RU2534345C2

RU2534345C2 - Method for preventing mycotoxicosis in horses

Info

Publication number: RU2534345C2
Application number: RU2013102613/10A
Authority: RU
Inventors: Михаил Петрович Неустроев; Надежда Петровна Тарабукина; Алексей Дмитриевич Жирков; Саргылана Степановна Татаринова; Александра Иннокентьевна Павлова
Priority date: 2013-01-21
Filing date: 2013-01-21
Publication date: 2014-11-27
Also published as: RU2013102613A

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to biotechnology. The method aims at preventing mycotoxicosis in horses. It provides adsorbing the preparation 'Sakhabactisubtil' representing a suspension of the bacterial strain Bacillus subtilis TNP-3-DEP and Bacillus subtilis TNP-5-DEP in equal proportions, adsorbed on oats, and feeding the animals with oats once a day at 10ml of 1kg of oats for 10 days.

EFFECT: invention provides normalising the intestinal microbiocenosis and increasing the animal's body weight.

1 tbl

Description

Изобретение относится к области ветеринарной микологии и санитарии, в частности к профилактике алиментарных микотоксикозов животных.The invention relates to the field of veterinary mycology and sanitation, in particular to the prevention of nutritional mycotoxicosis of animals.

Аналоги изобретения. Для профилактики и лечения микотоксикозов предложены препараты Полисорб ВП (Ж. Комбикорма, 2003. №3, с.68), Микросорб - П (Ж. Ветеринария, 2001, №11, с.15-17), цеолит (ж. Ветеринария, 2002, №9, с.3-8), которые проявляют выраженную адсорбирующую способность по отношению к микотоксинам.Analogs of the invention. For the prevention and treatment of mycotoxicosis, Polysorb VP preparations were proposed (J. Combicorm, 2003. No. 3, p. 68), Microsorb - P (J. Veterinary, 2001, No. 11, p. 15-17), zeolite (J. Veterinary, 2002, No. 9, pp. 3-8), which exhibit pronounced adsorbing ability with respect to mycotoxins.

Известен профилактический препарат «Субалин», изготовленный из штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-4759 и обладающий антибактериальной и антивирусной активностью патент РФ на изобретение №2035185 С1, опубл. 20.05.1995). Предложены генно-модифицированные бактерии Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis, используемые в качестве компонентов препарата против вирусных и бактериальных инфекций (№2142287, С1, опубл. 10.12.1999).Known prophylactic drug "Subalin", made from a strain of Bacillus subtilis VKPM B-4759 and having antibacterial and antiviral activity, patent of the Russian Federation for invention No. 2035185 C1, publ. 05/20/1995). Genetically modified bacteria Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis are proposed that are used as components of the drug against viral and bacterial infections (No. 2142287, C1, publ. 10.12.1999).

Однако препарат Субалин, а также штаммы бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-7092, ВКПМ В-7048 и штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-7038 не обладают активностью против плесневых токсинообразующих грибов, таких как Penicillium, Aspergillus, Stachybotrus, т.е. наиболее распространенных возбудителей микотоксикозов животных.However, the drug Subalin, as well as the bacterial strains of Bacillus subtilis VKPM B-7092, VKPM B-7048 and the bacterial strain Bacillus licheniformis VKPM B-7038 do not have activity against mold toxin-forming fungi, such as Penicillium, Aspergillus, Stachybotrus, i.e. the most common pathogens of animal mycotoxicosis.

Известен способ биологической борьбы с плесневением сена путем обработки сена штаммами бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП (патент РФ на изобретение №2292132 С2 AOF 25/00, А23К 1/100, опуб. 10.07.2006, бюл. №3). Однако способ применяется только для снижения пораженности сена плесневыми грибами родов Penicillium, Aspergillus и Stachybotrus. Известен способ профилактики микотоксикозов животных путем назначения препарата «Сахабактисубтил» вовнутрь (патент РФ на изобретение №2297842 С2 А61К 35/66, опуб. 20.07.2006, бюл. №12). Однако способ разработан для профилактики отравления микотоксинами крупного рогатого скота только Penicillium, Stachybortus и Аpergillus.A known method of biological control of hay mold by treating hay with strains of bacteria Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT (RF patent for the invention No. 2292132 C2 AOF 25/00, A23K 1/100, publ. 10.07.2006 Bulletin No. 3). However, the method is used only to reduce the incidence of hay by fungi of the genera Penicillium, Aspergillus and Stachybotrus. There is a method of preventing mycotoxicosis of animals by prescribing the drug "Sahabactisubtil" inside (RF patent for the invention No. 2297842 C2 A61K 35/66, publ. July 20, 2006, bull. No. 12). However, the method is designed to prevent only Penicillium, Stachybortus and Apergillus cattle mycotoxin poisoning.

Нет сведений об использовании штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП для профилактики микотоксикозов лошадей, вызываемых грибами родов Mucor, Candida и Fusarium.There is no information on the use of bacterial strains of Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT for the prevention of equine mycotoxicosis caused by fungi of the genera Mucor, Candida and Fusarium.

Известно использование пробиотика «Сахабактисубтил» с овсом для коррекции кишечного микробиоценоза при дегельминтизации (ГАВРИЛЬЕВА Л.Ю. Коррекция энтеробиоценоза жеребят, зараженных кишечными нематодозами, пробиотиком «Сахабактисубтил» при дегельминтизации. Ветеринарная медицина, №3-4, 2012, стр. 65-66).It is known to use the probiotic “Sahabactisubtil” with oats for the correction of intestinal microbiocenosis during deworming (Gavrilyeva L.Yu. )

Ближайшим аналогом является пробиотик «Лактобифадол», содержащий в своем составе смесь живых лактобактерий и бифидобактерий, высушенных сорбционным методом на естественном растительном носителе (мука или отруби), используемый, в том числе и для профилактики и лечения микотоксикозов лошадей. (См. интернет: http:www.bf-component.ru/products_horses.php., 2011 год/ Субботин В.В., Данилевская Н.В. Применение пробиотического препарата латкобифадол в птицеводстве и промышленном животноводстве. Актуальные проблемы инфекционной поталогии и иммунологии животных. М., 2006, с. 370-373). The closest analogue is the Lactobifadol probiotic, which contains a mixture of live lactobacilli and bifidobacteria dried by sorption on a natural plant carrier (flour or bran), which is also used for the prevention and treatment of horse mycotoxicosis. (See the Internet: http: www.bf-component.ru/products_horses.php., 2011 / Subbotin V.V., Danilevskaya N.V. Application of the probiotic preparation latcobifadol in poultry farming and industrial animal husbandry. Actual problems of the infectious pathology and immunology animals. M., 2006, S. 370-373).

В основу изобретения положена задача профилактики отравления лошадей токсинами грибов с использованием пробиотика на адсорбенте.The basis of the invention is the prevention of poisoning of horses with toxins of fungi using a probiotic on an adsorbent.

Технический результат изобретения - профилактика микотоксикозов лошадей путем применения препарата «Сахабактисубтил», адсорбированного на овсе, снижающего пораженность сена плесневыми и токсигенными грибами Aspergillus, Mucor и Fusarium, нормализующего кишечный микробиоценоз, исключающего тем самым отравление лошадей микотоксинами. The technical result of the invention is the prevention of equine mycotoxicosis by the use of the “Sahabaktisubtil” preparation adsorbed on oats, which reduces the damage of hay by mold and toxigenic fungi Aspergillus, Mucor and Fusarium, which normalizes intestinal microbiocenosis, thereby excluding mycotoxin poisoning.

Для профилактики микотоксикозов, вызываемых токсинами плесневых грибов, используют препарат «Сахабактисубтил», представляющий собой суспензию штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях, адсорбированных на овсе. Лошадям, в рацион которых включаются корма, пораженные токсигенными грибами, дают препарат «Сахабактисубтил» с овсом перорально, 1 раз в сутки в течение 10 дней из расчета 50×10⁹ КОЕ на 1 голову. Препарат сохраняет выраженную антагонистическую активность по отношению к токсинообразующим грибам родов Mucor, Fusarium, Aspergillus, в течение 10 месяцев (срок наблюдения), повышает иммунобиологическую реактивность организма, нормализует кишечный микробиоценоз.For the prevention of mycotoxicoses caused by mold toxins, the drug “Sahabactisubtil” is used, which is a suspension of the bacterial strains Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT in equal proportions adsorbed on oats. Horses, whose diet includes feeds affected by toxigenic fungi, are given Sahabactisubtil with oats orally, 1 time per day for 10 days at a rate of 50 × 10 ⁹ CFU per head. The drug retains pronounced antagonistic activity against toxin-forming fungi of the genera Mucor, Fusarium, Aspergillus for 10 months (observation period), increases the immunobiological reactivity of the body, and normalizes intestinal microbiocenosis.

Препарат «Сахабактисубтил» изготовляют из штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях, депонированных в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (справки о депонировании штаммов от 6 февраля 2001 г., №180/15 и №181/15).The drug "Sahabactisubtil" is made from strains of bacteria Bacillus subtilis TNP-3-DEP and Bacillus subtilis TNP-5-DEP in equal proportions deposited in the collection of microorganisms of the All-Russian State Institute for the Control of Standardization and Certification of Veterinary Medicines (VGNKI) (certificates of deposit of strains from 6 February 2001, No. 180/15 and No. 181/15).

Штаммы могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов ГНУ Якутский научно - исследовательский институт сельского хозяйства РАСХН и ВГНКИ.Strains can be obtained in the laboratory for the development of microbial preparations of GNU Yakutsk Research Institute of Agriculture of the RAAS and VGNKI.

Изготовление, контроль и испытание препарата «Сахабактисубтил» проводят согласно Техническим условиям «Препарат «Сахабактисубтил» для профилактики и лечения диареи новорожденных телят» №9383-003-00670203-06 от 2006 г.The manufacture, control and testing of the drug “Sahabactisubtil” is carried out according to the Technical conditions “The drug“ Sahabactisubtil ”for the prevention and treatment of diarrhea of newborn calves” No. 9383-003-00670203-06 from 2006

Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре рН 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°C, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 5×10⁹ КОЕ/мл.The bacterial strains of Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT are grown in meat and peptone agar pH 7.0-7.2 for 5-7 days at 37 ° C, then suspended in physiological saline at a concentration of 5 × 10 ⁹ CFU / ml.

Антагонистическую активность штаммов бактерий Bacillus subtilis в отношении токсинообразующих плесневых грибов определяют методом диффузии в агар на средах Чапека и МПА. Для этого штаммы бактерий высевают сплошным газоном на поверхность среды в чашках. В качестве тест-культур используют токсигенные грибы Aspergillus niqer, Mucor ramosissimus, Fusarium semitectum, Candida albicans. Микологической иглой осторожно захватывают кусочек мицелия (инокулят) и помещают на поверхность среды. Посевы культивируют при температуре 22-25°С, через 10-15 дней ведут учет по зоне задержки роста вокруг инокулята. Для контроля используют среду без штаммов бактерий. Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП проявляют выраженную антагонистическую (фунгицидную) активность по отношению к токсигенным грибам родов Aspergillus, Mucor, Fusarium и Candida.The antagonistic activity of bacterial strains of Bacillus subtilis against toxin-forming fungi is determined by agar diffusion on Chapek and MPA media. For this, bacterial strains are sown with a continuous lawn on the surface of the medium in cups. Toxigenic fungi Aspergillus niqer, Mucor ramosissimus, Fusarium semitectum, Candida albicans are used as test cultures. Using a mycological needle, carefully grab a piece of mycelium (inoculum) and place it on the surface of the medium. Crops are cultivated at a temperature of 22-25 ° C, after 10-15 days they keep records of the growth inhibition zone around the inoculum. For control use a medium without strains of bacteria. The bacterial strains of Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT exhibit pronounced antagonistic (fungicidal) activity against toxigenic fungi of the genera Aspergillus, Mucor, Fusarium and Candida.

Результаты в таблицеTable results Результаты изучения фунгицидных свойств штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕПThe results of the study of the fungicidal properties of strains of bacteria Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT Сроки наблюдения (дни)Duration of observation (days) Штаммы бактерийBacterial strains Тест - культурыTest - Culture Aspergillus niqerAspergillus niqer Fusarium semitectumFusarium semitectum Mucor ramosissimusMucor ramosissimus Candida albicansCandida albicans 1one Вас.subtilis ТНП-3 Вас.subtilis ТНП-5Vas.subtilis TNP-3 Vas.subtilis TNP-5 1 one -- 1one 88 88 -- -- 1one 33 Вас.subtilis ТНП-3 Вас.subtilis ТНП-5Vas.subtilis TNP-3 Vas.subtilis TNP-5 22 -- -- -- 22 -- -- 1one Примечание: «-» - отсутствие ростаNote: “-” - lack of growth «1-8» - размеры колоний в мм"1-8" - the size of the colonies in mm

Для адсорбции 10 мл пробиотика «Сахабактисубтил» (с содержанием 50×10⁹ КОЕ), обрабатывают 1 кг овса путем опрыскивания и выдерживают 24 ч при температуре 18-22°С. Затем обработанный пробиотиком овес выдерживают при колебании температуры от -47 до +32°С в течение 10 месяцев, с января по октябрь (срок наблюдения). В течение срока наблюдения штаммы бактерий Bacillus subtilis сохраняются стабильно в количестве от 1,8×10⁸ до 1,0×10⁹ КОЕ/г.For adsorption, 10 ml of the probiotic Sahabactisubtil (with a content of 50 × 10 ⁹ CFU) is treated with 1 kg of oats by spraying and incubated for 24 hours at a temperature of 18-22 ° C. Then, the oats treated with the probiotic are kept at temperature fluctuations from -47 to + 32 ° C for 10 months, from January to October (observation period). During the observation period, the bacterial strains of Bacillus subtilis remain stable in an amount of 1.8 × 10 ⁸ to 1.0 × 10 ⁹ CFU / g.

Микробиологические исследования овса, обработанного пробиотиком «Сахабактисубтил», показывают снижение количества колоний плесневых и токсинообразующих грибов в 40 раз по сравнению с контролем (овес с пробиотиком - опыт - 2,5·10⁴ КОЕ/г, овес без обработки - 1,0·10⁶КОЕ/г).Microbiological studies of oats treated with the probiotic Sahabactisubtil show a 40-fold reduction in the number of colonies of mold and toxin-forming fungi compared to the control (oats with probiotic - experience - 2.5 · 10 ⁴ CFU / g, oats without treatment - 1.0 · 10 ⁶ CFU / g).

Таким образом, овес, который является основным для подкормки, можно использовать в качестве адсорбента штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в борьбе с микотоксикозами лошадей.Thus, oats, which is the main one for top dressing, can be used as an adsorbent for the bacterial strains Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT in the fight against mycotoxicosis of horses.

Для определения профилактической эффективности препарата «Сахабактисубтил», адсорбированного на овсе при микотоксикозах, отбирают 20 голов лошадей в возрасте 6-8 месяцев. Первой группе (10 голов) скармливают «Сахабактисубтил» индивидуально 1 раз в сутки из расчета 10 мл на 1 кг овса, в течение 10 дней.To determine the prophylactic effectiveness of the drug "Sahabactisubtil" adsorbed on oats with mycotoxicosis, 20 horses were selected at the age of 6-8 months. The first group (10 goals) is fed “Sahabactisubtil” individually 1 time per day at the rate of 10 ml per 1 kg of oats for 10 days.

Контрольная группа (10 голов) не получает препарат.В рацион обеих групп животных включают сено, контаминированное токсинообразующими плесневыми грибами родов Aspergillus, Mucor, Fusarium. До и после применения препарата проводят иммунобиологические и бактериологические исследования. Опыт проводят 60 дней.The control group (10 goals) does not receive the drug. Hay, contaminated with toxin-forming mold fungi of the genera Aspergillus, Mucor, Fusarium, are included in the diet of both groups of animals. Before and after the use of the drug, immunobiological and bacteriological studies are carried out. The experiment spend 60 days.

Применение препарата «Сахабактисубтил» на овсе повышает лизоцимную активность, содержание лейкоцитов, общего белка, глобулиновой фракции сыворотки крови, что свидетельствует о повышении иммунологической реактивности.The use of the drug “Sahabactisubtil” on oats increases lysozyme activity, the content of leukocytes, total protein, globulin fraction of blood serum, which indicates an increase in immunological reactivity.

При скармливании сена неудовлетворительного качества в контрольной группе отмечается нарушение микробиоценоза кишечника с явлениями дисбактериоза, в которой доминируют токсигенные грибы.When feeding hay of unsatisfactory quality in the control group, there is a violation of intestinal microbiocenosis with dysbacteriosis, which is dominated by toxigenic fungi.

У молодняка, получавшего препарат «Сахабактисубтил» на овсе, отмечается повышение лактобактерий в 4 раза (до 6,2×10⁴ КОЕ/г) и снижение лактозоотрицательных эшерихий в 4 раза (до 1×10² КОЕ/г), повышение спорообразующих аэробных бактерий в 5 раз (до 5,8×10⁵ КОЕ/г), отсутствие роста грибов родов Mucor, Aspergillus по сравнению с контролем.Young animals treated with Sahabactisubtil on oats show a 4-fold increase in lactobacilli (up to 6.2 × 10 ⁴ CFU / g) and a 4-fold decrease in lactose-negative Escherichia (up to 1 × 10 ² CFU / g), an increase in spore-forming aerobic bacteria 5 times (up to 5.8 × 10 ⁵ CFU / g), the lack of growth of fungi of the genera Mucor, Aspergillus compared with the control.

Применение в рационе молодняка лошадей пробиотика, адсорбированного на овсе, обеспечивает повышение прироста живой массы в 3,4 раза по сравнению с контролем (опыт - 6,6 кг, контроль - 1,9 кг).The use of probiotic adsorbed on oats in the diet of young horses provides a 3.4-fold increase in live weight gain compared with the control (experiment - 6.6 kg, control - 1.9 kg).

Таким образом, применение препарата «Сахабактисубтил» на овсе молодняку лошадей подавляет негативное влияние на организм токсинообразующих плесневых грибов, нормализует кишечный микробиоценоз и может быть использован в качестве способа профилактики микотоксикозов животных.Thus, the use of Sahabactisubtil on oats in young horses suppresses the negative effect of toxin-forming molds on the body, normalizes intestinal microbiocenosis and can be used as a method of preventing animal mycotoxicosis.

Claims

A method for the prevention of alimentary mycotoxicosis of horses by administering a microbial preparation inside, characterized in that the preparation “Sahabactisubtil” on oats is used as a microbial preparation, which is a suspension of strains of Bacillus subtilis TNP-3-DEPT and Bacillus subtilis TNP-5-DEPT in equal proportions, adsorbed per 1 kg of oats.