RU2519125C2 - Method for endometrial local immunity assessment - Google Patents
Method for endometrial local immunity assessment Download PDFInfo
- Publication number
- RU2519125C2 RU2519125C2 RU2012131072/15A RU2012131072A RU2519125C2 RU 2519125 C2 RU2519125 C2 RU 2519125C2 RU 2012131072/15 A RU2012131072/15 A RU 2012131072/15A RU 2012131072 A RU2012131072 A RU 2012131072A RU 2519125 C2 RU2519125 C2 RU 2519125C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- endometrial
- local immunity
- relation
- local
- disorders
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Область применения Application area
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике.The present invention relates to medicine, namely to laboratory diagnostics.
Исследования последних лет показали, что хронические воспалительные заболевания органов малого таза не сопровождаются нарушениями параметров клеточного и гуморального иммунитета, определяемыми в периферической крови. В связи с этим для определения состояния эндометрия возникает необходимость оценки локального иммунитета. Бактериально-вирусная колонизация эндометрия является следствием неспособности иммунной системы полностью элиминировать инфекционный агент, и в то же время возникает ограничение его распространения за счет эффекторных свойств Т-лимфоцитов, NK-клеток и макрофагов. Под воздействием специфических антигенов в ткани эндометрия происходит изменение локального иммунитета, в частности, дифференцировка Т-хелперов на субпопуляции Th-1 и Th-2, специализированные на синтезе определенных цитокинов: IFN-γ (Th-1) и IL-4 (Th-2). Активация Th-1 может вести к развитию избыточно выраженных воспалительных реакций в эндометрии даже в условиях низкой концентрации инфекционного агента, что позволяет использовать определение функциональных характеристик Т-хелперов для оценки выраженности иммунопатологических процессов в эндометрии (1, 2, 3, 4).Recent studies have shown that chronic inflammatory diseases of the pelvic organs are not accompanied by violations of the parameters of cellular and humoral immunity, as determined in the peripheral blood. In this regard, to determine the condition of the endometrium, it becomes necessary to assess local immunity. Bacterial-viral colonization of the endometrium is a consequence of the inability of the immune system to completely eliminate the infectious agent, and at the same time, its distribution is limited due to the effector properties of T-lymphocytes, NK-cells and macrophages. Under the influence of specific antigens in endometrial tissue, local immunity changes, in particular, differentiation of T-helpers into Th-1 and Th-2 subpopulations, specialized in the synthesis of certain cytokines: IFN-γ (Th-1) and IL-4 (Th- 2). Activation of Th-1 can lead to the development of excessively expressed inflammatory reactions in the endometrium even in conditions of low concentration of the infectious agent, which allows the use of determining the functional characteristics of T-helpers to assess the severity of immunopathological processes in the endometrium (1, 2, 3, 4).
Уровень техникиState of the art
Аналогами данного изобретения являются внедренные в клиническую практику акушерства и гинекологии современные методы диагностики состояния эндометрия: гистологический, учитывающий совокупность общих морфологических признаков хронического воспаления, иммуногистоцитохимический с определением спектра параметров (4, 5, 6).The analogues of this invention are the modern methods for diagnosing the condition of the endometrium introduced into the clinical practice of obstetrics and gynecology: histological, taking into account the set of general morphological signs of chronic inflammation, immunohistocytochemical determination of the spectrum of parameters (4, 5, 6).
Прототипом предложенного изобретения является описанный в отечественной литературе способ оценки активности локального воспаления, заключающийся в определении методом ИФА уровня IFN-y в биоматериале, взятом путем мазка с поверхности зоны трансформации шейки матки. Несмотря на очевидные достоинства метода (отсутствие травматичности при заборе материала, наличие прогностических пороговых уровней данного показателя), недостатком метода является то, что оценка активности воспаления проводится с использованием одного параметра (7).A prototype of the proposed invention is a method for assessing the activity of local inflammation described in Russian literature, which consists in determining by IFA the level of IFN-y in a biomaterial taken by smear from the surface of the cervical transformation zone. Despite the obvious advantages of the method (the absence of trauma during sampling, the presence of prognostic threshold levels of this indicator), the disadvantage of the method is that the assessment of inflammation activity is carried out using one parameter (7).
Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION
Цель изобретения заключается в разработке способа оценки локального иммунитета у женщин с патологией эндометрия, основанного на определении количества лимфоцитов, экспрессирующих цитокины IFN-γ и IL-4.The purpose of the invention is to develop a method for assessing local immunity in women with endometrial pathology, based on determining the number of lymphocytes expressing IFN-γ and IL-4 cytokines.
Предлагаемый способ позволяет установить вовлеченность иммунной системы в патологический процесс в исследуемой ткани (эндометрии).The proposed method allows to establish the involvement of the immune system in the pathological process in the studied tissue (endometrium).
Способ осуществляют следующим образом: у женщин с патологией эндометрия на 7-9-й день менструального цикла путем пайпель-биопсии проводят забор ткани эндометрия. 1 мл полученного пайпель-биоптата помещают в пробирку со 100 Ед гепарина натрия в 1 мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ). Пайпель-биоптат в ФСБ механически измельчают и доводят до гомогенизированного состояния, пропуская с помощью шприца через иглы нисходящего диаметра. Из полученного гомогената эндометрия выделяют фракцию мононуклеаров на градиенте плотности: 2 мл гомогената аккуратно наслаивают на 2 мл фиколл-верографина и центрифугируют 40 минут при 1500 об/мин. После центрифугирования аккуратно с помощью дозатора собирают опалесцирующее кольцо мононуклеаров, переносят в сухую чистую пробирку и промывают ФСБ дважды путем центрифугирования 15 мин при 1500 об/мин.The method is as follows: in women with endometrial pathology, on the 7th-9th day of the menstrual cycle, endometrial tissue sampling is carried out by pipe-biopsy. 1 ml of the obtained pipel biopsy is placed in a test tube with 100 units of sodium heparin in 1 ml of phosphate-buffered saline (FSB). The pipel biopsy material in the FSB is mechanically crushed and brought to a homogenized state by passing through a needle through a needle of descending diameter. A fraction of mononuclear cells is isolated from the obtained endometrial homogenate on a density gradient: 2 ml of the homogenate is carefully layered on 2 ml of ficoll-verographin and centrifuged for 40 minutes at 1500 rpm. After centrifugation, an opalescent mononuclear ring is carefully collected using a dispenser, transferred to a dry clean tube and washed with FSB twice by centrifugation for 15 minutes at 1500 rpm.
- Определение содержания лимфоцитов, экспрессирующих цитокины IFN-γ и IL-4 в мононуклеарах пайпель-биоптата эндометрия проводят согласно рекомендациям фирмы-производителя реагентов (Becton Dickinson, США). Для этого в две пробирки наливают по 200 мкл полной культуральной среды RPMI 1640 и добавляют по 200 мкл мононуклеаров. В обе пробирки добавляют по 0,5 мкл ингибитора белкового транспорта GolgiPlug. В одну пробирку для оценки стимулированной продукции цитокинов добавляют 1 мкл Leukocyte Activation Coctail, содержащий активатор протеинкиназы С форбол-12-миристат-13-ацетат (ФМА) в комбинации с ионофором кальция иономицином. Инкубируют 4 часа при 37°С и 5% СO2. Затем добавляют в пробирки, в которых по 100 мкл стимулированных и нестимулированных мононуклеаров 4 мкл CD3PerCP. Инкубируют 15-30 мин при комнатной температуре в темном месте. По окончании инкубации лизируют эритроциты, добавив 1 мл готового лизирующего раствора (Lisyng). Инкубируют при комнатной температуре в темном месте 10-15 мин. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин и удаляют супернатант. Отмывают 1 раз добавлением 1 мл буфера CellWASH с последующим центрифугированием. Добавляют 250 мкл раствора Cytofix/Cytoperm. Инкубируют 20 мин при комнатной температуре в темноте. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин и удаляют супернатант. Добавляют 1 мл буфера Perm/Wash и инкубируют 10 мин при комнатной температуре в темноте. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин и удаляют супернатант. Добавляют 4 мкл меченых моноклональных антител IFN-γFITC и IL-4PE. Инкубируют 30 мин при комнатной температуре в темноте. Отмывают клетки один раз в 1 мл буфера Perm/Wash. Ресуспендируют клетки в CellFIX буфере для анализа на проточном цитофлуориметре, используя программу CELLQuest.- Determination of the content of lymphocytes expressing the cytokines IFN-γ and IL-4 in the mononuclear cells of the endometrial pipeloplast biopsy is carried out according to the recommendations of the reagent manufacturer (Becton Dickinson, USA). For this, 200 μl of the complete RPMI 1640 culture medium are poured into two tubes and 200 μl of mononuclear cells are added. 0.5 μl of GolgiPlug protein transport inhibitor is added to both tubes. 1 μl of Leukocyte Activation Coctail containing protein kinase C activator phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) in combination with calcium ionophore ionomycin is added to one tube to evaluate stimulated cytokine production. Incubated for 4 hours at 37 ° C and 5% CO 2 . Then add to the tubes in which 100 μl of stimulated and unstimulated mononuclear cells 4 μl of CD3PerCP. Incubate for 15-30 minutes at room temperature in a dark place. At the end of the incubation, red blood cells are lysed by adding 1 ml of ready-made lysing solution (Lisyng). Incubate at room temperature in a dark place for 10-15 minutes. Centrifuge for 5 min at 1500 rpm and remove the supernatant. Wash 1 time by adding 1 ml of CellWASH buffer, followed by centrifugation. Add 250 μl of Cytofix / Cytoperm solution. Incubated for 20 min at room temperature in the dark. Centrifuge for 5 min at 1500 rpm and remove the supernatant. Add 1 ml Perm / Wash buffer and incubate for 10 min at room temperature in the dark. Centrifuge for 5 min at 1500 rpm and remove the supernatant. 4 μl of labeled monoclonal antibodies IFN-γFITC and IL-4PE are added. Incubated for 30 min at room temperature in the dark. Wash cells once in 1 ml Perm / Wash buffer. Resuspend cells in CellFIX buffer for flow cytometer analysis using the CELLQuest program.
Проведено обследование 9 здоровых женщин благоприятного репродуктивного возраста (18-35 лет) и 30 женщин с патологией эндометрия. Установлено, что соотношение IFN-γ и IL-4-продуцирующих лимфоцитов Thl/Th2 более 0,92 у.е. свидетельствует о нарушениях на уровне локального иммунитета у женщин с патологией эндометрия. При Th1/Th2 менее 0,92 у.е. делают заключение об отсутствии признаков нарушений.A survey of 9 healthy women of favorable reproductive age (18-35 years) and 30 women with endometrial pathology was examined. The ratio of IFN-γ and IL-4-producing Thl / Th2 lymphocytes was found to be more than 0.92 cu indicates violations at the level of local immunity in women with endometrial pathology. With Th1 / Th2 less than 0.92 cu conclude that there are no signs of violations.
Чувствительность метода составляет 83,3%, специфичность - 83,8%, эффективность - 83,6%.The sensitivity of the method is 83.3%, specificity is 83.8%, and efficiency is 83.6%.
Пример 1. Пациентка С., 32 года, поступила в гинекологическое отделение ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России с диагнозом хронический эндометрит. Акушерский анамнез отягощен тремя регрессирующими беременностями. Менструальная функция не нарушена (через 28-30 дней по 5-6 дней). При исследовании пайпель-биоптата эндометрия Th1/Th2 составило 2,72 у.е., что выше установленного критерия в 0,92 у.е. и свидетельствует о нарушениях локального иммунитета эндометрия. После проведения терапии Th1/Th2 составило 0,64 у.е., что характеризует отсутствие признаков нарушений. При гистологическом исследовании признаков воспаления эндометриальной ткани не выявлено.Example 1. Patient S., 32 years old, was admitted to the gynecological department of the FSBI “Research Institute of OMM” of the Ministry of Health and Social Development of Russia with a diagnosis of chronic endometritis. An obstetric history is burdened by three regressive pregnancies. Menstrual function is not impaired (after 28-30 days for 5-6 days). In the study of endometrial pipelines, Th1 / Th2 was 2.72 cu, which is higher than the established criterion of 0.92 cu and indicates violations of the local immunity of the endometrium. After therapy, Th1 / Th2 was 0.64 cu, which characterizes the absence of signs of disturbance. A histological examination revealed no signs of inflammation of the endometrial tissue.
Пример 2. Пациентка Г., 27 лет, поступила в гинекологическое отделение ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России с диагнозом хронический эндометрит. Акушерский анамнез отягощен двумя регрессирующими беременностями. Менструальная функция не нарушена (через 24-25 дней по 5 дней). При бактериологическом исследовании мазка из шейки матки выделена Е. coli в диагностическом титре. При исследовании пайпель-биоптата эндометрия Th1/Th2 составило 1,66 у.е., что выше установленного критерия в 0,92 у.е. и свидетельствует о нарушениях локального иммунитета эндометрия. После проведения терапии Th1/Th2 составило 0,84 у.е., что характеризует отсутствие признаков нарушений. При гистологическом исследовании признаков воспаления эндометриальной ткани не выявлено.Example 2. Patient G., 27 years old, was admitted to the gynecological department of the FSBI “Research Institute OMM” of the Ministry of Health and Social Development of Russia with a diagnosis of chronic endometritis. An obstetric history is burdened by two regressive pregnancies. Menstrual function is not impaired (after 24-25 days for 5 days). During bacteriological examination of a smear from the cervix, E. coli was isolated in the diagnostic titer. In the study of endometrial pipelines, Th1 / Th2 was 1.66 cu, which is higher than the established criterion of 0.92 cu and indicates violations of the local immunity of the endometrium. After therapy, Th1 / Th2 was 0.84 cu, which characterizes the absence of signs of disturbance. A histological examination revealed no signs of inflammation of the endometrial tissue.
Пример 3. Пациентка Т., 35 лет, гинекологически здорова, что подтверждено данными гистологического исследования. При исследовании пайпель-биоптата эндометрия соотношение Th1/Th2 составило 0,87 у.е., что ниже установленного критерия в 0,92 у.е. и свидетельствует об отсутствии нарушений локального иммунитета эндометрия.Example 3. Patient T., 35 years old, is gynecologically healthy, as confirmed by histological examination. In the study of endometrial pipelines, the ratio of Th1 / Th2 was 0.87 cu, which is below the established criterion of 0.92 cu and indicates the absence of violations of the local immunity of the endometrium.
Таким образом, приведенные выше примеры наглядно демонстрируют, что предлагаемый способ дает возможность выявить лабораторные признаки, характерные для нарушений локального иммунитета эндометрия, что позволит своевременно решить вопрос о необходимости проведения терапевтической коррекции выявленной патологии.Thus, the above examples clearly demonstrate that the proposed method makes it possible to identify laboratory signs characteristic of violations of the local immunity of the endometrium, which will allow to timely resolve the issue of the need for therapeutic correction of the revealed pathology.
Источники информацииInformation sources
1. Плужникова Т.А. Диагностика и лечение хронического эндометрита у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе / Т.А. Плужникова, Е.К. Комаров // Журнал акушерства и женских болезней. - 2012. - №2. - С.52-55.1. Pluzhnikova T.A. Diagnosis and treatment of chronic endometritis in women with a history of miscarriage / T.A. Pluzhnikova, E.K. Komarov // Journal of Obstetrics and Women's Diseases. - 2012. - No. 2. - S. 52-55.
2. Подзолкова Н.М. Клинические и патогенетические аспекты неразвивающейся беременности / Н.М.Подзолкова, В.Г.Истратова, Т.В.Золотухина // Рос. вестник акуш.-гинекол. - 2003. - №2. - С.40-43.2. Podzolkova N.M. Clinical and pathogenetic aspects of an undeveloped pregnancy / N.M. Podzolkova, V.G. Istratova, T.V. Zolotukhina // Ros. Bulletin of obstetrician-gynecol. - 2003. - No. 2. - S. 40-43.
3. Скворцова М.Ю. Профилактика репродуктивных потерь и осложнений гестации у пациенток с невынашиванием беременности / М.Ю.Скворцова, Н.М.Подзолкова // Гинекология. - 2010. - №1. - С.46-49.3. Skvortsova M.Yu. Prevention of reproductive losses and complications of gestation in patients with miscarriage / M.Yu. Skvortsova, N.M. Podzolkova // Gynecology. - 2010. - No. 1. - S. 46-49.
4. Михнина Е.А. Способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления / Е.А.Михнина, В.Н.Элиниди и др. // Патент на изобретение №2236013.4. Mikhnina E.A. A method for the diagnosis of chronic endometritis and the nature of inflammation / E.A. Mikhnina, V.N. Elinidi and others // Patent for the invention No. 2236013.
5. Элиниди В.Н. Современные возможности диагностики хронического эндометрита / В.Н.Элиниди и др. // Журнал акушерства и женских болезней. - 2003. - №3. - С.64-68.5. Elinidi V.N. Modern possibilities for the diagnosis of chronic endometritis / V.N. Elinidi et al. // Journal of Obstetrics and Women's Diseases. - 2003. - No. 3. - S. 64-68.
6. Сухих Г.Т. Хронический эндометрит / Г.Т.Сухих, А.В.Шуршалина // М., 2010.6. Sukhikh G.T. Chronic endometritis / G.T. Sukhikh, A.V. Shurshalina // M., 2010.
7. Грибова С.Н. Способ оценки активности локального воспаления при фоновых заболеваниях шейки матки. / Грибова С.Н., Захарова Н.Б., Хрипунова Г.И. // Патент на изобретение №2405145.7. Gribova S.N. A method for assessing the activity of local inflammation in background diseases of the cervix. / Gribova S.N., Zakharova N.B., Khripunova G.I. // Patent for invention No. 2405145.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012131072/15A RU2519125C2 (en) | 2012-07-19 | 2012-07-19 | Method for endometrial local immunity assessment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012131072/15A RU2519125C2 (en) | 2012-07-19 | 2012-07-19 | Method for endometrial local immunity assessment |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012131072A RU2012131072A (en) | 2014-01-27 |
| RU2519125C2 true RU2519125C2 (en) | 2014-06-10 |
Family
ID=49956944
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012131072/15A RU2519125C2 (en) | 2012-07-19 | 2012-07-19 | Method for endometrial local immunity assessment |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2519125C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2008132411A (en) * | 2008-08-07 | 2010-02-20 | Марина Николаевна Бантьева (RU) | METHOD FOR RESEARCH AND ASSESSMENT OF LOCAL ENDOMETRY IMMUNITY |
| RU2405145C1 (en) * | 2009-03-16 | 2010-11-27 | Светлана Николаевна Грибова | Method of assessment of local inflammation activity with underlying uterine cervical diseases |
-
2012
- 2012-07-19 RU RU2012131072/15A patent/RU2519125C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2008132411A (en) * | 2008-08-07 | 2010-02-20 | Марина Николаевна Бантьева (RU) | METHOD FOR RESEARCH AND ASSESSMENT OF LOCAL ENDOMETRY IMMUNITY |
| RU2405145C1 (en) * | 2009-03-16 | 2010-11-27 | Светлана Николаевна Грибова | Method of assessment of local inflammation activity with underlying uterine cervical diseases |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЧИСТЯКОВА Г.Н. и др. Оценка цитокинового профиля при физиологической и патологической протекающей беременности // Цитокины и воспаление, 2007, N1, стр.3-8 . ГИЗИНГЕР О.А. и др. Система провоспалительных цитокинов в цервикальном секрете у женщин с урогенетальным хламидиозом // Цитокины и воспаление, 2006, N4, стр.13-16. КУЗНЕЦОВ П.А. Оценка факторов врожденного иммунитета слизистой цервикального канала в прогнозировании преждевременных родов // Автореферат кмн, Москва, 2009, стр.22-23, [он-лайн], [найдено 24.01.2014]. Найдено из Интернет: * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012131072A (en) | 2014-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bouachba et al. | Placental lesions and SARS-Cov-2 infection: diffuse placenta damage associated to poor fetal outcome | |
| RU2461006C1 (en) | Method for female screening for prenatal diagnosis of congenital anomalies and intrauterine infection of foetus | |
| RU2695356C1 (en) | Method for prediction of fetus in premature rupture of fetal membranes from 24 to 33 weeks of pregnancy | |
| Kalan et al. | Mid-trimester cervical inflammatory milieu and sonographic cervical length | |
| RU2424527C1 (en) | Method for prediction of cns pathology in newborns | |
| RU2519125C2 (en) | Method for endometrial local immunity assessment | |
| Kisiel et al. | Effect of perinatal risk factors on neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) level in umbilical and peripheral blood in neonates | |
| Yavari Kia et al. | Maternal serum and cervicovaginal IL-6 in patients with symptoms of preterm labor | |
| RU2338198C1 (en) | Method of preclinical gestosis prediction in third trimester of pregnancy associated with previous influenza a(h3n2) in first trimester of gestation, complicated with miscarriage threat | |
| RU2512808C2 (en) | Method for prediction of risk of perinatal pathology | |
| Creswell et al. | Preterm Birth: Screening and Prediction | |
| RU2690379C1 (en) | Method for predicting growth rate of uterine leiomyoma in women of reproductive age | |
| RU2529788C1 (en) | Method for prediction of spontaneous miscarriage | |
| RU2670451C1 (en) | Method of determining indications for urgent delivery in pregnant women with intrauterine growth restriction syndrome | |
| RU2336527C1 (en) | Method of pre-clinical prediction of placental insufficiency in second trimester of pregnancy associated with previous influenza a(h3n2) in first trimester of gestation | |
| Niklasson et al. | Lactate dehydrogenase and its isoenzymes in vaginal fluid in vaginitis/vaginosis cases and in healthy controls | |
| RU2745027C1 (en) | Method for predicting intrauterine infection realization with early premature rupture of fetal membranes | |
| RU2741500C1 (en) | Method for prediction of pregnancy outcome in threatening preterm delivery | |
| RU2826778C1 (en) | Method for prediction of preterm delivery in women with threatening late miscarriage and recurrent miscarriage | |
| RU2789258C1 (en) | Method for prediction of reproductive loss in the form of non-developing pregnancy and spontaneous miscarriage in women with threating early miscarriage | |
| Wang et al. | Obstetric Risk Factors and Serological Characteristics of Early-Onset Neonates Bacterial Infections | |
| RU2265224C1 (en) | Method for predicting the syndrome for delayed fetal development | |
| RU2121687C1 (en) | Method of predicting fetal infection in the latter half of pregnancy | |
| RU2752715C1 (en) | Method for predicting effectiveness of treatment of moderate preeclampsia | |
| RU2804278C1 (en) | Method of early prediction of miscarriage by assessing interleukin 1β and prostaglandin e2 in the blood serum of pregnant women with exacerbation of cytomegalovirus infection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140720 |