RU2510398C2 - Способ выделения низкомолекулярных пептидов - Google Patents
Способ выделения низкомолекулярных пептидов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2510398C2 RU2510398C2 RU2012123195/10A RU2012123195A RU2510398C2 RU 2510398 C2 RU2510398 C2 RU 2510398C2 RU 2012123195/10 A RU2012123195/10 A RU 2012123195/10A RU 2012123195 A RU2012123195 A RU 2012123195A RU 2510398 C2 RU2510398 C2 RU 2510398C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- molecular weight
- peptides
- inactivation
- kda
- erythromass
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выделения низкомолекулярных пептидов из сырья животного происхождения, которые могут служить в качестве биологически активных веществ при создании фармацевтических или косметических композиций. Способ включает ферментативный гидролиз исходного сырья, центрифугирование с последующей стерилизующей фильтрацией полученной субстанции через мелкопористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм. В качестве исходного сырья используют эритромассу крови доноров, которую предварительно подвергают гемолизу, вирусинактивации, инактивации фермента после ферментативного гидролиза. Проводят осветление раствором перекиси водорода с конечной концентрацией 0,83% с последующим выдерживанием при 66 °С в течение 15 мин. Изобретение позволяет выделить низкомолекулярные пептиды и повысить их биологическую активность. 2 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам выделения низкомолекулярных пептидов из сырья животного происхождения, которые могут служить в качестве биологически активных веществ при создании фармацевтических или косметических композиций.
Известно, что естественные низкомолекулярные пептиды с молекулярной массой до 15 кДа способны поддерживать гомеостаз организма, проявляя разнообразную активность - антибактериальную, противовирусную, антиоксидантную, регенеративную. Пептиды с молекулярной массой менее 3 кДа имеют повышенную биодоступность при наружном применении. Обзор литературы показывает, что в результате ограниченного протеолиза биологически активного белка - предшественника-гемоглобина образуются пептиды, модулирующие функции иммунной, нервной, эндокринной, сердечно-сосудистой и других систем организма [Малкова Н.В. Р-эндорфинподобный пептид иммунорфин: свойства и механизм действия. Дис.к.б.н., М., 2002. 121 с.].
В качестве прототипа принято описание изобретения «Способ выделения низкомолекулярных пептидов» к патенту RU 2416243, МПК A23J 1/20, опубликовано: 20.04.2011, бюл. №11.
Способ осуществляют следующим образом. Получают гидролизат ферментативным гидролизом молозивной казеиново-сывороточной массы с использованием 0,3-0,6 г панкреатина на 1 л гидролизуемой смеси в течение 3-4 часов и с коррекцией среды 25%-ным водным раствором аммиака. К полученному гидролизату добавляют 300 г сефадекса G-25, оставляют на 10 мин, смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут. Надосадочный раствор удаляют, набухший гель элюируют дистиллированной водой, вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут. Полученные жидкие фракции стерилизуют фильтрацией через мелкопористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм. Из одного литра гидролизата получают 118-123 мл фракции, содержащей низкомолекулярные пептиды с молекулярной массой от 3 до 15 кДа. Для получения сухой формы фракции подвергают лиофильному высушиванию. Наличие низкомолекулярных пептидов во фракции проверяют электрофорезом в ПААГ. В прототипе дано описание выделенных пептидных фракций (табл.1).
Таблица 1 | |
Содержание низкомолекулярных пептидов в гидролизате молозивной казеиново-сывороточной массы (электрофорез в ПААГ) | |
%±m | |
Пептиды с молекулярной массой от 7 до 14 кДа | 9,3±4,7 |
Пептиды с молекулярной массой от 3 до 7 кДа | 54,3±14,0 |
Аминокислоты (молекулярная масса менее 3 кДа) | 36,4±4,2 |
Данные табл.1 показывают, что использование предлагаемого способа выделения низкомолекулярных пептидов из гидролизатов молозивной казеиново-сывороточной массы позволяет получить пептиды с молекулярной массой от 3 до 14 кДа с преобладанием пептидов, имеющих молекулярную массу от 3 до 7 кДа.
Признаки изобретения, общие с прототипом, заключаются в наличии ферментативного гидролиза исходного сырья, центрифугировании с последующей стерилизующей фильтрацией полученной субстанции через мелкопористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм.
Недостатком прототипа является способ выделения пептидов с использованием сефадекса G-25, обладающего высокой селективностью по молекулярной массе и способного удерживать до элюции узкий спектр пептидов с молекулярной массой от 1 до 5 кДа, что приводит к удалению большей части низкомолекулярных пептидов с другой молекулярной массой вместе с надосадочной жидкостью после центрифугирования, снижая тем самым биологическую ценность гидролизата.
Задача, решаемая изобретением, заключается в повышении биологической активности пептидов.
Технический результат, обеспечивающий решение поставленной задачи, заключается в снижении молекулярной массы пептидов.
Технический результат достигается тем, что в способе выделения низкомолекулярных пептидов, включающем ферментативный гидролиз исходного сырья, центрифугирование с последующей стерилизующей фильтрацией полученной субстанции через мелкопористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, согласно изобретению в качестве исходного сырья используют эритромассу крови доноров, которую предварительно подвергают гемолизу, вирусинактивации, инактивации фермента после ферментативного гидролиза, осветлению раствором перекиси водорода с конечной концентрацией 0,83% с последующим выдерживанием при 66°С в течение 15 мин.
Использование в качестве исходного сырья эритромассы крови доноров, включающей в свой состав широкий спектр низкомолекулярных пептидов, обеспечивает дальнейшую возможность их выделения в технологии. Осуществление операций гемолиза, вирусинактивации, инактивации фермента после ферментативного гидролиза и осветления позволяет выделить больший спектр низкомолекулярных пептидов и изготовить необходимую композицию на их основе.
Признаки изобретения, отличающиеся от прототипа, заключаются в использовании в качестве исходного сырья эритромассы крови доноров, которую предварительно подвергают гемолизу, вирусинактивации, инактивации фермента после ферментативного гидролиза, осветлению раствором перекиси водорода с конечной концентрацией 0,83% с последующим выдерживанием при 66 °С в течение 15 мин.
Способ осуществляют следующим образом.
В качестве сырья используют эритромассу крови доноров. Отобранная для переработки эритромасса должна пройти вирусологический контроль (HBS-антиген к вирусу гепатита В, антитела к вирусу гепатита С и ВИЧ отсутствуют), рН (6,81±0,23), содержание аминного азота (249,90±36,35) мг%. Физико-химические параметры могут варьироваться в зависимости от сезона кроводачи, возраста и пола донора.
Гидролизат получают ферментативным гидролизом предварительно гемолизированной и вирусинактивированной эритромассы крови доноров с 2% пепсина от исходного объема в течение 144 ч и с коррекцией среды (0,01-0,1)М раствором соляной кислоты до рН (1,5-2,0), инактивируют фермент, осветляют гидролизат раствором перекиси водорода с конечной концентрацией 0,83% с последующим выдерживанием при 66°С в течение 15 мин и осаждают балластные вещества методом центрифугирования при 1,3*103 об/мин в течение 15 мин. Полученную жидкую фракцию подвергают стерилизующей фильтрации через мелкопористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм. Определение молекулярной массы пептидов в гидролизате проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). С 1 л исходного сырья эритромассы получают (100-110) г сухого вещества, что соответствует содержанию аминного азота (390-430) мг%, представленного низкомолекулярными пептидами, аминокислотами (табл.2).
Таблица 2 | ||
Содержание низкомолекулярных пептидов в гидролизате эритромассы (метод ВЭЖХ) | ||
%±m | ||
Пептиды с молекулярной массой от 4,5 до 6,0 кДа | 89,00±1,20 | |
Пептиды с молекулярной массой от 2 до 4,5 кДа | 7,00±0,12 | |
Мелкие пептиды и аминокислоты с молекулярной массой до 1,0 кДа | 4,10±0,09 |
Данные таблицы 2 показывают, что использование предлагаемого способа выделения низкомолекулярных пептидов из эритромассы позволяет получить пептиды с молекулярной массой до 6,0 кДа с преобладанием пептидов, имеющих молекулярную массу от 4,5 до 6,0 кДа (до 90%). Нужно отметить, что при хроматографии образцов обнаруживаются пептиды с молекулярной массой от 2,0 до 4,5 кДа и до 1,0 кДа. Способ обеспечивает получение депротеинизированного раствора, содержащего спектр низкомолекулярных пептидов до 6 кДа, без потерь на фракционирование.
Claims (1)
- Способ выделения низкомолекулярных пептидов, включающий ферментативный гидролиз исходного сырья, центрифугирование с последующей стерилизующей фильтрацией полученной субстанции через мелкопористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют эритромассу крови доноров, которую предварительно подвергают гемолизу, вирусинактивации, инактивации фермента после ферментативного гидролиза, осветлению раствором перекиси водорода с конечной концентрацией 0,83% с последующим выдерживанием при 66 °С в течение 15 мин.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012123195/10A RU2510398C2 (ru) | 2012-06-05 | 2012-06-05 | Способ выделения низкомолекулярных пептидов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012123195/10A RU2510398C2 (ru) | 2012-06-05 | 2012-06-05 | Способ выделения низкомолекулярных пептидов |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012123195A RU2012123195A (ru) | 2013-12-10 |
RU2510398C2 true RU2510398C2 (ru) | 2014-03-27 |
Family
ID=49682804
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012123195/10A RU2510398C2 (ru) | 2012-06-05 | 2012-06-05 | Способ выделения низкомолекулярных пептидов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2510398C2 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2729016C1 (ru) * | 2019-10-29 | 2020-08-04 | Игорь Александрович Базиков | Способ выделения природных антимикробных пептидов из лейкоцитарно-эритроцитарно-тромбоцитарной массы крови |
RU2813979C2 (ru) * | 2022-03-29 | 2024-02-20 | Игорь Александрович Базиков | Способ выделения эндогенных антимикробных пептидов из плацентарной ткани |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2737730C2 (ru) * | 2019-05-13 | 2020-12-02 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский национальный исследовательский политехнический университет" | Способ фракционирования лейкоцитарных белков |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0416416B1 (en) * | 1989-09-04 | 1993-12-01 | SCLAVO S.p.A. | Method for purifying low molecular weight compounds of peptide or pseudo-peptide structure |
RU2076715C1 (ru) * | 1991-11-05 | 1997-04-10 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.Мечникова | Способ получения препарата "аффинолейкин" для противоинфекционной иммунотерапии |
KR20040004347A (ko) * | 2003-12-24 | 2004-01-13 | 주식회사 신동방 | 저분자 대두 펩타이드의 제조방법 |
RU2416243C2 (ru) * | 2008-12-04 | 2011-04-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН РостовНИИМП Роспотребнадзора) | Способ выделения низкомолекулярных пептидов |
-
2012
- 2012-06-05 RU RU2012123195/10A patent/RU2510398C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0416416B1 (en) * | 1989-09-04 | 1993-12-01 | SCLAVO S.p.A. | Method for purifying low molecular weight compounds of peptide or pseudo-peptide structure |
RU2076715C1 (ru) * | 1991-11-05 | 1997-04-10 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.Мечникова | Способ получения препарата "аффинолейкин" для противоинфекционной иммунотерапии |
KR20040004347A (ko) * | 2003-12-24 | 2004-01-13 | 주식회사 신동방 | 저분자 대두 펩타이드의 제조방법 |
RU2416243C2 (ru) * | 2008-12-04 | 2011-04-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН РостовНИИМП Роспотребнадзора) | Способ выделения низкомолекулярных пептидов |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2729016C1 (ru) * | 2019-10-29 | 2020-08-04 | Игорь Александрович Базиков | Способ выделения природных антимикробных пептидов из лейкоцитарно-эритроцитарно-тромбоцитарной массы крови |
RU2813979C2 (ru) * | 2022-03-29 | 2024-02-20 | Игорь Александрович Базиков | Способ выделения эндогенных антимикробных пептидов из плацентарной ткани |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2012123195A (ru) | 2013-12-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bah et al. | Generation of bioactive peptide hydrolysates from cattle plasma using plant and fungal proteases | |
CN104250285B (zh) | 一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
Chauhan et al. | Bioactive peptides: Synthesis, functions and biotechnological applications | |
JP5437378B2 (ja) | ヒャッポダ由来のヘモコアグラーゼ | |
US20070017447A1 (en) | Avian eggshell membrane polypeptide extraction via fermentation process | |
CN116063386B (zh) | 一种鹿角盘免疫活性肽及其制备方法和应用 | |
RU2510398C2 (ru) | Способ выделения низкомолекулярных пептидов | |
CN104945484A (zh) | 一种抗菌肽及其制备方法与应用 | |
CN105648010B (zh) | 一种激活Nrf2-ARE通路的双髻鲨鱼肉抗氧化肽的制备方法 | |
CN109369781B (zh) | 一种麒麟菜抗氧化四肽及其应用 | |
KR20150081789A (ko) | 난백 단백질 연속분리공정 방법 | |
RU2416243C2 (ru) | Способ выделения низкомолекулярных пептидов | |
US9492486B2 (en) | Preparation of bee venom with allergenic components removed | |
Hou et al. | Extraction, Purification and characterization of collagen peptide prepared from skin hydrolysate of Sturgeon fish | |
RU2729016C1 (ru) | Способ выделения природных антимикробных пептидов из лейкоцитарно-эритроцитарно-тромбоцитарной массы крови | |
RU2737730C2 (ru) | Способ фракционирования лейкоцитарных белков | |
Mohammad et al. | Characteristics of enzymatic hydrolysis of protein from different food sources and potential separation techniques | |
KR20140091228A (ko) | 계란 난백으로부터 라이소자임과 오보알부민을 연속적으로 분리추출하는 추출방법 | |
Salvado et al. | Enzymatic production of bioactive peptides from whey proteins: Their active role and potential health benefits | |
CN111004305B (zh) | 姬松茸小肽及其制备方法和应用 | |
RU2415943C1 (ru) | Биологически активный пептид, полученный из молочного белка | |
US2432970A (en) | Method of reducing the pyrogen contents of parenteral solutions | |
RU2799637C1 (ru) | Способ получения биологически активного пептидно-аминокислотного препарата на основе плазмы крови человека | |
RU2745443C1 (ru) | Способ получения средства, обладающего антигипоксической, регенеративной активностью | |
CN105622719B (zh) | 一种激活Nrf2-ARE通路的双髻鲨鱼肉抗氧化肽的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140606 |