RU2482871C2 - Композиция для лечения вирусных заболеваний животных - Google Patents
Композиция для лечения вирусных заболеваний животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2482871C2 RU2482871C2 RU2010122954/15A RU2010122954A RU2482871C2 RU 2482871 C2 RU2482871 C2 RU 2482871C2 RU 2010122954/15 A RU2010122954/15 A RU 2010122954/15A RU 2010122954 A RU2010122954 A RU 2010122954A RU 2482871 C2 RU2482871 C2 RU 2482871C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- interferon
- interferons
- mixture
- alpha
- recombinant
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения вирусных заболеваний животных. Заявлена композиция для лечения вирусных заболеваний животных, содержащая два подвида рекомбинантного интерферона позвоночных животных, смешанных в равных молярных пропорциях. Использование заявленной композиции позволяет добиться существенного увеличения терапевтического эффекта рекомбинантных интерферонов и минимизировать потенциальные побочные эффекты, связанные с их применением. 4 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к ветеринарии, конкретно к композициям и способам усиления терапевтических эффектов рекомбинантных интерферонов, и может быть использовано при приготовлении препаратов рекомбинантного интерферона, необходимых для лечения различных вирусных заболеваний животных.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Интерфероны - это группа биологически активных белков, синтезируемых лимфоцитами в ходе защитной реакции на чужеродные агенты - вирусную инфекцию, бактерии, паразиты - антигенное или митогенное воздействие. Интерфероны секретируются во внеклеточную жидкость и через специфические рецепторы действуют на другие клетки, в которых инициируется комплекс последовательных внутриклеточных реакций, приводящих к индукции ряда ферментов и белков (таких как протеиназа Р, олигоаденилатциклаза и др.), которые повышают сопротивляемость клеток к чужеродным агентам. В результате действия интерферонов подавляется репликация вируса в инфицированных клетках, усиливается фагоцитарная активность макрофагов и увеличивается специфическая цитотоксичность лимфоцитов к клеткам-мишеням. В определенных условиях интерферон способен также препятствовать развитию злокачественных новообразований.
Интерфероны можно разделить на два главных типа. У интерферонов типа I один общий рецептор IFN-alpha (IFNAR), состоящий из альфа-субъединицы (IFNAR1) и короткой или длинной бета-субъединицы (IFNAR2) (M.S.Kunzi and P.P.Rowe (2001) in J.J.Oppenheim et al. (eds) Cytokine Reference, v.1, pp.627-639). У млекопитающих к этому типу относятся четыре вида интерферонов - альфа, бета и омега и тау. Интерфероны типа II связываются с рецептором IFNGR и представлены только одним видом - интерфероном гамма.
Все до сих пор изученные млекопитающие имеют гены, кодирующие интерфероны альфа, бета и гамма. Интерфероны омега и тау представлены только у некоторых видов животных. Многие типы клеток млекопитающих, такие как фибробласты, клетки эпителия и эндотелия, лимфоидные клетки и астроциты, способны продуцировать бета-интерферон. Тогда как альфа-интерферон синтезируется в основном лимфоцитами в ответ на вирусную инфекцию (M.S.Kunzi and P.P.Rowe (2001) in J.J.Oppenheim et al. (eds) Cytokine Reference, v.1, pp.627-639). Гамма-интерферон, известный как иммунный интерферон, продуцируется главным образом активированными Т-клетками и NK-клетками (G.R. Stark (1998) Annu. Rev. Biochem. 67, 227-264).
У всех млекопитающих наиболее широко представлены интерфероны вида альфа, а у некоторых групп животных - также омега и тау (R.M.Roberts et. al. (1998) J. Interferon Cytok. Res. 19(4), 427). Эти интерфероны кодируются генами, лишенными интронов, и образуют обширные семейства. Например, у кошек было выявлено 14 генов интерферонов альфа и 13 генов интерферонов омега (см. GenBank). У собаки было найдено 8 генов интерферонов альфа (Т. Osamu et al. (2005) J. Vet. Med. Sci. 67(10), 1059-1062). Внутри семейств белки очень похожи (процент гомологии достигает 90%). Между белками, входящими в различные семейства, гомология ниже и составляет примерно 70%. Интерфероны различаются главным образом наличием инсерции в несколько аминокислотных остатков на С-конце интерферонов омега (R.M.Roberts, L.Liu, A.Alexenko (1997) Nucl. Acids Res. Mol. Biol. 56, 287-325). У грызунов и человека функциональный бета-интерферон кодируется только одним геном.
Наличие множества подвидов интерферонов альфа и омега поднимает вопрос об их функциональных различиях. Действительно, в ряде работ была обнаружена разница в активности интерферонов по отношению к различным видам вирусов (W.-S.Yeow et al. (1998) J. Immunol. 160, 2932-2939; G.R.Foster et al. (1996) J. Interferon Cytok. Res. 16, 1027-1033; R.Wonderling et al. (2002) Veterin. Immun. Immunopath. 89, 13-27).
Интерфероны можно характеризовать по ингибированию цитопатологического действия вируса на клетки (Rubinstein. Familletti, and Pestka, J. Virol., 37: 755 (1981); Armstrong. "Cytopathic Effect Inhibition Assay for Interferon: Microculture Plate Assay," in Methods in Enzymology, 78: 381-387 (1981); Familletti, Rubinstein, and Pestka, "A Convenient and Rapid Cytopathic Effect Inhibition Assay for Interferon," in Methods in Enzymology, 78: 387-394 (1981)). Одна единица активности интерферона определяется как количество интерферона, снижающее индуцированный вирусом цитопатологический эффект на 50%, и калибруется по международному референс-стандарту в международных единицах.
Важно разделять препараты интерферона по способу их получения, что обуславливает различие в их составе, а следовательно, в тех эффектах, которые они будут вызывать в организме. Лейкоцитарные интерфероны получают путем стимуляции непатогенными вирусами, двухцепочечными РНК и т.п. донорских лейкоцитов. Фактически, таким образом получают смесь всех подвидов альфа-интерферонов, содержание которых в препарате варьирует от нескольких процентов до 90%, в зависимости от технологии очистки и концентрирования. При применении щадящих методов очистки удается получить комплексные препараты, обогащенные медиаторами клеточных взаимодействий, цитокинами. Основным недостатком такого способа получения интерферонов является вероятность загрязнения конечного продукта вирусами, такими как вирусы гепатита, иммунодефицита и др. В настоящее время более перспективным признан способ получения интерферона микробиологическим синтезом. Рекомбинантные интерфероны получают путем экспрессии гена, кодирующего интерферон, в составе плазмиды прокариотических клеток. Препараты являются очень гомогенными по составу и содержат белок, соответствующий определенному подтипу интерферона (Рафальский В.В. Клиническое применение интерферонов).
Для лечения вирусных заболеваний у собак (чума плотоядных, болезнь Адески, парвовирусный энтерит, вирусный гепатит) широко используется генноинженерный интерферон для ветеринарии миксоферон, представляющий собой смесь альфа, бета и гамма интерферонов человека. Однако лечение экзогенным геноинженерным интерфероном (миксофероном) является недостаточно эффективным: являясь чужеродным белковым препаратом, миксоферон может вызывать явления анафилоксии и иммунодепрессии. Кроме того, учитывая различную чувствительность групп и штаммов вирусов к интерферону, не всегда удается ввести извне количества интерферона, достаточные для подавления персистенции вируса и не вызывающие анафилактического шока.
Неоднократно предпринимались попытки использования интерферонов в виде смесей (например, патент № WO 0039280 (А2), CN 1935256 (A), RO 118842 (В), CN 1449740 (A), RU 0002327486 27.06.2008 С1). Однако вызывает удивление тот факт, что в описаниях изобретений очень часто отсутствует указание на источник происхождения интерферонов, что делает невозможным интерпретацию результатов экспериментов, приводимых в примерах. Как уже было сказано, препараты лейкоцитарных интерферонов содержат много других белков сыворотки крови, в том числе и цитокинов. Не исключено, что эти белки (не интерфероны), сами по себе или в сочетании с другими белками (в том числе и с интерферонами), могут вызывать биологические эффекты, описываемые авторами. В отличие от этого препараты рекомбинантных интерферонов гомогенны по составу, и поэтому эффекты, получаемые от их комбинирования (смешивания), строго воспроизводимы и могут быть приписаны именно интерферонам, входящим в композицию.
Одним из факторов, ограничивающих широкое применение препаратов интерферона в ветеринарии, является наличие у них побочных эффектов, зависящих от величины дозы и продолжительности терапии.
Известно, что интерфероны бета и гамма являются видоспецифичными. Однако интерфероны альфа, омега и тау обнаруживают противовирусную активность на гетерологичных животных клетках (M.Kubes, N.Fuchsberger, R.V.H.Pollock (1994) J. Interferon Res. 14, 57-59; L.Liu et al. (1996) Biochim. Biophys. Acta 1294, 55-62). Тем не менее, эффективность долговременной терапии экзогенными интерферонами у вирус-инфецированных животных проблематична, поскольку уже в течение нескольких недель у них нарабатываются нейтрализующие антитела, делающие дальнейшее лечение интерферонами невозможным (N.S.Zeidner et al. (1990) Antimicrob. Agents Chemother. 34(9), 1749-1756).
Описание композиций для лечения вирусных заболеваний животных, содержащих смеси рекомбинантных видоспецифичных интерферонов животных, в патентной базе данных отсутствует.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей изобретения является увеличение терапевтической эффективности рекомбинантных интерферонов и уменьшение на этой основе лечебных доз интерферонов.
Сущность изобретения состоит в том, что в способе усиления терапевтического эффекта интерферона животному вводят эндогенный рекомбинантный интерферон в количестве от 1 до 1×107 ME в день, где интерферон представляет собой смесь рекомбинантных интерферонов одного подвида альфа или омега или же смесь рекомбинантных интерферонов разных подвидов альфа и омега.
Вследствие усиления терапевтического эффекта интерферона лечебный эффект может быть достигнут с меньшим количеством каждого рекомбинантного интерферона, чем обычные лечебные дозы. Поэтому, используя настоящее изобретение, становится возможным снизить стоимость лечения и минимизировать потенциальные побочные эффекты, связанные с большими терапевтическими дозами рекомбинантного интерферона, и, тем не менее, достичь терапевтического эффекта.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Предлагаемая композиция для лечения вирусных заболеваний животных содержит:
- два подвида рекомбинантного интерферона альфа, или же
- два подвида рекомбинантного интерферона омега, или же
- два подвида рекомбинантных интерферонов альфа и омега, смешанных в равных молярных пропорциях.
В способе усиления терапевтического эффекта интерферона смесь рекомбинантных интерферонов может применяться в различных дозированных лекарственных формах, включая водные растворы и порошки. Фармацевтические ингредиенты, которые могут быть использованы в составе лекарственных форм, могут включать буферы, соли и стабилизаторы.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры демонстрируют изобретение.
Пример 1. Введение смеси рекомбинантных интерферонов альфа усиливает их антивирусный эффект на клеточных линиях кошки (Fells catus).
Антивирусный эффект смеси интерферонов оценивали по ингибированию цитопатологического эффекта следующих вирусов: вируса везикулярного стоматита, вируса калицивироза кошек, вируса инфекционного перитонита кошек и герпес вируса кошек на клеточных линиях кошки CRFK и FCWF-4 (Armstrong, Methods in Enzymol., v.78 (PtA), pp.381-387 (1981)). Испытуемые композиции приготавливали либо из порошкообразных лиофилизатов, либо из водных растворов интерферонов альфа №2 (GenBank: AAM78029) и №7 (GenBank: BAC75983), смешанных в различных молярных пропорциях 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 и 1:1 в ацетатном буфере, содержащем соль NaCl и стабилизаторы декстран и сорбитол. Смесь интерферонов вносили в клеточную культуру, которую выдерживали в течение суток в CO2-инкубаторе с 5% содержанием углекислоты, 95% влажности при 37,5°С. Среду декантировали, а клетки обрабатывали вирусом и инкубировали 72 часа до развития цитопатологического эффекта в тех же условиях, что и ранее. Способность смеси интерферонов ингибировать индуцированный вирусом цитопатологический эффект оценивали в терминах конечных титров интерферона. За конечный титр интерферона принимали величину, обратную к разбавлению, которая обеспечивала 50% защиту клеток в каждом из трех независимых опытов. Полученные данные свидетельствуют, что введение смеси интерферонов альфа значительно усиливало антивирусный эффект интерферона. Наибольший эффект клеточной защиты был достигнут при равном соотношении интерферонов альфа №2 и 7 в смеси. При этом действующая суммарная концентрация смеси интерферонов была в 1.45 раза меньше, чем в контроле, где каждый из подвидов интерферонов использовался в отдельности.
Пример 2. Введение смеси рекомбинантных интерферонов омега усиливает их антивирусный эффект на клеточных линиях кошки (Felis catus).
Антивирусный эффект смеси интерферонов оценивали так же, как описано в примере 1. Так же как и ранее, введение смеси интерферонов омега значительно усиливало антивирусный эффект интерферона. Наибольший эффект клеточной защиты был достигнут при равном соотношении интерферонов омега №1 (GenBank: ABD78704) и омега №2 (GenBank: ABD78705) в смеси. При этом действующая суммарная концентрация смеси интерферонов была в 1.6 раза меньше, чем в контроле, где каждый из подвидов интерферонов использовался в отдельности.
Пример 3. Введение смеси рекомбинантных интерферонов альфа и омега усиливает их антивирусный эффект на клеточных линиях кошки (Felis catus).
Антивирусный эффект смеси интерферонов оценивали так же, как описано в примере 1. Введение смеси интерферонов омега значительно усиливало антивирусный эффект интерферона. Наибольший эффект клеточной защиты был достигнут при равном соотношении интерферонов альфа №2 (GenBank: AAM78029) и омега №1 (GenBank: ABD78704) в смеси. При этом действующая концентрация смеси интерферонов была в 1.7 раза меньше, чем в контроле, где каждый из подвидов интерферонов использовался в отдельности.
Пример 4. Введение смеси рекомбинантных интерферонов альфа усиливает их антивирусный эффект на клеточных линиях собаки (Canisfamiliaris).
Антивирусный эффект смеси интерферонов оценивали по ингибированию цитопатологического эффекта вируса везикулярного стоматита и герпес вируса собаки на клеточных линиях собаки MDCK, A72 и Cf2Th (Armstrong, Methods in EnzymoL, v.78 (PtA), pp.381-387 (1981)). Испытуемые композиции приготавливали либо из порошкообразных лиофилизатов, либо из водных растворов интерферонов альфа №1 (NCBI: NP_001006655.1) и альфа №8 (NCBI: NP_001007131.1), смешанных в различных молярных пропорциях 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 и 1:1 в ацетатном буфере, содержащем соль NaCl и стабилизаторы декстран и сорбитол. Смесь интерферонов вносили в клеточную культуру, которую выдерживали в течение суток в CO2-инкубаторе с 5% содержанием углекислоты, 95% влажности при 37,5°С. Среду декантировали, а клетки обрабатывали вирусом и инкубировали 72 часа до развития цитопатологического эффекта в тех же условиях, что и ранее. Способность смеси интерферона альфа ингибировать индуцированный вирусом цитопатологический эффект оценивали в терминах конечных титров интерферона. За конечный титр интерферона принимали величину, обратную к разбавлению, которая обеспечивала 50% защиту клеток в каждом из трех независимых опытов. Полученные данные свидетельствуют, что введение смеси интерферонов альфа значительно усиливало антивирусный эффект интерферона. Наибольший эффект клеточной защиты был достигнут при равном соотношении интерферонов альфа №1 (NCBI: NP_001006655.1) и 8 (NCBI: NP_001007131.1) в смеси. При этом действующая суммарная концентрация смеси интерферонов была в 1.8 раза меньше, чем в контроле, где каждый из подвидов интерферонов использовался в отдельности.
Вышеприведенные сведения подтверждают возможность осуществления заявляемого способа с достижением технического результата.
Claims (4)
1. Композиция для лечения вирусных заболеваний животных, содержащая два подвида рекомбинантного интерферона позвоночных животных, смешанных в равных молярных пропорциях.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что подвиды рекомбинантного интерферона в смеси представляют собой альфа интерферон, омега интерферон или смесь альфа и омега интерферонов позвоночных животных.
3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она может содержать в своем составе фармацевтические ингредиенты, которые могут быть использованы в составе лекарственных форм, и представляют собой буферы, соли и стабилизаторы.
4. Композиция по пп.1-3, отличающаяся тем, что она представлена в различных дозированных лекарственных формах, включая водные растворы и порошки.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010122954/15A RU2482871C2 (ru) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | Композиция для лечения вирусных заболеваний животных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010122954/15A RU2482871C2 (ru) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | Композиция для лечения вирусных заболеваний животных |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010122954A RU2010122954A (ru) | 2011-12-20 |
RU2482871C2 true RU2482871C2 (ru) | 2013-05-27 |
Family
ID=45403665
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010122954/15A RU2482871C2 (ru) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | Композиция для лечения вирусных заболеваний животных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2482871C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2780097C1 (ru) * | 2021-12-24 | 2022-09-19 | Общество с ограниченной ответственностью "ВЕТСТЕМ" | Композиция для лечения инфекционного перитонита кошек |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2576814C1 (ru) * | 2014-10-10 | 2016-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-Технологический Центр "БиоИнвест" | Средство для лечения и профилактики природных инфекционных заболеваний у кошек |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000039280A2 (en) * | 1998-12-31 | 2000-07-06 | Viragen, Inc. | Leukocyte-derived interferon preparations |
EP1250147A1 (en) * | 2000-01-19 | 2002-10-23 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Interferon-alpha use in the treatment of ewing's family of tumors |
RU2004102500A (ru) * | 2001-06-29 | 2005-04-10 | Максиген Апс (Dk) | Композиции интерферонов |
CN1935256A (zh) * | 2005-09-22 | 2007-03-28 | 北京远策药业有限责任公司 | 一种能防治多型流感的复方人干扰素喷雾剂的制作技术 |
RU2008121874A (ru) * | 2005-11-02 | 2009-12-10 | Сентро Де Инхеньерия Хенетика И Биотекнолохия (Cu) | Стабильные фармацевтические составы, которые содержат интерфероны гамма и альфа в синергичных соотношениях |
-
2010
- 2010-06-07 RU RU2010122954/15A patent/RU2482871C2/ru active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000039280A2 (en) * | 1998-12-31 | 2000-07-06 | Viragen, Inc. | Leukocyte-derived interferon preparations |
EP1250147A1 (en) * | 2000-01-19 | 2002-10-23 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Interferon-alpha use in the treatment of ewing's family of tumors |
RU2004102500A (ru) * | 2001-06-29 | 2005-04-10 | Максиген Апс (Dk) | Композиции интерферонов |
CN1935256A (zh) * | 2005-09-22 | 2007-03-28 | 北京远策药业有限责任公司 | 一种能防治多型流感的复方人干扰素喷雾剂的制作技术 |
RU2008121874A (ru) * | 2005-11-02 | 2009-12-10 | Сентро Де Инхеньерия Хенетика И Биотекнолохия (Cu) | Стабильные фармацевтические составы, которые содержат интерфероны гамма и альфа в синергичных соотношениях |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2780097C1 (ru) * | 2021-12-24 | 2022-09-19 | Общество с ограниченной ответственностью "ВЕТСТЕМ" | Композиция для лечения инфекционного перитонита кошек |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2010122954A (ru) | 2011-12-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Melchjorsen et al. | Expression and function of chemokines during viral infections: from molecular mechanisms to in vivo function | |
US6361769B1 (en) | Stimulation of host defense mechanisms against viral challenges | |
Klotz et al. | Type I interferons in the pathogenesis and treatment of canine diseases | |
Dianzani et al. | The biological basis for clinical use of interferon | |
CN102041263B (zh) | 鸡α干扰素/白细胞介素2嵌合基因 | |
AU2006210753B2 (en) | Method and use of interferon compositions for the treatment of avian influenza | |
SEKELLICK et al. | Chicken interferon types I and II enhance synergistically the antiviral state and nitric oxide secretion | |
Tizard | Interferons | |
Liu et al. | Interferon as a mucosal adjuvant for an influenza vaccine in pigs | |
EP4121092B1 (en) | Hybrid interferons for treating viral infections | |
RU2482871C2 (ru) | Композиция для лечения вирусных заболеваний животных | |
Verjan et al. | A soluble nonglycosylated recombinant infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) G-protein induces IFNs in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) | |
Ramírez-Carvajal et al. | Expression of porcine fusion protein IRF7/3 (5D) efficiently controls foot-and-mouth disease virus replication | |
US5997858A (en) | Stimulation of host defense mechanisms against tumors | |
AU2006314497A1 (en) | Interferon in influenza | |
Minagawa et al. | Protective effect of recombinant murine interferon beta against mouse hepatitis virus infection | |
Peek et al. | Evaluation of cytotoxicity and antiviral activity of recombinant human interferon alfa-2a and recombinant human interferon alfa-B/D hybrid against bovine viral diarrhea virus, infectious bovine rhinotracheitis virus, and vesicular stomatitis virus in vitro | |
RU2694210C1 (ru) | Препарат рекомбинантного интерферона-альфа собаки для применения в терапии природных вирусных инфекций собак | |
EP3912627A1 (en) | Methods for the treatment of coronavirus infections | |
TW528599B (en) | Stimulation of host defense mechanisms against viral challenges | |
KR20080037656A (ko) | 저독성의 장시간 순환하는 사람 인터페론-알파 유사체 및인터페론 타우의 키메라 | |
Zhao et al. | Pharmacokinetic studies of the recombinant chicken interferon-α in broiler chickens | |
Stebbing et al. | Antiviral effects of bacteria-derived human leukocyte interferons against encephalomyocarditis virus infection of squirrel monkeys | |
CN112426523A (zh) | 一种含抗病毒组合物的猪用疫苗和应用 | |
CN112370524A (zh) | 一种抗病毒组合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20150629 |
|
HE4A | Notice of change of address of a patent owner |
Effective date: 20180402 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner |