RU2480769C2 - Применение белка с меланома-ингибирующей активностью (миа) в качестве раннего индикатора терапевтического ответа при меланоме - Google Patents
Применение белка с меланома-ингибирующей активностью (миа) в качестве раннего индикатора терапевтического ответа при меланоме Download PDFInfo
- Publication number
- RU2480769C2 RU2480769C2 RU2009106718/15A RU2009106718A RU2480769C2 RU 2480769 C2 RU2480769 C2 RU 2480769C2 RU 2009106718/15 A RU2009106718/15 A RU 2009106718/15A RU 2009106718 A RU2009106718 A RU 2009106718A RU 2480769 C2 RU2480769 C2 RU 2480769C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mia
- melanoma
- treatment
- concentration
- agent
- Prior art date
Links
- 101710195116 Melanoma-derived growth regulatory protein Proteins 0.000 title claims abstract description 209
- 102100022185 Melanoma-derived growth regulatory protein Human genes 0.000 title claims abstract description 209
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 23
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 title claims description 188
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 title description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 150
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 117
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 57
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 38
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 106
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 63
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 60
- YABJJWZLRMPFSI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-5-[[2-[5-(trifluoromethyl)-1H-imidazol-2-yl]-4-pyridinyl]oxy]-N-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-benzimidazolamine Chemical compound N=1C2=CC(OC=3C=C(N=CC=3)C=3NC(=CN=3)C(F)(F)F)=CC=C2N(C)C=1NC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 YABJJWZLRMPFSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 59
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 48
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 36
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 claims description 29
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 claims description 28
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 22
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 57
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- PIQCTGMSNWUMAF-UHFFFAOYSA-N chembl522892 Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(NC(=N2)C=3C(NC4=CC=CC(F)=C4C=3N)=O)C2=C1 PIQCTGMSNWUMAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 29
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 29
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 28
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 18
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 18
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 17
- 101100327819 Caenorhabditis elegans chl-1 gene Proteins 0.000 description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 10
- 101150101476 Mia gene Proteins 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 9
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 8
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 6
- 101000973510 Homo sapiens Melanoma-derived growth regulatory protein Proteins 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 102000048342 human MIA Human genes 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 4
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241001441724 Tetraodontidae Species 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102100020873 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 3
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- -1 antibody Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 108010077182 raf Kinases Proteins 0.000 description 3
- 102000009929 raf Kinases Human genes 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 101100291239 Rattus norvegicus Mia gene Proteins 0.000 description 2
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229940124674 VEGF-R inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000010176 18-FDG-positron emission tomography Methods 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCXUVYAZINUVJD-AHXZWLDOSA-N 2-deoxy-2-((18)F)fluoro-alpha-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H]([18F])[C@@H](O)[C@@H]1O ZCXUVYAZINUVJD-AHXZWLDOSA-N 0.000 description 1
- AOYNUTHNTBLRMT-SLPGGIOYSA-N 2-deoxy-2-fluoro-aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](F)C=O AOYNUTHNTBLRMT-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010078049 Interferon alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101100291238 Mus musculus Mia gene Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- 241000656145 Thyrsites atun Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 229940108502 bicnu Drugs 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000012308 immunohistochemistry method Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229960003507 interferon alfa-2b Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960002247 lomustine Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940087463 proleukin Drugs 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020615 rectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- MIXCUJKCXRNYFM-UHFFFAOYSA-M sodium;diiodomethanesulfonate;n-propyl-n-[2-(2,4,6-trichlorophenoxy)ethyl]imidazole-1-carboxamide Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)C(I)I.C1=CN=CN1C(=O)N(CCC)CCOC1=C(Cl)C=C(Cl)C=C1Cl MIXCUJKCXRNYFM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940061353 temodar Drugs 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/5743—Specifically defined cancers of skin, e.g. melanoma
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4703—Regulators; Modulating activity
- G01N2333/4704—Inhibitors; Supressors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, конкретно к онкологии, и касается способа определения ответа пациента млекопитающего с меланомой на лечение агентом, ингибирующим меланому, а именно CHIR-265 или сорафенибом. Определяют первую концентрацию белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом у пациента млекопитающего до начала лечения, и вторую концентрацию МИА во втором биологическом образце, взятом у пациента млекопитающего после начала лечения. Затем сравнивают первую и вторую концентрации МИА и при уменьшении второй концентрации МИА по сравнению с первой концентрацией МИА делают вывод о положительном ответе на лечение, который проявляется в уменьшении размеров опухоли. Изобретение позволяет на ранних стадиях оценить эффективность применяемых препаратов и таким образом обеспечить своевременную коррекцию проводимой терапии. 6 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 табл., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к применению белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в качестве раннего индикатора ответа на лечение ингибитором клеток опухоли меланомы у пациентов млекопитающих, больных меланомой.
Уровень техники
Общая заболеваемость меланомой среди мужчин и женщин в США повышается (см. например, Edwards B.K. и др., J. Nat. Cancer Inst. 97, 2005, cc.1407-1427). С 1981 года темпы роста заболеваемости меланомой возрастают примерно на 3% в год. По данным Американского общества по борьбе с раком (American Cancer Society) в США в 2005 году было примерно 59580 новых случаев заболевания меланомой и примерно 7700 людей умерло от этого заболевания (Amer. Cancer Soc. 2005, cc.1-62). Управление по пищевым продуктам и лекарствам США (FDA) одобрило лечение метастазирующей меланомы, предусматривающее применение дакарбазина, интерферона-альфа, интерлейкина-2 (ИЛ-2). Однако прогноз у пациентов с диссеминированной формой заболевания остается плохим, и в США доля пациентов с 5-летним выживанием составляет 16% или меньше. Из-за недостаточной эффективности современного лечения особенно остро ощущается потребность в новых способах лечения. Новые лекарственные средства, например анти-ангиогенные агенты, Raf-киназа и вакцины, в настоящее время разрабатываются, и смогут улучшить выживаемость пациентов с данным заболеванием (Mandara M. и др., Expert Rev. Anticancer Ther. 6, 2006, cc.121-130).
Исходя из того, что меланома встречается часто, а современные средства лечения недостаточно эффективны, необходим биомаркер меланомы и исследование биомаркера меланомы, который мог бы выступать в роли раннего индикатора терапевтического ответа у млекопитающих для измерения эффективности исследуемых меланома-ингибирующих агентов.
Краткое описание изобретения
В связи с указанным выше, один из объектов способа настоящего изобретения предусматривает определение ответа пациента млекопитающего с клетками опухоли меланомы на лечение агентом, ингибирующим меланому. Этот способ включает: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего до начала лечения агентом, ингибирующим меланому, (б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего после начала лечения агентом, ингибирующим меланому, и (в) сравнение первой и второй концентраций МИА, причем уменьшение второй концентрации МИА, измеренной во втором биологическом образце, по сравнению с первой концентрацией МИА, измеренной в первом биологическом образце, свидетельствует о положительном ответе на лечение агентом, ингибирующим меланому.
Другой объект настоящего изобретения предусматривает способ оценки эффективности агента, ингибирующего меланому, для лечения меланомы у пациента млекопитающего, больного меланомой. Указанный способ включает: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего до начала лечения агентом, ингибирующим меланому, (б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего после начала лечения агентом, ингибирующим меланому, и (в) сравнение первой и второй концентраций МИА, причем уменьшение второй концентрации МИА, измеренной во втором биологическом образце, по сравнению с первой концентрацией МИА, измеренной в первом биологическом образце, свидетельствует об эффективности ингибирующего агента в лечении меланомы.
Другой объект настоящего изобретения предусматривает способ определения того, следует ли пациенту продолжить лечение агентом, ингибирующим меланому. Указанный способ включает: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего до начала лечения агентом, ингибирующим меланому, (б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего после начала лечения агентом, ингибирующим меланому, (в) сравнение указанных первой и второй концентраций МИА, и (г) определение того, следует ли продолжать лечить пациента агентом, ингибирующим меланому, если вторая концентрация МИА понижена по меньшей мере на 20% по сравнению с первой концентрацией МИА.
Еще один объект настоящего изобретения предусматривает способ идентификации агентов, применимых для лечения меланомы. Указанный способ включает: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от линии культивируемых клеток меланомы млекопитающего перед введением агента к линии клеток меланомы млекопитающих, (б) определение второй концентрации МИА во втором образце, взятом от линии культивируемых клеток меланомы млекопитающего после введения агента к линии культивируемых клеток меланомы млекопитающего, (в) сравнение первой и второй концентраций МИА, и (г) определение того, что агент применим для лечения меланомы, если вторая концентрация понижена по меньшей мере на 20% по сравнению с первой концентрацией МИА.
Краткое описание фигур
Указанные выше объекты и многие преимущества настоящего изобретения могут стать понятнее благодаря подробному описанию, а также, если их рассматривать вместе с поясняющими фигурами.
Фиг.1А показывает сопоставление аминокислотных последовательностей белков МИА, полученных и от млекопитающих, и не от млекопитающих.
Фиг.1Б показывает сопоставление аминокислотных последовательностей белков МИА, полученных от приматов.
Фиг.2 представляет графически результаты исследования МИА методом ELISA, показывающие, что МИА секретируется в культуральные среды из линий клеток меланомы, но не из линий клеток карциномы толстой кишки, согласно описанному в примере 1.
Фиг.3 представляет графически результаты исследования МИА методом ELISA на не подвергнутых какому-либо воздействию мышах (n=4) и на бестимусных голых мышах, имплантированных клетками меланомы человека А375М, у которых объем опухолей составляет примерно 250 мм3 (n=10), согласно описанному в примере 2.
Фиг.4А представляет графически, что уровни МИА в плазме снижаются в ответ на ингибирование роста опухоли, индуцированное пероральным дозированием соединения CHIR-265 модельных мышей с привитой меланомой человека А375М, согласно описанному в примере 2.
Фиг.4Б представляет графически, что уровни МИА в плазме снижаются в ответ на ингибирование роста опухоли, индуцированное пероральным дозированием соединения CHIR-265 и сорафениба модельных мышей с привитой меланомой человека MEXF 276, согласно описанному в примере 2.
Фиг.4В представляет графически, что уровни МИА в плазме снижаются в ответ на ингибирование роста опухоли, индуцированное пероральным дозированием соединения CHIR-265 и сорафениба модельных мышей с привитой меланомой человека MEXF 1341, согласно описанному в примере 2.
Фиг.5А представляет графически ранние изменения уровней МИА в плазме для лечения соединением CHIR-258 и CHIR-265 модельных мышей с привитой меланомой человека А375М, согласно описанному в примере 3.
Фиг.5Б показывает объемы опухолей у мышей с опухолью меланомы человека А375 перед дозированием (0 сутки) и на 3, 8 и 13 сутки после лечения CHIR-258 или CHIR-265 по сравнению с контролями (растворителем), согласно описанному в примере 3.
Фиг.6А показывает объемы опухолей у мышей с опухолью меланомы человека CHL-1 перед дозированием (0 сутки) и на 8 и 22 сутки после лечения соединением CHIR-258 (в концентрации 30 мг/кг и 80 мг/кг) по сравнению с контролями (растворителем), согласно описанному в примере 4.
Фиг.6Б представляет графически ранние изменения уровней МИА в плазме в ответ на лечение соединением CHIR-258 (в концентрации 30 мг/кг и 80 мг/кг) модельных мышей с привитой меланомой человека CHL-1, согласно описанному в примере 4.
Подробное описание предпочтительного варианта осуществления настоящего изобретения
Если не указано иначе, все понятия, используемые в настоящем изобретении, имеют те же значения, которые им придают специалисты в данной области. Ниже приведены пояснения для обеспечения четкости понятий, используемых в настоящем описании и в формуле изобретения, необходимых для описания настоящего изобретения.
В контексте настоящего изобретения понятие «положительный ответ на лечение млекопитающего» относится к уменьшению объема опухоли и/или ингибированию роста опухоли после лечения агентом, подавляющим меланому.
Один из объектов настоящего изобретения предусматривает способ определения ответа пациента млекопитающего, больного меланомой, на лечение агентом, ингибирующим меланому. Указанный способ включает: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего до начала лечения агентом, ингибирующим меланому, (б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего после начала лечения агентом, ингибирующим меланому, и (в) сравнение первой и второй концентраций МИА, причем уменьшение второй концентрации МИА, измеренной во втором биологическом образце, по сравнению с первой концентрацией МИА, измеренной в первом биологическом образце, свидетельствует о положительном ответе на лечение агентом, подавляющим меланому.
В контексте настоящего изобретения понятие «меланома-ингибирующая активность («МИА»)» относится к растворимому белку массой 12 кДа, представленному в общедоступной базе данных GenBank под номером NP_006524 и кодируемому кДНК, представленной в базе данных GenBank под номером NM_006533, а также к гомологам млекопитающих или их фрагментам, включающим по меньшей мере десять последовательно расположенных остатков белка МИА. Установлено, что МИА участвует в отсоединении клеток меланомы от внеклеточного матрикса путем связывания молекул фибронектина и ламинина, тем самым, предупреждая взаимодействие клеток с матриксом (Brockez L. и др., Br. J. Dermatol. 143, 2000, сс. 256-268). Первоначально МИА был выделен из супернатанта клеток меланомы линии HTZ-19 человека (Bogdahn U. и др., Cancer Res. 49, 1989, cc.5358-5363). Из фиг.1А следует, что белок МИА человека состоит из 131 аминокислоты, из которых первые 24 аминокислоты представляют сигнальную последовательность, которая направляет секрецию МИА во внеклеточный компартмент. Зрелый секретированный МИА человека состоит из 107 аминокислот.
На фиг.1А также показано, что гомологи белка МИА были обнаружены у разных млекопитающих и видов, не относящихся к классу млекопитающих, включая, например, крыс (r), мышей (m), шимпанзе (chimp), макаку Резус (rh), собак (d), крупный рогатый скот (bov), хомяков (ham) и иглобрюхих скалозубых рыб-собак (Puffer fish) (pf). Аминокислотную последовательность МИА человека можно получить в базе данных Genbank под номером NP_006524, аминокислотную последовательность белка МИА мыши можно получить в базе данных Genbank под номером NP_062267, аминокислотную последовательность белка МИА крысы можно получить в базе данных Genbank под номером NP_110479, аминокислотную последовательность белка МИА хомяка можно получить в базе данных Genbank под номером AAF76220, аминокислотную последовательность белка МИА крупного рогатого скота можно получить в базе данных Genbank под номером NP_776361, аминокислотную последовательность белка МИА макаки Резус можно получить в базе данных Genbank под номером ХР_001098600, аминокислотную последовательность белка МИА собаки можно получить в базе данных Genbank под номером Number ХР_541610, аминокислотную последовательность белка МИА шимпанзе можно получить в базе данных Genbank под номером ХР_512675 и аминокислотную последовательность белка МИА иглобрюхой скалозубой рыбы-собаки можно получить в базе данных Genbank под номером Genbank Number AAL26991, согласно данным на 20 июля 2006 года.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения белки МИА, применимые в практике настоящего изобретения, по меньшей мере на 70% идентичны (например, по меньшей мере на 80% идентичны, или по меньшей мере на 90% идентичны, по меньшей мере на 95% идентичны, по меньшей мере на 99% идентичны) аминокислотной последовательности белка МИА человека, представленного в базе данных Genbank под номером NP_006524, показанного на фиг.1А, или его фрагмента, включающего по меньшей мере десять последовательно расположенных остатков белка МИА.
Понятия «процент идентичности» или «идентичный процент» применительно к белку МИА означают процент аминокислотных остатков в последовательности исследуемого белка, идентичных аминокислотным остаткам белковой последовательности пациента, после сличения исследуемой последовательности с последовательностью пациента для выявления максимального процента идентичности. Например, процент идентичности двух белковых последовательностей может быть определен по парным сравнением двух последовательностей, используя интерфейс bl2seq на сайте Национального центра информации в области биотехнологии (National Center for Biotechnology Information - NCBI) Национальной библиотеки медицины США (US National Library of Medicine), 8600 Rockville Pike, Bethesda, Md. 20894, USA Интерфейс bl2seq позволяет сличать последовательности, используя компьютерную программу BLAST, описанную Tatiana A. и др., FEMS Microbiol Lett. 174, 1999, cc.247-250. Используют следующие параметры сличения: матрица = BLOSUM62, штраф на внесение делеции = 11, штраф на продолжение делеции = 1, величина x_dropff делеции = 50, Expect = 10,0, размер поля (Word size) = 3 и Filter = off.
Фиг.1А показывает сопоставление аминокислотных последовательностей гомологов МИА. Процент идентичности разных гомологов МИА, показанных на фиг.1А, показан ниже в табл.1. Из фиг.1Б и табл.1 следует, что аминокислотная последовательность МИА в высокой степени консервативна и идентична у человека и шимпанзе.
| Таблица 1. | |||||||||
| Процент идентичности МИА | |||||||||
| МИА человека | МИА макаки Резус | МИА шимпанзе | МИА мыши | МИА крысы | МИА собаки | МИА крупного рогатого скота | МИА хомяка | МИА иглобрюхой скалозубой рыбы-собаки | |
| МИА человека | 100 | 96 | 100 | 81 | 83 | 88 | 85 | 73 | 38 |
| МИА макаки Резус | 100 | 96 | 82 | 83 | 91 | 87 | 73 | 38 | |
| МИА шимпанзе | 100 | 81 | 83 | 88 | 85 | 73 | 38 | ||
| МИА мыши | 100 | 92 | 84 | 80 | 66 | 37 | |||
| МИА крысы | 100 | 85 | 81 | 69 | 37 | ||||
| МИА собаки | 100 | 86 | 70 | 37 | |||||
| МИА крупного рогатого скота | 100 | 67 | 40 | ||||||
| МИА хомяка | 100 | 56 | |||||||
| МИА иглобрюхой скалозубой рыбы-собаки | 100 | ||||||||
МИА является секретируемым белком и, следовательно, его можно обнаружить в доступных тканях, например, в биологических жидкостях, в том числе в крови (включая плазму и сыворотку), в моче и в образцах тканей, например, в биопсийных образцах опухоли меланомы. Следовательно, наличие или концентрация МИА, установленная до и после лечения, могут быть использованы для определения ответа млекопитающего на лечение агентом, ингибирующим меланому, согласно описанию в примерах 1 и 2 и иллюстративному материалу на фиг.2-4. Также было установлено, что снижение концентрации МИА, измеренное после лечения исследуемым агентом, ингибирующим меланому, по сравнению с концентрацией МИА до лечения, выступает в качестве раннего и точного показателя эффективности агента для лечения меланомы у пациента млекопитающего, что описано в примерах 3 и 4 и показано на фиг.4-5Б.
В соответствии со способом настоящего изобретения первый биологический образец взят от пациента млекопитающего перед началом лечения агентом, ингибирующим меланому, и второй биологический образец взят от пациента млекопитающего по меньшей мере один раз после инициации лечения агентом, ингибирующим меланому. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения у пациента, подвергаемого лечению, отбирают большое количество биологических образцов (например, у пациента на стадии доклинического исследования) с периодическими интервалами после начала лечения агентом, ингибирующим меланому.
В контексте настоящего изобретения понятие «лечение» относится к введению одного или нескольких агентов, ингибирующих меланому, для облегчения симптомов, связанных с меланомой, или для остановки дальнейшего прогрессирования, или ухудшения симптомов, или предупреждения или профилактики меланомы. Например, успешное лечение может включать облегчение симптомов или остановку прогрессирования заболевания, измеренных по уменьшению скорости роста опухоли, уменьшению роста опухоли, уменьшению размера опухоли, частичную или полную ремиссию меланомы, или повышенную степень выживаемости, или улучшение клинических показателей. Понятие «инициация лечения» относится ко времени начала введения агента (агентов), ингибирующего меланому.
Например, биологические образцы могут отбираться от подвергаемого лечению пациента ежедневно после начала лечения или на периодической основе после инициации лечения агентом, ингибирующим меланому, на протяжении по меньшей мере 3 суток, и по меньшей мере до 3 месяцев или дольше. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения биологические образцы от подвергаемого лечению пациента берут до начала лечения и по меньшей мере один раз на протяжении периода от 3 суток до 3 месяцев (например, на протяжении 1 недели, 2 недель, 1 месяца, 2 месяцев или 3 месяцев) после начала лечения.
Схемы лечения агентами, ингибирующими меланому, описанные в настоящем изобретении, хорошо известны специалистам в данной области. Например, без ограничений, агент, ингибирующий меланому, может вводиться пациенту, нуждающемуся в этом, ежедневно на протяжении 7, 14, 21 или 28 суток, после чего на протяжении 7 или 14 суток соединение не вводят. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения цикл лечения включает введение количества агента, ингибирующего меланому, ежедневно на протяжении 7 суток, после чего на протяжении 7 суток соединение не вводят. Цикл лечения может повторяться один или несколько раз для осуществления курса лечения. Кроме того, агент, ингибирующий меланому, может вводиться один раз, два раза, три раза или четыре раза на протяжении фазы введения цикла лечения. В других вариантах осуществления настоящего изобретения способы также включают введение количества агента, ингибирующего меланому, один раз, два раза, три раза или четыре раза ежедневно или через день на протяжении курса лечения.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения схемы лечения дополнительно включают введение агента, ингибирующего меланому, в качестве части цикла лечения. Цикл лечения включает фазу введения, во время которой агент, ингибирующий меланому, вводят пациенту на регулярной основе за исключением выходных дней, когда соединение не вводится. Например, цикл лечения может включать ежесуточное введение количества агента, ингибирующего меланому, на 7, 14, 21 или 28 сутки, после которых в течение 7 или 14 суток агент не вводится. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения цикл лечения включает введение количества агента, ингибирующего меланому, ежедневно в течение 7 суток, и в последующие 7 суток агент не вводят. Цикл лечения может быть повторен один или несколько раз для обеспечения курса лечения. Кроме того, агент, ингибирующий меланому, может вводиться ежедневно один, два, три или четыре раза на протяжении фазы введения цикла лечения. В других вариантах осуществления настоящего изобретения способы дополнительно включают введение количества агента, ингибирующего меланому, один, два, три или четыре раза ежедневно или через сутки на протяжении курса лечения. Курсом лечения называется период времени, на протяжении которого пациента лечат от рака указанными способами. Например, курс лечения может распространяться на один или несколько циклов лечения или на период времени, во время которого пациент получает ежедневно или с перерывами дозы агента, ингибирующего меланому.
Биологический образец может быть образцом ткани или образцом жидкости, взятым у пациента из класса млекопитающих, например, образцом крови или мочи, или клиническим образцом, например, биопсийным образцом меланомы. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения биологическим образцом может быть образец крови. Образец крови может быть каким-либо типом образца крови, применимым для измерения концентрации белка МИА. Например, цельная кровь, плазма (например, отделенная центрифугированием) или сыворотка из плазмы (например, полученная путем коагуляции или в пробирках для отделения сыворотки) может применяться в практике применения способа настоящего изобретения.
Способы настоящего изобретения могут применяться для каких-либо пациентов из класса млекопитающих, обладающих клетками опухоли меланомы, например, для людей, макаки Резус, шимпанзе, мышей, крыс, собак, крупного рогатого скота, кроликов, морских свинок, хомяков, коз, овец или лошадей.
Наличие или концентрация белка МИА в первом биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего, может быть определена, используя какое-либо исследование, позволяющее выявить и/или измерить количество белка МИА. Например, наличие или концентрацию белка МИА можно определить, используя иммунофлуоресцентное окрашивание, жидкостную цитометрию, масс-спектрометрию, иммуноцитохимию, иммуноблоттинг или ELISA. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения концентрацию белка МИА измеряют в биологическом образце млекопитающего, используя антитело, которое специфически связывает МИА, например, метод ELISA или вестерн-блоттинг. Пример метода исследования ELISA для обнаружения уровней МИА в образцах крови описан в примере 1.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения концентрацию белка МИА определяют в биологическом образце, используя вестерн-блоттинг, согласно описанному в примере 1.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения концентрацию белка МИА определяют в биологическом образце, используя методы иммуногистохимии. Например, биологический образец, например, осажденные клетки меланомы человека, погруженные в парафин, трансплантированная меланома, а также меланома и здоровые ткани, выделенные от пациентов, могут быть применены для оценки уровня экспрессии МИА методами иммуногистохимии. Такие иммуногистохимические исследования могут осуществляться с помощью методов, известных специалистам в данной области, например, обнаружение МИА может сопровождаться окрашиванием клеток с помощью прибора Ventana Discovery Autostainer (фирма Ventana Medical Systems, Inc., Tucson, Аризона), используя стандартный протокол обработки клеток 1 для поиска антигена. Срезы тканей инкубируют без нагревания в течение 30-120 мин с антителами к МИА человека и контролями IgG, полученными до иммунизации (фирма Novartis AG, Emeryville, Калифорния), в концентрации 1-20 мкг/мл. Продукт Ventata Universal Secondary (фирма Ventana Medical Systems, Inc.) добавляют к срезам тканей и инкубируют в течение 10-60 мин, затем для выявления вносят продукт Ventana DABMap (фирма Ventana Medical Systems, Inc). Гематоксилин Ventana и реагент Bluing (фирма Ventana Medical Systems, Inc.) могут применяться в качестве красителей для подсчета. Срезы обезвоживают в градиенте растворов спиртов, осветляют в ксилене и накрывают покровным стеклом, используя синтетические поддерживающие среды.
В соответствии со способом настоящего изобретения, снижение второй концентрации МИА, измеренной во втором биологическом образце, взятом от пациента после инициации лечения агентом, ингибирующим меланому, по сравнению с первой концентрацией МИА, измеренной в первом биологическом образце, взятом от пациента до инициации лечения (или в сравнении с предварительно установленным контрольным уровнем), является показателем положительного ответа пациента на лечение ингибирующим агентом. Из примеров 3 и 4 следует, что корреляция присутствует между статистически значимым снижением концентрации МИА в биологическом образце, взятом у пациента из класса млекопитающих, после лечения агентом, ингибирующим меланому, и соответствующим снижением нагрузки опухоли меланомы у млекопитающего по сравнению с млекопитающим, в организме которого имеются клетки опухоли меланомы, и который не подвергался лечению ингибирующим агентом.
В некоторых вариантах осуществления способа настоящего изобретения снижение концентрации МИА в биологическом образце, взятом вскоре после начала лечения агентом, ингибирующим меланому, например, на 3-8 сутки после начала лечения, является ранним индикатором (например, средством прогноза) снижения опухолевой нагрузки у пациента млекопитающего, подвергавшегося лечению. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения снижение опухолевой нагрузки связано с уменьшением объема опухоли по сравнению с объемом опухоли при начале лечения, тем самым, показывая, что ингибирующий агент проявляет цитотоксическую активность в отношении клеток меланомы. В других вариантах осуществления настоящего изобретения снижение опухолевой нагрузки связано с уменьшением объема опухоли по сравнению с контрольным пациентом млекопитающим, который не получал агента, ингибирующего меланому, тем самым показывая, что ингибирующий агент проявляет цитостатическую активность в отношении клеток меланомы.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения снижение уровня МИА по меньшей мере на 20%, измеренное в биологическом образце, взятом у пациента (млекопитающего) в течение 3 месяцев после лечения, по сравнению с биологическим образцом, взятым от пациента, не подвергавшегося лечению, показывает позитивный ответ на агент, ингибирующий меланому. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения снижение уровня МИА по меньшей мере на 20%, измеренное в биологическом образце, взятом от пациента (млекопитающего) в течение 3 суток после лечения, по сравнению с биологическим образцом, взятым у пациента, не подвергавшегося лечению, свидетельствует о положительном ответе на агент, ингибирующий меланому.
Способы настоящего изобретения могут применяться для определения ответа пациента (млекопитающего) на лечение каким-либо агентом, ингибирующим меланому, например, низкомолекулярным соединением, лекарственным белком, антителом, нуклеиновой кислотой. В контексте настоящего изобретения агентом, ингибирующим меланому, является какой-либо агент, который вызывает ингибирование роста клеток меланомы, и культивируемых клеток in vitro, и/или клеток in vivo у млекопитающих. К примерам ингибирующих меланому агентов, которые могут быть применены в практике настоящего изобретения, относятся, но ими не ограничиваются, CHIR-265, сорафениб, CHIR-258, дакарбазин (DTIC, продукт DTIC-Dome®), темозоломид (продукт Temodar®), кармустин (BCNU, продукт BiCNU®), ломустин (CeeNU®), ИЛ-2 (продукт Proleukin®) и интерферон альфа-2b (продукт IntonA®).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения способы настоящего изобретения применяют для определения ответа млекопитающего, в организме которого имеются опухолевые клетки меланомы, на лечение агентом, ингибирующим меланому, выбранным из группы, включающей соединения: CHIR-265, сорафениб и CHIR-258, подробное описание которых приведено в примерах 2-4.
Соединение CHIR-265, в настоящее время также обозначаемое «RFB-265», является {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)-пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4-трифторметил-фенил)-амином:
Соединение CHIR-265 является новым ингибитором Raf/VEGFR, описанным в работах Venetsanakos E. и др., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 47, 2006, реферат 4854, Amiri P. и др., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 47, 2006, реферат 4855, Stuart D. и др., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 47, 2006, реферат 4856, которые включены в настоящее изобретение в виде ссылок.
Соединение CHIR-258, в настоящее время обозначаемое «TKI258», имеющее структуру 4-амино-5-фтор-3-[5-(4-метилпиперазин-1-ил)-1Н-бензимидазол-2-ил]хинолин-2(1Н)-он, описано в US 6774237. Соединение CHIR-258 является ингибитором многоцелевых рецепторных тирозинкиназ (RTK), описанным в работах Lopes de Menezes D.E. и др., Clin. Cancer Res. 11, 2005, cc.5281-5291, Lee S.H. и др., Clin. Cancer Res. 11, 2005, cc.3633-3641, которые включены в настоящее изобретение в виде ссылок. Сорафениб (также обозначаемый «BAY 43-9006») является ингибитором Raf-киназы и рецепторной тирозинкиназы (Receptor Tyrosine Kinase - RTK), описанным в публикации Wilhelm S.M. и др., Cancer Res. 64, 2004, сс.7099-7109, которая включена в настоящее изобретение в виде ссылки.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения способы настоящего изобретения применяют для определения ответа пациента млекопитающего, обладающего клетками опухоли меланомы, на лечение соединением CHIR-265. В соответствии с данным вариантом описания настоящего изобретения было установлено, что уровни МИА быстро понижаются в биологических образцах, полученных от животных с опухолями меланомы, которым перорально вводили соединение CHIR-265 в дозе 100 мг/кг через сутки. Из фиг.5А и примера 3 следует, что уровни МИА (начиная со среднего уровня 27,8 нг/мл) снижаются к третьим суткам у животных, подвергавшихся лечению соединением CHIR-265 (100 мг/кг), до среднего уровня 10,4 нг/мл (снижение 62%), который связан с регрессией опухоли на 29% согласно измерениям на 3 сутки (см. фиг 5Б).
В другом варианте осуществления настоящего изобретения способы настоящего изобретения используют для определения ответа пациента (млекопитающего), обладающего клетками опухоли меланомы, на лечение соединением CHIR-258. В соответствии с настоящим изобретением установлено, что уровни МИА снизились в биологических образцах, полученных от животных, имеющих опухоль меланомы, которым вводили CHIR-258 в количестве 60 мг/кг в 10 дозах на протяжении периода длительностью 13 суток. Из фиг.4А следует, что статистически значимое снижение МИА, установленное на 3 сутки у животных, которых лечили соединением CHIR-258 (60 мг/кг), связано с ингибированием роста опухоли, согласно измерениям на 8 сутки (см. фиг.5Б).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения снижение концентрации МИА во втором биологическом образце, полученном от пациента человека после лечения, например, в сыворотке крови, по сравнению с концентрацией МИА в первом биологическом образце, полученном от пациента человека перед лечением, используют в качестве ранней точки оценки эффективности для прогноза эффективности агента, ингибирующего меланому, в уменьшении опухолевой нагрузки у пациентов, включенных в клиническое исследование.
Способы настоящего изобретения могут быть использованы для определения ответа пациента млекопитающего на лечение агентом, ингибирующим меланому, введенным каким-либо соответствующим способом введения. Агент, ингибирующий меланому, может быть введен в составе фармацевтической композиции. Обычные способы, известные специалисту в данной области медицины, могут быть применены для введения фармацевтической композиции пациенту млекопитающему обычными путями (например, оральным, подкожным, внутрилегочным, чрезслизистым, внутрибрюшинным, внутриматочным, подъязычным, подоболочечным или внутримышечным путем) стандартными методами. Например, агент, ингибирующий меланому, может быть скомбинирован или введен с фармацевтически приемлемым носителем, растворителем или разбавителем, которые могут иметь самые разные формы, в зависимости от формы препарата, который предназначен для введения. Например, при приготовлении композиций в пероральной дозовой форме какая-либо из обычных фармацевтических сред может быть применена, например, вода, гликоли, масла, спирты и др.
Способы настоящего изобретения могут быть использованы для определения эффективного количества агента, ингибирующего меланому, для введения пациенту млекопитающему. Эффективное количество означает количество или дозу, обычно достаточную вызвать примерно желаемый терапевтический лечебный эффект у пациентов млекопитающих, проходящих лечение. Эффективные количества или дозы агента, ингибирующего меланому, могут быть определены обычными методами, например, моделированием, исследованием повышения дозы или клиническими исследованиями, а также анализом обычных факторов, например, типом или путем введения или высвобождения лекарственного средства, фармакокинетике агента, тяжести и течения меланомы, предшествующей или последующей терапии пациента, состояния здоровья пациента и ответа на лекарственные средства. Примерная доза находится в диапазоне примерно от 0,001 до примерно 200 мг/кг массы тела пациента в сутки, предпочтительно примерно от 0,05 до примерно 100 мг/кг/сутки, или примерно от 1 до 35 мг/кг/сутки. В другом варианте дозы могут вводиться на периодической основе, например, через сутки (например, 0,05-100 мг/кг через сутки).
В другом объекте настоящее изобретение предусматривает способ определения того, следует ли пациента млекопитающего продолжать лечить агентом, ингибирующим меланому. В связи с этим способы настоящего изобретения включают: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего перед инициацией лечения агентом, ингибирующим меланому, (б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце от пациента млекопитающего, взятого после инициации лечения агентом, ингибирующим меланому, (в) сравнение указанных первой и второй концентраций МИА и (г) определение того, следует ли продолжать лечение пациента агентом, ингибирующим меланому, если вторая концентрация МИА снижается по меньшей мере на 20% по сравнению с первой концентрацией МИА. В соответствующих способах настоящего изобретения могут применяться какие-либо агенты, ингибирующие меланому, в том числе агенты, описанные в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения второй биологический образец берут от пациента до инициации лечения и по меньшей мере один раз в период от 3 суток до 3 месяцев (например, за 1 неделю, за 2 недели, за 1 месяц, за 2 месяца или за 3 месяца) после начала лечения.
В другом объекте настоящее изобретение предусматривает способ оценки эффективности агента, ингибирующего меланому, для лечения меланомы у пациента млекопитающего, больного меланомой. Указанный способ включает: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего перед инициацией лечения агентом, ингибирующим меланому, (б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце от пациента млекопитающего, взятого после инициации лечения агентом, ингибирующим меланому, и (в) сравнение указанных первой и второй концентраций МИА, причем снижение второй концентрации МИА, измеренной во втором биологическом образце, по сравнению с первой концентрацией МИА, измеренной в первом биологическом образце, является показателем эффективности ингибирующего агента для лечения меланомы.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способ настоящего изобретения дополнительно включает измерение объема по меньшей мере одной опухоли меланомы у пациента млекопитающего перед лечением ингибирующим агентом, и по меньшей мере один раз после введения ингибирующего агента и сравнения измерений объема опухоли, сделанные перед началом лечения и после лечения для того, чтобы определить, не был ли объем опухоли уменьшен. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения снижение в сыворотке концентрации МИА перед выявлением измеряемого снижения объема опухоли положительно коррелирует с эффективностью ингибирующего агента для лечения меланомы. Например, согласно описанному в примере 3 установлено на модельных мышах с привитой меланомой, что лечение агентом CHIR-258 (60 мг/кг), ингибирующим меланому, приводит к статистически значимому снижению концентрации в плазме МИА на 3 сутки, что предполагалось и используется в качестве прогноза для определения статистически значимого снижения нагрузки на организм опухоли, по сравнению с пациентами, которых лечили растворителем, наблюдаемого к 8 суткам (см. фиг.5А и 5Б). Кроме того, степень уменьшения опухоли из-за лечения разными агентами, ингибирующими меланому, коррелировала с уровнями МИА в плазме, например, лечения соединением CHIR-265 (МИА ниже уровня обнаружения при концентрации 3 нг/мл, >97% подавления роста опухоли), лечения сорафенибом (МИА 28,9 нг/мл, 69% подавление роста опухоли).
Объем опухоли у пациента (млекопитающего) может быть измерен с помощью какого-либо известного метода. Например, измерения размеров могут быть использованы для оценки объема опухоли по формуле: (a×b2)×0,5, в которой «a» означает наибольший диаметр, а «b» означает длину, перпендикулярную диаметру, согласно описанию в примере 2. К другим методам, применимым для выявления уменьшения объема опухолей у пациентов млекопитающих, например, у людей, относят методы визуализации, например, сканирующую компьютерную томографию (КТ), сканирующее магнитно-резонансное исследование (МРИ). Обычно оценивают сокращение опухолей вместе с методами визуализации, используя критерии оценки ответа плотных опухолей (Response Evaluation Criteria In Solid Tumors - RECIST) согласно описанию в публикации в Jour Natl. Cancer Instit. 92, 2000, cc.205-216, включенной в настоящее изобретение в виде ссылки. К другим методам, которые могут быть применены для оценки метаболической активности опухоли in vivo, включая позитронную эмиссионную томографию (positron emission tomography - PET), фтордезоксиглюкозу (FDG-PET), а синтез ДНК может быть оценен, используя фтордезокситимидин (FLT-PET). Применительно к доклиническим моделям могут быть применены дополнительные методы, которые включают применение клеток опухолей меланомы, генетически модифицированных маркерными генами, например, геном люциферазы.
Способы настоящего изобретения могут применяться для оценки эффективности одного или нескольких исследуемых агентов, ингибирующих меланому, в модельных животных, например, в доклиническом исследовании. Например, практика осуществления способа настоящего изобретения описывается, используя модель привитой опухоли меланомы человека в примере 2 ниже.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусматривается способ выявления агентов, которые могут применяться в лечении меланомы. Способ включает: (а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом от культивируемой линии клеток меланомы млекопитающего перед введением агента к линии клеток меланомы млекопитающего, (б) определение второй концентрации МИА во втором образце, взятом от линии клеток меланомы млекопитающего после введения агента к линии клеток меланомы млекопитающего, и (в) сравнение указанных первой и второй концентраций МИА, и (г) подтверждения, что агент может применяться для лечения меланомы, если вторая концентрация МИА снижается по меньшей мере на 20% по сравнению с первой концентрацией МИА.
Способы настоящего изобретения могут применяться, используя какой-либо тип агента, который является исследуемым агентом, ингибирующим меланому, для терапевтического применения пациента млекопитающего, больного меланомой. Например, агент может быть низкомолекулярным соединением, белковым терапевтическим средством, антителом или молекулой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способы применяют для идентификации одного или нескольких агентов из множества агентов, например, комбинаторной библиотеки низкомолекулярных соединений. Агент может быть введен к культивируемым клеткам меланомы млекопитающего каким-либо образом, соответствующим типу агента, используя методы, хорошо известные специалистам в данной области. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способы могут применяться с агентом, ингибирующим меланому, в качестве положительного контроля, например, с CHIR-265, сорафенибом или CHIR-258, согласно описанному в настоящем изобретении. Способы могут применяться с какой-либо линией клеток меланомы млекопитающих, например, линии клеток меланомы млекопитающих, выбранной из группы, состоящей из G361, SKMEL-28, А375М и CHL-1, согласно приведенному ниже описанию в примере 1.
Хотя предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения проиллюстрирован и описан, следует учесть, что могут быть произведены разные изменения без отклонения от духа и области охвата настоящего изобретения.
Пример 1
Этот пример показывает, что МИА экспрессируется и секретируется из линии клеток меланомы человека и не экспрессируется в линиях клеток рака прямой кишки человека.
Методы
Линии клеток: Линии клеток меланомы человека G361, SKMEL-28, CHL-1 и линию клеток карциномы толстой кишки НСТ-116 получают из Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection - ATCC) (Manassas, Виргиния). Линию клеток меланомы человека А375М и линию клеток карциномы толстой кишки человека НТ-29Р получают из Университета штата Техас, M.D. Anderson Cancer Center (Хьюстон, Техас).
Культура клеток: Линии клеток G361, А375М и НТ-29Р культивируют в среде McCoy's 5A, линию клеток SKMEL-28 поддерживают в среде Minimum Essential Medium (MEM), линию клеток CHL-1 выращивают в среде Игла в модификации Дульбекко (Dulbeccos Modification of Eagles Medium - DMEM), a линию клеток НСТ-116 культивируют в среде RPMI 1640. Все среды для культур клеток обогащают 10% фетальной сыворотки теленка, 2 мМ L-глутамина, 1 мМ натрия пирувата, 1X MEM витаминами, 1X MEM аминокислотами и 1X MEM аминокислот, не являющихся незаменимыми. Все линии клеток поддерживают при 37°C во влажной атмосфере 5% CO2.
Анализ вестерн-блоттинг: линии клеток меланомы человека (А375М, G361, SKMEL-28 и CHL-1) и линии клеток карциномы толстой кишки человека (НТ-29Р и НСТ-116) промывают дважды в фосфатно-солевом буфере (ФСБ, фирма Mediatech, Inc., Herndon, Виргиния) и лизируют в буфере RIPA (50 мМ Tris HCl, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1 мМ EGTA, 2 мМ натрий ортованадат, 20 мМ пирофосфат, 1% Triton X-100, 1% натрий дезоксихолат и 0,1% SDS), содержащем свежий 1 мМ фенилметилсульфонилфторид, таблетки смеси ингибиторов протеазы Complete Mini Protease Inhibitor Cocktail (2 таблетки/25 мл лизирующего буфера) (фирма Roche Diagnostics GmbH, Маннгейм, Германия) и 1X смеси ингибиторов фосфатазы II (Phosphatase Inhibitor Cocktail II, фирма Sigma-Aldrich, Сэнт-Луис, Миссури), в течение 20 мин на льду. Лизаты собирают в центрифужные пробирки, центрифугируют при 4°C в течение 20 мин и фильтруют через пробирки QIAshredder (фирма QIAGEN, Inc., Valencia, Калифорния). Концентрации белков определяют, используя метод ВСА по протоколу производителя (фирма Pierce, Рокфорд, Иллинойс). Образцы подготавливали для проведения вестерн-блоттинга стандартными методами, используя продукт Novex® 18% Трис-глициновый гель (фирма Invitrogen, Карлсбад, Калифорния). МИА обнаруживают с помощью поликлонального антитела козы (фирма R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота), разведенного 1:1000 в солевом Трис-буфере, содержащем 0,1% Tween®20 (TBST - Tris buffer saline containing 0,1% Tween®20, фирма Fisher Scientific, Гэмптон, Нью-Гэмпшир), с 5% сухого молока, и инкубируют в течение ночи при 4°C. Вторым антителом является связанное с пероксидазой хрена антикозье антитело (фирма Vector Laboratories, Burlingame, Калифорния), разведенное 1:5000. Полосы белка визуализируют, используя повышенную хемилюминесценцию (фирма Amersham Biosciences, Piscataway, Нью-Джерси). Равную нагрузку и перенос подтверждают обнаружением β-актина (фирма Sigma-Aldrich, Сэнт-Луис, Миссури). Рекомбинантные белки человека МИА (с молекулярной массой 12 кДа), полученные из двух коммерческих источников, используют в качестве положительного контроля (фирма Axxora, LLC, Сан-Диего, Калифорния, и фирма ProSpec-Tany TechnoGene, LTD, Rehovot, Израиль).
Исследование МИА методом ELISA: Равные количества клеток меланомы человека и карциномы прямой кишки (~250000 клеток каждой клеточной линии) высевают в чашки для культуры ткани, и культуральную среду каждой линии клеток собирают через 48 ч. Уровни МИА в культуральных средах или в плазме измеряют с помощью набора для коммерческого одноступенчатого метода ELISA по протоколу производителя (фирма Roche Diagnostics Corporation, Индианополис, Индиана). Концентрации МИА в исследуемых образцах подсчитывают, используя кривую в диапазоне 3-37 нг/мл. Если концентрация МИА превышает наивысшую стандартную концентрацию, образцы разводят 1:5 и исследуют снова для получения результатов, попадающих в линейный диапазон стандартной кривой. Данные оценивают, используя t-критерий Стьюдента (двусторонний критерий), используя Р≤0,05 в качестве уровня значимости.
Результаты: Выявляемые уровни белка МИА наблюдают при анализе методом вестерн-блоттинга для всех исследуемых линий клеток меланомы человека (А375М, G361, SKMEL-28 и CHL-1), но не линий клеток карциномы толстой кишки человека (НТ-29Р и НСТ-116) (данные не представлены). Белок МИА, наблюдаемый в линиях клеток меланомы, мигрирует совместно с рекомбинантным белком МИА положительного контроля (молекулярная масса 12 кДа). Равная нагрузка и перенос методом вестерн-блоттинга подтверждается выявлением β-актина (фирма Sigma-Aldrich, Сэнт-Луис, Миссури).
Фиг.2 показывает результаты измерения методом ELISA секреции МИА в культуральные среды из клеточных линий меланомы и карциномы толстой кишки. На фиг.2 показана секреция МИА линиями клеток меланомы А375М, G361 SKMEL-28 и CHL-1, но не линиями клеток карциномы толстой кишки НТ-29Р и НСТ-116. Пунктирная линия (----) показывает предел чувствительности метода (3 нг/мл).
Полученные результаты показывают, что МИА экспрессируется и секретируется линиями клеток меланомы, но не линиями клеток карциномы толстой кишки.
Пример 2
Этот пример показывает, что МИА может применяться в качестве суррогатного маркера опухолевой нагрузки у мышей с опухолями меланомы человека.
Методы:
Модели животных:
Исследование трансплантации меланомы человека А375 проводят на самках бестимусных мышей линии пи/пи (в возрасте 8-12 недель), получаемых от фирмы Charles River Laboratories (Wilmington, Массачусетс). Примерно 2,5×106 клеток имплантируют самкам мышей под кожу в бок. Образцы плазмы собирают при достижении среднего размера опухолей 250 мм3 (n=10) и хранят при -80°C до анализа МИА. Дозирование обычно начинают при достижении среднего размера опухолей 250 мм3. Образцы плазмы исходных мышей (n=4) без опухолей также отбирают для сравнения (фиг.3). Измерения размеров проводят дважды в неделю для определения объема опухолей по формуле: (а×b2)×0,5, где «a» обозначает наибольший диаметр, а «b» обозначает длину, перпендикулярную диаметру.
Исследования ксенотрансплантата опухоли меланомы человека MEXF 276 и ксенотрансплантата опухоли меланомы человека MEXF 1341 проводят следующим образом. Клетки опухоли меланомы человека MEXF 276 и клетки эксплантата опухоли меланомы человека MEXF 1341 первоначально получают из образцов, удаленных хирургическим путем у разных пациентов с меланомой (получены от фирмы Oncotest GmbH, Институт экспериментальной онкологии, Фрайбург, Германия), и размножают в качестве ксенотрансплантата в голых мышах. Опухоли после удаления от мышей-доноров режут на фрагменты (1-2 мм в диаметре) и помещают в среду RPMI 1640 перед подкожной имплантацией мышам-реципиентам (самцам линии NMRI пи/пи в возрасте 6-8 недель). Дозирование обычно начинают при достижении опухолями среднего размера 6-8 мм в диаметре. Животных содержат в чистых лабораторных условиях в стерильных вентилируемых клетках и дают стерильный корм для грызунов и воду без ограничений.
Терапевтические агенты: низкомолекулярные соединения CHIR-265, сорафениб и CHIR-258 синтезированы фирмой Chiron Corporation (Emeryville, Калифорния). CHIR-265 и сорафениб перерабатывают в буфере ПЭГ400, CHIR-258 растворяют в воде. Соединение CHIR-265 является новым ингибитором Raf/VEGFR (см. Venetsanakos E. и др., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 47, 2006, реферат 4854, Amiri Р. и др., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 47, 2006, реферат 4855, и Stuart D. и др., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 47, 2006, реферат 4856). Соединение CHIR-258 является многоцелевым ингибитором RTK (см. Lopes de Menezes DE и др., Clin. Cancer Res. 11, 2005, cc.5281-5291, Lee SH и др., Clin. Cancer Res. 11, 2005, cc.3633-3641). Сорафениб является ингибитором Raf-киназы и рецепторной тирозинкиназы (RTK) (см. Wilhelm S.M. и др., Cancer Res. 64, 2004, cc.7099-7109).
Лечение терапевтическими агентами:
В первом эксперименте мышей с опухолями меланомы человека А375М (n=5) рандомизируют и дозируют перорально соединением CHIR-265 в концентрации 100 мг/кг (n=5) или растворителем (n=5) один раз в сутки через сутки. Животных с опухолями, подвергнутых лечению только буфером ПЭГ400, используют в качестве контроля растворителя. Процент подавления роста опухоли (ПРО) после лечения лекарственным средством подсчитывают следующим образом: 100×[1-(средний объем опухолилечение лекарственным средством/средний объем опухолилечение растворителем)]. Образцы плазмы собирают через 48 ч после введения четвертой дозы (10 сутки) для анализа МИА методом ELISA. Результаты анализа МИА методом ELISA показаны на фиг.4А.
Во втором эксперименте мышей с опухолями меланомы человека MEXF 276 рандомизируют и дозируют перорально соединением CHIR-265 (100 или 10 мг/кг) или сорафенибом (100 мг/кг) n=4/группу. Первые сутки дозирования обозначают «0 сутки». Соответственно, схема дозирования для соединения CHIR-265 составляет 10 мг/кг на 0, 2, 4, 6, 14, 16 и 20 сутки. Для соединения CHIR-265 схема дозирования составляет 100 мг/кг на 0, 2, 14, 16 и 20 сутки. В итоге, схема дозирования для сорафениба и растворителя ПЭГ400 составляет 100 мг/кг ежедневно на протяжении 0-20 суток. Объемы опухолей измеряют дважды в неделю, и процент подавления роста опухолей определяют согласно описанному выше. Измерения объемов опухолей показаны в табл.2. Образцы плазмы собирают через 4 ч после последней дозы на 20 сутки и хранят при -80°C до анализа МИА. Уровни МИА в плазме определяют методом ELISA, который выполняют согласно описанию в примере 1. Результаты исследований МИА методом ELISA показаны на фиг.4Б.
В третьем эксперименте мышей с опухолями меланомы человека MEXF 1341 рандомизируют и дозируют перорально соединением CHIR-265 (100 или 10 мг/кг) или сорафенибом (100 мг/кг) n=4/группу. Первые сутки дозирования обозначают «0 сутки». Соответственно, схема дозирования для соединения CHIR-265 (10 мг/кг) составляет 10 мг/кг на 0, 2, 4, 6, 14, 16 и 20 сутки. Для соединения CHIR-265 (100 мг/кг) схема дозирования составляет 100 мг/кг на 0, 2, 14, 16 и 20 сутки. В итоге схема дозирования сорафениба и растворителя ПЭГ400 составляет 100 мг/кг при ежедневном введении на 0-20 сутки. Объемы опухолей измеряют дважды в неделю, и процент подавления роста опухоли определяют согласно описанному выше. Измерения объемов опухолей показаны в табл.2. Образцы плазмы собирают через 4 ч после введения последней дозы на 20 сутки и хранят при -80°C до анализа МИА. Уровни МИА в плазме определяют методом ELISA, выполняемым согласно описанию в примере 1. Результаты анализа МИА методом ELISA показаны на фиг.4 В.
Результаты
Фиг.3 показывает результаты анализа методом ELISA уровня МИА у исходных, не имеющих опухолей мышей (n=4) и у бестимусных голых мышей, имплантированных клетками меланомы человека А375М, с опухолями объемом 250 мм3 (n=10). На фиг.3 показано, что уровни МИА в плазме, варьирующие от 16 до 48 нг/мл (средняя величина = 31 нг/мл), обнаруживают у мышей с опухолями меланомы. Напротив, величины МИА, получаемые методом ELISA у исходных мышей, ниже предела чувствительности метода (который составляет 3 нг/мл и отмечен на фиг.3 пунктирной линией). Эти результаты показывают, что МИА секретируется in vivo у мышей, несущих клетки меланомы, и может быть обнаружен в плазме методом ELISA.
| Таблица 2. | ||||
| Объем опухолей после лечения ингибиторами опухолей меланомы. | ||||
| Модель мышей с привитой опухолью: | Объем опухолей (мм3) | |||
| Растворитель | CHIR-265 (100 мг/кг) | CHIR-265 (10 мг/мл) | Сорафениб | |
| А375М | 10 сутки: | 10 сутки: | Не выявляется | Не выявляется |
| Модель мышей с привитой опухолью: | Объем опухолей (мм3) | |||
| Растворитель | CHIR-265 (100 мг/кг) | CHIR-265 (10 мг/мл) | Сорафениб | |
| 436±69,5 | 133±14,1 | |||
| MEXF 276 | 20 сутки: 2902±374 | 20 сутки: 19±2,9 | 20 сутки: 58±15,2 | 20 сутки: 887±196 |
| MEXF 1341 | 20 сутки: 1895±535 | 20 сутки: 575±214 | 20 сутки: 1190±291 | 20 сутки: 1338±264 |
Фиг.4А показывает графически снижение уровней МИА в плазме в ответ на подавление роста опухоли, индуцированное пероральным дозированном соединения CHIR-265 модельным мышам с привитой меланомой А375М. Каждая точка на графике представляет данные, полученные от отдельного животного. Р≤0,05 для уровней МИА в плазме при сравнении лечения растворителем и соединением CHIR-265, согласно t-критерию Стьюдента. Пунктирная линия на графике показывает предел чувствительности метода (3 нг/мл). Выше в табл.2 указано, что средние объемы опухолей на 10 сутки для групп лечения растворителем и соединением CHIR-265 составляют 436±69,5 и 133±14,1 мм3, соответственно (±стандартное отклонение оценки) (Р<0,02). Следовательно, соединение CHIR-265, дозируемое перорально в количестве 100 мг/кг через сутки, вызывает существенную регрессию опухоли, почти на 50% после четырех доз, по сравнению с первоначальным объемом опухоли (250 мм3). Это соответствует 70% подавлению роста опухоли при сравнении с обработкой растворителем (p<0,02). На фиг.4А показано существенное снижение уровней МИА в плазме, связанное с регрессией опухоли. Уровни МИА у всех подвергавшихся лечению животных близки или ниже предела чувствительности (4 нг/мл) после четырех доз соединения CHIR-265. Напротив, у мышей, обработанных растворителем, средняя концентрация МИА составляет 69,2 нг/мл (варьируя от 21 нг/мл до 119 нг/мл), что в 17 раз выше, чем у мышей, подвергавшихся лечению соединением CHIR-265 (n=5/группу) (Р≤0,05).
Фиг.4Б графически показывает, что уровни МИА в плазме снижаются в ответ на подавление роста опухоли, индуцированное пероральным дозированием соединения CHIR-265 и сорафениба у модельных мышей, трансплантированных MEXF 276. Выше в табл.2 показаны средние объемы опухолей, измеренные на 20 сутки для растворителя (2902±374 мм3), соединения CHIR-265 в концентрации 100 мг/кг (19±2,9 мм3), соединения CHIR-265 в концентрации 10 мг/кг (58±15,2 мм3) и сорафениба (887±196 мм3) (±стандартное отклонение оценки) (Р<0,007 для всех групп лечения лекарственными средствами по сравнению с группой, в которой применяли растворитель). Следовательно, установлено, что лечение соединением CHIR-265 и сорафенибом, вызвавшее существенное ингибирование роста опухоли на модели меланомы MEXF 276 с >97% подавлением роста опухоли, индуцированным соединением CHIR-265 в обеих дозах и 69% ингибирование роста опухолей при лечении сорафенибом. Из фиг.4Б следует, что указанные ответы по ингибированию опухолей связаны с существенным снижением в плазме уровней МИА у животных, подвергнутых лечению. Средние концентрации в плазме МИА в группе обработки растворителем (113,5 нг/мл) сопоставляют с группой лечения сорафенибом (28,9 нг/мл). Уровни МИА в плазме в группах лечения соединением CHIR-265 ниже предела чувствительности (Р<0,04 для всех случаев лечения лекарственным средством против растворителя). Кроме того, степень уменьшения опухоли в результате лечения коррелирует с уровнями МИА в плазме, например, лечения соединением CHIR-265 (МИА не выявляется, подавление роста опухоли >97%), лечения сорафенибом (МИА 28,9 нг/мл, подавление роста опухоли 69%).
Фиг.4В графически показывает, что уровни МИА в плазме снижаются в ответ на подавление роста опухоли при пероральном дозировании CHIR-265 и сорафениба у модельных мышей, привитых меланомой MEXF 1341. В приведенной выше табл.2 показаны средние объемы опухолей, измеренные на 20 сутки для случаев обработки растворителем (1895±535 мм3), лечения соединением CHIR-265 в дозе 100 мг/кг (575±214 мм3), лечения соединением CHIR-265 в дозе 10 мг/кг (1190±291 мм3) и лечения сорафенибом (1338±264 мм3) (±стандартное отклонение оценки) (Р>0,08 для всех групп лечения лекарственным средством против группы лечения растворителем). Следовательно, установлено, что лечение соединением CHIR-265 и сорафенибом не вызывает существенного подавления роста опухолей у моделей меланомы MEXF 276 при 37-70% подавлении роста опухолей, индуцированном соединении CHIR-265 в обеих дозах. На фиг.4В показано, что, несмотря на пониженный уровень исходной концентрации МИА в плазме у ксенотрансплантатов MEXF 1341 по сравнению с MEXF276, обнаружено существенное (в 2 раза) снижение МИА в ответ на оба лечения соединением CHIR-265 (Р<0,02). Лечение сорафенибом также снижает в плазме уровни сорафениба (Р>0,17). Согласуясь с результатами, полученными на моделях ксенотрансплантатов А375М и MEXF276, степень уменьшения опухоли у модели ксенотрансплантата MEXF1341, получаемого в результате разных вариантов лечения, коррелирует с уровнями МИА в плазме. Результаты на моделях ксенотрансплантатов MEXF276 и MEXF1341 являются прогнозом для опухолей человека, поскольку опухолевые клетки выделяют от пациента с меланомой человека и серийно пассируют в голых мышах. Поскольку такие опухолевые клетки не растут в культуре, они более полно соответствуют исходной опухоли у пациента человека.
Полученные результаты показывают, что уровни МИА в плазме являются чувствительными суррогатными маркерами опухолевой нагрузки и ответа на лечение агентами, ингибирующими меланому, у животных с опухолями меланомы.
Пример 3
Этот пример показывает, что МИА является ранним и точным индикатором противоопухолевой лекарственной активности у доклинических моделей меланомы.
Способы: Кинетику концентраций МИА в плазме после лечения лекарственным средством исследуют следующим образом. Мышей с опухолью А375М перорально дозируют или соединением CHIR-265 (100 мг/кг), или соединением CHIR-258 (60 мг/кг), или растворителем (n=10/группу). Образцы плазмы собирают перед началом дозирования, а также на 3, 8 и 13 сутки.
Объемы опухолей измеряют в те же временные точки, используя способы, описанные в примере 2.
Результаты: фиг.5А графически показывает ранние и существенные изменения уровней МИА в плазме в ответ на лечение соединениями CHIR-258 и CHIR-265 на модели привитой меланомы человека А375М. *Р<0,05 для всех сопоставлений с обработкой растворителем. Вертикальными отрезками показывают стандартное отклонение оценок (СО). Пунктирная линия показывает предел чувствительности исследования.
Фиг.5Б показывает объемы опухолей у мышей с опухолью меланомы человека А375М на 3, 8 и 13 сутки после лечения соединением CHIR-258 или CHIR-265 в сравнении с контролями-растворителями. ұP<0,01 для соединения CHIR-265 против растворителя, ФР<0,005 для CHIR-258 против растворителя. Вертикальными отрезками показывают стандартное отклонение оценок (СО).
Результаты на фиг.5А и 5Б показывают, что и CHIR-258, и CHIR-265 вызывают статистически значимые снижения концентрации МИА в плазме к 3 суткам, причем указанный показатель продолжает снижаться по ходу лечения (Р<0,05). Исходная концентрация МИА, измеренная на 0 сутки, составляет 27,8 нг/кг. Снижение в плазме концентрации МИА - более выраженный показатель при лечении соединением CHIR-265, которое индуцирует регрессию опухоли, но отличается от соединения CHIR-258, подавляющего, но не регрессирующего опухоль. После лечения соединением CHIR-265 концентрации МИА снижаются до 10,4 нг/мл на 3 сутки, 62% уменьшение концентрации МИА связано с регрессией опухоли на 29% (фиг.5А). К 13 суткам концентрации МИА не выявляются в группе лечения соединением CHIR-265. Лечение соединением CHIR-258 приводит к ингибированию роста опухолей, однако регрессий не наблюдают. Тем не менее, уровни МИА снижаются к 3 суткам до статистически значимых более низких уровней по сравнению с растворителем и снижаются до 63% на 13 сутки по сравнению с исходным уровнем.
Указанные данные показывают, что МИА является ранним индикатором действия лекарственного средства и что изменения, обнаруживаемые методом ELISA в уровнях циркулирующего МИА, предшествуют фиксируемым изменениям объемов опухолей. Лечение соединениями CHIR-265 и CHIR-258, приводящее к разным степеням ингибирования роста опухолей и/или регрессии опухолей, что связано с воздействиями на опухолевую нагрузку, является значимым и коррелирующим со снижением уровней МИА в плазме. Например, лечение соединением CHIR-265 индуцирует регрессию опухоли с быстрым и существенным снижением уровней МИА, а лечение CHIR-258 приводит к ингибированию роста опухоли с не столь выраженным снижением уровней МИА.
Другое значимое наблюдение заключается в том, что уровни МИА снижаются раньше и с большей амплитудой, чем объемы опухолей. Примером является существенное снижение уровней МИА на ранние сроки в схемах дозирования. Даже при стабилизации объема опухолей, наблюдаемого при лечении соединением CHIR-258, уровни МИА продолжают снижаться. Без опоры на теоретические обоснования предполагают, что данный эффект может быть связан с наличием некротических и погибающих клеток, что влияет на объем опухоли, но они более не секретируют МИА.
Основываясь на результатах доклинических исследований, клинические исследования у людей могут показать пониженные уровни МИА до момента, когда ответ опухоли может быть измерен, тем самым, являясь ранним индикатором наличия положительного ответа пациента человека на агент, ингибирующий меланому. Кроме того, описанные в настоящем описании данные показывают, что МИА может быть применен в клинических исследованиях агентов, являющихся цитостатическими, а также агентов, являющихся цитотоксическими.
Пример 4
Этот пример показывает, что МИА может применяться в качестве суррогатного маркера опухолевой нагрузки у мышей с привитой опухолью меланомы человека CHL-1.
Методы:
Модели животных:
Исследование привитой меланомы человека CHL-1 проводят на самках бестимусных мышей линии пи/пи (в возрасте 8-12 недель), получаемых от фирмы Charles River Laboratories (Вилмингтон, Массачусетс). Примерно 5×106 опухолевых клеток в продукте Matrigel™ имплантируют подкожно в бок мышам. Дозирование начинают, когда опухоли достигают среднего размера 200 мм3. Измерения размеров проводят дважды в неделю для оценки объема опухоли по формуле: (а×b2)×0,5, в которой «a» означает наибольший диаметр, а «b» означает длину, перпендикулярную диаметру.
Терапевтические агенты: Низкомолекулярное соединение CHIR-258 получают согласно описанию в примере 2.
Лечение терапевтическими агентами: мышей с опухолью меланомы человека CHL-1 рандомизируют и дозируют перорально соединением CHIR-258 в количестве 30мг/кг и 80 мг/кг (n=10/группу) в сутки через сутки. Первые сутки дозирования обозначают «0 сутки». Образцы плазмы отбирают перед дозированием и на 8 и 22 сутки. В исследовании также используют контрольную группу (n=10).
Результаты: Фиг.6А графически показывает объемы опухолей у мышей с клетками опухолей меланомы человека CHL-1 после лечения соединением CHIR-258 или контролем растворителем. *Р<0,03 для обоих вариантов лечения соединением CHIR-258 относительно контроля. Вертикальными отрезками показывают стандартное отклонение оценок (СО). Из фиг.6А следует, что соединение CHIR-258 в дозах 30 мг/кг или 80 мг/кг при введении один раз в сутки вызывает существенное подавление роста опухоли (Р<0,03) к восьмым суткам по сравнению с обработкой растворителем.
Фиг.6Б показывает графически воздействие лечения агентом CHIR-258 на концентрацию в плазме МИА. *Р<0,05 для всех сравнений с растворителем. Вертикальными отрезками показывают стандартное отклонение оценок (СО). Пунктирная линия показывает предел чувствительности метода. На фиг.6Б показано, что соединение CHIR-258 существенно ингибирует секрецию МИА при введении в обеих дозах - и 30 мг/кг, и 80 мг/кг. На фиг.6Б также показано, что уровни МИА в плазме во всех группах мышей до дозирования примерно равны или ниже предела обнаружения данного исследования. Интересно отметить, что уровни МИА у ксенотрансплантатов CHL-1 до дозирования (2,6 нг/мл) ниже, чем уровни МИА у мышей с ксенотрансплантатом меланомы человека А375М (31 нг/мл, согласно описанию в примере 2), несмотря на то, что исходные объемы опухолей до дозирования находились в близком диапазоне (200 против 250 мм3, соответственно). Средний уровень МИА в плазме в контрольной группе исследования меланомы CHL-1 составляет примерно 7,7 нг/мл к восьмым суткам, а уровни МИА в плазме из обеих групп, в которых лечили соединением CHIR-258, не обнаруживались к восьмым суткам и в последующие временные точки анализа (см. фиг.6Б).
Эти результаты подтверждают, что хотя лечение соединением CHIR-258 вызывает ингибирование роста опухоли, но не вызывает регрессии, лекарственное средство эффективно при существенно снижающихся уровнях МИА в плазме. Эти результаты согласуются с результатами, полученными на модели привитой меланомы А375М, согласно описанию в примере 2. Хотя теоретическое объяснение отсутствует, данный эффект может быть связан с наличием некротизирующих или гибнущих клеток, которые влияют на объем опухоли, но не секретируют МИА. Результаты также подтверждают применение МИА в качестве раннего индикатора ответа лекарственного средства и эффективности лечения меланомы.
Хотя предпочтительный вариант настоящего изобретения был проиллюстрирован и описан, следует учесть, что различные изменения могут быть сделаны, не отклоняясь от духа и области охвата настоящего изобретения.
Claims (7)
1. Способ определения ответа пациента млекопитающего, имеющего опухолевые клетки меланомы, на лечение агентом, ингибирующим меланому, который выбран из группы, которая содержит CHIR-265, сорафениб, включающий:
(а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом у пациента млекопитающего до начала лечения агентом, ингибирующим меланому,
(б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего после начала лечения агентом, ингибирующим меланому, и
(в) сравнение первой и второй концентраций МИА, причем уменьшение второй концентрации МИА, измеренной во втором биологическом образце, по сравнению с первой концентрацией МИА, измеренной в первом биологическом образце, свидетельствует о положительном ответе на лечение агентом, ингибирующим меланому,
где ответ проявляется в уменьшении размеров опухоли.
(а) определение первой концентрации белка с меланома-ингибирующей активностью (МИА) в первом биологическом образце, взятом у пациента млекопитающего до начала лечения агентом, ингибирующим меланому,
(б) определение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, взятом от пациента млекопитающего после начала лечения агентом, ингибирующим меланому, и
(в) сравнение первой и второй концентраций МИА, причем уменьшение второй концентрации МИА, измеренной во втором биологическом образце, по сравнению с первой концентрацией МИА, измеренной в первом биологическом образце, свидетельствует о положительном ответе на лечение агентом, ингибирующим меланому,
где ответ проявляется в уменьшении размеров опухоли.
2. Способ по п.1, в котором агентом, ингибирующим меланому, является CHIR-265.
3. Способ по п.1, в котором снижение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, измеренной на протяжении 3 месяцев после начала лечения, свидетельствует о положительном ответе на лечение агентом, ингибирующим меланому.
4. Способ по п.1, в котором снижение второй концентрации МИА во втором биологическом образце, измеренной на протяжении 1 недели после начала лечения, свидетельствует о положительном ответе на лечение агентом, ингибирующим меланому.
5. Способ по п.1, в котором снижение второй концентрации МИА используют в качестве эффективной конечной точки для оценки ответа пациента млекопитающего на лечение агентом, ингибирующим меланому.
6. Способ по п.1, в котором биологическим образцом является образец крови.
7. Способ по п.1, в котором концентрацию МИА в биологическом образце определяют, используя антитело, которое специфически связывается с МИА.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US82075606P | 2006-07-28 | 2006-07-28 | |
| US60/820,756 | 2006-07-28 | ||
| PCT/US2007/016848 WO2008013912A1 (en) | 2006-07-28 | 2007-07-26 | Use of melanoma inhibitory activity (mia) protein as an early indicator for therapeutic response in melanoma |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009106718A RU2009106718A (ru) | 2010-09-10 |
| RU2480769C2 true RU2480769C2 (ru) | 2013-04-27 |
Family
ID=38626977
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009106718/15A RU2480769C2 (ru) | 2006-07-28 | 2007-07-26 | Применение белка с меланома-ингибирующей активностью (миа) в качестве раннего индикатора терапевтического ответа при меланоме |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8288087B2 (ru) |
| EP (1) | EP2049904A1 (ru) |
| JP (2) | JP5274458B2 (ru) |
| KR (1) | KR20090046893A (ru) |
| CN (1) | CN101512343A (ru) |
| AU (1) | AU2007277144B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0715062A2 (ru) |
| CA (1) | CA2659270A1 (ru) |
| MX (1) | MX2009001070A (ru) |
| RU (1) | RU2480769C2 (ru) |
| WO (1) | WO2008013912A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2651469C1 (ru) * | 2014-04-24 | 2018-04-19 | Пфайзер Инк. | Лечение рака |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2440799T3 (es) | 2005-05-13 | 2014-01-30 | Novartis Ag | Métodos para tratar cáncer resistente a los fármacos |
| CA2679268A1 (en) * | 2007-03-09 | 2008-09-18 | Novartis Ag | Treatment of melanoma |
| JP5568807B2 (ja) * | 2008-06-06 | 2014-08-13 | 静岡県 | プロテオミクス解析を用いたメラノーママーカーの同定 |
| WO2011044072A1 (en) * | 2009-10-05 | 2011-04-14 | Novartis Ag | Combination of raf-265 and an activator of ampk for use in the treatment of a proliferative disease |
| DE102015103158A1 (de) | 2014-03-04 | 2015-09-10 | Bergische Universität Wuppertal | Verbindungen für die Behandlung des Melanoms |
| KR20180091024A (ko) * | 2015-12-02 | 2018-08-14 | 클리어라이트 다이어그노스틱스 엘엘씨 | 암의 검출 및 모니터링을 위해 종양 조직 시료를 준비하고 분석하는 방법 |
| EP3816934A1 (en) * | 2019-11-04 | 2021-05-05 | Nathan Vinçon | Method of, and computerized system for labeling an image of cells of a patient |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280483C2 (ru) * | 2004-07-05 | 2006-07-27 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Способ определения эффективности противоопухолевого лечения меланом кожи |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4725538A (en) * | 1985-10-25 | 1988-02-16 | The Beth Israel Hospital Association | Method of assaying the presence of cancer cells |
| EP0498851B1 (en) * | 1989-11-03 | 1996-01-03 | MORTON, Donald L. | Urinary tumor associated antigen, antigenic subunits uses and methods of detection |
| DK0710248T3 (da) * | 1993-07-20 | 2000-04-10 | Roche Diagnostics Gmbh | Melanom-inhiberende protein |
| US5869332A (en) * | 1994-06-03 | 1999-02-09 | Southwest Foundation For Biomedical Research | Metastatic melanoma cell lines from monodelphis domestica for use in anti-cancer agent discovery |
| JP4628365B2 (ja) * | 2003-11-04 | 2011-02-09 | ニツポネツクス・インコーポレーテツド | 免疫組織化学的方法 |
| KR20080097382A (ko) * | 2005-07-21 | 2008-11-05 | 뉴사우스 이노베이션즈 피티와이 리미티드 | 암의 치료 방법 |
-
2007
- 2007-07-26 AU AU2007277144A patent/AU2007277144B2/en not_active Ceased
- 2007-07-26 CN CNA2007800336701A patent/CN101512343A/zh active Pending
- 2007-07-26 EP EP07797034A patent/EP2049904A1/en not_active Withdrawn
- 2007-07-26 WO PCT/US2007/016848 patent/WO2008013912A1/en active Application Filing
- 2007-07-26 RU RU2009106718/15A patent/RU2480769C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-07-26 BR BRPI0715062-8A patent/BRPI0715062A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2007-07-26 KR KR1020097004157A patent/KR20090046893A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-07-26 MX MX2009001070A patent/MX2009001070A/es active IP Right Grant
- 2007-07-26 US US12/375,074 patent/US8288087B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-26 JP JP2009521842A patent/JP5274458B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-26 CA CA002659270A patent/CA2659270A1/en not_active Abandoned
-
2012
- 2012-10-04 US US13/645,221 patent/US20130237546A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-01-04 JP JP2013000198A patent/JP2013083665A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280483C2 (ru) * | 2004-07-05 | 2006-07-27 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Способ определения эффективности противоопухолевого лечения меланом кожи |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DEICHMANN M. et al. Are responses to therapy of metastasized malignant melanoma reflected by decreasing serum values of S100beta or melanoma inhibitory activity (MIA)? Melanoma Res. 2001 Jun; 11(3): 291-296. VENETSANAKOS E. et al. Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 47, 2006, реферат 4854. LOPES DE MENEZES D.E. et al. CHIR-258: a potent inhibitor of FLT3 kinase in experimental tumor xenograft models of human acute myelogenous leukemia. Clin Cancer Res. 2005 Jul 15; 11(14): 5281-5291. WILHELM S.M. et al. BAY 43-9006 exhibits broad spectrum oral antitumor activity and targets the RAF/MEK/ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis. Cancer Res. 2004 Oct 1; 64(19): 7099-7109. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2651469C1 (ru) * | 2014-04-24 | 2018-04-19 | Пфайзер Инк. | Лечение рака |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2659270A1 (en) | 2008-01-31 |
| CN101512343A (zh) | 2009-08-19 |
| KR20090046893A (ko) | 2009-05-11 |
| BRPI0715062A2 (pt) | 2013-06-04 |
| JP5274458B2 (ja) | 2013-08-28 |
| JP2009544970A (ja) | 2009-12-17 |
| US20100009392A1 (en) | 2010-01-14 |
| AU2007277144A1 (en) | 2008-01-31 |
| WO2008013912A1 (en) | 2008-01-31 |
| MX2009001070A (es) | 2009-04-23 |
| EP2049904A1 (en) | 2009-04-22 |
| US20130237546A1 (en) | 2013-09-12 |
| RU2009106718A (ru) | 2010-09-10 |
| US8288087B2 (en) | 2012-10-16 |
| AU2007277144B2 (en) | 2012-01-19 |
| JP2013083665A (ja) | 2013-05-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2480769C2 (ru) | Применение белка с меланома-ингибирующей активностью (миа) в качестве раннего индикатора терапевтического ответа при меланоме | |
| EP3099380B1 (en) | Methods and compositions for killing senescent cells and for treating senescence-associated diseases and disorders | |
| RU2748549C2 (ru) | Способ лечения почечно-клеточного рака с использованием n-(4-(6,7-диметоксихинолин-4-илокси)фенил)-n'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамида, (2s)-гидроксибутандиоата | |
| US20120128665A1 (en) | Preselection of subjects for therapeutic treatment based on hypoxic status | |
| US20140024030A1 (en) | Preselection of subjects for therapeutic treatment with oxygen sensitive agents based in hypoxic status | |
| JP2020524698A (ja) | がんの処置における使用のためのＩＬ−１β結合性抗体 | |
| JP6695003B2 (ja) | 癌のための併用療法 | |
| KR20150132205A (ko) | B-Raf 억제제와 제2 억제제를 포함하는 조합 요법 | |
| US20150253330A1 (en) | Pre-selection of subjects for therapeutic treatment with an hsp90 inhibitor based on hypoxic status | |
| JP6270481B2 (ja) | フラザノベンゾイミダゾールに対する薬物応答のバイオマーカーとしてのｇｌｕ−チューブリンの使用 | |
| KR20220088830A (ko) | 비뇨기계암의 치료 방법 | |
| US20200405719A1 (en) | Cancer treatment using combination of neutrophil modulator with modulator of immune checkpoint | |
| US20160045598A1 (en) | Combination Treatments with Sonic Hedgehog Inhibitors | |
| JP2016511766A (ja) | Ｃａｉｘ階層化に基づく癌治療 | |
| KR101539138B1 (ko) | 병용 요법 및 치료에 대한 내성 평가 방법 | |
| AU2019409139A1 (en) | Use of IL-1β binding antibodies | |
| US20230346791A1 (en) | Atr inhibitors for the treatment of cancer | |
| NL2021185B1 (en) | Combination Therapy and Use Thereof for Treating Cancer | |
| TW202434251A (zh) | 治療癌症之療法 | |
| WO2024216200A1 (en) | Dosage regimen for sotorasib/carboplatin/pemetrexed in cancer treatment | |
| AU2022205969A9 (en) | Use of a kras g12c inhibitor in treating cancers | |
| CN117554616A (zh) | Tap1在肿瘤耐药中的应用 | |
| KR20200124661A (ko) | 종양 성장을 감소시키기 위한 미나프린의 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140727 |