RU2477894C1 - Method for simulating intestinal dysbacteriosis in laboratory animals - Google Patents
Method for simulating intestinal dysbacteriosis in laboratory animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2477894C1 RU2477894C1 RU2011149501/14A RU2011149501A RU2477894C1 RU 2477894 C1 RU2477894 C1 RU 2477894C1 RU 2011149501/14 A RU2011149501/14 A RU 2011149501/14A RU 2011149501 A RU2011149501 A RU 2011149501A RU 2477894 C1 RU2477894 C1 RU 2477894C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- intestinal
- microflora
- cfu
- gentamicin
- intestinal microflora
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и медицинской микробиологии и может быть использовано для изучения характера изменений состава и свойств кишечной микрофлоры и обоснования подходов для коррекции микроэкологических нарушений в кишечнике.The invention relates to the field of medicine and medical microbiology and can be used to study the nature of changes in the composition and properties of intestinal microflora and substantiation of approaches for the correction of microecological disturbances in the intestine.
Различные факторы экзогенного и эндогенного характера, влекущие за собой выраженные клинические проявления со стороны макроорганизма либо являющиеся следствием каких-то патологических процессов в организме, сказываются на качественном или количественном состоянии типичного для данного биотопа состава нормальной микрофлоры. Такие качественные и количественные нарушения нормофлоры относят к дисбактериозам (Дисбактериозы - актуальная проблема медицины / А.А.Воробьев [и др.] // Вестник РАМН. - 1997. - №3. - С.4-7).Various factors of exogenous and endogenous nature, entailing pronounced clinical manifestations on the part of the macroorganism or resulting from some pathological processes in the body, affect the qualitative or quantitative state of the composition of normal microflora typical of a given biotope. Such qualitative and quantitative disturbances of normoflora are attributed to dysbacteriosis (Dysbacteriosis - an urgent problem of medicine / A.A. Vorobyov [et al.] // Vestnik RAMS. - 1997. - No. 3. - P.4-7).
К наиболее значимым причинам, приводящим к нарушению микробиоценоза кишечника, относят: фактор питания, стрессы различного генеза, острые инфекционные заболевания желудочно-кишечного тракта, снижение иммунного статуса различного генеза, ксенобиотики различного происхождения, нарушения биоритмов, дальние поездки, заболевания внутренних органов, прежде всего органов желудочно-кишечного тракта, нарушения моторики кишечника, ятрогенные воздействия (антибактериальная терапия, гормонотерапия, применение цитостатинов, лучевая терапия, оперативные вмешательства) (Минушкин, О.Н. Дисбактериоз кишечника (понятие, диагностика, принципы лечебной коррекции). Современные возможности пребиотической терапии. Учебно-методическое пособие для врачей и курсантов циклов усовершенствования врачей / О.Н.Минушкин [и др.] // М.: ФГУ «Учебно-методический центр» управления делами Президента Российской Федерации, 2010. - 50 с.).The most significant reasons leading to disruption of intestinal microbiocenosis include: nutrition factor, stresses of various origins, acute infectious diseases of the gastrointestinal tract, decreased immune status of various origins, xenobiotics of various origins, biorhythm disturbances, long trips, diseases of internal organs, primarily organs of the gastrointestinal tract, impaired intestinal motility, iatrogenic effects (antibiotic therapy, hormone therapy, the use of cytostatins, radiation therapy, op iterative interventions) (Minushkin, O.N. Intestinal dysbiosis (concept, diagnosis, principles of medical correction). Modern possibilities of prebiotic therapy. A training manual for doctors and cadets of the doctor’s cycle of improvement / O. N. Minushkin [et al.] / / M.: FGU "Educational and Methodological Center" of the Administrative Department of the President of the Russian Federation, 2010. - 50 p.).
Очевидно, что любая из причин может привести к изменению состава и свойств кишечной микрофлоры и развитию дисбактериоза. Его проявления разнообразны, что в значительной мере затрудняет жизнь больного и заставляет обращаться за помощью к врачу. Назначая лекарственные препараты, врач исходит из общих принципов воздействия на дисбиотические состояния и руководствуясь отраслевым стандартом (Приказ Минздрава РФ №231 от 2003 г.) «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника». Для более адекватной коррекции дисбиотических нарушений в кишечнике у людей целесообразно в эксперименте на лабораторных животных выявить факторы и условия, способствующие формированию дисбактериоза. Экспериментальный дисбактериоз для изучения характера изменений состава и свойств кишечной микрофлоры у лабораторных животных, а также для обоснования подходов с целью коррекции микроэкологических нарушений, нуждается в определенном обосновании и установлении определенных количественных показателей, свидетельствующих о его становлении и развитии. Это тем более важно, что полученные в эксперименте на лабораторных животных результаты можно в последующем экстраполировать на организм человека как в плане профилактики, так и лечения дисбактериозов.Obviously, any of the reasons can lead to a change in the composition and properties of intestinal microflora and the development of dysbiosis. Its manifestations are diverse, which greatly complicates the life of the patient and makes him turn to a doctor for help. When prescribing medicines, the doctor proceeds from the general principles of influence on dysbiotic conditions and is guided by the industry standard (Order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 231 of 2003) “Protocol for the management of patients. Intestinal dysbiosis. " For a more adequate correction of dysbiotic disorders in the intestines in humans, it is advisable in an experiment on laboratory animals to identify factors and conditions that contribute to the formation of dysbiosis. Experimental dysbiosis to study the nature of changes in the composition and properties of intestinal microflora in laboratory animals, as well as to justify approaches for the correction of microecological disturbances, needs a certain justification and the establishment of certain quantitative indicators indicating its formation and development. This is all the more important because the results obtained in an experiment on laboratory animals can subsequently be extrapolated to the human body both in terms of prevention and treatment of dysbiosis.
В связи с серьезностью проблемы дисбактериозов предпринимались усилия по оптимизации средств и методов их лечения, включая патогенетическое и этиотропное лечение основного заболевания в сочетании с заместительной терапией пробиотиками, а также иммуностимуляторами различной направленности. Весьма перспективным способом нормализации кишечной микрофлоры является стимуляция собственной индигенной микрофлоры с использованием фруктоолигосахаридов и фруктополисахаридов и содействие приживлению пробиотических микроорганизмов при их энтеральном применении (Захаренко С.М. Инфекции, микробиота кишечника человека и метаболический синдром / С.М.Захаренко, Ю.А.Фоминых, С.Н.Мехтиев // Эффективная фармакотерапия. Гастроэнтерология. - 2011. - №3. - С.14-20). В этой связи весьма ценной будет информация об общем количестве фекальной микрофлоры, а также об отдельных ее представлениях, в частности бифидобактерий, лактобактерий, эшерихий, которые, судя по данным отчета о клинико-лабораторном исследовании (Сравнительная оценка клинико-лабораторной эффективности современных про- и пребиотических препаратов в коррекции дисбиотических нарушений желудочно-кишечного тракта: отчет о клинико-лабораторном исследовании / ФГУН «Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского; рук. Грачева Н.М., Ардатская М.Д.; исполн. Аваков А.А., Соловьева А.И. - М.: 2010. - 23 с.), являются своеобразными индикаторами эффективности лечения дисбактериоза различной степени выраженности. В то же время до настоящего времени не решен вопрос о моделировании дисбактериоза кишечника, что позволило бы в эксперименте оценить терапевтическую эффективность новых пробиотических микроорганизмов и создаваемых на их основе пробиотических препаратов (Патент РФ №2246956. Штамм Lactobcillus paracasei CNCM 1-2116 (NCC 2461), обладающий способностью предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами, вызывающими диарею, и средство для лечения и/или профилактики нарушений, ассоциируемых с диареей, вызываемой ротавирусами; патент РФ 2308483. Штамм Bifidobacterium longum infantis для приготовления пробиотика, антимикробный агент и препарат на основе штамма Bifidobacterium longum infantis с иммуномодулирующими свойствами; патент РФ №2310463. Гепатопротекторный пробиотик).Due to the seriousness of the problem of dysbacteriosis, efforts were made to optimize the means and methods of their treatment, including pathogenetic and etiotropic treatment of the underlying disease in combination with probiotic replacement therapy, as well as immunostimulants of various kinds. A very promising way to normalize the intestinal microflora is to stimulate its own indigenous microflora using fructooligosaccharides and fructopolysaccharides and to promote the engraftment of probiotic microorganisms during their enteral use (Zakharenko S.M. Infections, human intestinal microbiota and metabolic syndrome / S.M. Zakharenko, Yu.A. Fominykh, S. N. Mehdiyev // Effective pharmacotherapy. Gastroenterology. - 2011. - No. 3. - S.14-20). In this regard, information on the total amount of fecal microflora, as well as on its individual representations, in particular bifidobacteria, lactobacilli, Escherichia, which, judging by the report on the clinical and laboratory research (a comparative assessment of the clinical and laboratory effectiveness of modern and prebiotic drugs in the correction of dysbiotic disorders of the gastrointestinal tract: report on clinical and laboratory research / FGUN "Moscow Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology named after G.N. Gabrichevsky; hand. Gra eva NM, M. D .; Ardatskaya executable Avakov AA, Solov'eva AI -. M .: 2010. -. 23) is an indicator of efficiency of treatment of dysbiosis of different severity. At the same time, the issue of modeling intestinal dysbiosis has not yet been resolved, which would allow us to experimentally evaluate the therapeutic efficacy of new probiotic microorganisms and the probiotic preparations created on their basis (RF Patent No. 2246956. Lactobcillus paracasei CNCM 1-2116 strain (NCC 2461) having the ability to prevent infection of intestinal epithelial cells with rotaviruses causing diarrhea, and an agent for treating and / or preventing disorders associated with rotavirus diarrhea; RF patent 2308483. Sta m Bifidobacterium longum infantis for preparing probiotic antimicrobial agent and a preparation based on the strain of Bifidobacterium longum infantis with immunomodulatory properties; RF Patent №2310463 hepatoprotective probiotic)..
В доступной литературе не отражено описание специальных исследований по воспроизведению дисбактериоза кишечника на лабораторных животных, хотя исследователи при выполнении экспериментов на лабораторных животных и решении конкретных научных задач сталкивались с проявлением дисбактериоза кишечника у животных. Наиболее близкими к заявляемому способу являются постлучевой дисбактериоз, возникающий у белых мышей, облученных γ-квантами в дозе 700 рентген (Изучение влияния препарата из лактобактерий «Салко» на выживаемость и микрофлору кишечника у облучаемых животных / В.Боссарт [и др.] // Журн. микробиол. - 1990. - №11. - С.6-9), а также постинфекционный стафилококковый дисбактериоз кишечника у мышей линии СВА и кроликов породы шиншилла (Коршунов В.М. Влияние подкожной контаминации стафилококками на состояние микрофлоры кишечника у животных / В.М.Коршунов, Е.Д.Радакова, Л.Г.Дугашева // Журн. микробиол. - 1990. - №12. - С.105-1906). Авторы отмечают развитие манифестной формы дисбактериоза у подопытных животных с выраженными изменениями в качественном и количественном составе кишечной микрофлоры как при экспериментальной лучевой болезни, так и при подкожном введении больших доз (2·109 микробных клеток) стафилококков. В обоих случаях облученные и инфицированные стафилококком животные погибали, что не позволило изучать в динамике восстановление нормальной кишечной микрофлоры и оценивать эффективность того или иного подхода в лечении индуцированного дисбактериоза кишечника подопытных животных. Кроме того, работа на установках для облучения лабораторных животных для инициации дисбактериоза кишечника чревата последствиями для самих экспериментаторов.The available literature does not reflect the description of special studies on the reproduction of intestinal dysbiosis in laboratory animals, although researchers, when performing experiments on laboratory animals and solving specific scientific problems, encountered intestinal dysbiosis in animals. Closest to the claimed method are post-radiation dysbiosis that occurs in white mice irradiated with γ-rays at a dose of 700 x-rays (Study of the effect of the drug from lactobacilli "Salko" on the survival and intestinal microflora in irradiated animals / V. Bossart [et al.] // Zh. Microbiol. - 1990. - No. 11. - P.6-9), as well as post-infectious staphylococcal intestinal dysbiosis in CBA mice and chinchilla rabbits (V. Korshunov. Effect of subcutaneous staphylococcal contamination on the intestinal microflora in animals / V.M. Korshunov, E.D. Radakova, L.G. Dugasheva // Journal of Microbiol. - 1990. - No. 12. - S.105-1906). The authors note the development of a manifest form of dysbiosis in experimental animals with marked changes in the qualitative and quantitative composition of intestinal microflora both in experimental radiation sickness and in the subcutaneous administration of large doses (2 × 10 9 microbial cells) of staphylococci. In both cases, animals irradiated and infected with staphylococcus died, which did not allow us to study the dynamics of restoration of normal intestinal microflora and evaluate the effectiveness of this or that approach in the treatment of induced intestinal dysbiosis in experimental animals. In addition, work in facilities for irradiating laboratory animals to initiate intestinal dysbiosis is fraught with consequences for the experimenters themselves.
Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего моделировать дисбактериоз кишечника у лабораторных животных. Технический результат, который может быть достигнут при использовании предлагаемого способа, заключается в том, что у лабораторных животных можно определить глубину дисбиотических изменений в кишечнике как на уровне общего содержания кишечной микрофлоры, так и определенных ее представителей, изучить влияние существующих и создаваемых средств и методов восстановления нарушений микробиоценоза кишечника с перспективой использования разработанных подходов для лечения дисбактериозов кишечника у людей.The objective of the invention is to develop a method that allows you to simulate intestinal dysbiosis in laboratory animals. The technical result that can be achieved using the proposed method is that in laboratory animals it is possible to determine the depth of dysbiotic changes in the intestine both at the level of the total content of intestinal microflora and its certain representatives, to study the effect of existing and created means and methods of restoration disorders of intestinal microbiocenosis with the prospect of using the developed approaches for the treatment of intestinal dysbiosis in humans.
Поставленная задача достигается тем, что в способе моделирования дисбактериоза кишечника у лабораторных животных воздействуют антибактериальным препаратом гентамицином на кишечную микрофлору и определяют количество жизнеспособных микроорганизмов кишечной микрофлоры в начале и конце опыта, сравнивают их численные значения, при этом создают селективное давление антибактериальным препаратом гентамицином при пероральном его введении лабораторным животным 1 раз в сутки в течение 5 дней в дозах, превышающих его суточную терапевтическую дозу при парентеральном ведении более чем в 4,8 раза у мышей и в 4 раза - у морских свинок.This object is achieved by the fact that in the method of modeling intestinal dysbiosis in laboratory animals, they treat the intestinal microflora with the antibacterial drug gentamicin and determine the number of viable microorganisms of the intestinal microflora at the beginning and end of the experiment, compare their numerical values, while creating selective pressure with the antibacterial gentamicin when it is taken orally the introduction of laboratory animals 1 time per day for 5 days in doses exceeding its daily therapeutic dose when administered parenterally administered more than 4.8-fold in mice and 4 times - in guinea pigs.
Среди многих причин, приводящих к формированию и развитию дисбактериозов кишечника, антибактериальная терапия относится к одной из ведущих причин, вызывающих качественные и количественные нарушения нормальной микрофлоры в кишечнике. Как известно, антибиотики и химиотерапевтические препараты являются основными средствами борьбы с инфекционными заболеваниями бактериальной природы (Современное состояние и перспективы решения проблемы повышения эффективности экстренной профилактики и лечения системных бактериальных инфекций / Т.А.Бондарева [и др.] // Молекулярная медицина. - 2009. - №5. - С.21-25; Шевелева М.А. Современные представления о применении различных групп пробиотических средств при антибиотикотерапии / М.А.Шевелева, Г.В.Раменская // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. - Т. 54, №3-4. - С.61-68). Часто вследствие бесконтрольного их использования отмечается гибель не только патогенных микроорганизмов в естественных биотопах, но и представителей нормальной микрофлоры человека (Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии / Б.А.Шендеров // Антибиот. и мед. биотехнол. - 1987. -Т. 32, №2. - С.18-24; Шевяков М.А. Антибиотик - ассоциированная диарея и кандидоз кишечника: возможность лечения и профилактики / М.А.Шевяков // Антибиотики и химиотерапия. - 2004. - Т.49, №10. - С.25-29; Бельмер С.В. Дисбактериоз кишечника как осложнение антибактериальной терапии / С. В. Бельмер // Детские инфекции. - 2007. - Т.6, №2. - С.44-48). Таким образом, для селективного подавления кишечной микрофлоры у экспериментальных животных можно использовать такой антибактериальный препарат, который бы при пероральном введении угнетал жизнедеятельность микроорганизмов, вызывая микроэкологические нарушения в кишечнике. Судя по описанию фармакологического действия, приведенному в инструкции по применению (Гентамицин-К. Инструкция, применение, описание лекарственного действия, синонимы, аналоги и цена препарата Гентамицин-К (международное название Гентамицин). http://www.ros-med.info), такой характеристикой обладает гентамицин. Абсорбция антибиотика при приеме внутрь незначительная - он практически не всасывается в желудочно-кишечном тракте и оказывает местное действие. Данное обстоятельство предопределило использование гентамицина для формирования экспериментального антибиотико-ассоциированного дисбактериоза у лабораторных животных - белых мышей и морских свинок. По нашим данным, токсичность гентамицина при внутрибрюшинном введении составляет 6,85: ×1,2 мг. Это значение явилось ориентировочным при выборе дозы препарата для перорального введения лабораторным животным.Among the many reasons leading to the formation and development of intestinal dysbiosis, antibiotic therapy is one of the leading causes of qualitative and quantitative disturbances in the normal microflora in the intestine. As you know, antibiotics and chemotherapeutic drugs are the main means of combating infectious diseases of a bacterial nature (Current status and prospects for solving the problem of increasing the effectiveness of emergency prevention and treatment of systemic bacterial infections / T.A. Bondareva [et al.] // Molecular Medicine. - 2009 - No. 5. - P.21-25; Sheveleva MA Modern ideas about the use of various groups of probiotic agents in antibiotic therapy / M.A. Sheveleva, G.V. Ramenskaya // Antibiotics and chemotherapy. - 2009. - T 54, No. 3-4. - S.61-68). Often, as a result of their uncontrolled use, death is observed not only of pathogenic microorganisms in natural biotopes, but also of representatives of the normal human microflora (B. Shenderov Normal microflora and some issues of microecological toxicology / B.A.Shenderov // Antibiot. And medical biotechnol. - 1987. - T. 32, No. 2. - P.18-24; Shevyakov MA Antibiotic - associated diarrhea and intestinal candidiasis: the possibility of treatment and prevention / M.A. Shevyakov // Antibiotics and chemotherapy. - 2004. - T.49, No. 10. - P.25-29; Belmer S.V. Intestinal dysbiosis as complication of antibiotic therapy / S.V. Belmer // Infection of children. - 2007. - T.6, No. 2. - P.44-48). Thus, for the selective suppression of intestinal microflora in experimental animals, one can use such an antibacterial drug that, when administered orally, inhibits the vital activity of microorganisms, causing microecological disturbances in the intestine. Judging by the description of the pharmacological action given in the instructions for use (Gentamicin-K. Instructions, use, description of the medicinal action, synonyms, analogues and price of the drug Gentamicin-K (international name Gentamicin). Http://www.ros-med.info ), this characteristic has gentamicin. Absorption of the antibiotic when ingested is negligible - it is practically not absorbed in the gastrointestinal tract and has a local effect. This circumstance predetermined the use of gentamicin for the formation of experimental antibiotic-associated dysbiosis in laboratory animals - white mice and guinea pigs. According to our data, the toxicity of gentamicin with intraperitoneal administration is 6.85 : × 1.2 mg. This value was indicative when choosing the dose of the drug for oral administration to laboratory animals.
Гентамицин, относящийся к классу аминогликозидов, как и другие представители этого класса (канамицин, стрептомицин), длительное время являлся наиболее эффективным, а зачастую и единственным средством купирования инфекций, вызываемых грамотрицательными бактериями. Введенный перорально лабораторным животным в соответствующих дозах, гентамицин будет оказывать местное действие на пристеночную и просветную микрофлору и с течением времени вызовет дисбиотическое состояние кишечника животных. Это состояние может быть зафиксировано как на уровне определения общего содержания микрофлоры в пересчете на 1 г фекалий, так и содержания отдельных ее представителей, в частности бифидо- и лактобактерий, эшерихий. Суточная терапевтическая доза гентамицина при парентеральном введении составляет 240 мг. Соответствующие дозы препарата для белых мышей и морских свинок в пересчете на единицу поверхности тела составляют 0,6 мг и 7,5 мг соответственно. Проведенные исследования показали, что при пероральном введении гентамицина в указанных концентрациях действительно происходит некоторое снижение общего количества фекальной микрофлоры, что тем не менее не позволяло говорить о воспроизведении у животных экспериментального дисбактериоза. Ввиду того, что гентамицин перорально не вводят, в качестве ориентира использовали утвержденные суточные дозы аминогликозидов - канамицина и стрептомицина при пероральном введении (Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание: в 3 т. Том 1: Микрофлора человека и животных и ее функции / Б.А. Шендеров. - М.: Издательство ГРАНТЪ, 1998. - 288 с.), при которых в 1 г фекалий достижима доза указанных препаратов, равная 1000 мкг, белым мышам и морским свинкам вводили per os 2,9 и 30 мг гентамицина в пересчете на единицу поверхности тела. Гентамицин в указанной дозировке вводили 1 раз в сутки в течение 5 дней с ежедневным отбором фекалий для определения общего количества фекальной микрофлоры в 1 г фекалий животных, а также отдельных ее представителей.Gentamicin, belonging to the class of aminoglycosides, like other representatives of this class (kanamycin, streptomycin), has long been the most effective and often the only way to stop infections caused by gram-negative bacteria. Introduced orally to laboratory animals in appropriate doses, gentamicin will have a local effect on the parietal and luminal microflora and over time will cause a dysbiotic state of the intestines of animals. This condition can be fixed both at the level of determining the total microflora content in terms of 1 g of feces, and the content of its individual representatives, in particular bifidobacteria, lactobacilli, and Escherichia. The daily therapeutic dose of gentamicin for parenteral administration is 240 mg. The corresponding doses of the drug for white mice and guinea pigs in terms of a unit of body surface are 0.6 mg and 7.5 mg, respectively. Studies have shown that with the oral administration of gentamicin in the indicated concentrations, a certain decrease in the total amount of fecal microflora does occur, which nevertheless did not allow us to speak of the reproduction of experimental dysbiosis in animals. Due to the fact that gentamicin is not orally administered, the approved daily doses of aminoglycosides, kanamycin and streptomycin, when administered orally, were used as a guideline (B. Shenderov Medical Microbial Ecology and Functional Nutrition: 3 vol. Volume 1: Microflora of humans and animals and its functions / B.A. Shenderov. - M .: Publishing house GRANT, 1998. - 288 p.), in which a dose of the indicated preparations equal to 1000 mcg is achievable in 1 g of feces, per os 2.9 was administered to white mice and guinea pigs 30 mg of gentamicin in terms of unit of body surface. Gentamicin at a specified dosage was administered 1 time per day for 5 days with daily selection of feces to determine the total amount of fecal microflora in 1 g of animal feces, as well as its individual representatives.
Для количественного определения микроорганизмов суспензию фекалий белых мышей и морских свинок высевали на рекомендованные питательные среды (Совершенствование методов диагностики дисбактериоза толстого кишечника / В.П. Иванов [и др.] // Информационное письмо. - СПб.: ФГУ «Центр госсанэпиднадзора», 2002. - 31 с.; Лихачева А.Ю. Современное состояние вопроса таксономии бактерий рода Lactobacillus / А.Ю. Лихачева, В.М. Бондаренко, К.Я. Соколова // Журн. микробиол. - 1992. - №9-10. - С.74-78) и выращивали в соответствующих условиях при температуре 37°С.For the quantitative determination of microorganisms, the feces suspension of white mice and guinea pigs was sown on recommended nutrient media (Improving the methods for the diagnosis of colonic dysbiosis / V.P. Ivanov [et al.] // Information letter. - St. Petersburg: Center for Sanitary and Epidemiological Surveillance, 2002 .- 31 p .; A. Likhacheva. Current status of the taxonomy of bacteria of the genus Lactobacillus / A. Yu. Likhacheva, V. M. Bondarenko, K. Ya. Sokolova // Journal of Microbiol. - 1992. - No. 9-10 - S.74-78) and grown under appropriate conditions at a temperature of 37 ° C.
Пример 1.Example 1
Готовят раствор гентамицина на изотоническом растворе хлорида натрия, в 1 мл которого содержится 29 мг препарата гентамицина. Берут расчетное количество прошедших акклиматизацию белых мышей массой 18-20 г, рассаживают их в индивидуальные кюветы с крышками. Отбирают от каждого животного фекальные массы, взвешивают их, после чего суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают на плотные питательные среды в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С (в течение 48 часов), после чего подсчитывают количество выросших колоний. С учетом массы фекалий от каждого животного и числа выросших колоний делают перерасчет общего числа микроорганизмов, а также бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий на 1 г фекалий (КОЕ·г-1). Вводят по 0,1 мл раствора гентамицина (2,9 мл препарата) с помощью туберкулинового шприца с иглой и канюлей на конце перорально каждому животному. Через 24 часа повторяют отбор фекалий для количественного определения фекальной микрофлоры и отдельных ее представителей, повторно вводят перорально раствор гентамицина (2,9 мг препарата). Ежедневно, начиная со 2 суток, в кюветах с животными меняют подстилку для облегчения отбора свежих фекальных масс. Отбор фекалий для определения общего числа микроорганизмов фекальной микрофлоры и отдельных ее представителей, а также однократное в сутки пероральное введение животным раствора гентамицина (2,9 мл препарата), превышающего суточную терапевтическую дозу более чем в 4,8 раза, повторяют в течение 5 суток, после чего определяют общее количество фекальной микрофлоры, отдельных ее представителей и судят о глубине дисбиотических изменений в кишечнике.A solution of gentamicin is prepared on an isotonic solution of sodium chloride, 1 ml of which contains 29 mg of the drug gentamicin. Take the estimated number of acclimatized white mice weighing 18-20 g, and they are seated in individual cuvettes with covers. Fecal masses were collected from each animal, weighed, then suspended in 1.0 ml of isotonic sodium chloride solution and plated on solid nutrient media in Petri dishes, which were incubated at 37 ° C (for 48 hours), after which the amount was calculated grown colonies. Taking into account the mass of feces from each animal and the number of colonies grown, they recalculate the total number of microorganisms, as well as bifidobacteria, lactobacilli and Escherichia per 1 g of feces (CFU · g -1 ). 0.1 ml of gentamicin solution (2.9 ml of the drug) is administered using a tuberculin syringe with a needle and cannula at the end orally to each animal. After 24 hours, the selection of feces is repeated for the quantitative determination of fecal microflora and its individual representatives, gentamicin solution (2.9 mg of the drug) is re-administered orally. Every day, starting from 2 days, litter is changed in cuvettes with animals to facilitate the selection of fresh fecal matter. The selection of feces to determine the total number of microorganisms of fecal microflora and its individual representatives, as well as a single daily oral administration of gentamicin solution to animals (2.9 ml of the drug), exceeding the daily therapeutic dose by more than 4.8 times, is repeated for 5 days, then determine the total amount of fecal microflora, its individual representatives and judge the depth of dysbiotic changes in the intestine.
Результаты определения.Determination results.
Начало эксперимента:Beginning of the experiment:
Через 5 суток на фоне введения раствора гентамицина:After 5 days against the background of the introduction of a solution of gentamicin:
Через 2 суток после прекращения введения раствора гентамицина:2 days after the cessation of the administration of gentamicin solution:
Полученные результаты свидетельствуют о развитии у белых мышей при пероральном введении гентамицина антибиотико-ассоциированного дисбактериоза кишечника, а также о микроэкологическом изменении фекальной микрофлоры после введения животным антибиотика.The results obtained indicate the development of antibiotic-associated intestinal dysbacteriosis in white mice with oral administration of gentamicin, as well as the microecological change in fecal microflora after administration of an antibiotic to animals.
Пример 2.Example 2
Готовят раствор гентамицина на изотоническом растворе хлорида натрия, в 1,0 мл которого содержится 150 мг препарата гентамицина. Берут расчетное количество прошедших акклиматизацию морских свинок массой 250-300 г, рассаживают их в индивидуальные кюветы с крышками. Отбирают от каждого животного фекальные массы, взвешивают их, после чего суспендируют в 4,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают на плотные питательные среды в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 48 часов, после чего подсчитывают количество выросших колоний. С учетом массы фекалий от каждого животного и числа выросших колоний делают перерасчет общего числа микроорганизмов, а также бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий на 1 г фекалий (КОЕ·г-1). Вводят по 0,2 мл раствора гентамицина (30 мг препарата), превышающих суточную терапевтическую дозу в 4 раза, с помощью туберкулинового шприца с иглой и канюлей на конце перорально каждому животному. Через 24 часа повторяют отбор фекалий для количественного определения фекальной микрофлоры и отдельных ее представителей, повторно вводят перорально раствор гентамицина (30 мг препарата). Ежедневно, начиная со 2 суток, в кюветах с животными меняют подстилку для облегчения отбора свежих фекальных масс. Отбор фекалий для определения общего числа микроорганизмов фекальной микрофлоры и отдельных ее представителей, а также однократное в сутки пероральное введение животным раствора гентамицина (30 мл препарата), повторяют в течение 5 суток, после чего определяют общее количество фекальной микрофлоры, отдельных ее представителей и судят о глубине дисбиотических изменений в кишечнике.A solution of gentamicin is prepared in an isotonic solution of sodium chloride, in 1.0 ml of which contains 150 mg of the drug gentamicin. Take the estimated number of acclimatized guinea pigs weighing 250-300 g, and they are seated in individual cuvettes with lids. Fecal masses were collected from each animal, weighed, then suspended in 4.0 ml of isotonic sodium chloride solution and plated on solid nutrient media in Petri dishes, which were incubated at 37 ° C for 48 hours, after which the number of grown colonies was counted. . Taking into account the mass of feces from each animal and the number of colonies grown, they recalculate the total number of microorganisms, as well as bifidobacteria, lactobacilli and Escherichia per 1 g of feces (CFU · g -1 ). 0.2 ml of gentamicin solution (30 mg of the drug) is administered, 4 times the daily therapeutic dose, using an tuberculin syringe with a needle and cannula at the end, orally to each animal. After 24 hours, the selection of feces is repeated for the quantitative determination of fecal microflora and its individual representatives, gentamicin solution (30 mg of the drug) is re-administered orally. Every day, starting from 2 days, litter is changed in cuvettes with animals to facilitate the selection of fresh fecal matter. The selection of feces to determine the total number of microorganisms of fecal microflora and its individual representatives, as well as a single daily oral administration of gentamicin solution to animals (30 ml of the drug), is repeated for 5 days, after which the total amount of fecal microflora, its individual representatives is determined and judged the depth of dysbiotic changes in the intestine.
Результаты определения.Determination results.
Начало эксперимента:Beginning of the experiment:
Через 5 суток на фоне введения раствора гентамицина:After 5 days against the background of the introduction of a solution of gentamicin:
Через 2 суток после прекращения введения раствора гентамицина:2 days after the cessation of the administration of gentamicin solution:
Полученные результаты свидетельствуют о развитии у морских свинок при пероральном введении гентамицина антибиотико-ассоциированного дисбактериоза кишечника. При этом дисбиотические изменения в кишечнике морских свинок более выражены, чем у белых мышей.The results obtained indicate the development in guinea pigs with oral administration of gentamicin antibiotic-associated intestinal dysbiosis. Moreover, dysbiotic changes in the intestines of guinea pigs are more pronounced than in white mice.
Пример 3.Example 3
Берут расчетное количество морских свинок с выраженными изменениями состава кишечной микрофлоры как последствием антибиотико-ассоциированного дисбактериоза. Морских свинок рассаживают в индивидуальные кюветы. Отбирают от каждого животного фекальные массы, взвешивают их, после чего суспендируют в 4,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают на плотные питательные среды в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 48 часов, после чего подсчитывают количество выросших колоний. С учетом массы фекалий от каждого животного и числа выросших колоний делают перерасчет общего числа микроорганизмов, а также бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий на 1 г фекалий (КОЕ·г-1). Готовят суспензию пробиотика Биоспорин на изотоническом растворе хлорида натрия, в 1,0 мл которого содержится 1,4·108 пробиотических микроорганизмов. Готовят суспензию пребиотика Стимбифид на изотоническом растворе хлорида натрия, в 1,0 мл которого содержится 655 мг препарата. Животных делят на две группы. Одной группе животных вводят перорально только суспензию пробиотика Биоспорин ежедневно однократно в течение 7 суток в дозе 2,8·107 пробиотических микроорганизмов в объеме 0,2 мл. Другой группе животных водят совместно суспензию пробиотика Биоспорин в дозе 2,8·107 пробиотических микроорганизмов в объеме 0,2 мл и суспензию пребиотика Стимбифид в дозе 131 мг в объеме 0,2 мл ежедневно однократно в течение 7 суток. У животных обеих групп в начале эксперимента и на 7 сутки введения препаратов Биоспорин и совместного введения препаратов Биоспорин и Стимбифид отбирают фекальные массы для определения общего количества фекальной микрофлоры, а также бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий на 1 г фекалий (КОЕ·г-1), после чего судят об изменении кишечной микрофлоры у животных обеих групп.Take the estimated number of guinea pigs with pronounced changes in the composition of the intestinal microflora as a result of antibiotic-associated dysbiosis. Guinea pigs are planted in individual ditches. Fecal masses were collected from each animal, weighed, then suspended in 4.0 ml of isotonic sodium chloride solution and plated on solid nutrient media in Petri dishes, which were incubated at 37 ° C for 48 hours, after which the number of grown colonies was counted. . Taking into account the mass of feces from each animal and the number of colonies grown, they recalculate the total number of microorganisms, as well as bifidobacteria, lactobacilli and Escherichia per 1 g of feces (CFU · g -1 ). A suspension of the probiotic Biosporin is prepared in an isotonic sodium chloride solution, 1.0 ml of which contains 1.4 · 10 8 probiotic microorganisms. A suspension of the prebiotic Steambifide is prepared in an isotonic solution of sodium chloride, in which 1.0 ml contains 655 mg of the drug. Animals are divided into two groups. In one group of animals, only a suspension of the probiotic Biosporin is orally administered once daily for 7 days at a dose of 2.8 · 10 7 probiotic microorganisms in a volume of 0.2 ml. Another group of animals was co-administered with a suspension of probiotic Biosporin at a dose of 2.8 · 10 7 probiotic microorganisms in a volume of 0.2 ml and a suspension of the prebiotic Steambifid at a dose of 131 mg in a volume of 0.2 ml once daily for 7 days. In animals of both groups, at the beginning of the experiment and on the 7th day of the administration of Biosporin preparations and the joint administration of Biosporin and Steambifid preparations, fecal masses were selected to determine the total amount of fecal microflora, as well as bifidobacteria, lactobacilli and Escherichia per 1 g of feces (CFU · g -1 ), after which they judge the change in intestinal microflora in animals of both groups.
Результаты определения.Determination results.
Начало эксперимента (среднее значение по двум группам животных):The beginning of the experiment (average value for two groups of animals):
Через 7 суток эксперимента на фоне перорального введения суспензии пробиотика Биоспорин:After 7 days of the experiment on the background of oral administration of a suspension of the probiotic Biosporin:
Через 7 суток эксперимента на фоне перорального введения суспензии пробиотика Биоспорин и пребиотика Стимбифид:After 7 days of the experiment on the background of oral administration of a suspension of the probiotic Biosporin and the prebiotic Steambifid:
Полученные результаты свидетельствуют о восстановлении нормальной микрофлоры кишечника у морских свинок с антибиотико-ассоциированным дисбактериозом как при пероральном ведении только пробиотика Биоспорин, так и совместно пробиотика Биоспорин с пребиотиком Стимбифид. В последнем случае отмечается более значительное восстановление кишечной микрофлоры у морских свинок, дополненной бациллами пробиотика Биоспорин (B.subtilis 3 и B.licheniformis 21).The results obtained indicate the restoration of normal intestinal microflora in guinea pigs with antibiotic-associated dysbiosis, both when the probiotic Biosporin is administered orally, as well as the probiotic Biosporin with the prebiotic Steambifid. In the latter case, there is a more significant restoration of intestinal microflora in guinea pigs supplemented with bacilli of the biosporin probiotic (B.subtilis 3 and B.licheniformis 21).
Заявленный способ позволяет воспроизводить дисбактериоз кишечника у лабораторных животных, изучать возможность коррекции дисбактериоза кишечника с использованием заместительной терапии существующими и разрабатываемыми пробиотическими и пребиотическими препаратами, а также прогнозировать сроки восстановления нормальной микрофлоры при дисбактериозах кишечника.The claimed method allows reproducing intestinal dysbiosis in laboratory animals, studying the possibility of correcting intestinal dysbiosis using replacement therapy with existing and developing probiotic and prebiotic drugs, as well as predicting the recovery time of normal microflora in intestinal dysbiosis.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011149501/14A RU2477894C1 (en) | 2011-12-05 | 2011-12-05 | Method for simulating intestinal dysbacteriosis in laboratory animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011149501/14A RU2477894C1 (en) | 2011-12-05 | 2011-12-05 | Method for simulating intestinal dysbacteriosis in laboratory animals |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2477894C1 true RU2477894C1 (en) | 2013-03-20 |
Family
ID=49124453
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011149501/14A RU2477894C1 (en) | 2011-12-05 | 2011-12-05 | Method for simulating intestinal dysbacteriosis in laboratory animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2477894C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2745654C1 (en) * | 2019-12-30 | 2021-03-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" (ВятГУ) | Method of study of gastric and intestinal microbiota during suppression of colonization resistance of gastric mucosa of experimental animals |
| RU217804U1 (en) * | 2023-01-29 | 2023-04-19 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный федеральный университет" (ДВФУ) | Model of the gastrointestinal tract |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2161497C2 (en) * | 1998-10-26 | 2001-01-10 | Потиевский Эмиль Григорьевич | Method for treating intestinal dysbacteriosis in children and adults |
| RU2279721C2 (en) * | 2004-01-09 | 2006-07-10 | ГОУ ВПО Омская Государственная Медицинская Академия | Method for modeling intestinal infection in small-sized laboratory animals |
| CN101669959A (en) * | 2009-08-07 | 2010-03-17 | 天津生机集团股份有限公司 | Medical composite for treating livestock and poultry intestinal canal diseases and preparation method and application thereof |
-
2011
- 2011-12-05 RU RU2011149501/14A patent/RU2477894C1/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2161497C2 (en) * | 1998-10-26 | 2001-01-10 | Потиевский Эмиль Григорьевич | Method for treating intestinal dysbacteriosis in children and adults |
| RU2279721C2 (en) * | 2004-01-09 | 2006-07-10 | ГОУ ВПО Омская Государственная Медицинская Академия | Method for modeling intestinal infection in small-sized laboratory animals |
| CN101669959A (en) * | 2009-08-07 | 2010-03-17 | 天津生机集团股份有限公司 | Medical composite for treating livestock and poultry intestinal canal diseases and preparation method and application thereof |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| WANG SX, Effects of psychological stress on small intestinal motility and bacteria and mucosa in mice World J Gastroenterol. 2005, Apr 7; 11(13):2016-21. * |
| ZAĬTSEVA LG. The functional activity of the macrophages in experimental intestinal dysbacteriosis in rats Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 1991 Aug; (8):68-71. * |
| ГАПОН М.Н. Показатели местной неспецифической резистентности при дисбактериозе толстой кишки. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2010, No.5, с.53-57. * |
| ГАПОН М.Н. Показатели местной неспецифической резистентности при дисбактериозе толстой кишки. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2010, №5, с.53-57. WANG SX, Effects of psychological stress on small intestinal motility and bacteria and mucosa in mice World J Gastroenterol. 2005, Apr 7; 11(13):2016-21. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2745654C1 (en) * | 2019-12-30 | 2021-03-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" (ВятГУ) | Method of study of gastric and intestinal microbiota during suppression of colonization resistance of gastric mucosa of experimental animals |
| RU2796316C1 (en) * | 2022-06-20 | 2023-05-22 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Нижегородский НИИ гигиены и профпатологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method of simulation of physical load for evaluation of workability of laboratory rats with dysbiotic intestinal disorders |
| RU217804U1 (en) * | 2023-01-29 | 2023-04-19 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный федеральный университет" (ДВФУ) | Model of the gastrointestinal tract |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2665815C2 (en) | Probiotic and prebiotic compositions | |
| Whelan | Mechanisms and effectiveness of prebiotics in modifying the gastrointestinal microbiota for the management of digestive disorders | |
| CN102905712B (en) | Be used for the treatment of the probiotic composition of enteritis | |
| Borycka-Kiciak et al. | Butyric acid–a well-known molecule revisited | |
| US10179153B2 (en) | Probiotic and prebiotic compositions | |
| JP2019525944A (en) | Methods for treating ulcerative colitis | |
| KR20230170647A (en) | Bifidobacterium lactis and its uses | |
| US11730776B2 (en) | Preventive and/or therapeutic agent for clostridium difficile infection | |
| UA97078C2 (en) | Pharmaceutical composition comprising proton pump inhibitor and prebiotic for the treatment of gastric and duodenal ulcer | |
| Lazarenko et al. | Imunobiotics are the novel biotech drugs with antibacterial and immunomodulatory properties | |
| He et al. | Protective effects of intestinal gallic acid in neonatal dairy calves against extended-spectrum β-lactamase producing enteroaggregative Escherichia coli infection: modulating intestinal homeostasis and colitis | |
| RU2477894C1 (en) | Method for simulating intestinal dysbacteriosis in laboratory animals | |
| EA024443B1 (en) | Strains of bacteria for increasing epithelial integrity and decreasing intestinal permeability in treating and/or preventing intestinal disorders | |
| Stef et al. | Virulence characteristics of five new Campylobacter jejuni chicken isolates | |
| Moura et al. | Protection by Lactobacillus acidophilus UFV-H2B20 against experimental oral infection with Salmonella enterica subsp. enterica ser. Typhimurium in gnotobiotic and conventional mice | |
| CN113164527A (en) | Compositions and methods for treating epilepsy and related disorders | |
| RU2483113C1 (en) | Method to assess effect of exogenous factors at intestinal microflora in case of its dysbiotic disturbances | |
| RU2526806C2 (en) | Method for prevention of developing bacterial intestinal infection | |
| My et al. | 2. Stability and safety study of liquid-suspension bacillus clausii spore probiotics (livespo clausy) | |
| US20230241135A1 (en) | A composition for reducing the risk of urinary tract infection and vaginal infection in women | |
| Silva et al. | Translocation of Klebsiella sp. in mice fed an enteral diet containing prebiotics | |
| ATALAY | THE USE OF PROBIOTICS IN GASTROINTESTINAL DISEASES | |
| Bukhari | Role of Probiotics in Prevention of Necrotizing Enterocolitis in Preterm Infants | |
| Purbantoro et al. | PF-21 Burkholderia cepacia Infection in Python reticulatus | |
| Almansour | The role of microbiota on Campylobacter jejuni colonization and growth performance in broiler chickens |