RU2477728C1 - SPARC, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С ScFv - Google Patents
SPARC, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С ScFv Download PDFInfo
- Publication number
- RU2477728C1 RU2477728C1 RU2011127454/10A RU2011127454A RU2477728C1 RU 2477728 C1 RU2477728 C1 RU 2477728C1 RU 2011127454/10 A RU2011127454/10 A RU 2011127454/10A RU 2011127454 A RU2011127454 A RU 2011127454A RU 2477728 C1 RU2477728 C1 RU 2477728C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sparc
- binding
- seq
- protein
- tumors
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 92
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 65
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 45
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 44
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 95
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 89
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 79
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 16
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 15
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 14
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 14
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 18
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 abstract description 15
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 195
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 105
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 88
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 87
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 77
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 67
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 63
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 53
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 47
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 45
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 44
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 41
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 21
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 21
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 21
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 21
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- -1 benzyl ester Chemical class 0.000 description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 18
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 16
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 15
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 15
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 14
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 14
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 14
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 13
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 13
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 12
- 102100039160 Amiloride-sensitive amine oxidase [copper-containing] Human genes 0.000 description 11
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 11
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 11
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 11
- 108010089417 Sex Hormone-Binding Globulin Proteins 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 11
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 11
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 9
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 8
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 8
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 8
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 7
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 7
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 6
- 102100029100 Hematopoietic prostaglandin D synthase Human genes 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 5
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 5
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 5
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 5
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 4
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- HHSGWIABCIVPJT-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=C(NC(=O)CI)C=C1 HHSGWIABCIVPJT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 4
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 3
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerase Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 3
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 3
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 3
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 3
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QYEAAMBIUQLHFQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 QYEAAMBIUQLHFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MAWFYTWZTJWMFB-UHFFFAOYSA-N 1-[2-[2-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethoxy]propan-2-yloxy]ethyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1CCOC(C)(C)OCCN1C(=O)C=CC1=O MAWFYTWZTJWMFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYRLCJMMJQUBY-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCC1=CC=C(N2C(C=CC2=O)=O)C=C1 VHYRLCJMMJQUBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-[6-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]hexanoyloxy]pyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYMHBQQZUYHXSS-UHFFFAOYSA-N 2-(3h-dithiol-3-yl)pyridine Chemical compound C1=CSSC1C1=CC=CC=N1 VYMHBQQZUYHXSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 2
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 2
- 208000006274 Brain Stem Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 2
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 2
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 208000022461 Glomerular disease Diseases 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000017278 Glutaredoxin Human genes 0.000 description 2
- 108050005205 Glutaredoxin Proteins 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241001195348 Nusa Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 2
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 2
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 108010027375 bacterioferritin Proteins 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 2
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 2
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000005890 cell-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 229960005215 dichloroacetic acid Drugs 0.000 description 2
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 2
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 2
- 201000006828 endometrial hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 208000024519 eye neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 102000035175 foldases Human genes 0.000 description 2
- 108091005749 foldases Proteins 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 208000024596 kidney oncocytoma Diseases 0.000 description 2
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 208000026045 malignant tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 2
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 2
- 208000011252 penile benign neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 2
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 208000005039 renal oncocytoma Diseases 0.000 description 2
- 201000008946 renal pelvis neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 208000029584 urinary system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000024719 uterine cervix neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- JSHOVKSMJRQOGY-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(pyridin-2-yldisulfanyl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCSSC1=CC=CC=N1 JSHOVKSMJRQOGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKSPIZSKQWTXQG-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[1-(pyridin-2-yldisulfanyl)ethyl]benzoate Chemical compound C=1C=C(C(=O)ON2C(CCC2=O)=O)C=CC=1C(C)SSC1=CC=CC=N1 GKSPIZSKQWTXQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLTJVODYZSODON-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) [[dihydroxy(oxo)-lambda6-sulfanylidene]-(1-phenylethyl)-lambda4-sulfanyl]formate Chemical compound CC(C1=CC=CC=C1)S(=S(=O)(O)O)C(=O)ON2C(=O)CCC2=O DLTJVODYZSODON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRLUODMOTSXWIP-BYPYZUCNSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-nitramidopentanoic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)N[N+]([O-])=O WRLUODMOTSXWIP-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N (8S)-3-(2-deoxy-beta-D-erythro-pentofuranosyl)-3,6,7,8-tetrahydroimidazo[4,5-d][1,3]diazepin-8-ol Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NCC2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 1-(2-azaniumylacetyl)pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWHMETIBESABNA-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(7-azido-4-methyl-2-oxochromen-3-yl)acetyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1OC=2C=C(N=[N+]=[N-])C=CC=2C(C)=C1CC(=O)ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O NWHMETIBESABNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDPOCFDNTVUOKD-UHFFFAOYSA-N 2-(7-azido-4-methyl-2-oxochromen-3-yl)acetamide Chemical compound C1=C(N=[N+]=[N-])C=CC2=C1OC(=O)C(CC(N)=O)=C2C BDPOCFDNTVUOKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QZDDFQLIQRYMBV-UHFFFAOYSA-N 2-[3-nitro-2-(2-nitrophenyl)-4-oxochromen-8-yl]acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(C(C=2[N+]([O-])=O)=O)=C1OC=2C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O QZDDFQLIQRYMBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRUVPQAHQFHMQG-UHFFFAOYSA-N 2-[[amino(hydrazinyl)methylidene]amino]butanoic acid Chemical compound CCC(C(O)=O)N=C(N)NN ZRUVPQAHQFHMQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMUAKWNHKQBPGJ-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)-n-[4-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]butyl]propanamide Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSCCC(=O)NCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JMUAKWNHKQBPGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- YJEMXOZWENRSFC-UHFFFAOYSA-N 5,6-dichlorotriazine-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=NN=NC(Cl)=C1Cl YJEMXOZWENRSFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N Adamantane Natural products C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010012934 Albumin-Bound Paclitaxel Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 1
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000068 Angiostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 1
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012492 Biacore method Methods 0.000 description 1
- 241001580343 Bifidobacterium longum BORI Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 1
- 102100028728 Bone morphogenetic protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000654 Bone morphogenetic protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049990 CD13 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N Capecitabine Chemical compound C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N Capecitabine Natural products C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1C1C(O)C(O)C(C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- JWBOIMRXGHLCPP-UHFFFAOYSA-N Chloditan Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C(C(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 JWBOIMRXGHLCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 238000012287 DNA Binding Assay Methods 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102100033189 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Human genes 0.000 description 1
- 101710101225 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Proteins 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 102000004860 Dipeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090001081 Dipeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101710106383 Disulfide bond formation protein B Proteins 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 1
- 102400001047 Endostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical group O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 102100032864 General transcription factor IIH subunit 2 Human genes 0.000 description 1
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010063907 Glutathione Reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100036442 Glutathione reductase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 102100023737 GrpE protein homolog 1, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 241000288105 Grus Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000829489 Homo sapiens GrpE protein homolog 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000608935 Homo sapiens Leukosialin Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000010781 Interleukin-6 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 101710180643 Leishmanolysin Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039564 Leukosialin Human genes 0.000 description 1
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108090000812 Neurolysin Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009890 Osteonectin Human genes 0.000 description 1
- 108010077077 Osteonectin Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 description 1
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 1
- 101710116318 Probable disulfide formation protein Proteins 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 102000004892 Pyroglutamyl-peptidase II Human genes 0.000 description 1
- 108090001002 Pyroglutamyl-peptidase II Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091007187 Reductases Proteins 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102100031293 Thimet oligopeptidase Human genes 0.000 description 1
- 102000013090 Thioredoxin-Disulfide Reductase Human genes 0.000 description 1
- 108010079911 Thioredoxin-disulfide reductase Proteins 0.000 description 1
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100024598 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- BTXLWRWDYZKCPQ-UHFFFAOYSA-N [nitro(phenyl)methyl] carbonochloridate Chemical compound ClC(=O)OC([N+](=O)[O-])C1=CC=CC=C1 BTXLWRWDYZKCPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229940028652 abraxane Drugs 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000007801 affinity label Substances 0.000 description 1
- 238000003450 affinity purification method Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940045985 antineoplastic platinum compound Drugs 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 229960004117 capecitabine Drugs 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000008619 cell matrix interaction Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical class C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004210 cyclohexylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- ALKZAGKDWUSJED-UHFFFAOYSA-N dinuclear copper ion Chemical compound [Cu].[Cu] ALKZAGKDWUSJED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229930013356 epothilone Natural products 0.000 description 1
- HESCAJZNRMSMJG-KKQRBIROSA-N epothilone A Chemical class C/C([C@@H]1C[C@@H]2O[C@@H]2CCC[C@@H]([C@@H]([C@@H](C)C(=O)C(C)(C)[C@@H](O)CC(=O)O1)O)C)=C\C1=CSC(C)=N1 HESCAJZNRMSMJG-KKQRBIROSA-N 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002308 glutamine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002664 inhalation therapy Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011900 installation process Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229960002247 lomustine Drugs 0.000 description 1
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 230000012976 mRNA stabilization Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000350 mitotane Drugs 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006502 nitrobenzyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N nitrosourea Chemical compound NC(=O)N=NO OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000004416 odontoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N pamidronate Chemical compound NCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046231 pamidronate Drugs 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229960002340 pentostatin Drugs 0.000 description 1
- FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N pentostatin Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC[C@H]2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 150000003058 platinum compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 108040000983 polyphosphate:AMP phosphotransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 1
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- DXGIRFAFSFKYCF-UHFFFAOYSA-N propanehydrazide Chemical compound CCC(=O)NN DXGIRFAFSFKYCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 229940124272 protein stabilizer Drugs 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 201000002793 renal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000008458 response to injury Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- ATEBXHFBFRCZMA-VXTBVIBXSA-N rifabutin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC(=C2N3)C(=O)C=4C(O)=C5C)C)OC)C5=C1C=4C2=NC13CCN(CC(C)C)CC1 ATEBXHFBFRCZMA-VXTBVIBXSA-N 0.000 description 1
- 229960000885 rifabutin Drugs 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000009919 sequestration Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[[4-[(e)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-n-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=C1 RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229960003433 thalidomide Drugs 0.000 description 1
- 108010073106 thimet oligopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 1
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 101150057627 trxB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/44—Antibodies bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/51—Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Abstract
Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены варианты анти-SPARC ScFv, а также композиция для лечения состояния, связанного с повышенной экспрессией SPARC с KD, составляющей по меньшей мере 7,8×10-5 М, включающая в эффективном количестве указанное антитело, связанное с терапевтическим средством, а также способ лечения млекопитающего, основанный на использовании указанной композиции. Описана композиция для диагностики состояния, связанного с повышенной экспрессией SPARC на основе анти-SPARC ScFv антитела, связанного с диагностическим средством. Использование изобретения может найти применение в медицине для лечения заболеваний, связанных с повышенной экспрессией SPARC. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 табл., 20 ил., 5 пр.
Description
Притязание на приоритет
В настоящей заявке испрашивается преимущество предварительной заявки США № 61/120228, поданной 5 декабря 2008 г., и полное содержание этой заявки вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Предшествующий уровень техники
Секреторный кислый белок, богатый цистеином (SPARC), который также известен как остеонектин, представляет собой гликопротеин, состоящий из 303 аминокислот и экспрессирующийся в организме человека. Экспрессия SPARC является стадие-регулируемой, причем SPARC экспрессируется, главным образом, в тканях при их ремоделировании в процессе нормального развития или в ответ на их повреждение. См., например, Lane et al., FASEB J., 8, 163-173 (1994). Так, например, высокий уровень экспрессии белка SPARC наблюдается в костях и в зубах развивающегося организма и, главным образом, в остеобластах, одонтобластах, перихондриальных фибробластах и в дифференцирующихся хондроцитах мышиных, коровьих и человеческих эмбрионов. SPARC также играет важную роль во взаимодействиях клеток с матриксом в процессе ремоделирования ткани, заживления ран, морфогенеза, дифференцировки клеток, миграции и ангиогенеза, включая процессы, ассоциированные с патологическими состояниями. Так, например, SPARC экспрессируется при интерстициальном фиброзе почек и может играть определенную роль в вырабатывании ответа у хозяина на повреждение легких, такое как индуцированный блеомицином фиброз легких.
SPARC дифференциально экспрессируется в опухолях и в окружающей их строме при различных раковых заболеваниях, но не экспрессируется в нормальных тканях, причем характер его экспрессии зависит от типа ракового заболевания. Таким образом, пока не существует унифицированной модели, которая объясняла бы все аспекты функций этого белка и его вклада в развитие и прогрессирование рака. В качестве примера можно отметить, что в литературе сообщалось о повышенной экспрессии SPARC в раковой опухоли молочной железы (Bellahcene and Castronovo, 1995; Jones et al., 2004; Lien et al., 2007; Porter et al., 1995), в меланоме (Ledda et al., 1997a) и в глиобластомах (Rempel et al., 1998). Повышенные уровни экспрессии SPARC играют определенную роль в стимуляции развития опухоли или в прогрессировании указанных раковых заболеваний.
В соответствии с этим сверхэкспрессия SPARC при воспалительных заболеваниях и при некоторых раковых заболеваниях позволяет считать SPARC потенциальной мишенью, которая может быть использована в диагностике и в терапии.
Краткое описание сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к композициям для доставки терапевтического или диагностического средства в пораженную область млекопитающего, а именно для доставки терапевтически или диагностически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей терапевтическое или диагностическое средство, связанное с SPARC-связывающимся пептидом («SBP»), и фармацевтически приемлемый носитель («композиции согласно изобретению»), где указанный SBP содержит одну или несколько последовательностей SEQ ID NO:1-117.
Особенно предпочтительные варианты изобретения включают, например, композиции согласно изобретению, предназначенные для доставки терапевтического средства в пораженную область млекопитающего и включающие один или несколько SBP, где указанное терапевтическое средство представляет собой фрагмент антитела, содержащий функциональный Fc-домен антитела, включая, например, функциональный Fc-домен антитела, содержащий SEQ ID NO:118.
Другими предпочтительными вариантами изобретения являются композиции согласно изобретению, предназначеные для доставки терапевтического или диагностического средства в пораженную область млекопитающего, где SBP, например, включает по меньшей мере 10 следующих друг за другом аминокислот, присутствующих в любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-112 и 117. Предпочтительно, SBP может состоять по меньшей мере из 10 смежных аминокислот, присутствующих в любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-112 и 117. Другие варианты изобретения включают композиции, например, содержащие два или более отдельных SBP, каждый из которых содержит по меньшей мере 10 смежных аминокислот, присутствующих в любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-112 и 117, а предпочтительно, в любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-5. Другие варианты изобретения включают композиции, например, содержащие два или более отдельных SBP, каждый из которых состоит из одной или нескольких SEQ ID NO:1-117.
Настоящее изобретение также относится к композициям для доставки терапевтического или диагностического средства в пораженную область млекопитающего, а именно для доставки терапевтически или диагностически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей терапевтическое или диагностическое средство, связанное с SBP, фармацевтически приемлемый носитель, а также фармацевтически приемлемый носитель, дополнительно включающий альбумин-связывающий пептид («ABP»), где ABP содержит SEQ ID NO:119 или SEQ ID NO:120, или обе последовательности SEQ ID NO:119 и 120. Такими композициями являются композиции, в которых SBP и ABP присутствуют в одном и том же полипептиде, и композиции, в которых SBP и ABP присутствуют в различных полипептидах.
Настоящее изобретение также относится к способам доставки терапевтического или диагностического средства в пораженную область млекопитающего, где указанные способы включают доставку терапевтически или диагностически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей терапевтическое или диагностическое средство, связанное с SPARC-связывающимся пептидом, и фармацевтически приемлемый носитель («способы согласно изобретению»), где указанный SBP содержит SEQ ID NO:1-117. Предпочтительные варианты включают способы согласно изобретению, где указанные композиции включают, например, SBP, который содержит по меньшей мере 10 смежных аминокислот, происходящих от любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-112 и 117, а более предпочтительно, в любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-5 и 117.
Другие предпочтительные варианты включают способы согласно изобретению, например, способы, в которых два или более отдельных SBP состоят из одной или нескольких SEQ ID NO:1-117. Настоящее изобретение также относится к способам согласно изобретению, где указанные два или более отдельных полипептида состоят по меньшей мере из одного SBP, и где указанные SBP содержат по меньшей мере 10 смежных аминокислот, происходящих от любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-112.
Особенно предпочтительные способы согласно изобретению включают применение композиций, например, содержащих терапевтическое средство, которое представляет собой фрагмент антитела, содержащий функциональный Fc-домен антитела, где указанный фрагмент антитела содержит SEQ ID NO:118. Такими способами согласно изобретению являются, например, способы, где указанным терапевтическим средством является фрагмент антитела, который опосредует одну или несколько функций, таких как активация комплемента, клеточно-опосредуемая цитотоксичность, индуцирование апоптоза, индуцирование клеточной гибели и опсонизация.
Способы согласно изобретению, описанные в настоящей заявке, также включают применение пептидов, связывающихся с сывороточным альбумином ("ABP"), где указанные пептиды включают последовательности SEQ ID NO:119 или 120, или SEQ ID NO:119 и 120. Способами согласно изобретению также являются способы, где, например, SBP и ABP присутствуют в одном и том же полипептиде, и способы, где SBP и ABP присутствуют в различных полипептидах. Однако SBP может также состоять по меньшей мере из 10 смежных аминокислот, происходящих от любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-112.
Могут быть также применены композиции согласно изобретению и способы согласно изобретению, в которых пораженным участком является опухоль, а млекопитающим является человек.
Краткое описание некоторых аспектов графического материала
На фиг. 1 проиллюстрирована общая концепция присоединения связывающегося пептида к терапевтическому или диагностическому средству. В одном из примеров, проиллюстрированных в данном графическом материале, терапевтическим средством является Fc-домен антитела.
На фиг. 2 проиллюстрирована общая стратегия итеративного скрининга библиотеки фагового представления.
На фиг. 3 представлены последовательности, идентифицированные после скрининга пептидной библиотеки фагового представления на связывание с SPARC по числу выделенных последовательностей.
На фиг. 4 представлены последовательности, идентифицированные после скрининга пептидной библиотеки фагового представления на связывание с SPARC по авидности связывания с SPARC (на что указывает OD).
На фиг. 5 проиллюстрировано клонирование любого пептида из пептидов PD15 или PD21 в вектор pFUSE-hIgG1-Fc2 с получением гибридного белка PD15 или PD21-Fc.
На фиг. 6 представлена последовательность ДНК, полученная в результате клонирования последовательностей, кодирующих пептид 15 и пептид 21, в вектор pFUSE-hIgG1-Fc2, кодирующий гибридные белки «пептид-Fc».
На фиг. 7 представлены экспрессированные гибридные белки PD 15-Fc и PD 21-Fc, очищенные с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.
На фиг. 8 проиллюстрирован массив Protoarray, используемый для определения нежелательного связывания PD15 и PD21.
На фиг. 9 представлен график, на котором проиллюстрированы ELISA-анализы на связывание путем сравнения авидности связывания SPARC с PD15 и PD21 с авидностью его связывания с анти-SPARC антителом.
На фиг. 10 представлены микрофотографии, полученные в результате иммуногистологических анализов срезов человеческой опухоли, которые продемонстрировали экспрессию опухолевого SPARC в присутствии анти-SPARC антитела (анти-SPARC антитела R&D). Антитело против герцептина, используемое в качестве негативного контроля (только Fc-фрагмент) и гибридный белок «пептид-Fc», связывающийся со стабилином (stab-Fc), не окрашивали опухоль.
На фиг. 11 проиллюстрировано гистологическое окрашивание SPARC-экспрессирующей опухоли, указывающее на связывание PD15 и PD21 со SPARC-экспрессирующими клетками опухоли.
На фиг. 12 показан потенциальный SPARC-связывающий сайт на эластине.
На фиг. 13 проиллюстрирована противоопухолевая активность PD15 и PD21 в моделированной системе «мышь с человеческим раком предстательной железы»/«голая» мышь.
На фиг. 14 проиллюстрирована противоопухолевая активность PD15 и PD21 в моделированной системе «мышь с человеческим раком молочной железы»/«голая» мышь.
На фиг. 15 представлены два полипептида scFv, ScFv 3-1 и ScFv 3-2, обладающие SPARC-связывающей активностью.
На фиг. 16 представлены два полипептида scFv, ScFv 2-1 и ScFv 2-2, обладающие SPARC-связывающей активностью.
На фиг. 17 представлена нуклеотидная последовательность scfv 2-1, 2-2, 3-1 и 3-2. CDR подчеркнуты.
На фиг. 18 проиллюстрировано выделение scfv2-1 из бактерий.
На фиг. 19 проиллюстрировано выделение scfv3-1 из бактерий.
На фиг. 20 проиллюстрировано связывание scfv2-1 с белком SPARC, иммобилизованным на чипе, как было оценено с помощью анализа Biacore. Указаны величины Kd для scfv 2-1, 3-1 и 3-2, связанных с белком SPARC, которые были получены методом Biacore (SPARC HTI, то есть с очищенным тромбоцитарным SPARC, полученным от HTI; и SPARC Abx, то есть с SPARC, выделенным из сконструированных клеток HEK293, поставляемых Abraxis).
Подробное описание настоящего изобретения
SBP и ABP представляют собой «домены пептидного лиганда». Термин «домен пептидного лиганда» означает аминокислотную последовательность, которая может существовать сама по себе и/или присутствовать в более крупной полипептидной последовательности, где указанная аминокислотная последовательность связывается с другой биомолекулой с определенной степенью специфичности. Так, например, в связывании этих биомолекул с сывороточным альбумином участвует главная система транспорта жирных кислот, билирубина, триптофана, кальция, стероидных гормонов и других физиологически важных соединений в кровотоке. Связывание этих биомолекул осуществляется в дискретных сайтах аминокислотных последовательностей альбумина, то есть в доменах пептидных лигандов в сывороточном альбумине.
Настоящее изобретение относится к композициям для доставки терапевтического или диагностического средства в пораженную область млекопитающего, а именно для доставки терапевтически или диагностически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей терапевтическое или диагностическое средство, связанное с SPARC-связывающим пептидом («SBP»), и фармацевтически приемлемый носитель («композиции согласно изобретению» и «способы согласно изобретению»). Настоящее изобретение включает композиции и способы, в которых SBP содержит пептид, имеющий любую одну или несколько последовательностей SEQ ID NO:1-117, а наиболее предпочтительно, любую одну или несколько последовательностей SEQ ID NO:1-5 или один или несколько гомологов любой одной из SEQ ID NO:1-117.
Термин «гомолог» означает полипептид, который, в основном, содержит такую же аминокислотную последовательность, как и исходная последовательность, и обладает релевантными свойствами, которые, по существу, аналогичны свойствам исходной последовательности. Одним из таких репрезентативных свойств является способность модулировать распределение активного агента в ткани, где указанный гомолог SEQ ID NO:1-117 может иметь уровень модуляции, в основном, аналогичный уровню модуляции SEQ ID NO:1-117. В этом контексте, желательно, например, чтобы гомолог SEQ ID NO:1-117, в основном, обладал такой же способностью к модуляции, при которой уровень активного агента в крови был по меньшей мере примерно на 80%, предпочтительно, по меньшей мере примерно на 85%, более предпочтительно, по меньшей мере примерно на 90%, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере примерно на 95% аналогичен уровню, достигаемому с использованием SEQ ID NO:1-117. Альтернативно, термин «гомолог» также означает, например, пептидную последовательность, состоящую по меньшей мере из 6 смежных аминокислот, предпочтительно, по меньшей мере из 7 смежных аминокислот, более предпочтительно, по меньшей мере из 8 смежных аминокислот, еще более предпочтительно, по меньшей мере из 9 смежных аминокислот, еще более предпочтительно, по меньшей мере из 10 смежных аминокислот любой одной из SEQ ID NO:1-112, а наиболее предпочтительно, из любой одной или нескольких SEQ ID NO:1-5.
Композиции и способы согласно изобретению также включают ABP, содержащие SEQ ID NO:119 или 120, либо SEQ ID NO:119 и 120 и их гомологи. Способы согласно изобретению также включают, например, способы, в которых SBP и ABP присутствуют в одном и том же полипептиде и в которых SBP и ABP присутствуют в различных полипептидах.
Что касается изменений в исходной последовательности, то было бы желательно, чтобы гомолог имел последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, предпочтительно, по меньшей мере примерно на 90%, еще более предпочтительно, по меньшей мере примерно на 95%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере примерно на 99% была идентична исходной последовательности.
Используемый здесь термин «процент идентичности последовательностей» означает величину, определяемую путем сравнения оптимально двух выровненных последовательностей по «окну» сравнения. Кроме того, часть полипептидной последовательности в «окне» сравнения может содержать добавления или делеции (то есть «пробелы») по сравнению со сравниваемой последовательностью (которая не содержит добавлений или делеций), используемой для оптимального сопоставления двух последовательностей. Процент вычисляют путем определения числа положений, в которых идентичный аминокислотный остаток присутствует в обеих последовательностях, в результате чего получают ряд соответствующих положений, и число этих положений делят на общее число положений в «окне» сравнения, а затем, полученный результат умножают на 100 и получают процент идентичности данных последовательностей. Предпочтительно, оптимальное выравнивание осуществляют с использованием алгоритма выравнивания для достижения максимальной гомологии Нидлмана и Вюнша (1970) J. Mol. Biol. 48:443 453.
В том случае, если гомологи не содержат идентичных аминокислот, также может оказаться желательным, чтобы мутации давали только консервативные аминокислотные замены. В соответствии с этим в положениях остатков, которые не являются идентичными, осуществляют замену таких аминокислотых остатков на другие аминокислотые остатки с аналогичными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью), а поэтому функциональные свойства такой молекулы не изменяются. Если последовательности имеют консервативные замены, то процент идентичности последовательностей может быть уточнен путем коррекции на консервативную природу таких замен. Говорят, что последовательности, отличающиеся такими консервативными заменами, представляют собой «аналогичные» последовательности или «подобные» последовательности. Методы осуществления такой коррекции хорошо известны специалистам.
Для лучшего объяснения термина «консервативная аминокислотная замена или модификация», употребляемого в контексте настоящего изобретения, ниже перечислены группы аминокислот A-F. Замена одного члена нижеследующих групп другим членом той же самой группы рассматривается как «консервативная» замена.
Группа A включает лейцин, изолейцин, валин, метионин, фенилаланин, серин, цистеин, треонин и модифицированные аминокислоты, имеющие нижеследующие боковые цепи: этил, изобутил, -CH2CH2OH, -CH2CH2CH2OH, -CH2CHOHCH3 и CH2SCH3.
Группа B включает глицин, аланин, валин, серин, цистеин, треонин и модифицированную аминокислоту, имеющую этильную боковую цепь.
Группа C включает фенилаланин, фенилглицин, тирозин, триптофан, циклогексилметил и модифицированные аминокислотные остатки, имеющие замещенные бензильные или фенильные боковые цепи.
Группа D включает глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, замещенный или незамещенный алифатический, ароматический или бензиловый эфир глутаминовой или аспарагиновой кислоты (например, метиловый, этиловый, н-пропиловый, изопропиловый, циклогексиловый, бензиловый или замещенный бензиловый эфир), глутамин, аспарагин, CO-NH-алкилированный глутамин или аспарагин (например, алкилированный метилом, этилом, н-пропилом и изопропилом) и модифицированные аминокислоты, имеющие боковую цепь -(CH2)3COOH, их сложный эфир (замещенный или незамещенный алифатический, ароматический или бензиловый сложный эфир), амид и замещенный или незамещенный N-алкилированный амид.
Группа Е включает гистидин, лизин, аргинин, N-нитроаргинин, п-циклоаргинин, g-гидроксиаргинин, N-амидиноцитрулин, 2-аминогуанидинобутановую кислоту, гомологи лизина, гомологи аргинина и орнитин.
Группа F включает серин, треонин, цистеин и модифицированные аминокислоты, имеющие прямые или разветвленные алкильные боковые C1-C5-цепи, замещенные -OH или -SH.
Настоящее изобретение также относится к композициям, включающим молекулу-конъюгат, содержащую домен пептидного лиганда, конъюгированный с активным агентом, где указанный домен пептидного лиганда дополнительно содержит примерно 50 аминокислот, предпочтительно, дополнительно примерно 25 аминокислот, более предпочтительно, дополнительно примерно 15 аминокислот, а наиболее предпочтительно, дополнительно примерно 10 аминокислот, присоединенных к амино-концу, или карбокси-концу, или к обоим концам. Полученные полипептиды согласно изобретению включают полипептиды, общая длина которых составляет менее чем 50, менее чем 40, менее чем 30, менее чем 25 или менее чем 20 аминокислот.
Настоящее изобретение также относится к композициям, включающим молекулу-конъюгат, содержащую SBP, конъюгированный с активным агентом, где в указанной композиции присутствуют один или множество SBP, содержащих любую одну из SEQ ID NO:1-117, а наиболее желательно, любую одну или более SEQ ID NO:1, 2 и 117.
Настоящее изобретение также относится к выделенным полинуклеотидам, кодирующим полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность домена, связывающегося с пептидным лигандом, включая последовательности, в которых указанная дополнительная аминокислота присоединена у амино- и/или карбоксиконца.
II. Способы получения пептидов согласно изобретению
Полипептиды, содержащие домен пептидного лиганда и полученные в соответствии с настоящим изобретением, могут быть синтезированы, детектированы, количественно оценены и очищены известными методами. Так, например, клетки, экспрессирующие экзогенные полипептиды, содержащие домен пептидного лиганда, могут быть получены путем помещения кДНК под контроль сильного промотора/сайта инициации трансляции и в трансфицированный или трансформированный вектор, встраиваемый в подходящие прокариотические или эукариотические клетки для инициации экспрессии полипептидов, содержащих домен пептидного лиганда, методами, хорошо известными среднему специалисту в данной области. Альтернативно, полипептиды, содержащие домен пептидного лиганда, могут быть химически синтезированы методами, хорошо известными среднему специалисту в данной области.
Полипептиды, содержащие домен пептидного лиганда, могут быть получены стандартным методом твердофазного синтеза. Как, в основном, известно специалистам, пептиды требуемой длины могут быть получены с применением коммерчески доступного оборудования и реагентов в соответствии с инструкциями производителей по блокированию интерферирующих групп, защите реакционноспособных аминокислот, связыванию, реакции снятия защиты и кэпированию непрореагировавших остатков. Подходящее оборудование может быть закуплено, например, у Applied BioSystems, Foster City, CA, или Biosearch Corporation in San Raphael, CA.
Так, например, пептиды синтезируют в соответствии со стандартными протоколами автоматизированного твердофазного синтеза, где используются трет-бутоксикарбонил-альфа-аминокислоты с соответствующей защитой боковой цепи. Полноразмерный пептид удаляют с твердофазного носителя путем одновременного снятия защиты боковой цепи стандартным методом с использованием фтористого водорода. Затем, неочищенные пептиды дополнительно очищают с помощью полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (Vydac C18) в градиенте ацетонитрила в 0,1% трифторуксусной кислоте (TFA). После этого пептиды сушат в вакууме для удаления ацетонитрила и лиофилизуют из раствора 0,1% TFA в воде. Чистоту подтверждают с помощью аналитической ОФ-ВЭЖХ. Пептиды могут быть лиофилизованы, а затем солюбилизированы в воде или в 0,01M уксусной кислоте в концентрациях 1-2 мг/мл по массе.
Применение вышеупомянутых методов синтеза необходимо в том случае, если в пептидах присутствуют некодируемые аминокислоты или D-формы аминокислот. Однако в случае пептидов, кодируемых геном, такой синтез может быть также проведен рекомбинантными методами с использованием уже синтезированных последовательностей ДНК в коммерчески доступных системах экспрессии.
В соответствии с этим настоящее изобретение относится к рекомбинантному вектору, содержащему элементы регуляции экспрессии полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, содержащий домен пептидного лиганда. Кроме того, настоящее изобретение относится к клеткам, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, содержащий домен пептидного лиганда, где указанными клетками являются прокариотические клетки или эукариотические клетки. Методы культивирования микробных и тканевых культур хорошо известны специалистам (см., например, Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001), pp. 16.1-16.54). Таким образом, настоящее изобретение относится к способу получения полипептидов, содержащих домен пептидного лиганда, где указанный способ включает: (a) трансформацию клеток нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид по п.1 формулы изобретения; (b) индуцирование экспрессии полипептида трансформированными клетками; и (c) очистку полипептида.
Экспрессия белка зависит от уровня транскрипции РНК, которая, в свою очередь, регулируется ДНК-сигналами. Аналогичным образом, трансляция мРНК требует, на очень небольшом уровне, присутствия инициирующего кодона AUG, который обычно локализуется в области между нуклеотидами 10 и 100 у 5'-конца матричной РНК. Было показано, что последовательности, фланкирующие инициирующий кодон AUG, влияют на его распознавание. Так, например, для распознавания эукариотическими рибосомами, инициирующие кодоны AUG встраивают в последовательности так, чтобы они точно соответствовали «консенсусной последовательности Козака», что будет приводить к оптимальной трансляции (см., например, Kozak, J. Molec. Biol. 196:947-950 (1987)). Кроме того, для успешной экспрессии экзогенной нуклеиновой кислоты в клетках может потребоваться посттрансляционная модификация полученного белка.
Описанные здесь молекулы нуклеиновой кислоты, предпочтительно, включают кодирующую область, функционально присоединенную к подходящему промотору, например к промотору, который является функциональным в эукариотических клетках. В настоящем изобретении могут быть использованы вирусные промоторы, такие как, но не ограничивающиеся ими, промотор RSV и основной поздний промотор аденовируса. Подходящими не-вирусными промоторами являются, но не ограничиваются ими, промотор фосфоглицерокиназы (PGK) и промотор фактора элонгации 1α. Не-вирусными промоторными, предпочтительно, являются человеческие промоторы. Дополнительные подходящие генетические элементы, многие из которых известны специалистам, могут быть также присоединены к нуклеиновой кислоте согласно изобретению и к ее конструкциям, либо они могут быть встроены в указанную нуклеиновую кислоту и ее конструкции в целях сообщения им дополнительных функций, повышения уровня экспрессии или улучшения характера экспрессии.
Кроме того, описанные здесь молекулы нуклеиновой кислоты могут быть функционально присоединены к энхансерам для облегчения транскрипции. Энхансерами являются цисдействующие элементы ДНК, стимулирующие транскрипцию смежных генов. Примерами энхансеров, которые обеспечивают высокий уровень транскрипции сцепленных генов в ряде клеток различных типов, происходящих от множества видов, являются, но не ограничиваются ими, энхансеры, происходящие от SV40 и RSV-LTR. Такие энхансеры могут быть объединены с другими энхансерами, обладающими клетко-специфическими эффектами, либо может быть использован любой отдельно взятый энхансер.
Для оптимизации продуцирования белка в эукариотических клетках молекула нуклеиновой кислоты согласно изобретению может также содержать сайт полиаденилирования, расположенный за кодирующей областью молекулы нуклеиновой кислоты. Кроме того, предпочтительно, чтобы все соответствующие сигналы транскрипции (и сигналы трансляции, если они имеются) были расположены так, чтобы экзогенная нуклеиновая кислота соответствующим образом экспрессировалась в клетках, в которые ее вводят. Если это необходимо, экзогенная нуклеиновая кислота может также включать сайты сплайсинга (то есть акцепторые и донорные сайты сплайсинга) для облегчения продуцирования мРНК, то есть полноразмерного транскрипта, с сохранением рамки считывания. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут также включать соответствующие последовательности для процессинга, секреции, внутриклеточной локализации и т.п.
Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть встроены в любой подходящий вектор. Подходящими векторами являются, но не ограничиваются ими, вирусные векторы. Подходящими вирусными векторами являются, но не ограничиваются ими, ретровирусные векторы, векторы на основе альфа-вирусов, вируса коровьей оспы, аденовируса, аденоассоциированного вируса, вируса герпеса и вируса оспы домашней птицы. Такие векторы, предпочтительно, обладают природной или сообщенной им способностью трансформировать эукариотические клетки, например клетки CHO-K1. Кроме того, векторами, используемыми в настоящем изобретении, могут быть векторы на основе «оголенной» нуклеиновой кислоты (то есть векторы, имеющие небольшое количество инкапсулированных в них белков, сахаров и/или липидов, или векторы, не содержащие указанных соединений), такие как плазмиды или эписомы, либо указанные векторы могут образовывать комплекс с другими молекулами. Другими молекулами, которые могут быть соответствующим образом объединены с нуклеиновыми кислотами согласно изобретению, являются, но не ограничиваются ими, вирусные оболочки, катионные липиды, липосомы, полиамины, золотые частицы и нацеливающие молекулы, такие как лиганды, рецепторы или антитела, нацеленные на клеточные молекулы.
Описанные здесь молекулы нуклеиновой кислоты могут быть перенесены в любые подходящие клетки, обычно в эукариотические клетки, такие как, например, клетки CHO, HEK293 или BHK, так, чтобы это приводило к экспрессии полипептида, содержащего домен пептидного лиганда, такого как, например, полипептид, содержащий последовательности SEQ ID NO:1-120, или их гомологи, описанные в настоящей заявке. Клетка может быть культивирована так, чтобы она экспрессировала молекулу нуклеиновой кислоты, а поэтому продуцировала полипептид, содержащий домен пептидного лиганда, такой как, например, полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1-120, или ее гомологи, описанные в настоящей заявке.
В соответствии с этим настоящее изобретение относится к клетке, трансформированной или трансфицированной описанной здесь молекулой нуклеиновой кислоты согласно изобретению. Методы трансформации или трансфекции клеток молекулой экзогенной ДНК хорошо известны специалистам. Так, например, молекулу ДНК вводят в клетки стандартными методами трансформации или трансфекции, хорошо известными специалистам, такими как, но не ограничивающимися ими, трансфекция, опосредуемая фосфатом кальция или DEAE-декстраном, слияние протопластов, электропорация, метод с применением липосом и прямая микроинжекция (см., например, Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001), pp. 1.1-1.162, 15.1-15.53, 16.1-16.54).
Другим примером метода трансформации является метод слияния протопластов, в котором протопласты, происходящие от бактерий, несущих большое число копий представляющей интерес плазмиды, смешивают непосредственно с культивированными клетками млекопитающих. После слияния клеточных мембран (обычно посредством полиэтиленгликоля) содержимое бактерий доставляется в цитоплазму клетками млекопитающих, и плазмидная ДНК переносится в ядро.
Электропорация, то есть подача коротких электрических импульсов высокого напряжения на различные клетки млекопитающих и растений, приводит к образованию нанометровых пор в плазматической мембране. ДНК переносится непосредственно в цитоплазму клетки либо через эти поры, либо в результате перераспределения компонентов мембраны, которое сопровождается закрытием этих пор. Электропорация может быть исключительно эффективной и может быть использована для временной экспрессии генов клонов и для получения клеточных линий, несущих интегрированные копии представляющего интерес гена.
Такие методы могут быть применены для стабильной и временной трансформации эукариотических клеток. Для выделения стабильно трансформированных клеток требуется введение селективного маркера в сочетании с трансформацией представляющего интерес гена. Такими селективными маркерами являются гены, сообщающие резистентность к неомицину, а также ген HPRT в HPRT-негативных клетках. При отборе может потребоваться более длительное культивирование в селективной среде, а именно по меньшей мере в течение примерно 2-7 дней, а предпочтительно, по меньшей мере примерно 1-5 недель (см., например, Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001), pp. 16.1-16.54).
Полипептид, содержащий домен пептидного лиганда, может быть экспрессирован в рекомбинантных клетках-хозяевах и выделен из этих клеток. Рекомбинантные клетки-хозяева могут быть прокариотическими или эукариотическими, включая, но не ограничиваясь ими, бактерии, такие как E. coli, клетки грибов, такие как дрожжи, клетки насекомых, включая, но не ограничиваясь ими, клеточные линии, происходящие от дрозофилы и тутового шелкопряда, и клетки и клеточные линии млекопитающих. При экспрессии полипептида, содержащего домен пептидного лиганда, в клетках, например в человеческих клетках, независимо от того, используются ли они in vitro или in vivo, кодоны, отобранные для такого полинуклеотида, кодирующего пептид, могут быть оптимизированы для клеток данного типа (то есть вида). Специалистам известно множество методов оптимизации кодонов (см., например, Jayaraj et al., Nucleic Acids Res. 33(9):3011-6 (2005); Fuglsang et al., Protein Expr. Purif. 31(2):247-9 (2003); Wu et al., The Synthetic Gene Designer: a Flexible Web Platform to Explore Sequence Space of Synthetic Genes for Heterologous Expression, csbw, 2005 IEEE Computational Systems Bioinformatics Conference - Workshops (CSBW'05), pp. 258-259 (2005)).
Факторами, которые следует учитывать для достижения оптимальной экспрессии полипептида в прокариотах, являются конкретно используемые экспрессионные системы, выбор штамма-хозяина, стабильность мРНК, смещение кодонов, образование телец включения и предотвращение их образования; образование гибридного белка и его сайт-специфический протеолиз, а также компартмент-направленная секреция (см. публикацию Sorensen et al., Journal of Biotechnology 115 (2005) 113-128, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки).
Обычно, экспрессия индуцируется с плазмиды, имеющейся в системе, совместимой с фоновым генотипом. Генетическими элементами экспрессионной плазмиды являются ориджин репликации (ori), маркер резистентности к антибиотикам, промоторы транскрипции, области инициации трансляции (TIR), а также терминаторы транскрипции и трансляции.
При этом может быть использована любая подходящая экспрессионная система, такая как, например, клетки Escherichia coli, которые благодаря их относительной простоте облегчают экспрессию белка; культуры высокой плотности; хорошо известные генетические элементы и большое число совместимых материалов, включая ряд доступных плазмид, рекомбинантные партнеры по слиянию и мутантные штаммы, подходящие для экспрессии полипептида. Особенно подходящими для рекомбинантной экспрессии являются штамм E. coli или фоновый генотип. Экспрессионные штаммы должны быть дефицитными по многим природным протеазам с нежелательным действием, а также должны поддерживать стабильную экспрессию плазмиды и содержать генетические элементы, соответствующие данной экспрессионной системе (например, DE3).
Число плазмидных копий регулируется ориджином репликации, который, предпочтительно, инициирует репликацию в нестрогих условиях (Baneyx, 1999). Репликон ColE1, присутствующий в современных экспрессионных плазмидах, происходит от семейства плазмид pBR322 (число копий 15-20) или pUC (число копий 500-700), а репликон p15A происходит от pACYC184 (число копий 10-12). Наиболее известные маркеры резистентности к лекарственным средствам, присутствующие в рекомбинантных экспрессионных плазмидах, сообщают резистентность к ампициллину, канамицину, хлорамфениколу или тетрациклину.
Экспрессионными системами E. coli являются экспрессионная система pET на основе T7 (поставляемая в продажу Novagen), промотор PL лямбда/репрессор cI (например, Invitrogen pLEX), промотор Trc (например, Amersham Biosciences pTrc), промотор Tac (например, Amersham Biosciences pGEX) и гибрид lac/T5 (например, Qiagen pQE), а также промотор BAD (например, pBAD Invitrogen).
Для инициации трансляции из области инициации трансляции (TIR) транскрибированной матричной РНК требуется присутствие сайта связывания с рибосомой (RBS), включая последовательность Шайна-Дальгарно (SD) и кодон инициации трансляции. Последовательность Шайна-Дальгарно представляет собой последовательность из 7±2 нуклеотидов, расположенных выше инициирующего кодона, который является каноническим AUG в эффективных рекомбинантных экспрессионных системах. Оптимальная инициация трансляции достигается из мРНК с использованием последовательности SD, такой как UAAGGAGG.
Частота встречаемости кодонов в E. coli зависит от уровня когнатных амино-ацилированных тРНК, присутствующих в цитоплазме. Большинство кодонов присутствует в генах, экспрессируемых на высоком уровне, а небольшое число кодонов или редко встречающиеся кодоны обычно встречаются в генах, экспрессируемых на низком уровне. Редко встречающиеся кодоны в E. coli часто в избытке присутствуют в гетерологичных генах, происходящих от таких источников, как эукариоты, архебактерии и другие отдаленно родственные организмы, в которых преимущественно встречаются другие кодоны (Kane, 1995). Экспрессия генов, содержащих редко встречающиеся кодоны, может приводить к ошибочной трансляции в результате рибосомного блокирования в положениях, требующих включения аминокислот, связанных с тРНК с минорными кодонами (McNulty et al., 2003). Проблемы, связанные со смещением кодонов, особенно часто возникают в рекомбинантных экспрессионных системах, в случае если транскрипты содержат редко встречающиеся кодоны в кластерах, таких как дублеты и триплеты, которые аккумулируются там в больших количествах.
Для активности белка требуется его строгая укладка с образованием трехмерных структур. Стрессовая ситуация, такая как тепловой шок, оказывает негативное влияние на укладку in vivo, а укладка с образованием промежуточных структур приводит к образованию аморфных белковых гранул, называемых тельцами включения.
Тельца включения представляют собой набор агрегатов со сложной структурой, которые часто могут образовываться в ответ на стрессовые условия, в случае когда рекомбинантный белок экспрессируется на высоком уровне. Макромолекулярные скопления белков при концентрации 200-300 мг/мл в цитоплазме E. coli позволяют предположить о наличии очень неблагоприятных условий для укладки белка, а в частности в процессе рекомбинантной экспрессии на высоком уровне (van den Berg et al., 1999). При этом неизвестно, образуются ли тельца включения в результате пассивных событий, происходящих при гидрофобном взаимодействии между «пэтчами», присутствующими на неуложенных цепях, или в результате специфических механизмов кластеризации (Villaverde and Carrio, 2003). Очищенные агрегаты могут быть солюбилизированы с использованием детергентов, таких как мочевина и гидрохлорид гуадиния. Нативный белок может быть получен путем in vitro рефолдинга из солюбилизированных телец включения методами разведения, диализа или рефолдинга на колонке (Middelberg, 2002; Sørensen et al., 2003a).
Стратегии рефолдинга могут быть усовершенствованы путем включения молекулярных шаперонов (Mogk et al., 2002). Однако для оптимизации процедуры рефолдинга данного белка требуются большие затраты времени, и это не всегда дает высокий выход продукта. Стратегией предупреждения образования телец включения может быть ко-сверхэкспрессия молекулярных шаперонов.
Для упрощения очистки и экспрессии рекомбинантных белков были получены партнеры по слиянию белков широкого ряда (Stevens, 2000). Гибридные белки или химерные белки обычно включают партнера или «метку», связанную с белком-«пассажиром» или белком-мишенью посредством сайта распознавания специфической протеазой. Большинство партнеров по слиянию используются для специфических стратегий аффинной очистки. Партнеры по слиянию также предпочтительно использовать in vivo, поскольку они могут защищать белки-«пассажиры» от внутриклеточного протеолиза (Jacquet et al., 1999; Martinez et al., 1995) и повышать растворимость (Davis et al., 1999; Kapust and Waugh, 1999; Sørensen et al., 2003b), либо они могут быть использованы в качестве специфических экспрессионных репортеров (Waldo et al., 1999). Высокие уровни экспрессии могут часто передаваться от N-концевого партнера по слиянию слабо экспрессирующемуся белку-«пассажиру», что, вероятно, обусловлено, главным образом, стабилизацией мРНК (Arechaga et al., 2003). Наиболее распространенными аффинными метками являются полигистидиновая метка (His-метка), которая является подходящей для проведения аффинной хроматографии на колонке с иммобилизованным металлом (IMAC), и глутатион-S-трансферазная метка (GST), используемая для очистки на смолах, полученных на основе глутатиона. Существуют и многие другие аффинные метки, подробно описанные в литературе (Terpe, 2003).
В принципе, рекомбинантно экспрессируемые белки могут быть направлены в три различных участка, а именно в цитоплазму, в периплазму или в культуральную среду. Доставка рекомбинантного белка в специфический клеточный компартмент имеет ряд преимуществ и недостатков. Обычно, предпочтительной является экспрессия в цитоплазме, поскольку, в данном случае, она дает достаточно высокие выходы продукта. Образование дисульфидных связей сегрегируется в E. coli и активно катализируется в периплазме системой Dsb (Rietsch and Beckwith, 1998). Восстановление цистеинов в цитоплазме достигается посредством тиоредоксина и глутаредоксина. Тиоредоксин восстанавливается тиоредоксин-редуктазой, а глутаредоксин - глутатионом. Низкомолекулярный глутатион восстанавливается глутатион-редуктазой. Дизрупция генов trxB и gor, кодирующих эти две редуктазы, приводит к образованию дисульфидных связей в цитоплазме E. coli.
Клеточная система экспрессии имеет тот недостаток, что она не дает нужного количества и качества белков и не всегда является высокопродуктивной. Многие из этих недостатков можно обойти путем использования бесклеточных систем экспрессии.
Бесклеточные системы для экспрессии генов in vitro и для синтеза белка описаны для многих различных прокариотических и эукариотических систем (см. Endo & Sawasaki Current Opinion in Biotechnology 2006, 17:373-380). Эукариотические бесклеточные системы, такие как лизат кроличьих ретикулоцитов и экстракт пшеничных проростков, получают из неочищенного экстракта, содержащего все компоненты, необходимые для трансляции in vitro транскрибированных РНК-матриц. В эукариотических бесклеточных системах используется выделенная РНК, синтезированная in vivo или in vitro в качестве матрицы для реакции трансляции (например, системы лизата кроличьих ретикулоцитов или системы экстрактов пшеничных проростков). Связанные эукариотические бесклеточные системы объединяют РНК-полимеразу прокариотического фага с эукариотическими экстрактами и используют экзогенную ДНК или ПЦР-генерированные матрицы с фаговым промотором для синтеза белка in vitro (например, лизат ретикулоцитов, TNT®).
Белки, транслированные с использованием связанных систем TNT®, могут быть использованы в функциональных исследованиях многих типов. Реакции транскрипции/трансляции связанных систем TNT® обычно используют для подтверждения открытых рамок считывания, мутаций исследуемых белков и получения белков in vitro для исследования на связывание белок-ДНК, для анализов на активность белка или для исследований на взаимодействие «белок-белок». Недавно, белки, экспрессированные с применением связанных систем TNT®, были также использованы в анализах для подтверждения взаимодействий двухкомпонентной дрожжевой системы, для осуществления экспрессионного клонирования in vitro (IVEC) и для получения белков-субстратов для анализов на ферментативную активность или модификацию белка. Обзор сопряженных систем TNT®, недавно упоминаемых в различных заявках, можно найти на сайте: www.promega.com/citations/.
Транскрипция и трансляция в прокариотических системах обычно является сопряженной, то есть эти системы содержат эндогенную или фаговую РНК-полимеразу, транскрибирующую мРНК из экзогенной матричной ДНК. Эту РНК затем используют в качестве матрицы для трансляции. Матричной ДНК может быть либо ген, клонированный в плазмидный вектор (кДНК), либо ПЦР(а)-генерированная матрица. Для матриц, транслируемых в прокариотических системах, требуется сайт связывания с рибосомой (RBS). В процессе транскрипции, 5'-конец мРНК становится доступным для связывания с рибосомой и инициации трансляции, что приводит к одновременному осуществлению реакции транскрипции и трансляции. Существуют также прокариотические системы, в которых используются матричные ДНК, содержащие либо прокариотические промоторы (такие как lac или tac; система экстрактов E. coli S30 для кольцевой и линейной ДНК), либо фаговый промотор РНК-полимеразы (система экстрактов E. coli S30 для кольцевой ДНК). Растворимость очищенного полипептида, содержащего домен пептидного лиганда, может быть улучшена методами, известными специалистам. Так, например, для повышения растворимости экспрессируемого белка (например, в E. coli) можно снизить скорость синтеза белка, а именно путем снижения температуры культивирования, путем использования слабого промотора, путем использования низкокопийной плазмиды, путем снижения концентрации индуктора и путем замены культуральной среды, как описано Georgiou & Valax (Current Opinion Biotechnol. 7:190-197(1996)). Такое снижение скорости синтеза белка обычно приводит к получению белка с лучшей растворимостью. Могут быть также добавлены простетические группы или ко-факторы, которые играют важную роль в правильной укладке белка или в повышении стабильности белка, либо может быть добавлен буфер для регуляции изменений рН в среде в процессе культивирования, либо может быть добавлена 1% глюкоза для подавления индуцирования промотора lac лактозой, которая присутствует в наиболее обогащенной среде (такой как LB, 2 x YT). В среду могут быть также добавлены полиолы (например, сорбит) и сахароза, поскольку повышение осмотического давления, вызываемое такими добавлениями, приводит к аккумуляции осмопротектантов в клетке, что обеспечивает стабилизацию структуры нативного белка. Могут быть добавлены этанол, низкомолекулярные тиолы и дисульфиды, и NaCl. Кроме того, с нужным полипептидом могут также ко-экспрессироваться шапероны и/или фолдазы. Молекулярные шапероны стимулируют правильную изомеризацию и нацеливание на клетки посредством временного взаимодействия с промежуточными соединениями, ответственными за укладку. Системами шаперонов E. coli являются, но не ограничиваются ими, GroES-GroEL, DnaK-DnaJ-GrpE, CIpB.
Фолдазы ускоряют прохождение скорость-ограничивающих стадий на протяжении всего процесса укладки. Важную роль обычно играют фолдазы трех типов: пептидилпролил-цис/транс-изомеразы (PPI), дисульфид-оксидоредуктаза (DsbA) и дисульфид-изомераза (DsbC), протеин-дисульфид-изомераза (PDI), которая представляет собой эукариотический белок, катализирующий окисление цистеина белка и изомеризацию дисульфидных связей. Ко-экспрессия одного или нескольких из этих белков с белком-мишенью может давать более высокие уровни растворимого белка-мишени.
Полипептид, содержащий домен пептидного лиганда, может быть получен в виде гибридного белка в целях улучшения его растворимости и продуцирования. Такой гибридный белок включает полипептид, содержащий домен пептидного лиганда, и второй полипептид, присоединенные друг к другу с сохранением рамки считывания. Вторым полипептидом может быть партнер по связыванию, который, как известно специалистам, способствует улучшению растворимости полипептида, с которым он связан, и таким полипептидом является, например, NusA, бактериоферритин (BFR), GrpE, тиоредоксин (TRX) и глутатион-S-трансфераза (GST). Компания Novagen Inc. (Madison, WI) выпускает вектор pET серии 43.1, который стимулирует образование гибрида NusA-мишень. Также известно, что DsbA и DsbC оказывают позитивное влияние на уровни экспрессии при их использовании в качестве партнера по связыванию, а поэтому они могут быть использованы для присоединения к домену пептидного лиганда в целях повышения растворимости.
В одном из аспектов таких гибридных белков, экспрессированный полипептид, содержащий домен пептидного лиганда, включает линкерный полипептид, который имеет сайт расщепления протеазой, включающий пептидную связь, гидролизуемую протеазой. В результате этого, после экспрессии, домен пептидного лиганда в полипептиде может быть отделен от остального полипептида посредством протеолиза. Линкер может включать одну или несколько дополнительных аминокислот на обеих сторонах связи, которая также связывает каталитический сайт протеазы (см., например, Schecter & Berger, Biochem. Biophys. Res. Commun. 27,157-62 (1967)). Альтернативно, сайт расщепления линкера может быть отделен от сайта распознавания протеазы, а два сайта расщепления и сайт распознавания могут быть отделены друг от друга одной или несколькими (например, 2-4) аминокислотами. В одном из аспектов изобретения линкер содержит по меньшей мере примерно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, примерно 10, примерно 20, примерно 30, примерно 40, примерно 50 или более аминокислот. Более предпочтительный линкер имеет длину примерно от 5 до 25 аминокислот, а наиболее предпочтительно, примерно от 8 до 15 аминокислот.
Некоторые протеазы, используемые в соответствии с настоящим изобретением, обсуждаются в нижеследующих работах: Hooper et al., Biochem. J. 321:265-279 (1997); Werb, Cell 91:439-442 (1997); Wolfsberg et al., J. Cell Biol. 131:275-278 (1995); Murakami & Etlinger, Biochem. Biophys. Res. Comm. 146:1249-1259 (1987); Berg et al., Biochem. J. 307:313-326 (1995); Smyth and Trapani, Immunology Today 16:202-206 (1995); Talanian et al., J. Biol. Chem. 272:9677-9682 (1997); и Thornberry et al., J. Biol. Chem. 272:17907-17911 (1997). Протеазы клеточной поверхности могут быть также использованы в комбинации с расщепляемыми линкерами согласно изобретению, и такими протеазами являются, но не ограничиваются ими: аминопептидаза N; восприимчивая к пуромицину аминопептидаза; ангиотензин-конвертирующий фермент; пироглутамилпептидаза II; дипептидил-пептидаза IV; двухосновная N-аргинин-конвертаза; эндопептидаза 24.15; эндопептидаза 24.16; секретаза белка-предшественника амилоида-альфа, -бета и -гамма; ангиотензин-конвертирующий фермент секретаза; TGF-альфа-секретаза; TNF-альфа-секретаза; FAS-лиганд-секретаза; секретазы рецептора TNF I и II; секретаза CD30; секретазы KL1 и KL2; секретаза рецептора IL6; секретаза CD43, CD44; секретазы CD16-I и CD16-II; секретаза L-селектина; секретаза фолатного рецептора; MMP 1,2, 3,7, 8,9, 10,11, 12,13, 14 и 15; урокиназный активатор плазминогена; тканевый активатор плазминогена; плазмин; тромбин; BMP-1 (проколлаген C-пептидаза); ADAM 1,2, 3,4, 5,6, 7,8, 9,10 и 11; и ферменты гранзимы A, B, C, D, E, F, G и H.
В качестве альтернативы клеточно-ассоциированным протеазам может служить саморасщепляющийся линкер. Так, например, в качестве линкера может служить протеаза вируса ящура (FMDV) 2A. Такая протеаза представляет собой короткий полипептид из 17 аминокислот, который расщепляет полипротеин FMDV на стыке 2A/2B. Последовательность полипептида FMDV 2A представляет собой NFDLLKLAGDVESNPGP. Расщепление происходит на C-конце пептида в паре концевых аминокислот глицин-пролин, и такое расщепление не зависит от присутствия других последовательностей FMDV и происходит даже в присутствии гетерологичных последовательностей.
Для очистки полипептидов, содержащих домен пептидного лиганда, может быть использована аффинная хроматография отдельно или в сочетании с ионообменной хроматографией, эксклюзионной хроматографией или ВЭЖХ. Такие хроматографические методы могут быть проведены с использованием колоночной или ступенчатой хроматографии. Методы хроматографической очистки хорошо известны специалистам.
Кроме того, настоящее изобретение относится к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим полипептиды, содержащие пептидый лиганд с одной или несколькими аминокислотными заменами и инсерциями или делециями примерно от 1 до 5 аминокислот, предпочтительно, примерно от 1 до 3 аминокислот, а более предпочтительно, 1 аминокислоту в последовательностях SEQ ID NO:1-117, и имеющие релевантные свойства, которые, по существу, аналогичны свойствам исходных последовательностей.
Мутагенез может быть осуществлен любыми методами, известными специалистам. Обычно мутагенез осуществляют путем клонирования последовательности нуклеиновой кислоты в плазмиду или в некоторые другие векторы для облегчения модификаций данной последовательности. Затем уникальный рестрикционный сайт, в нуклеотидную последовательность которого могут быть добавлены дополнительные нуклеиновые кислоты, идентифицируют или встраивают в последовательность нуклеиновой кислоты. Двухцепочечный синтетический олигонуклеотид обычно получают из перекрывающихся синтетических одноцепочечных смысловых и антисмысловых олигонуклеотидов так, чтобы двухцепочечный олигонуклеотид был включен в рестрикционные сайты, фланкирующие последовательность-мишень, и этот олигонуклеотид может быть использован, например, для включения ДНК-замены. Палазмиду и другой вектор расщепляют рестриктирующим ферментом и олигонуклеотидную последовательность, имеющую соответствующие липкие концы, лигируют в плазмиду или в другой вектор для замены исходной ДНК.
Специалистам известны и другие способы осуществления сайт-направленного мутагенеза in vitro, и такой мутагенез может быть, в частности, осуществлен с помощью полимеразной цепной реакции с перекрывающимся удлинением (ПЦР), см., например, Parikh & Guengerich, Biotechniques 24:428-431 (1998)). Комплементарные праймеры, перекрывающиеся с сайтом замены, могут быть использованы для ПЦР-амплификации целой плазмиды в смеси, содержащей 500 мM dNTP, 2 единицы полимеразы Pfu, 250 нг каждого смыслового и антисмыслового праймера и 200 нг плазмидной ДНК, содержащей последовательность, кодирующую полипептид, содержащий домен пептидного лиганда. Желательно, чтобы ПЦР включала 18 циклов с временем удлинения 2,5 минуты для каждых т.п.н. ДНК. ПЦР-продукты могут быть обработаны ферментом DpnI (который гидролизует только метилированную по аденину плазмидную ДНК) и перенесены в клетки Escherichia coli DH5α. Трансформанты могут быть скринированы путем гидролиза рестриктирующим ферментом на включение замен, которые затем могут быть подтверждены с помощью анализа последовательности ДНК.
Подходящими методами детектирования белка и количественной оценки полипептидов, содержащих домен пептидного лиганда, являются вестерн-блот-анализ, твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), окрашивание серебром, анализ BCA (см., например, Smith et al., Anal. Biochem., 150,76-85 (1985)), анализ белка Лаури (описанный, например, в публикации Lowry et al., J. Biol. Chem., 193, 265-275 (1951)), который представляет собой колориметрический анализ на основе комплексов «белок-медь», и анализ белка Брэдфорда (описанный, например, в публикации Bradford et al., Anal. Biochem., 72, 248 (1976)), в основе которого лежит зависимость от изменения оптической плотности кумасси синего G-250 после связывания с белком. После экспрессии, полипептиды, содержащие домен пептидного лиганда, могут быть очищены традиционными методами очистки, такими как ионообменная хроматография, эксклюзионная хроматография или хроматография на C18.
III. Методы связывания доменов пептидного лиганда
Методы «связывания» (или «конъюгирования» или «перекрестного связывания») подходящих активных агентов, таких как, например, терапевтические средства, химиотерапевтические средства, радионуклиды, полипептиды и т.п., с полипептидом, содержащим домен пептидного лиганда, хорошо известны специалистам. При получении описанных здесь конъюгатов, активный агент непосредственно или опосредованно связывают с доменом пептидного лиганда любым методом, известным специалистам в области присединения двух молекул, при условии, что такое присоединение конъюгированных или связанных молекул к домену пептидного лиганда, в основном, не будет оказывать негативного влияния на функцию домена пептидного лиганда или на функцию активного агента. Такое присоединение может быть осуществлено любыми подходящими средствами, включая, но не ограничиваясь ими, связывание посредством ионных и ковалентных связей и любой другой достаточно стабильной ассоциацией, посредством которой будет модулироваться распределение доставляемого агента.
Различные гетеробифункциональные перекрестно-связывающие реагенты, используемые для образования ковалентных связей между аминогруппами и тиоловыми группами и для введения тиоловых групп в белки, хорошо известны специалистам в данной области (см., например, Cumber et al. (1992) Bioconjugate Chem. 3':397 401; Thorpe et al. (1987) Cancer Res. 47:5924 5931; Gordon et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. 84:308 312; Walden et al. (1986) J. Mol. Cell Immunol. 2:191 197; Carlsson et al. (1978) Biochem. J. 173:723 737; Mahan et al. (1987) Anal. Biochem. 162:163 170; Wawryznaczak et al. (1992) Br. J. Cancer 66:361 366; Fattom et al. (1992) Infection & Immun. 60:584 589). Эти реагенты могут быть использованы для образования ковалентных связей между доменом пептидного лиганда или полипептидом, содержащим домен пептидного лиганда, и любыми описанными здесь активными агентами. Такими реагентами являются, но не ограничиваются ими, N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP; дисульфидный линкер); сульфосукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат (сульфо-LC-SPDP); сукцинимидилоксикарбонил-α-метилбензилтиосульфат (SMBT, дисульфатный линкер со стерически затрудненной конформацией); сукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат (LC-SPDP); сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-SMCC); сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)бутират (SPDB; дисульфидный линкер со стерически затрудненными связями); сульфосукцинимидил-2-(7-азидо-4-метилкумарин-3-ацетамид)этил-1,3-дитиопропионат (SAED); сульфо-сукцинимидил-7-азидо-4-метилкумарин-3-ацетат (SAMCA); сульфосукцинимидил-6-[альфа-метил-альфа-(2-пиридиидитио)толуамидо]гексаноат (сульфо-LC-SMPT); 1,4-ди-[3'-(2'-пиридиидитио)пропионамидо]бутан (DPDPB); 4-сукцинимидилоксикарбонил-α-метил-α.-(2-пиридилтио)толуол (SMPT, дисульфатный линкер со стерически затрудненной конформацией); сульфосукцинимидил-6-[α.-метил-α.-(2-пиридилдитио)толуамидо]гексаноат (сульфо-LC-SMPT); м-малеимидобензоил-N-гидроксисукцинимидоэфир (MBS); м-малеимидобензоил-N-гидроксисульфосукцинимидоэфир (сульфо-MBS); N-сукцинимидил(4-иодацетил)аминобензоат (SIAB; тиоэфирный линкер); сульфосукцинимидил(4-иодацетил)аминобензоат (сульфо-SIAB); сукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират (SMPB); сульфосукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират (сульфо-SMPB); азидобензоилгидразид (ABH).
Другими гетеробифункциональными расщепляемыми связывающими агентами являются N-сукцинимидил-(4-иодацетил)аминобензоат; сульфосукцинимидил-(4-иодацетил)аминобензоат; 4-сукцинимидил-оксикарбонил-a-(2-пиридилдитио)толуол; сульфосукцинимидил-6-[a-метил-a-(пиридилдитиол)толуамидо]гексаноат; N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат; сукцинимидил-6[3(-(-2-пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат; сульфосукцинимидил-6[3(-(-2-пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат; 3-(2-пиридиидитио)пропионилгидразид, реагент Элмана, дихлортриазиновая кислота, S-(2-тиопиридил)-L-цистеин. Другие репрезентативные бифункциональные связывающие соединения описаны в патентах США №№ 5349066, 5618528, 4569789, 4952394 и 5137877.
Альтернативно, для конъюгирования могут быть использованы, например, полипептидные сульфгидрильные группы. Кроме того, сахарные группы, связанные с гликопротеинами, например антитела могут быть окислены с образованием альдегидных групп, используемых в ряде способов конъюгирования, известных специалистам. Конъюгаты, образованные в соответствии с настоящим изобретением, могут быть стабильными in vivo или нестабильными, например, они могут иметь ферментативно гидролизуемые тетрапептидные связи или неустойчивые к действию кислоты цис-аконитильные или гидразоновые связи.
Полипептид, содержащий домен пептидого лиганда, может быть, но необязательно, связан с активным агентом посредством одного или нескольких линкеров. Линкерную часть выбирают в зависимости от желаемых свойств. Так, например, длина линкерной части может быть выбрана в целях оптимизации кинетики и специфичности связывания с лигандом, включая любые конформационные изменения, индуцированные связыванием лиганда с рецептором-мишенью. Линкерная часть должна быть достаточно длинной и достаточно гибкой, чтобы это позволяло свободно взаимодействовать с молекулой полипептидного лиганда и с рецептором клетки-мишени. Если линкер является слишком коротким или слишком жестким, то между молекулой полипептидного лиганда и клеточным токсином могут образовываться стерически затрудненные связи. Если молекула линкера является слишком длинной, то активный агент может разлагаться в процессе продуцирования, либо он может не оказывать желаемое воздействие на клетку-мишень.
В настоящем изобретении может быть использован любой подходящий линкер, известный специалистам. Вообще говоря, в конъюгатах, которые представляют собой гибридные белки, состоящие из линкеров химически продуцируемых конъюгатов, могут быть использованы различные наборы линкеров. Линкерами и связями, которые могут быть использованы для получения химически связанных конъюгатов, являются, но не ограничиваются ими, дисульфидные связи, тиоэфирные связи, стерически затрудненные дисульфидные связи и ковалентные связи, расположенные между свободными реакционноспособными группами, такими как аминогруппы и тиоловые группы. Эти связи получают с использованием гетеробифункциональных реагентов для продуцирования реакционноспособных тиоловых групп на одном или обоих полипептидах, а затем тиоловые группы на одном полипептиде подвергают реакции взаимодействия с реакционноспособными тиоловыми группами или аминогруппами, к которым могут быть присоединены реакционноспособные малеимидо-группы или тиоловые группы, присутствующие на другом полипептиде. Другими линкерами являются расщепляемые кислотой линкеры, такие как бисмалеимидоэтоксипропан, конъюгаты «неустойчивая к действию кислоты группа - трансферрин» и диигидразид адипиновой кислоты, которые расщепляются в более кислотных внутриклеточных компартментах; перекрестно-сшивающие линкеры, которые расщепляются под воздействием УФ-излучения или видимого света, и другие линкеры. В некоторых вариантах изобретения для того, чтобы воспользоваться нужными свойствами каждого линкера, в молекулу может быть включено несколько линкеров. Химические линкеры и пептидные линкеры могут быть встроены путем ковалентного связывания линкера с полипептидом, содержащим домен пептидого лиганда, и с агентом для доставки. Гетеробифункциональные агенты, описанные ниже, могут быть использованы для осуществления такого ковалентного связывания. Пептидные линкеры могут быть также присоединены путем экспрессии ДНК, кодирующей линкер и домен пептидного лиганда, линкер и активный агент, или домен пептидного лиганда, линкер и активный агент в виде гибридного белка. Также рассматривается применение гибких линкеров и линкеров, повышающих растворимость конъюгатов, которые также используются либо отдельно, либо в комбинации с другими линкерами.
В соответствии с этим линкерами могут быть, но не ограничиваются ими, пептидные связи, аминокислотные и пептидные связи, обычно содержащие от одной до примерно 30 аминокислот, а более предпочтительно, примерно от 10 до 30 аминокислот. Альтернативно, химическими линкерами, такими как гетеробифункциональные расщепляемые перекрестно-сшивающие линкеры, являются, но не ограничиваются ими, N-сукцинимидил-(4-иодацетил)аминобензоат, сульфосукцинимидил(4-иодацетил)-аминобензоат, 4-сукцинимидил-оксикарбонил-a-(2-пиридилдитио)толуол, сульфосукцинимидил-6-a-метил-a- (пиридилдитиол)толуамидо)гексаноат, N-сукцинимидил-3-(-2-пиридилдитио)проприонат, сукцинимидил-6(3(-(-2-пиридилдитио)-проприонамидо)гексаноат, сульфосукцинимидил-6(3-(-(-2- пиридиидитио)пропионамидо)гексаноат, 3-(2-пиридилдитио)-пропионилгидразид, реагент Элмана, дихлортриазиновая кислота и S-(2-тиопиридил)-L-цистеин.
Другими линкерами являются тритильные линкеры, а в частности дериватизированные тритильные группы, используемые для получения конъюгатов различных типов, обеспечивающих высвобождение терапевтических средств с различной степенью кислотности или основности. Таким образом, нужная гибкость, может быть достигнута благодаря предварительному выбору значений рН в пределах, при которых может высвобождаться терапевтическое средство, что позволяет проводить отбор линкера на основе известных физиологических различий между тканями, в которые необходимо доставить терапевтическое средство (см., например, патент США № 5612474). Так, например, кислотность опухолевых тканей, очевидно, ниже кислотности нормальных тканей.
Могут быть также использованы линкеры, расщепляемые под действием кислоты, фоточувствительные и термочувствительные линкеры, особенно в тех случаях, когда они необходимы для расщепления направленного на мишень агента, что делает их более доступными для реакции. Линкерами, расщепляемыми под действием кислоты, являются, но не ограничиваются ими, бисмалеимидоэтоксипропан, линкеры на основе дигидразида адипиновой кислоты (см., например, Fattom et al. (1992) Infection & Immun. 60:584 589) и неустойчивые к действию кислоты трансферриновые конъюгаты, которые содержат достаточное количество трансферрина для обеспечения его участия в пути циклизации внутриклеточного трансферрина (см., например, Welhoner et al. (1991) J. Biol. Chem. 266:4309 4314). Фоторасщепляемыми линкерами являются линкеры, которые расщепляются под действием света (см., например, Goldmacher et al. (1992) Bioconj. Chem. 3:104 107, и которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки), а поэтому эти линкеры обеспечивают высвобождение направленного на мишень агента под действием света. Фоторасщепляемые линкеры, которые расщепляются под действием света, известны специалистам (см., например, публикацию Hazum et al. (1981) in Pept., Proc. Eur. Pept. Symp., 16th, Brunfeldt, K (Ed), pp. 105 110, в которой описано использование нитробензильной группы в качестве фоторасщепляемой защитной группы для цистеина; публикацию Yen et al. (1989) Makromol. Chem. 190:69 82, в которой описаны водорастворимые фоторасщепляемые сополимеры, включая гидроксипропилметакриламидный сополимер, глициновый сополимер, флуоресцеиновый сополимер и метилродаминовый сополимер; публикацию Goldmacher et al. (1992) Bioconj. Chem. 3:104 107, в которой описан перекрестно-сшивающий линкер и реагент, который подвергается фотолитическому расщеплению под действием света в ближнем УФ-диапазоне (350 нм); и публикацию Senter et al. (1985) Photochem. Photobiol 42:231 237, в которой описаны нитробензилоксикарбонилхлоридные перекрестно-сшивающие реагенты, образующие фоторасщепляемые связи), а поэтому эти линкеры обладают способностью высвобождать нацеленный на мишень агент под действием света. Такие линкеры, в частности, могут быть использованы для лечения кожных или глазных болезней путем облучения светом с применением волоконной оптики. После введения конъюгата глаза или кожа или другие части тела могут быть подвергнуты действию света, что будет приводить к высвобождению нацеленной на мишень молекулы из указанного конъюгата. Такие фоторасщепляемые линкеры могут быть использованы в комбинации с протоколами диагностики, где желательно удаление нацеливающего агента для его быстрого выведения из организма животного.
IV. Настоящее изобретение относится к множеству активных агентов
В различных аспектах настоящего изобретения предусматривается, что полипептид, содержащий домен пептидного лиганда, связан с активным агентом, то есть терапевтическим или диагностическим средством.
Используемый здесь термин «терапевтический агент» означает биологическую макромолекулу или экстракт, полученный из биологических материалов, таких как клетки или ткани бактерий, растений, грибов или животных (в частности, млекопитающих), которые, как предполагается, обладают терапевтическими свойствами, например химиотерапевтическое средство или радиотерапевтическое средство. Используемый здесь термин «терапевтический» относится к ослаблению симптомов заболевания, а также к лечению или предупреждению (то есть предупреждению развития или снижения риска развития рассматриваемого заболевания, например, рака или другого пролиферативного заболевания), заболевания или родственного состояния, которым страдает данное млекопитающее. «Лечебная терапия» направлена на ослабление, в целом или частично, симптомов уже существующего заболевания или состояния у млекопитающего.
Указанное средство может быть очищенным, по существу, очищенным или частично очищенным. Кроме того, такое терапевтическое средство может быть включено в липосому или иммунолипосому, либо оно может быть ассоциировано с ними, и конъюгирование может быть осуществлено непосредственно с указанным средством или с липосомой/иммунолипосомой. Термин «липосома» означает небольшую везикулу, состоящую из различных липидов, фосфолипидов и/или поверхностно-активных веществ, которые могут быть использованы для доставки лекарственного средства (например, лекарственных средств, антител, токсинов). Компоненты липосомы обычно локализуются в виде бислоя, аналогично липидной структуре биологических мембран.
Репрезентативными терапевтическими средствами, которые могут быть связаны с полипептидом, содержащим домен пептидного лиганда, способом, рассматриваемым в настоящем изобретении, являются, но не ограничиваются ими, химиотерапевтические средства (например, доцетаксел, паклитаксел, таксаны и соединения платины), антифолаты, антиметаболиты, антимитотические средства, ДНК-разлагающие агенты, проапоптотические средства, агенты, индуцирующие дифференцировку, антиангиогенные агенты, антибиотики, гормоны, пептиды, антитела, ингибиторы тирозинкиназы, биологически активные агенты, биологические молекулы, радионуклиды, адриамицин, анзамициновые антибиотики, аспарагиназа, блеомицин, бусульфан, цисплатин, карбоплатин, кармустин, капецитабин, хлорамбуцил, цитарабин, циклофосфамид, камптотецин, дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин, дексразоксан, доцетаксел, доксорубицин, этопозид, эпотилоны, флоксуридин, флударабин, фторурацил, гемцитабин, гидроксимочевина, идарубицин, ифосфамид, иринотекан, ломустин, мехлоретамин, меркаптопурин, мелфалан, метотрексат, рапамицин (сиролимус), митомицин, митотан, митоксантрон, нитрозомочевина, паклитаксел, памидронат, пентостатин, пликамицин, прокарбазин, ритуксимаб, стрептозоцин, тенипозид, тиогуанин, тиотепа, таксаны, винбластин, винкристин, винорелбин, таксол, комбретастатины, дискодермолиды, трансплатинум, ингибиторы тирозинкиназы (генистеин) и другие химиотерапевтические средства.
Используемый здесь термин «химиотерапевтическое средство» означает средство, обладающее активностью, направленной против ракового заболевания, новообразований и/или пролиферативных заболеваний. Предпочтительными химиотерапевтическими средствами являются доцетаксел и паклитаксел, используемые в виде частиц, содержащих альбумин, где более чем 50% химиотерапевтического средства присутствует в форме наночастиц. Наиболее предпочтительное химиотерапевтическое средство включает частицы связанного с альбумином паклитаксела, например Abraxane®.
Подходящими терапевтическими средствами также являются, например, биологически активные агенты (TNF, от tTF); радионуклиды (131I, 90Y, 111In, 211At, 32P и другие известные терапевтические радионуклиды); антиангиогенные агенты (ингибиторы ангиогенеза, например, INF-альфа, фумагилин, ангиостатин, эндостатин, талидомид и т.п.); другие биологически активные полипептиды; средства, повышающие чувствительность к терапии; антитела; лектины и токсины.
Заболеваниями, на лечение которых направлено применение настоящего изобретения, являются злокачественные и предзлокачественные состояния, а также пролиферативные заболевания, включая, но не ограничиваясь ими, такие пролиферативные заболевания, как, например, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, эндометриоз, гиперплазия эндометрия, атеросклероз, псориаз, иммунологическое пролиферативное заболевание или пролиферативная гломерулопатия почек.
Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество, которое обеспечивает восстановление, частично или полностью, физиологических или биохимических параметров, ассоциированных с заболеванием или состоянием, или индуцированных таким заболеванием или состоянием. Врач-клиницист может самостоятельно определить количество фармацевтической композиции, которое является терапевтически эффективным для лечения конкретного заболевания или состояния. Так, например, в соответствии с предпочтительным вариантом изобретения указанным терапевтическим средством является паклитаксел, который может быть введен в дозе в пределах примерно от 30 мг/м2 до 1000 мг/м2 примерно с интервалами в 3 недели (то есть эту дозу паклитаксела вводят один раз приблизительно через каждые три недели), желательно примерно от 50 мг/м2 до 800 мг/м2, предпочтительно, примерно от 80 мг/м2 до 700 мг/м2, а наиболее предпочтительно, примерно от 250 мг/м2 до 300 мг/м2 примерно с интервалами в 3 недели, предпочтительно, примерно в 2 недели, а более предпочтительно, еженедельно.
В одном из своих аспектов настоящее изобретение также относится к способу диагностики. Так, например, диагностическим агентом может быть меченое вещество или метка, включая, но не ограничиваясь ими, радиоактивные вещества, контрастные вещества для МРТ, контрастные вещества для рентгенографии, контрастные вещества для ультразвуковой диагностики и контрастные вещества для ПЭТ. В этом аспекте настоящего изобретения также рассматривается взаимодействие этих веществ с описанными терапевтическими средствами. Кроме того, термин «диагностически эффективное количество» означает количество фармацевтической композиции, которое в соответствующих клинических условиях позволяет достаточно точно установить наличие и/или степень аномальной пролиферативной активности, гиперплазиии, ремоделирования и воспалительной активности в тканях и органах. Так, например, состоянием, «диагностированным» в соответствии с настоящим изобретением, может быть доброкачественная или злокачественная опухоль.
Описанными здесь диагностическими средствами являются полипептиды, такие как антитела, которые могут быть помечены путем ковалентного или нековалентного связывания с веществом, передающим детектируемый сигнал. Специалистам известен широкий ряд меток и методов конъюгирования, подробно описанных в научной и патентной литературе. Подходящми метками являются радионуклиды, ферменты, субстраты, кофакторы, ингибиторы, флуоресцентные молекулы, хемилюминесцентные молекулы, магнитные частицы и т.п. Патентами, в которых описано использование таких меток, являются патенты США № 3817837; 3850752; 3939350; 3996345; 4277437; 4275149 и 4366241. Могут быть также продуцированы рекомбинантные иммуноглобулины, см., Cabilly, патент США № 4816567; Moore, et al., патент США № 4642334; и Queen, et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033.
Может быть проведен мониторинг доставки терапевтических или диагностических средств в участок опухоли или в другой участок поражения с использованием композиций согласно изобретению и с применением способов согласно изобретению, и такая доставка может быть оценена любым подходящим методом, включая, например, введение в данную композицию радиоактивной метки или рентгеноконтрастной метки и ее визуализацию, если это необходимо, и методы такой доставки хорошо известны среднему специалисту в данной области. Мониторинг секвестрации композиций в жидкостном пространстве плазмы может быть проведен любым подходящим методом, включая, например, венепункцию.
В других и в родственных своих аспектах настоящее изобретение относится к способу предсказания или оценки ответа опухоли на химиотерапевтическое средство, а также к способу предсказания или оценки ответа пролиферативного заболевания на действие химиотерапевтического средства или к способу лечения пролиферативного заболевания, включая, но не ограничиваясь ими, такие пролиферативные заболевания, как, например, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, эндометриоз, гиперплазия эндометрия, атеросклероз, псориаз, иммунологическое пролиферативное заболевание или пролиферативная гломерулопатия почек.
V. Настоящее изобретение относится к гибридным белкам, в которых домены пептидного лиганда связаны с полипептидными активными агентами
В настоящем изобретении также рассматривается присоединение доменов пептидного лиганда к полипептидным активным агентам с образованием гибридных белков. В качестве неограничивающего примера можно отметить, что последовательности доменов пептидного лиганда могут быть присоединены в положениях выше или ниже от диагностически ценных доменов белков (таких как гаптен, GFP); веществ, повышающих чувствительность к терапии; активных доменов белков (например, таких как, но не ограничивающихся ими, tTF, TNF, пептид р44, происходящий от Smarl, интерферон, TRAIL, Smac, VHL, прокаспаза, каспаза и IL-2); или токсина (например, такого как, но не ограничивающегося ими, рицин, PAP, дифтерийный токсин, экзотоксин Pseudomonas).
Термины «гибридный белок» и «гибридный полипептид» означают полипептид, имеющий по меньшей мере две части, ковалентно связанные друг с другом, где каждая из этих частей представляет собой полипептид, обладающий отличающимся свойством. Таким свойством может быть биологическое свойство, например активность in vitro или in vivo. Указанным свойством может быть также простое химическое или физическое свойство, такое как способность связываться с молекулой-мишенью, катализ реакции и т.п. Части могут быть связаны непосредственно простой пептидной связью или посредством пептидного линкера, содержащего один или несколько аминокислотных остатков. Вообще говоря, указанные части и линкер могут быть связаны друг с другом с сохранением рамки считывания.
VI. Антитело или активные агенты фрагмента антитела
В конкретном аспекте изобретения, терапевтическим средством может быть антитело или фрагмент антитела, которые опосредуют одну или несколько функций, таких как активация комплемента, клеточно-опосредуемая цитотоксичность, апоптоз, гибель некрозирующих клеток и опсонизация.
Используемый здесь термин «антитело» включает, но не ограничивается ими, моноклональные антитела, поликлональные антитела, димеры, мультимеры, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела). Антителами могут быть мышиные, человеческие, гуманизованные, химерные антитела или антитела, происходящие от организмов других видов. Антителом является белок, продуцируемый иммунной системой, обладающей способностью распознавать специфический антиген и связываться с ним. Антиген-мишень, в основном, имеет множество сайтов связывания, также называемых эпитопами, которые распознаются CDR, присутствующими на многих антителах. Каждое антитело, специфически связывающееся с другим эпитопом, имеет отличающуюся структуру. Так, например, один антиген может связываться с более чем одним соответствующим антителом. Антитело представляет собой полноразмерную молекулу иммуноглобулина или иммунологически активную часть полноразмерной молекулы иммуноглобулина, то есть молекулы, содержащей антигенсвязывающий сайт, который иммуноспецифически связывается с антигеном представляющей интерес мишени или его части, где такими мишенями являются, но не ограничиваются ими, раковые клетки или клетки, продуцирующие аутоиммунные антитела, ассоциированные с аутоиммунным заболеванием. Описанные здесь молекулы иммуноглобулина могут принадлежать к любому классу (например, IgG, IgE, IgM, IgD и IgA) или подклассу (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2). Иммуноглобулины могут происходить от организмов любых видов.
«Фрагменты антитела» представляют собой часть полноразмерного антитела, которая сохраняет нужную биологическую активность. В большинстве случаев «фрагментами антитела» являются антигенсвязывающие части или их вариабельные области. Примерами фрагментов антител являются Fab-, Fab'-, F(ab')2- и Fv-фрагменты; диантитела; линейные антитела; фрагменты, продуцируемые экспрессионной библиотекой Fab, антиидиотипические (анти-Id) антитела, CDR (комплементарность-определяющая область) и эпитоп-связывающие фрагменты любого из вышеупомянутых антител, которые иммуноспецифически связываются с антигенами раковых клеток, с вирусными антигенами или с микробными антигенами; молекулы одноцепочечного антитела и мультиспецифические антитела, образованные фрагментами антител. Однако определяемыми здесь «фрагментами антител» могут быть и другие, не связывающиеся с антигеном части антител, например такие, как, но не ограничивающиеся ими, «фрагменты антитела», которые могут представлять собой полноразмерные или неполные Fc-домены.
Описанными здесь моноклональными антителами, в частности, являются «химерные антитела», в которых часть тяжелой цепи и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, происходящих от конкретных видов или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антител, а остальная часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, происходящих от других видов или принадлежащих к антителам другого класса или подкласса, а также фрагменты таких антител, при условии, что они обладают нужной биологической активностью (патент США № 4816567). Представляющими интерес химерными антителами согласно изобретению являются «приматизированные» антитела, содержащие антигенсвязывающие последовательности вариабельного домена, происходящие от примата, не являющегося человеком (например, мартышки или человекообразной обезьяны), и последовательности константной области человеческого антитела.
Термины «антитело-зависимая клеточно-опосредуемая цитотоксичность» и «ADCC» означают клеточно-опосредуемую реакцию, в которой неспецифические цитотоксические клетки, экспрессирующие Fc-рецепторы (FcR) (например, природные клетки-киллеры (NK), нейтрофилы и макрофаги), распознают связанное антитело на клетках-мишенях, что впоследствии приводит к лизису клеток-мишеней. Первичные клетки, опосредующие ADCC, NK-клетки, экспрессируют только FcγRIII, а моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Для оценки ADCC-активности представляющей интерес молекулы может быть проведен анализ на ADCC in vitro (патент США № 55003621; патент США № 5821337). Эффекторными клетками, используемыми в таких анализах, являются мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) и природные клетки-киллеры (NK). Альтернативно или дополнительно, ADCC-активность представляющей интерес молекулы может быть оценена in vivo, например, у животного-модели, описанной в публикации Clynes et al. PNAS (USA), 95:652-656 (1998).
Антитело, «индуцирующее клеточную гибель», представляет собой антитело, которое жизнеспособную клетку делает нежизнеспособной. Для того чтобы дифференцировать гибель глеток, индуцированную антитело-зависимой клеточно-опосредуемой цитотоксичностью (ADCC) или комплемент-зависимой цитотоксичностью (CDC), такая гибель клеток может быть определена in vitro в отсутствии комплемента и иммунных эффекторных клеток. Таким образом, анализ на клеточную гибель может быть осуществлен с использованием термоинактивированной сыворотки (то есть в отсутствии комплемента) и в отсутствии иммунных эффекторных клеток. Для того чтобы определить, может ли данное антитело индуцировать гибель клеток, может быть оценено нарушение целостности мембраны по поглощению иодида пропидия (PI), трипанового синего или 7AAD по сравнению с необработанными клетками. Антителами, индуцирующими гибель клеток, являются антитела, индуцирующие поглощение PI в анализе на поглощение PI в клетках BT474.
Антителом, «индуцирующим апоптоз», является антитело, которое индуцирует запрограммированную гибель клеток, определяемую по связыванию с аннексином V, фрагментации ДНК, сморщиванию клеток, увеличению объема эндоплазматического ретикулума, фрагментации клеток и/или образованию мембранных везикул (называемых апоптотическими тельцами).
VII. Способ модуляции распределения активных агентов
В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к свойствам описанных здесь конъюгатов, которые содержат домен пептидного лиганда и которые могут быть использованы для разработки способов модуляции распределения активного агента в ткани животного, где указанные способы включают введение животному композиции, содержащей молекулу-конъюгат, включающую домен пептидного лиганда, конъюгированный с активным агентом, где указанный домен пептидного лиганда содержит пептид SEQ ID NO:1-117 или его гомолог, и где введение указанной композиции животному приводит к распределению активного агента в ткани, которое отличается от распределения в ткани, достигаемого после введения только одного активного агента.
Композиции и способы согласно изобретению могут оказаться желательными для модуляции распределения активного агента в ткани пораженного участка. Такая модуляция, предпочтительно, заключается в изменении концентрации активного агента в пораженном участке и/или в повышении уровня активного агента в крови (или увеличении времени полужизни), то есть в увеличении уровня активного агента по сравнению с уровнем, наблюдаемым при введении животному лишь одного активного агента (в неконъюгированной форме). Такая модуляция может также заключаться в увеличении скорости поглощения конъюгированной пептидной молекулы в ткани, в увеличении времени удерживания молекулы в сайте-мишени, то есть в опухоли; в повышении скорости диффузии конъюгированной пептидной молекулы в ткани, и/или в повышении уровня распределения конъюгированной пептидной молекулы в ткани, и в обеспечении соответствия скорости поглощения конъюгированной пептидной молекулы в ткани и скорости интернализации одного или нескольких тканевых рецепторов. Такие свойства могут быть определены любым подходящим методом, известным специалистам, включая, но не ограничиваясь ими, детектирование, локализацию и относительную количественную оценку соответствующим образом помеченного активного агента, например радиографическими, микроскопическими, химическими, иммунологическими методами или МРТ-методами.
Термин «увеличение скорости» означает увеличение скорости по меньшей мере примерно на 33%, предпочтительно, по меньшей мере примерно на 25%, более предпочтительно, по меньшей мере примерно на 15%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере примерно на 10%. Термин «более высокая концентрация в пораженном участке» означает, что концентрация активного агента в конъюгате в пораженном участке по меньшей мере примерно на 33%, предпочтительно, по меньшей мере примерно на 25%, более предпочтительно, по меньшей мере примерно на 15%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере примерно на 10% превышает концентрацию неконъюгированного активного агента в том же пораженном участке.
Подходящими пораженными участками являются, но не ограничиваются ими, участки, в которых наблюдаются аномальная пролиферация, ремоделирование ткани, гиперплазия, аномальное заживление ран в любой ткани организма, включая мягкие ткани, соединительные ткани, кость, твердые органы, кровеносные сосуды и т.п. Более конкретными примерами таких заболеваний являются рак, диабетическая или другая ретинопатия, воспаление, фиброз, артрит, рестеноз кровеносных сосудов или искусственных трансплантатов кровеносных сосудов или внутрисосудистых приспособлений и т.п., катаракта и дегенерация желтого пятна, остеопороз и другие заболевания костей, атеросклероз и другие заболевания, при которых часто наблюдается кальциноз.
В своем предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к способам диагностики и/или лечения опухолей, где указанная опухоль выбрана из группы, состоящей из опухолей ротовой полости, опухолей носоглотки, опухолей пищеварительной системы, опухолей дыхательных путей, опухолей кости, опухолей хряща, метастазов кости, саркомы, кожных опухолей, меланомы, опухолей молочной железы, опухолей половых органов, опухолей мочевыделительной системы, опухолей глаз, опухолей головного мозга и центральной нервной системы, глиомы, опухолей эндокринной системы, опухолей щитовидной железы, опухолей пищевода, опухолей желудка, опухолей тонкого кишечника, опухолей толстой кишки, опухолей прямой кишки, опухолей заднего прохода, опухолей печени, опухолей желчного пузыря, опухолей поджелудочной железы, опухолей ротоглотки, опухолей легких, опухолей бронхов, не-мелкоклеточной карциномы легких, мелкоклеточной карциномы легких, опухолей шейки матки, опухолей тела матки, опухолей яичника, опухолей вульвы, опухолей влагалища, опухолей предстательной железы, карциномы предстательной железы, опухолей яичек, опухолей пениса, опухолей мочевого пузыря, опухолей почек, опухолей почечной лоханки, опухолей мочеточника, опухолей головы и шеи, рака паращитовидной железы, болезни Ходжкина, не-ходжкинской лимфомы, множественной миеломы, лейкоза, острого лимфоцитарного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, острого миелоидного лейкоза и хронического миелоидного лейкоза. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу предсказания или определения ответа опухоли на действие химиотерапевтического средства, к способам лечения опухолевого заболевания и к наборам для предсказания ответа опухоли млекопитающего на действие химиотерапевтического средства, где указанной опухолью является саркома, аденокарцинома, плоскоклеточная карцинома, крупноклеточная карцинома, мелкоклеточная карцинома, базально-клеточная карцинома, почечно-клеточная карцинома, онкоцитома или их комбинации.
В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к композициям и к способам применения указанных композиций, где введение указанных композиций животному приводит к увеличению уровней активного агента в крови по сравнению с уровнем, наблюдаемым после введения лишь одного активного агента. Уровень активного агента в крови может быть измерен в любых единицах, включая, но не ограничиваясь ими, Cmax, Cmin и AUC. Термин «увеличение уровня в крови по сравнению с уровнем, наблюдаемым после введения лишь одного активного агента» означает увеличение уровня такого агента в крови по меньшей мере примерно на 33%, предпочтительно, по меньшей мере примерно на 25%, более предпочтительно, по меньшей мере примерно на 15%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере примерно на 10%.
В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к композициям и к способам применения этих композиций, где введение указанных композиций животному приводит к увеличению времени полужизни активного агента в крови по сравнению с временем полужизни, наблюдаемым после введения лишь одного активного агента. Термин «увеличение времени полужизни активного агента в крови по сравнению с временем полужизни, наблюдаемым после введения лишь одного активного агента» означает увеличение времени полужизни в крови по меньшей мере примерно на 33%, предпочтительно, по меньшей мере примерно на 25%, более предпочтительно, по меньшей мере примерно на 15%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере примерно на 10%.
VIII. Препараты и введение
Для применения in vivo активный агент, связанный с доменом пептидного лиганда, таким как SEQ ID NO:1-117 и его гомологи, предпочтительно, приготавливают в виде фармацевтической композиции, содержащей физиологически приемлемый носитель. В соответствии с настоящим изобретением может быть использован любой подходящий физиологически приемлемый носитель, в зависимости от способа введения. Специалисту в данной области известны носители, которые могут быть использованы в целях приготовления фармацевтической композиции, подходящей для ее использования в нужном способе введения.
Введение фармацевтических композиций согласно изобретению может быть осуществлено любым подходящим способом, включая, но не ограничиваясь ими, внутривенное введение, подкожное введение, внутримышечное введение, введение в брюшную полость, введение вовнутрь опухоли, пероральное введение, ректальное введение, вагинальное введение, интравезикулярное введение и введение путем ингаляции; причем, наиболее предпочтительными являются внутривенное введение и введение вовнутрь опухоли. Композиция может также включать любые другие подходящие компоненты, а в частности, компоненты, необходимые для повышения стабильности данной композиции и/или необходимые для конечного применения. В соответствии с этим настоящее изобретение включает широкое разнообразие подходящих препаратов, содержащих композицию согласно изобретению. Нижеследующие препараты и способы приводятся лишь в иллюстративных целях и не ограничивают объема изобретения.
Фармацевтические композиции могут также включать, если это необходимо, дополнительные терапевтически или биологически активные вещества. Так, например, в композиции могут присутствовать терапевтические средства, используемые для лечения конкретных заболеваний. Для снижения опухания и воспаления, ассоциированного с введением фармацевтической композиции in vivo и с физиологическим дистрессом, в композицию могут быть включены средства, снижающие воспаление, такие как ибупрофен или стероиды.
Носитель обычно является жидким, но может быть и твердым, либо он может представлять собой комбинацию жидких и твердых компонентов. Предпочтительным носителем является физиологически приемлемый (например, фармацевтически или фармакологически приемлемый) носитель (например, наполнитель или разбавитель). Физиологически приемлемые носители хорошо известны специалистам и являются легко доступными. Выбор носителя может быть осуществлен, по меньшей мере частично, в зависимости от локализации тканей-мишеней и/или клеток-мишеней, и от конкретного способа введения композиции.
Обычно такие композиции могут быть получены в виде препаратов для инъекций, либо в виде жидких растворов или суспензий; в виде твердых форм, подходящих для получения растворов или суспензий после добавления жидкости перед инъекцией, и эти препараты могут быть также эмульгированными. Фармацевтическими препаратами, подходящими для инъекций, являются стерильные водные растворы или дисперсии; препараты, содержащие известные стабилизаторы белка и лиопротектанты; препараты, включающие кунжутное масло, арахисовое масло или водный пропиленгликоль, и стерильные порошки для получения препаратов в виде стерильных растворов или дисперсий для инъекций, предназначенных для немедленного приема. Во всех случаях препарат должен быть стерильным и должен быть жидким до той степени, при которой он легко мог бы быть введен шприцем. Такой препарат должен быть стабильным в условиях его приготовления и хранения и должен быть защищен от контаминирующего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Растворы активных соединений в виде свободного основания или их фармакологически приемлемых солей могут быть приготовлены в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксицеллюлоза. Дисперсии могут быть также приготовлены в глицерине, в жидких полиэтиленгликолях и в их смесях, а также в маслах. Такие препараты, при их хранении и применении в обычных условиях, содержат консервант, предотвращающий рост микроорганизмов.
Конъюгат, содержащий домен пептидного лиганда, может быть включен в композицию в нейтральной или солевой форме. Фармацевтически приемлемыми солями являются кислотно-аддитивные соли (образованные свободными аминогруппами белка) и соли, образованные неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или органическими кислотами, такими как уксусная, щавелевая, винная, миндальная кислота и т.п. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, могут также происходить от неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа(III), и органических оснований, таких как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и т.п.
Препаратами, подходящими для парентерального введения, являются водные и безводные изотонические стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, сообщающие данному препарату изотоничность с кровью данного реципиента, и водные и безводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты, солюбилизаторы, загустители, стабилизаторы и консерванты. Указанные препараты могут содержаться в запаянных контейнерах, таких как ампулы и флаконы, в виде унифицированной дозы или доз для многократного приема, и могут храниться в виде осушенной вымораживанием (лиофилизованной) композиции, в которую, непосредственно перед ее использованием, необходимо добавить лишь стерильный жидкий наполнитель, например воду для инъекций. Инъецируемые растворы и суспензии для немедленного приема могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток описанных ранее типов. В предпочтительном варианте изобретения конъюгат, содержащий домен пептидного лиганда, приготавливают в форме для инъекций (например, для парентерального введения). В этой связи желательно, чтобы данный препарат мог быть использован для введения вовнутрь опухоли, однако такой препарат может быть приготовлен в форме, подходящей для внутривенной инъекции, внутрибрюшинной инъекции, подкожной инъекции и т.п.
Настоящее изобретение, если это необходимо, также относится к вариантам, в которых конъюгат, содержащий домен пептидного лиганда (то есть полипептид, содержащий домен пептидного лиганда и конъюгированный с активным агентом), также конъюгирован с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Конъюгирование с ПЭГ может способствовать увеличению времени полужизни этих полипептидов в кровотоке, снижению иммуногенности и антигенности полипептида и улучшению их биологической активности. При этом может быть применен любой метод конъюгирования с ПЭГ, если он используется, включая, но не ограничиваясь им, реакцию взаимодействия метокси-ПЭГ с доступной(ыми) аминогруппой(ами) пептида или с другими реакционноспособными молекулами, такими как, например, гистидины или цистеины. Кроме того, для присоединения аминокислот с ПЭГ-реактивными группами к конъюгату, содержащему домен пептидного лиганда, могут быть применены методы рекомбинантных ДНК. Кроме того, в соответствии с некоторыми аспектами настоящего изобретения могут быть применены стратегии ПЭГилирования с высвобождением и с образованием гибридов, такие как ПЭГилирование полипептида, где молекулы ПЭГ, добавляемые в некоторые сайты молекулы-конъюгата, содержащего домен пептидного лиганда, высвобождаются in vivo. Примеры методов конъюгирования с ПЭГ известны специалистам. См., например, Greenwald et al., Adv. Drug Delivery Rev. 55:217-250 (2003).
Препаратами, подходящими для введения путем ингаляции, являются аэрозольные препараты. Аэрозольные препараты могут быть внесены в подходящие пропелленты под давлением, такие как дихлордифторметан, пропан, азот и т.п. Такие композиции могут быть также получены в не-герметичных сосудах для доставки с помощью аэрозольного ингалятора или распылителя.
Препараты, подходящие для ректального введения, могут быть приготовлены в виде суппозиториев путем смешивания активного ингредиента с различными основами, такими как эмульгирующиеся основы или водорастворимые основы. Препараты, подходящие для вагинального введения, могут быть приготовлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спреев, содержащих, помимо активного ингредиента, соответствующие носители, известные специалистам.
Кроме того, композиция согласно изобретению может содержать дополнительные терапевтически или биологически активные вещества. Так, например, в данной композиции могут присутствовать терапевтические средства, используемые для лечения конкретных заболеваний. Для снижения опухания и воспаления, ассоциированного с введением фармацевтической композиции in vivo и с физиологическим дистрессом, в композицию могут быть включены средства, снижающие воспаление, такие как ибупрофен или стероиды.
В случае ингаляционной терапии фармацевтические композиции согласно изобретению желательно приготавливать в форме аэрозоля. Существуют аэрозольные генераторы и распылители, предназначенные для введения агента в твердой форме. Такие генераторы содержат частицы, которые предназначены для вдыхания или ингаляции, и создают объем аэрозоля, содержащего предварительно отмеренную дозу лекарственного средства, подаваемую со скоростью, подходящей для введения человеку. Примерами таких аэрозольных генераторов и ингаляторов являются известные специалистам ингаляторы и инсуффляторы с дозирующим клапаном. Если фармацевтические композиции согласно изобретению присутствуют в жидкой форме, то они могут быть приготовлены в виде аэрозоля, доставляемого с помощью любого подходящего устройства.
В случае внутривенного введения, внутрибрюшинного введения или введения вовнутрь опухоли фармацевтическая композиция согласно изобретению может быть приготовлена так, чтобы она содержала стерильные, водные и безводные растворы, суспензии или эмульсии активного соединения для инъекций, где указанные препараты, предпочтительно, должны быть изотоничными с кровью данного реципиента. Эти препараты могут содержать одно или несколько веществ, таких как антиоксиданты, буферы, поверхностно-активные вещества, сорастворители, бактериостаты, растворенные вещества, сообщающие данному препарату изотоничность с кровью данного реципиента, и другие компоненты препаратов, известные специалистам. Водные и безводные стерильные суспензии могут включать суспендирующие агенты и загустители. Указанные композиции могут содержаться, например, в запаянных ампулах и флаконах в виде унифицированной дозы или доз для многократного приема.
Способы согласно изобретению могут также составлять часть комбинированной терапии. Термин «комбинированная терапия» означает последовательное или одновременное введение терапевтического средства согласно изобретению вместе с другой терапевтической композицией, так, чтобы у млекопитающего, подвергаемого лечению, наболюдались благоприятные эффекты от введения такой комбинации.
XI. Настоящее изобретение может быть применено для лечения многих состояний
Композиции и способы согласно изобретению могут быть применены для диагностики или лечения различных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, заболевания, при которых пораженными участками являются, но не ограничиваются ими, участки, в которых наблюдаются аномальная пролиферация, ремоделирование ткани, гиперплазия, аномальное заживление ран в любой ткани организма, включая мягкие ткани, соединительные ткани, кость, твердые органы, кровеносные сосуды и т.п. Более конкретными примерами таких заболеваний являются рак, диабетическая или другая ретинопатия, воспаление, фиброз, артрит, рестеноз кровеносных сосудов или искусственных трансплантатов кровеносных сосудов или внутрисосудистых приспособлений и т.п., катаракта и дегенерация желтого пятна, остеопороз и другие заболевания костей, атеросклероз и другие заболевания, при которых часто наблюдается кальциноз.
В своем предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к способам диагностики и/или лечения опухолей, где указанная опухоль выбрана из группы, состоящей из опухолей ротовой полости, опухолей носоглотки, опухолей пищеварительной системы, опухолей дыхательных путей, опухолей кости, опухолей хряща, метастазов кости, саркомы, кожных опухолей, меланомы, опухолей молочной железы, опухолей половых органов, опухолей мочевыделительной системы, опухолей глаз, опухолей головного мозга и центральной нервной системы, глиомы, опухолей эндокринной системы, опухолей щитовидной железы, опухолей пищевода, опухолей желудка, опухолей тонкого кишечника, опухолей толстой кишки, опухолей прямой кишки, опухолей заднего прохода, опухолей печени, опухолей желчного пузыря, опухолей поджелудочной железы, опухолей ротоглотки, опухолей легких, опухолей бронхов, не-мелкоклеточной карциномы легких, мелкоклеточной карциномы легких, опухолей шейки матки, опухолей тела матки, опухолей яичника, опухолей вульвы, опухолей влагалища, опухолей предстательной железы, карциномы предстательной железы, опухолей яичек, опухолей пениса, опухолей мочевого пузыря, опухолей почек, опухолей почечной лоханки, опухолей мочеточника, опухолей головы и шеи, рака паращитовидной железы, болезни Ходжкина, не-ходжкинской лимфомы, множественной миеломы, лейкоза, острого лимфоцитарного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, острого миелоидного лейкоза и хронического миелоидного лейкоза. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу предсказания или определения ответа опухоли на действие химиотерапевтического средства, к способам лечения опухолевого заболевания и к наборам для предсказания ответа опухоли млекопитающего на действие химиотерапевтического средства, где указанной опухолью являются саркома, аденокарцинома, плоскоклеточная карцинома, крупноклеточная карцинома, мелкоклеточная карцинома, базально-клеточная карцинома, почечно-клеточная карцинома, онкоцитома или их комбинации.
Настоящее изобретение относится к вариантам, в которых указанным заболеванием страдает млекопитающее, включая, но не ограничиваясь им, человека.
X. Наборы
Настоящее изобретение относится к наборам для лечения опухолевых заболеваний, включающим фармацевтический препарат и инструкции по его применению для лечения опухолевых заболеваний, где указанный фармацевтический препарат включает молекулу-конъюгат, который содержит домен пептидного лиганда, конъюгированный с активным агентом, а указанный домен пептидного лиганда содержит пептид, имеющий последовательность SEQ ID NO:1-137, 139 или 140, или 141-143, или их гомолог, где указанный домен пептидного лиганда обладает аффинностью по отношению к альбумину человеческой сыворотки, имеющей константу равновесной диссоциации (Kd), составляющую примерно 700 мкM или менее, и где, но необязательно, указанная молекула-конъюгат также содержит второй домен пептидного лиганда, а также инструкции по применению указанных наборов (например, вкладыши в упаковку с указанием по применению лекарственного средства, разрешенного FDA).
XI. Аффинная очистка
Аффинная хроматография (также называемая аффинной очисткой) предусматривает осуществление специфического взаимодействия между молекулами посредством их связывания. Конкретный лиганд является химически иммобилизованным или «связанным» с твердым носителем таким образом, чтобы при пропускании комплексной смеси через колонку эти молекулы, обладающие специфической аффинностью связывания с лигандом, становились связанными. После отмывки других компонентов образца связанная молекула отделяется от носителя, что позволяет ее выделить из исходного образца.
Для каждой специфической аффинной системы необходим ряд характерных для этой системы условий, и для достижения каждой конкретной цели исследования, специалисты сталкиваются с определенными проблемами. В других статьях, относящихся к методам очистки белков, описаны факторы и условия, ассоциированные с применением конкретных систем очистки (см. пронумерованный список ниже). Тем не менее, общие принципы очистки являются одинаковыми для всех систем связывания лиганда с мишенью, и такие концепции рассматриваются в данном описании.
Аффинная очистка обычно включает следующие стадии:
(1) Инкубирование неочищенного образца с аффинным носителем, позволяющее молекуле-мишени, присутствующей в образце, связываться с иммобилизованным лигандом.
(2) Удаление несвязанных компонентов образца из носителя путем отмывки.
(3) Элюирование (диссоциация и выделение) молекулы-мишени с иммобилизованного лиганда путем замены буфера так, чтобы взаимодействие посредством связывания больше не осуществлялось.
Одно пропускание пробы сыворотки или образца клеточного лизата через аффинную колонку может давать более чем 1000-кратную очистку специфического белка, и при этом будет обнаруживаться только одна полоса, как может быть определено с помощью анализа методом гель-электрофореза (например, в ДСН-ПААГ).
Лиганды, которые связываются с белками основных классов (например, с антителами) или с наиболее распространенными метками в виде гибридных белков (например, 6xHis), являются коммерчески доступными и выпускаются в виде предварительно иммобилизованных форм, готовых для аффинной очистки. Альтернативно, более специализированные лиганды, такие как специфические антитела или представляющие интерес антигены, могут быть иммобилизованы с использованием одного из нескольких коммерчески доступных активированных аффинных носителей, например пептидный антиген может быть иммобилизован на носителе и использован для очистки антител, распознающих данный пептид.
В большинстве случаев, лиганды иммобилизуют на твердом носителе или «присоединяют» непосредственно к твердому носителю посредством образования ковалентных химических связей между конкретными функциональными группами на лиганде (например, такими как первичные амины, сульфгидрилы, карбоновые кислоты, альдегиды) и реакционноспособными группами на носителе (см. родственную статью, озаглавленную «Ковалентная иммобилизация»). Однако могут быть также осуществлены и методы непрямого связывания. Так, например, GST-меченный гибридный белок сначала может быть иммобилизован на глутатионовом носителе посредством аффинного взаимодействия глутатиона-GST, а затем он может быть подвергнут химической реакции перекрестного связывания для его иммобилизации. Затем иммобилизованный GST-меченный гибридный белок может быть использован для аффинной очистки партнера(ов) по связыванию гибридного белка.
В большинстве процедур по аффинной очистке, включающих взаимодействия «белок:лиганд», используются связывающие буферы при физиологических рН и ионной силе, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS). Это, в частности, относится к случаям, когда за основу аффинной очистки были взяты взаимодействия «антитело:антиген» или «нативный белок:белок». После осуществления взаимодействия посредством связывания носитель промывают дополнительным буфером для удаления несвязанных компонентов образца. Неспецифические (например, простые ионные) взаимодействия посредством связывания могут быть минимизированы путем добавления низких уровней детергента или путем умеренной коррекции концентрации соли в связывающем и/или в промывочном буфере. И наконец, для прекращения взаимодействия посредством связывания и высвобождения молекулы-мишени добавляют элюирующий буфер, а затем собирают продукт в очищенной форме. Элюирующий буфер может вызывать диссоциацию партнеров по связыванию при экстремальных значениях рН (низких или высоких), при высокой концентрации соли (ионной силе), а использование детергентов или хаотропных агентов, которые денатурируют одну или обе этих молекулы, позволяет удалять вещества, связывающиеся или конкурирующие с противолигандом. В большинстве случаев последующий диализ или обессоливание необходимы для замены элюирующего буфера для очищенного белка на более подходящий буфер в целях последующего хранения или проведения анализа данного белка.
Наиболее широко используемым элюирующим буфером для аффинной очистки белков является 0,1M глицин-HCl, pH 2,5-3,0. Этот буфер эффективно диссоциирует большинство комплексов, образующихся при взаимодействии «белок:белок» и «антитело:антиген», но при этом не оказывает какого-либо перманентного влияния на структуру белка. Однако некоторые антитела и белки разрушаются при низких рН, а поэтому элюированные фракции белка должны быть нейтрализованы непосредственно путем добавления 1/10 объема щелочного буфера, такого как 1M трис-ΗCl, pH 8,5. Другими элюирующими буферами, используемыми для аффинной очистки белков, являются буферы:
Системы наиболее часто используемых элюирующих буферов для аффинной очистки белков | |
Условия | Буфер |
рН | 100 мM глицина-HCl, pH 2,5-3,0 100 мM лимонной кислоты, pH 3,0 50-100 мM триэтиламина или триэтаноламина, pH 11,5 150 мM гидроксид аммония, pH 10,5 |
Ионная сила и/или хаотропный эффекты | 3,5-4,0 M хлорид магния, pH 7,0 в 10 мМ триса 5 М хлорид лития в 10 мМ фосфатном буфере, рН 7,2, 2,5 М иодид натрия, рН 7,5 0,2-3,0 тиоцианат натрия |
Денатурирующие агенты | 2-6 М гуанидин-HCl 2-8 М мочевина 1% дезоксихолат 1% ДСН |
Органические вещества | 10% диоксан 50% этиленгликоль, pH 8-11,5 (также хаотропный) |
Конкурирующие агенты | >0,1 M противолиганда или его аналога |
Аффинная очистка включает стадию разделения молекул в растворе (подвижная фаза) на основе различий во взаимодействиях посредством связывания с лигандом, иммобилизованным на стационарной фазе (твердой фазе). Носителем или матрицей для аффинной очистки является любой материал, с которым ковалентно связывается биоспецифический лиганд. Обычно материал, используемый в качестве аффинной матрицы, является нерастворимым в системе, в которой присутствует молекула-мишень. Обычно, но не всегда, нерастворимая матрица является твердой. В литературе описаны сотни веществ, которые могут быть использованы в качестве аффинных матриц.
Подходящими аффинными носителями являются носители, которые имеют высокое отношение площади поверхности к объему, содержат химические группы, которые могут быть легко модифицированы для ковалентного связывания с лигандами, обладают минимальной способностью к неспецифическому связыванию, имеют хорошую текучесть и механическую и химическую стабильность. Вероятно, что при выборе аффинного носителя или аффинной матрицы для любого разделения, важнее всего ответить на вопрос, существует ли надежный коммерчески доступный источник для получения нужного матричного материала в требуемых количествах.
Иммобилизованные лиганды или активированные химические аффинные носители являются доступными для их использования в нескольких различных форматах. Для осуществления процедур колоночной очистки или лабораторной очистки наиболее часто используются перекрестно связанные сферические агарозные или полиакриламидные смолы. Для разделения клеток и для осуществления некоторых автоматизированных процедур очистки особенно подходящими являются магнитные частицы, на которых были иммобилизованы аффинные лиганды. Для очистки партнеров по связыванию, в качестве носителей для иммобилизующих лигандов могут быть даже использованы и полистироловые микропланшеты, которые наиболее часто применяются при проведении анализов.
Наиболее подходящими носителями для аффинной очистки белков обычно являются пористые гелевые носители. Носителями такого типа обычно являются полимерные смолы на основе сахаров или акриламида, которые получают в растворе (то есть в гидратированной форме) в виде сфер диаметром 50-150 мкм. Такой сферический формат позволяет использовать эти смолы в виде сырых взвесей, которые могут быть легко введены для заполнения и «набивки» колонок сферическими смолами любого размера. Эти сферы являются в высокой степени пористыми и достаточно крупными, что позволяет биомолекулам (белкам и т.п.) свободно растекаться по сферам и просачиваться между сферами, то есть они могут находиться между сферами и на поверхности этих сфер. Лиганды могут быть ковалентно связаны со сферическим полимером (на внешних и внутренних поверхностях) различными методами. В результате образуется рыхлая матрица, в которой молекулы образца могут свободно проходить далеко за пределы площади поверхности иммобилизованого лиганда.
В основном, большинство матриц, широко используемых в методах аффинной очистки белков, представляют собой сферическую агарозу с перекрестными связями, плотность которой обычно составляет 4% и 6%. (Это означает, что 1 мл сфер со смолой имеют более чем 90% воды по объему.)
Некоторые методы очистки антител включают процедуры аффинной очистки. Типичная лабораторная процедура получения антител включает использование относительно небольших объемов сыворотки, асцитной жидкости или супернатанта культуры. В зависимости от цели применения антитела в различных анализах и методах детектирования, такое антитело должно быть частично или полностью очищенным. Существуют три уровня специфичности очистки, которая осуществляется следующими способами.
Осаждение сульфатом аммония. Этот простой способ предусматривает грубую очистку полноразмерного иммуноглобулина от других белков сыворотки.
Аффинная очистка с использованием иммобилизованного белка A, G, A/G или L. Эти белки связываются с IgG большинства видов и подклассов, то есть с наиболее часто встречающимися иммуноглобулинами, вырабатываемыми у млекопитающих в ответ на действие иммуногенов. Готовые к применению смолы и наборы для очистки, содержащие эти белки, выпускаются в виде упаковок различных размеров и в различных форматах.
Аффинная очистка с использованием иммобилизованного антигена. Ковалентная иммобилизация очищенного антигена (то есть пептида или гаптена, используемого в качестве иммуногена для стимуляции продуцирования антитела у животного-хозяина) на аффинном носителе позволяет выделять специфическое антитело из неочищенных образцов. Активированные смолы и укомплектованные наборы для получения иммобилизованных антигенов посредством различных химических соединений являются коммерчески доступными. См. также: Seo et al., Characterization of a Bifidobacterium longum BORI dipeptidase belonging to the U34 family, Appl Environ Microbiol. 2007 Sep; 73(17):5598-606; Clonis YD, Affinity chromatography matures as bioinformatic and combinatorial tools develop, J Chromatogr A. 2006 Jan 6; 1101(l-2):l-24; Jmeian Y & El Rassi Z, Liquid-phase-based separation systems for depletion, prefractionation and enrichment of proteins in biological fluids for in-depth proteomics analysis, Electrophoresis. 2009 Jan; 30(1):249-61.
Настоящее изобретение относится к scFv, которые по меньшей мере на 80%, предпочтительно, по меньшей мере на 85%, более предпочтительно, по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 99% идентичны любой одной из последовательностей SEQ ID NO:113-116 и которые имеют KD для белка SPARC, равную по меньшей мере 4×10-7 M, предпочтительно, 4×10-6 M, а более предпочтительно, 7×10-5 M, либо KD для белка SPARC, равную примерно от 3,3×10-7 до 7,8×10-5. Кроме того, настоящее изобретение относится к scFv, которые по меньшей мере на 80%, предпочтительно, по меньшей мере на 85%, более предпочтительно, по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 99% идентичны любой одной из последовательностей SEQ ID NO:113-116 и которые по меньшей мере на 80%, предпочтительно, по меньшей мере на 85%, более предпочтительно, по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 99% идентичны любой одной из последовательностей CDR SEQ ID NO:113-116 и имеют KD для белка SPARC, равную по меньшей мере 4×10-7 M, предпочтительно, 4×10-6 M, а более предпочтительно, 7×10-5 M, либо KD для белка SPARC, равную примерно от 3,3×10-7 М до 7,8×10-5 М.
Для лучшей иллюстрации настоящего изобретения приводятся нижеследующие примеры, которые не должны рассматриваться как ограничение его объема.
ПРИМЕР 1
В этом примере продемонстрированы идентификация SPARC-связывающих пептидов, проводимая с применением технологии фагового представления, и введение таких SPARC-связывающих пептидов в молекулы, используемые для лечения опухолевых заболеваний.
Более конкретно, главной целью изобретения является получение молекулы, содержащей SPARC-связывающий пептид, конъюгированный с терапевтическим или диагностическим средством. В частности, целью изобретения является получение гибридного белка «SPARC-связывающий пептид - Fc» (фиг.1), где Fc-домен антитела действует как терапевтическое средство посредством стимуляции иммунных функций, таких как, например, антитело-зависимая цитотоксичность (ADC) или клеточно-зависимая цитотоксичность (CDC).
Основным принципом технологии фагового представления является связывание лиганда (пептида, белка) с геном, кодирующим этот лиганд (см. фиг.2). В методе фагового представления это может быть достигнуто путем сцепления гена лиганда с геном, кодирующим оболочечный белок нитчатого фага. Затем рекомбинантный фаговый геном вводят в Escherichia coli, где гибридный белок экспрессируется вместе со всеми другими фаговыми белками. После этого гибридный белок вводят в фаговую оболочку, содержащую фаговый геном (включающий ген лиганда). Секретированная фаговая частица, представляющая лиганд, может быть отобрана на иммобилизованной мишени, а все несвязанные фаги удаляют путем промывки. После проведения стадии элюирования выделенный фаг используют для инфицирования E. coli, что позволяет проводить амплификацию этого фага для нового раунда отбора и, в конечном счете, для проведения анализа на связывание.
В соответствии с этим коммерчески доступную пептидную библиотеку фагового представления (12-мерные пептиды в М13) скринировали на пептиды, связывающиеся с SPARC. Мишень, то есть SPARC, представляет собой кислый гликопротеин с PI=4,6. Пептидную библиотеку Ph.D.-12 скринировали в четырех раундах отбора связывающихся пептидов с применением метода фагового представления, который проводили путем иммобилизации на 96-луночных планшетах с буфером для нанесения покрытий, pH 9,6. В частности, связанные фаги элюировали кислотным элюирующим раствором в 1-м раунде скрининга. Затем жесткость скрининга постепенно увеличивали путем снижения концентрации белка-мишени и увеличения процента твина-20 в промывочном буфере. Одновременно с этим для повышения специфичности скрининга осуществляли конкурентное элюирование избыточным количеством мишени. И наконец, после проведения четырех раундов скрининга, оцДНК отобранных клонов подвергали ДНК-секвенированию. Одновременно с этим связывание позитивных фагов с белком-мишенью подтверждали с помощью ELISA фага.
Результаты такого скрининга пептидной библиотеки фагового представления на наличие SPARC-связывающих пептидов приводятся на фиг. 3 и 4. Связывание с SPARC может быть количественно оценено по числу выделенных фаговых клонов, кодирующих пептиды с той же самой последовательностью (фиг. 3), или по авидности SPARC-связывания, оцененной по связыванию пептид-экспрессирующего фага с лунками микротитрационного планшета, покрытыми SPARC (фиг. 4). Были дополнительно охарактеризованы два пептида, идентифицированные методом фагового представления, PD15 (SEQ ID NO:1) и PD21 (SEQ ID NO:2).
Затем PD15 и PD21 клонировали в экспрессионный вектор pFUSE-hIg1-Fc2 (фиг. 5) с получением плазмид, кодирующих гибридные белки PD15-Fc и PD21-Fc (фиг. 6). Эти гибридные белки экспрессировали и последовательно очищали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (фиг. 7).
Анализ микромассивов белков (см. фиг. 8) PD15 и PD21 указывал лишь на минимальную перекрестную реактивность с белками, не являющимися SPARC, где анализируемый массив включал 5000 белков (Invitrogen, ProtoArray v.3).
ELISA-анализы на связывание в зависимости от концентрации, иллюстрирующие связывание PD15 и PD21 с SPARC, показали, что такое связывание было лишь несколько слабее, чем связывание с анти-SPARC антителом (фиг. 9). Kd для SPARC-связывающего PD15 составляет 4,1±0,6×10-8 M, а Kd для PD21 составляет 1,0±0,7×10-7 M. (Протестированное анти-SPARC антитело имеет Kd для связывания с SPARC, равную 6,2±3,4×10-9 M, то есть это означает, что данное антитело связывается с SPARC лишь с несколько большей авидностью.)
На фиг. 10 и 11 показаны со-локализация SPARC (на что указывало иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание анти-SPARC антителом) и связывание PD15 и PD21 в срезах опухолей человеческого головного мозга (которые имели эпитоп, помеченный для ИГХ-окрашивания). Как указано на фигуре 10, приводимые в литературе данные по связыванию стабилина 1 со SPARC не были подтверждены, поскольку stab-Fc не связывался с опухолевой тканью, а PD15 и PD21 связывались с этой тканью (фиг. 11).
Анализ гомологии последовательностей SPARC-связывающих пептидов, выделенных методом фагового представления, продемонстрировал, что ряд выделенных последовательностей SPARC-связывающих пептидов были идентичны последовательностям области эластина, представленной на фиг. 12.
Таким образом, в этом примере продемонстрировано, что SPARC-связывающие пептиды могут быть идентифицированы методом фагового представления, а также описаны другие методы характеризации идентифицированных пептидов. Из двух рабочих клонов PD15 и PD21, PD15 обладал более высокой аффинностью по отношению к SPARC, чем PD21, на что указывали ELISA- и ИГХ-эксперименты.
ПРИМЕР 2
Гибридные белки PD15 и PD21 - Fc анализировали на противоопухолевую активность на мышах с моделью человеческого ксенотрансплантата карциномы предстательной железы PC3. Оба этих гибридных белка PD15 и PD21 - Fc продемонстрировали статистически значимое ингибирование роста опухоли (фиг. 13). PD15 обнаруживал более высокую противоопухолевую активность, чем PD21 в отношении ксенотрансплантата PC3. У мышей с моделью человеческого ксенотранспланта HT29 толстой кишки PD21 обладал более высокой противоопухолевой активностью, чем PD15, причем такая активность была почти эквивалентна активности абраксана (фиг. 14).
ПРИМЕР 3
В этом примере продемонстрирована потенциальная иммуногенность SPARC-связывающих пептидов.
Программа ProPred представляет собой графический web-инструмент для предсказания связывающих областей MHC класса II в последовательностях антигенного белка (см. Singh et al.: ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. Bioinformatics 2001, 17(12):1236-7). Алгоритм предсказания на основе серверной матрицы, в котором используется таблица коэффициентов аминокислот/положений, был взят из литературы. Предсказанные связующие вещества могут быть визуализированы как пики в графическом интерфейсе или как окрашенные остатки в интерфейсе HTML. Этот сервер может быть полезным инструментом в определении локализации беспорядочно расположенных связывающих областей, которые могут связываться с несколькими аллелями HLA-DR.
Результаты ProPred-анализа SPARC-связывающих пептидов, идентифицированных методом фагового представления, включая PD21 и PD15, показали, что лишь несколько молекул HLA-DR представляют эти пептиды, и эти результаты позволяют предположить, что такие пептиды имеют невысокую иммуногенность.
Любой из описанных здесь пептидов, включая, например, SEQ ID:1-112 или 117, обладающий высокой аффинностью, может быть аналогичным образом проанализирован на низкую иммуногенность или на отсутствие иммуногенности.
ПРИМЕР 4
Фрагменты антител могут быть также представлены на фагах в различных форматах. Одноцепочечный фрагмент вариабельной области (scFv) представляет собой гибрид вариабельных областей тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, связанных друг с другом посредством короткого (обычно серинового, глицинового) линкера. Такая химерная молекула сохраняет специфичность исходного иммуноглобулина несмотря на отсутствие константных областей и введение линкерного пептида. Наиболее распространенные форматы метода фагового представления антитела включают использование библиотек scFv. Таким образом, большие наборы вариантов антител могут быть скринированы на присутствие антиген-связывающего клона.
Общая стратегия заключается в предварительном скрининге библиотек фагового представления человеческих антител с помощью ELISA с использованием SPARC в качестве антигена.
Сначала, HuScL-3® скринировали в четыре раунда (три раунда - с элюированием кислотой, и один раунд - с конкурентным элюированием), и 17 позитивных клонов отбирали с помощью ELISA фага. ДНК-секвенирование этих клонов выявило две уникальных последовательности антитела, из которых 1-я последовательность имела общие 15 позитивных клонов, а 2-я последовательность имела общие остальные два позитивных клона. После этого специфичность связывания двух уникальных антител подтверждали с помощью ELISA растворимого scFv.
Затем, HuScL-2® скринировали в три раунда (два раунда - с элюированием трипсиновым гидролизатом, и один раунд - с конкурентным элюированием). По окончании эксперимента было отобрано 30 позитивных клонов с помощью ELISA фага. В соответствии с результатами секвенирования было установлено, что 29 клонов имели одну общую последовательность антитела, а один клон кодировал другое уникальное антитело. После этого специфичность связывания этих двух антител также подтверждали с помощью ELISA растворимого scFv.
Были идентифицированы четыре уникальных ScFv против SPARC, а именно ScFv 3-1, ScFv 3-2, ScFv 2-1 и ScFv 2-2 (SEQ ID NO:113-116). На фиг. 17 показаны последовательности ScFv 3-1, ScFv 3-2, ScFv 2-1 и ScFv 2-2 (SEQ ID NO:113-116), где антигенсвязывающие CDR подчеркнуты.
ПРИМЕР 5
В этом примере описана очистка репрезентативных SPARC-связывающих ScFv.
На фиг. 18 проиллюстрирована очистка на колонке с никелем и характеризация ScFv2.1 путем секвенирования концевых аминокислот и электрофореза в ДСН-ПААГ scfv2.1, выделенных из бактерий (A, экспрессированная последовательность; B, аффинная хроматография; C, ДСН-ПААГ; D, данные N-концевой аминокислотой последовательности).
На фиг. 19 проиллюстрирована очистка и характеризация ScFv2.1 путем секвенирования концевых аминокислот и электрофореза в ДСН-ПААГ scfv3.1, выделенных из бактерий (A, экспрессированная последовательность; B, аффинная хроматография; C, ДСН-ПААГ; D, данные N-концевой аминокислотой последовательности).
На фиг. 20 проиллюстрировано определение KD очищенных ScFv2.1, scFv3.1 и scFv3.2 для связывания с SPARC. A, сенсорограммы типичного эксперимента Biacore, проводимого с использованием SPARC-иммобилизованного чипа, и ScFv2.1 в качестве проходящего через колонку фрагмента; B, KD для ScFv2-1, ScFV3-1 и ScFV3-2 против SPARC (HTI SPARC представляет собой тромбоцитарный SPARC, полученный от HTI; Abx SPARC представляет собой SPARC, выделенный из сконструированных клеток HEK293 и поставляемый в виде очищенного препарата от Abraxis).
Все документы, включая публикации, патентные заявки и патенты, цитируемые в настоящей заявке, во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки, так, как если бы каждый из перечисленных документов был отдельно и конкретно введен в настоящее описание посредством ссылки.
При употреблении артиклей «а», «an» и «the» и аналогичных грамматических элементов в контексте описания настоящего изобретения (а в частности, в контексте нижеследующей формулы изобретения) подразумевается, что существительные, с которыми употребляются эти артикли и элементы, могут присутствовать как в единственном числе, так и во множественном числе, если это явно не противоречит контексту изобретения. Термины «составляющий», «имеющий», «включающий» и «содержащий» имеют неограничивающий смысл (то есть означают «включающий, но не ограничивающийся ими»), если это не оговорено особо. Указание интервалов рассматриваемых здесь величин приводится лишь для краткости изложения, которое относится к каждой отдельной величине, входящей в данный интервал, если это не оговорено особо, и такая каждая отдельная величина входит в объем описания изобретения, как если бы она была указана отдельно. Все описанные здесь методы могут быть осуществлены в любом порядке, если это не оговорено особо, и если это явно не противоречит контексту изобретения. Любой используемый здесь пример, или все примеры, или любое типичное словосочетание (например, «такой как») приводятся лишь для лучшего понимания изобретения и не должны рассматриваться как ограничение объема изобретения, если это не выходит за рамки формулы изобретения. Ни одно словосочетание, употребляемое в описании настоящего изобретения, не должно быть сформулировано так, чтобы оно указывало на какой-либо незаявленный элемент как на элемент, играющий главную роль в практическом осуществлении настоящего изобретения.
В настоящей заявке описаны предпочтительные варианты настоящего изобретения, которые, по мнению авторов, включают наилучший способ осуществления изобретения. В указанные предпочтительные варианты могут быть внесены модификации, которые будут очевидными для среднего специалиста в данной области после прочтения им описания изобретения, представленного выше. Авторы настоящего изобретения надеются, что специалист в данной области может использовать такие варианты, если он сочтет это необходимым; при этом авторы, в принципе, не исключают, что способ осуществления настоящего изобретения может отличаться от конкретно описанного здесь способа. В соответствии с этим настоящее изобретение включает все модификации и эквиваленты рассматриваемого объекта, заявленного в прилагаемой формуле изобретения, если это позволяют применяемые правовые нормы. Кроме того, в объем настоящего изобретения входит любая комбинация вышеописанных элементов во всех возможных их вариантах, если это не оговорено особо, и если это явно не противоречит контексту изобретения.
Claims (9)
1. Композиция для лечения состояния, связанного с повышенной экспрессией SPARC, включающая антитело в формате ScFv в эффективном количестве, связанное с терапевтическим средством, где ScFv имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:115 или SEQ ID NO:116, и связывается с белком SPARC с KD, составляющей по меньшей мере 7,8·10-5 М.
2. Композиция по п.1, где указанным терапевтическим средством является фрагмент антитела, содержащий функциональный Fc-домен антитела.
3. Композиция по п.2, где указанный функциональный Fc-домен антитела содержит последовательность SEQ ID NO:118.
4. Композиция по любому из пп.1-3, дополнительно включающая фармацевтический носитель.
5. Способ лечения млекопитающего, страдающего пролиферативным заболеванием с повышенной экспрессией SPARC, включающий введение терапевтически эффективного количества композиции по любому из пп.1-4.
6. Способ по п.5, где указанное заболевание представляет собой рак.
7. Способ по любому из пп.5 или 6, где указанное млекопитающее представляет собой человека.
8. Композиция для диагностики состояния, связанного с повышенной экспрессией SPARC, включающая антитело в формате ScFv в эффективном количестве, связанное с диагностическим средством, где ScFv имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:115 или SEQ ID NO:116, и связывается с белком SPARC с KD, составляющей по меньшей мере 7,8·10-5 М.
9. Анти-SPARC ScFv, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:113-116.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US12022808P | 2008-12-05 | 2008-12-05 | |
US61/120,228 | 2008-12-05 | ||
PCT/US2009/067032 WO2010065969A1 (en) | 2008-12-05 | 2009-12-07 | Sparc binding scfcs |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2011127454A RU2011127454A (ru) | 2013-01-10 |
RU2477728C1 true RU2477728C1 (ru) | 2013-03-20 |
Family
ID=42233653
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011127456/10A RU2491085C2 (ru) | 2008-12-05 | 2009-12-07 | Sparc-связующие пептиды и их применение |
RU2011127454/10A RU2477728C1 (ru) | 2008-12-05 | 2009-12-07 | SPARC, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С ScFv |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011127456/10A RU2491085C2 (ru) | 2008-12-05 | 2009-12-07 | Sparc-связующие пептиды и их применение |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US8445637B2 (ru) |
EP (3) | EP2376534A4 (ru) |
JP (3) | JP5580329B2 (ru) |
KR (3) | KR101413480B1 (ru) |
CN (6) | CN102281890B (ru) |
AU (2) | AU2009322145A1 (ru) |
BR (2) | BRPI0923155A2 (ru) |
CA (4) | CA2896413A1 (ru) |
ES (1) | ES2647351T3 (ru) |
MX (2) | MX2011005966A (ru) |
NZ (6) | NZ623264A (ru) |
RU (2) | RU2491085C2 (ru) |
WO (2) | WO2010065969A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201104122B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2799573C2 (ru) * | 2014-04-25 | 2023-07-06 | 2сэвэнти био, Инк. | Химерные антигенные рецепторы с mnd-промотором |
Families Citing this family (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9474888B2 (en) | 2005-03-04 | 2016-10-25 | C. R. Bard, Inc. | Implantable access port including a sandwiched radiopaque insert |
US7947022B2 (en) | 2005-03-04 | 2011-05-24 | C. R. Bard, Inc. | Access port identification systems and methods |
US8029482B2 (en) | 2005-03-04 | 2011-10-04 | C. R. Bard, Inc. | Systems and methods for radiographically identifying an access port |
EP1858565B1 (en) | 2005-03-04 | 2021-08-11 | C.R. Bard, Inc. | Access port identification systems and methods |
JP5149158B2 (ja) | 2005-04-27 | 2013-02-20 | シー・アール・バード・インコーポレーテッド | 注入装置およびそれに関する方法 |
US10307581B2 (en) | 2005-04-27 | 2019-06-04 | C. R. Bard, Inc. | Reinforced septum for an implantable medical device |
US9642986B2 (en) | 2006-11-08 | 2017-05-09 | C. R. Bard, Inc. | Resource information key for an insertable medical device |
US9579496B2 (en) | 2007-11-07 | 2017-02-28 | C. R. Bard, Inc. | Radiopaque and septum-based indicators for a multi-lumen implantable port |
US11890443B2 (en) | 2008-11-13 | 2024-02-06 | C. R. Bard, Inc. | Implantable medical devices including septum-based indicators |
US8932271B2 (en) | 2008-11-13 | 2015-01-13 | C. R. Bard, Inc. | Implantable medical devices including septum-based indicators |
CN102281890B (zh) * | 2008-12-05 | 2014-08-20 | 阿布拉西斯生物科学有限责任公司 | Sparc结合肽及其应用 |
WO2011043739A1 (en) * | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Singapore Health Services Pte. Ltd. | Methods and compositions for maintenance of a functional wound |
JP2013510652A (ja) | 2009-11-17 | 2013-03-28 | シー・アール・バード・インコーポレーテッド | 係止用特徴部および識別特徴部を含むオーバーモールド成形されたアクセスポート |
WO2013088250A1 (en) | 2011-12-13 | 2013-06-20 | Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd | Bacterially derived, intact minicells for delivery of therapeutic agents to brain tumors |
CN102775502A (zh) * | 2012-08-16 | 2012-11-14 | 天津禹王生物医药科技有限公司 | α干扰素融合蛋白 |
EP3230322B1 (en) | 2014-12-11 | 2020-10-07 | University of Utah Research Foundation | Bi-functional allosteric protein-drug molecules for targeted therapy |
WO2017024182A1 (en) | 2015-08-04 | 2017-02-09 | Duke University | Genetically encoded intrinsically disordered stealth polymers for delivery and methods of using same |
US11752213B2 (en) | 2015-12-21 | 2023-09-12 | Duke University | Surfaces having reduced non-specific binding and antigenicity |
KR20220080015A (ko) | 2016-04-22 | 2022-06-14 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | Alk7 결합 단백질 및 이들의 용도 |
WO2017210476A1 (en) | 2016-06-01 | 2017-12-07 | Duke University | Nonfouling biosensors |
WO2018053201A1 (en) | 2016-09-14 | 2018-03-22 | Duke University | Triblock polypeptide-based nanoparticles for the delivery of hydrophilic drugs |
KR20190064600A (ko) | 2016-09-23 | 2019-06-10 | 듀크 유니버시티 | Lcst 거동을 갖는 비구조화된 비-반복적 폴리펩티드 |
WO2018124835A1 (ko) * | 2016-12-29 | 2018-07-05 | 한국과학기술연구원 | 신규 엑소좀 계열 항암제 |
WO2018132732A1 (en) | 2017-01-12 | 2018-07-19 | Duke University | Genetically encoded lipid-polypeptide hybrid biomaterials that exhibit temperature triggered hierarchical self-assembly |
WO2018213320A1 (en) | 2017-05-15 | 2018-11-22 | Duke University | Recombinant production of hybrid lipid-biopolymer materials that self-assemble and encapsulate agents |
WO2019006374A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Duke University | ORDER AND DISORDER AS A DESIGN PRINCIPLE FOR STIMULI-SENSITIVE BIOPOLYMER NETWORKS |
GB201721308D0 (en) * | 2017-12-19 | 2018-01-31 | Nordic Bioscience As | SPARC assay |
US20210060171A1 (en) * | 2018-01-26 | 2021-03-04 | Duke University | Albumin binding peptide-drug (aibiped) conjugates and methods of making and using same |
US11649275B2 (en) | 2018-08-02 | 2023-05-16 | Duke University | Dual agonist fusion proteins |
US11512314B2 (en) | 2019-07-12 | 2022-11-29 | Duke University | Amphiphilic polynucleotides |
KR102362621B1 (ko) * | 2020-06-17 | 2022-02-14 | 한국타이어앤테크놀로지 주식회사 | 리그닌 화합물을 포함하는 친환경 타이어용 고무 조성물 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005117952A2 (en) * | 2004-05-14 | 2005-12-15 | Abraxis Bioscience, Inc. | Treatment methods utilizing albumin-binding proteins as targets |
Family Cites Families (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3939350A (en) | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4277437A (en) | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4366241A (en) | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
EP0088994B1 (en) | 1982-03-15 | 1991-06-19 | Schering Corporation | Hybrid dna, binding composition prepared thereby and processes therefor |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4542225A (en) | 1984-08-29 | 1985-09-17 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Acid-cleavable compound |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
US4952394A (en) | 1987-11-23 | 1990-08-28 | Bristol-Myers Company | Drug-monoclonal antibody conjugates |
US5137877B1 (en) | 1990-05-14 | 1996-01-30 | Bristol Myers Squibb Co | Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production |
DE122004000008I1 (de) | 1991-06-14 | 2005-06-09 | Genentech Inc | Humanisierter Heregulin Antikörper. |
US5618528A (en) | 1994-02-28 | 1997-04-08 | Sterling Winthrop Inc. | Biologically compatible linear block copolymers of polyalkylene oxide and peptide units |
US5612474A (en) | 1994-06-30 | 1997-03-18 | Eli Lilly And Company | Acid labile immunoconjugate intermediates |
HUP9900017A3 (en) * | 1995-09-21 | 2001-08-28 | Andaris Ltd Ruddington | Transcytosis vehicles and enhancers for drug delivery |
PT1012280E (pt) | 1997-06-11 | 2005-02-28 | Borean Pharma As | Modulo de trimerizacao |
GB9722131D0 (en) | 1997-10-20 | 1997-12-17 | Medical Res Council | Method |
US6551795B1 (en) * | 1998-02-18 | 2003-04-22 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid and amino acid sequences relating to pseudomonas aeruginosa for diagnostics and therapeutics |
JP2002521053A (ja) | 1998-07-28 | 2002-07-16 | マイクロメット アーゲー | ヘテロミニ体 |
WO2000073430A2 (de) * | 1999-05-27 | 2000-12-07 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Vakzine gegen konformationsabhängige antigene sowie gegen antigene, die keine oder nicht ausschliesslich proteine oder peptide sind |
JP2004520803A (ja) * | 2000-04-21 | 2004-07-15 | コリクサ コーポレイション | 尋常性挫瘡の治療および診断のための組成物および方法 |
JP4214051B2 (ja) * | 2001-05-30 | 2009-01-28 | 啓一 宮本 | エラスチン架橋体およびその製造方法 |
JP2004020357A (ja) * | 2002-06-17 | 2004-01-22 | Hidetsugu Ikegami | 非熱核融合反応発生方法における非熱核融合燃料温度制御方法 |
ITMI20021527A1 (it) * | 2002-07-11 | 2004-01-12 | Consiglio Nazionale Ricerche | Anticorpi anti componente c5 del complemento e loro uso |
EP1440981A3 (en) | 2003-01-21 | 2005-11-23 | Research Association for Biotechnology | Full-length human cdna |
EP1604014A4 (en) * | 2003-03-20 | 2008-03-26 | Dana Farber Cancer Inst Inc | GENE EXPRESSION IN BREAST CANCER |
EP1682890A2 (en) | 2003-11-13 | 2006-07-26 | Genentech, Inc. | Screening assays and methods of tumor treatment |
SE0400235D0 (sv) * | 2004-02-06 | 2004-02-06 | Active Biotech Ab | New composition containing quinoline compounds |
AU2006249235B2 (en) * | 2004-05-14 | 2010-11-11 | Abraxis Bioscience, Llc | Sparc and methods of use thereof |
US8420603B2 (en) | 2004-05-14 | 2013-04-16 | Abraxis Bioscience, Llc | SPARC and methods of use thereof |
EP1813943B1 (en) * | 2004-10-19 | 2009-09-23 | Kumamoto University | Novel diagnostic kit for malignant melanoma |
CA2591914C (en) * | 2005-01-24 | 2017-04-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Fc-fusion constructs binding to phosphatidylserine and their therapeutic use |
JP2008535475A (ja) * | 2005-02-18 | 2008-09-04 | アブラクシス バイオサイエンス、インコーポレイテッド | Q3sparc欠失変異体及びその使用 |
KR101408173B1 (ko) | 2006-06-16 | 2014-06-16 | 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 | Sparc 유래의 암 거절항원 펩티드 및 이를 포함하는 의약 |
CN101528914B (zh) * | 2006-09-08 | 2014-12-03 | Ambrx公司 | 通过脊椎动物细胞位点特异性并入非天然氨基酸 |
EP2094730A4 (en) | 2006-12-07 | 2010-08-04 | Mayo Foundation | METHODS AND MATERIALS ASSOCIATED WITH ANTI-AMYLOID ANTIBODIES |
AT504702A1 (de) * | 2006-12-22 | 2008-07-15 | Arc Austrian Res Centers Gmbh | Set von tumormarkern |
AU2008240117B2 (en) | 2007-04-13 | 2013-12-05 | Abraxis Bioscience, Llc | SPARC and methods of use thereof |
CN102281890B (zh) * | 2008-12-05 | 2014-08-20 | 阿布拉西斯生物科学有限责任公司 | Sparc结合肽及其应用 |
-
2009
- 2009-12-07 CN CN200980154420.2A patent/CN102281890B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-07 WO PCT/US2009/067032 patent/WO2010065969A1/en active Application Filing
- 2009-12-07 CA CA2896413A patent/CA2896413A1/en not_active Abandoned
- 2009-12-07 US US13/132,274 patent/US8445637B2/en active Active
- 2009-12-07 US US13/132,455 patent/US8809507B2/en active Active
- 2009-12-07 EP EP09831276A patent/EP2376534A4/en not_active Withdrawn
- 2009-12-07 JP JP2011539774A patent/JP5580329B2/ja active Active
- 2009-12-07 NZ NZ623264A patent/NZ623264A/en not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 NZ NZ593173A patent/NZ593173A/xx not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 CA CA2745904A patent/CA2745904C/en active Active
- 2009-12-07 ES ES16159226.6T patent/ES2647351T3/es active Active
- 2009-12-07 WO PCT/US2009/066986 patent/WO2010065954A2/en active Application Filing
- 2009-12-07 CN CN200980153235.1A patent/CN102272159B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-07 MX MX2011005966A patent/MX2011005966A/es active IP Right Grant
- 2009-12-07 BR BRPI0923155A patent/BRPI0923155A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 AU AU2009322145A patent/AU2009322145A1/en not_active Abandoned
- 2009-12-07 MX MX2011005967A patent/MX2011005967A/es active IP Right Grant
- 2009-12-07 EP EP09831264.8A patent/EP2381952B1/en active Active
- 2009-12-07 CA CA2745923A patent/CA2745923C/en active Active
- 2009-12-07 CN CN201410229745.5A patent/CN104127879B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-07 BR BRPI0922790A patent/BRPI0922790A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 EP EP16159226.6A patent/EP3059247B1/en active Active
- 2009-12-07 KR KR1020117015402A patent/KR101413480B1/ko active IP Right Grant
- 2009-12-07 RU RU2011127456/10A patent/RU2491085C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 KR KR1020147013474A patent/KR101523705B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 RU RU2011127454/10A patent/RU2477728C1/ru not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 KR KR1020117015398A patent/KR20110100260A/ko active Application Filing
- 2009-12-07 NZ NZ602794A patent/NZ602794A/en not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 CA CA2808320A patent/CA2808320C/en active Active
- 2009-12-07 NZ NZ593281A patent/NZ593281A/xx not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 AU AU2009322130A patent/AU2009322130B2/en not_active Ceased
- 2009-12-07 JP JP2011539780A patent/JP2012511032A/ja active Pending
- 2009-12-07 NZ NZ602824A patent/NZ602824A/en not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 CN CN201510203002.5A patent/CN104940928B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-07 CN CN201710247043.3A patent/CN106905429A/zh active Pending
- 2009-12-07 NZ NZ623273A patent/NZ623273A/en not_active IP Right Cessation
- 2009-12-07 CN CN201410346267.6A patent/CN104174025B/zh not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-06-02 ZA ZA2011/04122A patent/ZA201104122B/en unknown
-
2013
- 2013-05-17 US US13/896,973 patent/US8821836B2/en active Active
-
2014
- 2014-07-10 JP JP2014142142A patent/JP2014221800A/ja active Pending
- 2014-07-31 US US14/448,696 patent/US9295733B2/en active Active
- 2014-08-04 US US14/451,008 patent/US9308279B2/en active Active
- 2014-08-05 US US14/451,858 patent/US9314537B2/en active Active
-
2016
- 2016-04-19 US US15/132,647 patent/US10053504B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005117952A2 (en) * | 2004-05-14 | 2005-12-15 | Abraxis Bioscience, Inc. | Treatment methods utilizing albumin-binding proteins as targets |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
DAUGHERTY et al., "Antibody affinity maturation using bacterial surface display", Protein Engineering, vol.11, no.9, стр.825-832, 1998, реферат * |
DAUGHERTY et al., "Antibody affinity maturation using bacterial surface display", Protein Engineering, vol.11, no.9, стр.825-832, 1998, реферат MAO et al., "Phage-display library selection of high-affinity human single-chain antibodies to tumor-associated carbohydrate antigens sialyl Lewis x and * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2799573C2 (ru) * | 2014-04-25 | 2023-07-06 | 2сэвэнти био, Инк. | Химерные антигенные рецепторы с mnd-промотором |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2477728C1 (ru) | SPARC, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С ScFv | |
JP5496220B2 (ja) | アルブミン結合ペプチド介在性の疾患標的化 | |
AU2013228006B2 (en) | Albumin binding peptide-mediated disease targeting |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181208 |