RU2473361C9 - Меченые пептиды, связывающие фактор роста гепатоцитов (hgf), для визуализации - Google Patents
Меченые пептиды, связывающие фактор роста гепатоцитов (hgf), для визуализации Download PDFInfo
- Publication number
- RU2473361C9 RU2473361C9 RU2009140475/10A RU2009140475A RU2473361C9 RU 2473361 C9 RU2473361 C9 RU 2473361C9 RU 2009140475/10 A RU2009140475/10 A RU 2009140475/10A RU 2009140475 A RU2009140475 A RU 2009140475A RU 2473361 C9 RU2473361 C9 RU 2473361C9
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cmbp
- gly
- cys
- peptide
- group
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 129
- 238000012800 visualization Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 32
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 title description 12
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 title description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 42
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 35
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 31
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 20
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 claims description 39
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 28
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 25
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 24
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 23
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 18
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 18
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 claims description 17
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 16
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 15
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 15
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 9
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 9
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 6
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 claims description 6
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims description 5
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims description 5
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000003140 primary amides Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 claims description 4
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 4
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 3
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 claims description 3
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 claims description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000002853 C1-C4 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N Ser-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000732 arylene group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000002993 cycloalkylene group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 claims description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 claims description 2
- 125000005549 heteroarylene group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M thiocyanate group Chemical group [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 3
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 40
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 239000000047 product Substances 0.000 description 33
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- -1 SOX-2 Proteins 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 14
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 13
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 12
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 11
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 10
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 10
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 10
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 8
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 7
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 7
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 6
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 5
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 5
- WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N (3-nitropyridin-2-yl) thiohypochlorite Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CN=C1SCl WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N Formic acid Chemical compound OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 3
- 102100022623 Hepatocyte growth factor receptor Human genes 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 108010089836 Proto-Oncogene Proteins c-met Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 3
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 3
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 3
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 3
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentafluorophenol Chemical compound OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 3',5'-di-O-methyltricetin Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IKYJCHYORFJFRR-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 350 Chemical compound O=C1OC=2C=C(N)C(S(O)(=O)=O)=CC=2C(C)=C1CC(=O)ON1C(=O)CCC1=O IKYJCHYORFJFRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEJVZSAYICGDCK-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 430 Chemical compound CC[NH+](CC)CC.CC1(C)C=C(CS([O-])(=O)=O)C2=CC=3C(C(F)(F)F)=CC(=O)OC=3C=C2N1CCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WEJVZSAYICGDCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHVNXSBKJGAXKU-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 532 Chemical compound [H+].[H+].CC1(C)C(C)NC(C(=C2OC3=C(C=4C(C(C(C)N=4)(C)C)=CC3=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=C2C=3C(C=C1)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O WHVNXSBKJGAXKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M Alexa Fluor 546 Chemical compound [H+].[Na+].CC1CC(C)(C)NC(C(=C2OC3=C(C4=NC(C)(C)CC(C)C4=CC3=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=C2C=3C(C(=C(Cl)C=1Cl)C(O)=O)=C(Cl)C=1SCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 555 Chemical compound C=12C=CC(=N)C(S(O)(=O)=O)=C2OC2=C(S(O)(=O)=O)C(N)=CC=C2C=1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1C(O)=O IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 2
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 2
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 2
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 2
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 2
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 2
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical class CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N Piscigenin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2)=O)=C1 IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 102000004504 Urokinase Plasminogen Activator Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010042352 Urokinase Plasminogen Activator Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000009543 diffuse optical tomography Methods 0.000 description 2
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N flavin adenine dinucleotide Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1[C@@H]([C@H](O)[C@@H]1O)O[C@@H]1CO[P@](O)(=O)O[P@@](O)(=O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C2=NC(=O)NC(=O)C2=NC2=C1C=C(C)C(C)=C2 VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N 0.000 description 2
- 235000019162 flavin adenine dinucleotide Nutrition 0.000 description 2
- 239000011714 flavin adenine dinucleotide Substances 0.000 description 2
- 229940093632 flavin-adenine dinucleotide Drugs 0.000 description 2
- 150000002301 glucosamine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- MHYFEEDKONKGEB-UHFFFAOYSA-N oxathiane 2,2-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CCCCO1 MHYFEEDKONKGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 2
- BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N tricin Natural products COc1cc(OC)c(O)c(c1)C2=CC(=O)c3c(O)cc(O)cc3O2 BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 125000000430 tryptophan group Chemical class [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYHGRNUNHLNLTR-UHFFFAOYSA-M (2e)-3-ethyl-2-[(e)-3-(1-ethylquinolin-1-ium-2-yl)prop-2-enylidene]-1,3-benzoxazole;iodide Chemical compound [I-].C1=CC=CC2=[N+](CC)C(C=CC=C3N(C4=CC=CC=C4O3)CC)=CC=C21 ZYHGRNUNHLNLTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- JRNVQLOKVMWBFR-UHFFFAOYSA-N 1,2-benzenedithiol Chemical class SC1=CC=CC=C1S JRNVQLOKVMWBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UVAMFBJPMUMURT-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentafluorobenzenethiol Chemical compound FC1=C(F)C(F)=C(S)C(F)=C1F UVAMFBJPMUMURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHLVQDZNNSHMEF-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethyl-1,3-bis(4-sulfobutyl)indol-1-ium-5-sulfonate Chemical compound C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(CCCCS(O)(=O)=O)(C)C(C)=[N+](CCCCS(O)(=O)=O)C2=C1 JHLVQDZNNSHMEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGECGSDLSUJXJG-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethyl-3-(4-sulfobutyl)indole-5-sulfonic acid Chemical compound C1=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(CCCCS(O)(=O)=O)(C)C(C)=NC2=C1 KGECGSDLSUJXJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNTIRRQEPHPUCI-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethylamino]-2-oxoethoxy]acetic acid Chemical compound NCCOCCOCCOCCNC(=O)COCC(O)=O GNTIRRQEPHPUCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTKQHJHANLVEBM-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(ethylamino)-6-ethylimino-2,7-dimethylxanthen-9-yl]benzoic acid Chemical compound C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=CC(=NCC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(O)=O ZTKQHJHANLVEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOAOGKCUZYCBGR-UHFFFAOYSA-N 2-phenyliminopropanedial Chemical compound O=CC(C=O)=Nc1ccccc1 WOAOGKCUZYCBGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHDBZCJYSHDCKF-UHFFFAOYSA-N 4,6-dichlorotriazine Chemical compound ClC1=CC(Cl)=NN=N1 IHDBZCJYSHDCKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWKQQIVWVMPGGN-UHFFFAOYSA-N 4-(3H-indol-5-ylsulfonyloxy)butane-1-sulfonic acid Chemical compound S(=O)(=O)([O-])CCCCOS(=O)(=O)C=1C=C2CC=[NH+]C2=CC=1 CWKQQIVWVMPGGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOMZCWUHFGMSEJ-UHFFFAOYSA-N 4-(azaniumylamino)benzenesulfonate Chemical compound NNC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 IOMZCWUHFGMSEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FIZOAOKWJAZVQL-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-6-oxoheptane-1-sulfonic acid Chemical compound CC(=O)C(C)CCCCS(O)(=O)=O FIZOAOKWJAZVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012109 Alexa Fluor 568 Substances 0.000 description 1
- 239000012110 Alexa Fluor 594 Substances 0.000 description 1
- 239000012112 Alexa Fluor 633 Substances 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 239000012115 Alexa Fluor 660 Substances 0.000 description 1
- 239000012116 Alexa Fluor 680 Substances 0.000 description 1
- 239000012117 Alexa Fluor 700 Substances 0.000 description 1
- 239000012118 Alexa Fluor 750 Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101100243447 Arabidopsis thaliana PER53 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 1
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 1
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 1
- 229910052692 Dysprosium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 101710113436 GTPase KRas Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076557 Matrix Metalloproteinase 14 Proteins 0.000 description 1
- 102100030216 Matrix metalloproteinase-14 Human genes 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- LFZAGIJXANFPFN-UHFFFAOYSA-N N-[3-[4-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)piperidin-1-yl]-1-thiophen-2-ylpropyl]acetamide Chemical compound C(C)(C)C1=NN=C(N1C1CCN(CC1)CCC(C=1SC=CC=1)NC(C)=O)C LFZAGIJXANFPFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930192627 Naphthoquinone Natural products 0.000 description 1
- AWZJFZMWSUBJAJ-UHFFFAOYSA-N OG-514 dye Chemical compound OC(=O)CSC1=C(F)C(F)=C(C(O)=O)C(C2=C3C=C(F)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(F)C=C32)=C1F AWZJFZMWSUBJAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical class CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- NKEWNCBOYNTPQY-UHFFFAOYSA-N S(=O)(=O)(O)C1C(=O)N(C(C1)=O)ON1C(C(CC1=O)S(=O)(=O)O)=O Chemical compound S(=O)(=O)(O)C1C(=O)N(C(C1)=O)ON1C(C(CC1=O)S(=O)(=O)O)=O NKEWNCBOYNTPQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229910052772 Samarium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100032795 Semaphorin-6A Human genes 0.000 description 1
- 101710199479 Semaphorin-6A Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 206010041662 Splinter Diseases 0.000 description 1
- 101150080074 TP53 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000005497 Thymidylate Synthase Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- GBEXSAXFTDULOC-UHFFFAOYSA-L [K+].[K+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(CCCCS([O-])(=O)=O)(C)C(C)=[N+](CCCCS([O-])(=O)=O)C2=C1 Chemical compound [K+].[K+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(CCCCS([O-])(=O)=O)(C)C(C)=[N+](CCCCS([O-])(=O)=O)C2=C1 GBEXSAXFTDULOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 229940067596 butylparaben Drugs 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960002798 cetrimide Drugs 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N chembl402140 Chemical compound Cl.C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=C\C(=N/CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- ONCCWDRMOZMNSM-FBCQKBJTSA-N compound Z Chemical compound N1=C2C(=O)NC(N)=NC2=NC=C1C(=O)[C@H]1OP(O)(=O)OC[C@H]1O ONCCWDRMOZMNSM-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 150000001924 cycloalkanes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- OCDXZFSOHJRGIL-UHFFFAOYSA-N cyclohexyloxycyclohexane Chemical compound C1CCCCC1OC1CCCCC1 OCDXZFSOHJRGIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-dimethylformamide Chemical compound ClCCl.CN(C)C=O MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOSNQBHBXDDGSH-UHFFFAOYSA-L dipotassium;2,3-dimethyl-3-(4-sulfonatobutyl)indole-5-sulfonate Chemical compound [K+].[K+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(CCCCS([O-])(=O)=O)(C)C(C)=NC2=C1 AOSNQBHBXDDGSH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KBQHZAAAGSGFKK-UHFFFAOYSA-N dysprosium atom Chemical compound [Dy] KBQHZAAAGSGFKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000002961 echo contrast media Substances 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- DQYBDCGIPTYXML-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;hydrate Chemical compound O.CCOCC DQYBDCGIPTYXML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FNENWZWNOPCZGK-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-methyl-3-oxobutanoate Chemical compound CCOC(=O)C(C)C(C)=O FNENWZWNOPCZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001617 ethyl hydroxybenzoate Drugs 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000198 fluorescence anisotropy Methods 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 229960004657 indocyanine green Drugs 0.000 description 1
- MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M indocyanine green Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCCCN1C2=CC=C3C=CC=CC3=C2C(C)(C)C1=CC=CC=CC=CC1=[N+](CCCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=C(C=CC=C3)C3=C2C1(C)C MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 125000006178 methyl benzyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 description 1
- 150000002791 naphthoquinones Chemical class 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 230000003606 oligomerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012014 optical coherence tomography Methods 0.000 description 1
- BRJCLSQFZSHLRL-UHFFFAOYSA-N oregon green 488 Chemical compound OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 BRJCLSQFZSHLRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid propyl ester Natural products CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N pacific blue Chemical compound FC1=C(O)C(F)=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachloro-phenol Natural products OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 208000015768 polyposis Diseases 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- CASUWPDYGGAUQV-UHFFFAOYSA-M potassium;methanol;hydroxide Chemical compound [OH-].[K+].OC CASUWPDYGGAUQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 150000005599 propionic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- KZUNJOHGWZRPMI-UHFFFAOYSA-N samarium atom Chemical compound [Sm] KZUNJOHGWZRPMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N terbium atom Chemical compound [Tb] GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHHKPEUQJIEKOA-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-[6-(nitromethyl)-6-bicyclo[3.2.0]hept-3-enyl]acetate Chemical compound C1C=CC2C(CC(=O)OC(C)(C)C)(C[N+]([O-])=O)CC21 DHHKPEUQJIEKOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004905 tetrazines Chemical class 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003556 thioamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/0059—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons using light, e.g. diagnosis by transillumination, diascopy, fluorescence
- A61B5/0071—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons using light, e.g. diagnosis by transillumination, diascopy, fluorescence by measuring fluorescence emission
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/48—Other medical applications
- A61B5/4842—Monitoring progression or stage of a disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
Группа изобретений относится к области биохимии и медицины. Предложен агент визуализации, представляющий собой конъюгат структуры I, как определено в формуле изобретения. Агент визуализации относится к меченым cMet-связывающим пептидам. Эти пептиды включают метку оптической репортерной группой, подходящей для визуализации in vivo, с использованием света в диапазоне длин волн в области спектра 600-1200 нм. Также предложены фармацевтическая композиция для оптической визуализации, содержащая агент визуализации, набор для ее приготовления и способ оптической визуализации организма млекопитающего in vivo. Также предложен способ ведения больных колоректальным раком, включающий стадию оптической визуализации in vivo. Предложенный агент визуализации обладает повышенной cMet-связывающей аффинностью и избирательностью нацеливания in vivo на клетки-мишени. 6 н. и 22 з.п. ф-лы, 2 табл., 7 пр.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к меченым cMet-связывающим пептидам, подходящим для оптической визуализации in vivo. Эти пептиды включают метку оптической репортерной группой, подходящей для визуализации в области спектра от красной до ближней инфракрасной. Также раскрыты способы визуализации in vivo, в частности, для применения в диагностике колоректального рака (CRC).
Предшествующий уровень техники
В WO 2005/030266 раскрыто, что существует медицинская необходимость в ранней диагностике колоректального рака (CRC). В WO 2005/030266 раскрыты оптические контрастные агенты визуализации, имеющие аффинность в отношении биологической мишени, аномально экспрессирующейся при CRC. Данная биологическая мишень выбрана из следующих: циклооксигеназа-2 (СОХ-2), бета-катенин, Е-кадгерин, Р-кадгерин, различные киназы, Her-2, матриксные металлопротеиназы (ММР), циклины, Р53, тимидилат-синтаза, рецепторы фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), рецепторы эпидермального фактора роста, K-ras, белок аденоматозного полипоза толстой кишки, катепсин В, рецептор активатора плазминогена урокиназного типа (uPAR), рецептор фактора роста гепатоцитов (cMet), муцины и желудочные рецепторы. Сказано, что предпочтительные такие мишени (стр.7, строки 11-12) представляют собой: cMet, MMP-14, СОХ-2, бета-катенин и катепсин В. Вектор из WO 2005/030266 может представлять собой: пептид, пептоидную группировку, олигонуклеотид, олигосахарид, относящееся к липидам соединение или обычную органическую малую молекулу, подобную лекарствам. Репортерная группировка предпочтительно представляет собой краситель, который взаимодействует со светом в диапазоне длин волн от ультрафиолетовой до инфракрасной области электромагнитного спектра.
Фактор роста гепатоцитов (HGF), также известный как рассеивающий фактор (scatter factor, SF), представляет собой фактор роста, который вовлечен в различные физиологические процессы, такие как заживление ран и ангиогенез. Взаимодействие HGF с его высокоаффинным рецептором (cMet) вовлечено в рост, инвазию и метастазы опухолей.
В Knudsen et al. рассмотрена роль HGF и cMet в раке предстательной железы с возможным применением для визуализации и терапии [Adv.Cancer Res., 91, 31-67 (2004)]. Меченые антитела против met для диагностики и терапии описаны в WO 03/057155.
В WO 2004/078778 раскрыты полипептиды или мультимерные пептидные конструкции, которые связываются с cMet или комплексом, содержащим cMet и HGF. Описано приблизительно 10 различных структурных классов пептидов. В WO 2004/078778 раскрыто, что эти пептиды могут быть мечены детектируемой меткой для in vitro и in vivo применений или лекарственным средством для терапевтического применения. Детектируемая метка может представлять собой: фермент, флуоресцентное соединение, оптический краситель, ион парамагнитного металла, ультразвуковой контрастный агент или радионуклид. Сказано, что предпочтительные метки согласно WO 2004/078778 являются радиоактивными или парамагнитными и, наиболее предпочтительно, включают металл, который хелатирован металл-хелатирующим агентом.
Настоящее изобретение
В настоящем изобретении предложены агенты визуализации, подходящие для оптической визуализации in vivo, которые содержат cMet-связывающие циклические пептиды и оптическую репортерную визуализируемую группировку, подходящую для визуализации организма млекопитающего in vivo с использованием света в диапазоне длин волн от зеленой до ближней инфракрасной области спектра 500-1200 нм. cMet-связывающие циклические пептиды относятся к одному из структурных классов пептида из WO 2004/078778 и имеют оптимальную аффинность связывания в отношении cMet. Эти пептиды имеют происхождение из фагового дисплея и отобраны по их аффинности в отношении cMet и отсутствию конкуренции с HGF, как описано в WO 2004/078778. cMet-связывающие пептиды по настоящему изобретению предпочтительно имеют по меньшей мере один из их концов, защищенных группами, ингибирующими метаболизм (MIG). Это является важным фактором для применения in vivo, где эндогенные ферменты и пептидазы в противном случае будут быстро метаболизировать пептид с последующей потерей cMet-связывающей аффинности и тем самым потерей избирательного нацеливания in vivo.
В настоящем изобретении предложен наилучший путь использования cMet-связывающих пептидов in vivo, включающий применение оптического репортера, в противоположность другим способам визуализации (например, ядерной, магнитно-резонансной визуализации (MRI) или ультразвуковой), и кроме того предложены предпочтительные оптические визуализируемые репортеры. Область спектра от зеленой до ближней инфракрасной (свет с длиной волны 500-1200 нм) является предпочтительной, так как эта область имеет минимальное спектральное перекрывание с эндогенными тканями и веществами, такими как гемоглобин, порфирины, меланин и коллаген [Licha, Topics Curr. Chem., 222, 1-29 (2002)]. Другие важные факторы, вносящие вклад в аутофлуоресценцию, представляют собой восстановленный никотинамид-адениндинуклеотид (NADH), флавин-адениндинуклеотид (FAD) и эластин.
Подробное описание изобретения
В первом аспекте настоящего изобретения предложен агент визуализации, включающий конъюгат формулы I:
где:
Z1 присоединен к N-концу сМВР и представляет собой Н или MIG;
Z2 присоединен к С-концу сМВР и представляет собой ОН, OBc или MIG, где Bc представляет собой биосовместимый катион;
сМВР представляет собой cMet-связывающий циклический пептид из 17-30 аминокислот, который включает аминокислотную последовательность (SEQ-1):
Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6; где
X1 представляет собой Asn, His или Tyr;
X2 представляет собой Gly, Ser, Thr или Asn;
X3 представляет собой Thr или Arg;
X4 представляет собой Ala, Asp, Glu, Gly или Ser;
X5 представляет собой Ser или Thr;
X6 представляет собой Asp или Glu;
и каждый из Cysa-d представляет собой остаток цистеина, так что остатки а и b, а также c и d циклизованы с образованием двух отдельных дисульфидных связей;
MIG представляет собой группу, ингибирующую метаболизм, которая представляет собой биосовместимую группу, ингибирующую или подавляющую метаболизм сМВР-пептида in vivo;
L представляет собой синтетическую линкерную группу формулы -(А)m-, где каждый А независимо представляет собой -CR2-, -CR=CR-, -C≡C-, -CR2CO2-, -CO2CR2-, -NRCO-, -CONR-, -NR(C=O)NR-, -NR(C=S)NR-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2-, С4-8циклогетероалкиленовую группу, С4-8циклоалкиленовую группу, С5-12ариленовую группу или С3-12гетероариленовую группу, аминокислоту, сахар или монодисперсную полиэтиленгликолевую (PEG) структурную единицу;
каждый R независимо выбран из Н, С1-4алкила, С2-4алкенила, С2-4алкинила, С1-4алкоксиалкила или С1-4гидроксиалкила;
m равен целому числу от 1 до 20;
n равен целому числу 0 или 1;
IM представляет собой оптическую репортерную визуализируемую группировку, подходящую для визуализации организма млекопитающего in vivo с использованием света в диапазоне длин волн в области спектра от зеленой до ближней инфракрасной: 600-1200 нм.
Термин "агент визуализации" означает соединение, подходящее для визуализации организма млекопитающего in vivo. Предпочтительно, млекопитающее представляет собой человека. Визуализация может быть инвазивной (например, интраоперационной или эндоскопической) или неинвазивной. Предпочтительный способ визуализации представляет собой эндоскопию. Хотя конъюгат формулы I подходит для визуализации in vivo, он также может быть использован in vitro (например, для анализов количественного определения cMet в биологических образцах или визуализации cMet в тканевых образцах). Предпочтительно, агент визуализации используют для визуализации in vivo.
Группа Z1 замещает аминогруппу последнего аминокислотного остатка. Таким образом, когда Z1 представляет собой Н, амино-конец сМВР оканчивается свободной группой NH2 последнего аминокислотного остатка. Группа Z2 замещает карбонильную группу последнего аминокислотного остатка. Таким образом, когда Z2 представляет собой ОН, карбокси-конец сМВР оканчивается свободной группой CO2H последнего аминокислотного остатка, и когда Z2 представляет собой OBc, эта концевая карбоксильная группа ионизирована в виде группы CO2Bc.
Термин "группа, ингибирующая метаболизм" (MIG) означает биосовместимую группу, которая ингибирует или подавляет метаболизм сМВР-пептида in vivo либо по амино-концу (Z1), либо по карбокси-концу (Z2). Такие группы хорошо известны специалистам в данной области техники и выбраны подходящим образом, для амино-конца пептидов, из: N-ацилированных групп -NH(C=О)RG, где ацильная группа -(C=O)RG имеет RG, выбранный из C1-6алкила, С3-10арильных групп, или содержит полиэтиленгликолевую (PEG) структурную единицу. Подходящие группы PEG описаны ниже для линкерной группы (L). Предпочтительные такие группы PEG представляют собой биомодификаторы формулы IA или IB. Предпочтительные такие аминоконцевые группы MIG представляют собой ацетил, бензилоксикарбонил или трифторацетил, наиболее предпочтительно ацетил.
Подходящие группы, ингибирующие метаболизм, для пептидного карбоксильного конца включают: карбоксамид, трет-бутиловый эфир, бензиловый эфир, циклогексиловый эфир, аминоспирт или полиэтиленгликолевую (PEG) структурную единицу. Подходящая группа MIG для карбоксильного концевого аминокислотного остатка сМВР-пептида является такой, где концевая аминогруппа аминокислотного остатка N-алкилирована C1-4алкильной группой, предпочтительно метильной группой. Предпочтительные такие группы MIG представляют собой карбоксамид или PEG, наиболее предпочтительные такие группы представляют собой карбоксамид.
Формула I означает, что группировка -(L)n[IM] может быть присоединена по любому положению Z1, Z2 или сМВР. Для Z1 или Z2 группировка -(L)n[IM] может быть либо присоединена к группе MIG, где один из Z1/Z2 представляет собой MIG. Когда Z1 представляет собой Н, или Z2 представляет собой ОН, присоединение группировки -(L)n[IM] по положению Z1 или Z2 дает соединения формул [IM]-(L)n-[cMBP]-Z2 или Z1-[cMBP]-(L)n-[IM], соответственно. Ингибирование метаболизма сМВР по одному из пептидных концов может также быть достигнуто путем присоединения группировки -(L)n[IM] таким образом, но -(L)n[IM] не охватывается определением MIG по настоящему изобретению.
Группировка -(L)n- формулы I может быть присоединена по любому подходящему положению IM. Группировка -(L)n- либо занимает место имеющегося заместителя IM, либо ковалентно присоединена к имеющемуся заместителю IM. Группировка -(L)n- предпочтительно присоединена через карбоксиалкильный заместитель IM.
Термин "cMet-связывающий циклический пептид" (сМВР) означает пептид, который связывается с высокоаффинным рецептором фактора роста гепатоцитов (HGF), также известным как cMet (c-Met или рецептор фактора роста гепатоцитов). Подходящие сМВР-пептиды по настоящему изобретению имеют кажущуюся константу диссоциации (KD) для cMet из комплекса cMet/HGF менее чем приблизительно 20 нМ. Указанные сМВР-пептиды содержат остатки пролина, и известно, что такие остатки могут проявлять цис/транс изомеризацию основной амидной связи. сМВР-пептиды по настоящему изобретению включают любые такие изомеры.
Термин "биосовместимый катион" (Bc) означает положительно заряженный противоион, который образует соль с ионизированной отрицательно заряженной группой, где указанный положительно заряженный противоион является также нетоксичным и поэтому подходящим для введения в организм млекопитающего, особенно организм человека. Примеры подходящих биосовместимых катионов включают: щелочные металлы натрий и калий; щелочноземельные металлы кальций и магний; и ион аммония. Предпочтительные биосовместимые катионы представляют собой натрий и калий, наиболее предпочтительно натрий.
Термин "аминокислота" означает L- или D-аминокислоту, аналог аминокислоты (например, нафтилаланин) или миметик аминокислоты, которые могут быть естественного происхождения или получены тонким синтезом, и могут быть оптически чистыми, то есть в виде индивидуального энантиомера и поэтому хиральными, или в виде смеси энантиомеров. Для обозначения аминокислот в данном описании использованы общепринятые 3-буквенные или однобуквенные сокращения. Предпочтительно, аминокислоты по настоящему изобретению являются оптически чистыми. Термин "миметик аминокислоты" означает синтетические аналоги существующих в природе аминокислот, которые являются изостерами, то есть разработаны так, чтобы имитировать стерическую и электронную структуру природного соединения. Такие изостеры хорошо известны специалистам в данной области техники и включают депсипептиды, ретро-инверсо-пептиды, тиоамиды, циклоалканы или 1,5-дизамещенные тетразолы, но не ограничены ими [см. М. Goodman, Biopolymers, 24, 137, (1985)].
Термин "пептид" означает соединение, содержащее две или более аминокислот, как определено выше, связанных пептидной связью (то есть амидной связью, присоединяющей амин одной аминокислоты к карбоксилу другой аминокислоты). Термин "миметик пептида" или "миметик" относится к биологически активным соединениям, которые имитируют биологическую активность пептида или белка, но более не являются пептидными по химической природе, то есть они более не содержат никаких пептидных связей (то есть амидных связей между аминокислотами). Здесь термин «миметик пептида» используют в более широком смысле для включения молекул, которые более не являются полностью пептидными по природе, таких как псевдопептиды, полупептиды и пептоиды.
Термин "оптическая репортерная визуализируемая группировка" (IM) означает флуоресцентный краситель или хромофор, способный к обнаружению прямо или опосредованно в процедуре оптической визуализации с использованием света в диапазоне длин волн в области спектра от зеленой до ближней инфракрасной (500-1200 нм, предпочтительно 600-1000 нм). Предпочтительно IM имеет флуоресцентные свойства.
Предусмотрено, что одна из ролей линкерной группы -(А)m- формулы I заключается в том, чтобы отдалять IM от активного сайта сМВР-пептида. Это особенно важно, когда визуализируемая группировка является относительно объемной, так чтобы не препятствовать взаимодействию с ферментом. Этого можно достичь комбинацией гибкости (например, простые алкильные цепи), так что эта объемная группа имеет свободу для саморасположения вдали от активного сайта, и/или жесткости, такой как циклоалкильный или арильный спейсер, который ориентирует IM вдали от активного сайта. Природа линкерной группы может также быть использована для модификации биораспределения агента визуализации. Таким образом, например, включение эфирных групп в линкер будет способствовать минимизации связывания с белками плазмы. Когда -(А)m- содержит полиэтиленгликолевую (PEG) структурную единицу или пептидную цепь из 1-10 аминокислотных остатков, линкерная группа может иметь функцию модифицирования фармакокинетических параметров и скорости клиренса из крови агента визуализации in vivo. Такие "биомодифицирующие" линкерные группы могут ускорять клиренс агента визуализации из фоновой ткани, такой как мышечная или печеночная, и/или из крови, тем самым давая лучшее диагностическое изображение вследствие меньших фоновых помех. Биомодифицирующая линкерная группа может также быть использована для того, чтобы способствовать конкретному пути экскреции, например, через почки, в противоположность пути через печень.
Термин "сахар" означает моно-, ди- или трисахарид. Подходящие сахара включают: глюкозу, галактозу, мальтозу, маннозу и лактозу. Возможно, сахар может быть функционализирован, чтобы обеспечить легкое сочетание с аминокислотами. Таким образом, например, глюкозаминное производное аминокислоты может быть конъюгировано с другими аминокислотами через пептидные связи. Глюкозаминное производное аспарагина (имеющееся в продаже от NovaBiochem) представляет собой один из таких примеров:
Предпочтительные признаки
Молекулярная масса агента визуализации составляет подходящим образом вплоть до 8000 Дальтон. Предпочтительно, молекулярная масса находится в диапазоне от 2800 до 6000 Дальтон, наиболее предпочтительно от 3000 до 4500 Дальтон, особенно предпочтительно от 3200 до 4000 Дальтон.
Предпочтительные агенты визуализации по настоящему изобретению имеют оба пептидных конца, защищенных группами MIG, то есть предпочтительно оба Z1 и Z2 представляют собой MIG, которые будут, как правило, разными. Как указано выше, один из Z1/Z2 может возможно представлять собой -(L)n[IM]. Наличие обоих замещенных пептидных концов в данном случае важно для применений визуализации in vivo, так как в противном случае ожидается быстрый метаболизм с последующей потерей аффинности избирательного связывания в отношении cMet. Когда оба Z1 и Z2 представляют собой MIG, предпочтительно Z1 представляет собой ацетил, и Z2 представляет собой первичный амид. Наиболее предпочтительно, Z1 представляет собой ацетил, и Z2 представляет собой первичный амид, и группировка -(L)n[IM] присоединена к ε-аминогруппе боковой цепи остатка лизина в сМВР.
Предпочтительные сМВР-пептиды по настоящему изобретению имеют KD в отношении связывания cMet с комплексом cMet/HGF менее чем приблизительно 10 нМ (на основе анализа измерений поляризации флуоресценции), наиболее предпочтительно в диапазоне от 1 до 5 нМ, в идеальном случае менее чем 3 нМ,
Пептидная последовательность (SEQ-1):
Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6 (SEQ-1)
сМВР формулы I представляет собой последовательность 17-мерного пептида, ответственную главным образом за избирательное связывание с cMet. Когда сМВР-пептид по настоящему изобретению содержит более чем 17 аминокислотных остатков, остальные аминокислоты могут представлять собой любую аминокислоту, за исключением цистеина. Дополнительно, незащищенные остатки цистеина могут вызывать нежелательное скремблирование определенных дисульфидных мостиков Cysa-Cysb и Cysc-Cysd. Дополнительные пептиды предпочтительно содержат по меньшей мере один аминокислотный остаток с боковой цепью, подходящей для легкой конъюгации группировки -(L)n[IM]. Подходящие такие остатки включают остатки Asp или Glu для конъюгации с группами -(L)n[IM], функционализированными аминогруппами, или остаток Lys для конъюгации с группой -(L)n[IM], функционализированной карбоксигруппами или активным сложным эфиром. Аминокислотные остатки для конъюгации -(L)n[IM] подходящим образом локализованы вдали от 17-мерного связывающего участка сМВР-пептида (SEQ-1) и предпочтительно локализованы на С- или N-конце. Предпочтительно, аминокислотный остаток для конъюгации представляет собой остаток Lys.
Замещение остатка триптофана SEQ-1 оценивали с известными аминокислотными заместителями фенилаланином и нафтилаланином. Однако была обнаружена потеря аффинности в отношении cMet, подтверждая тот факт, что остаток триптофана важен для активности.
Предпочтительно, когда сМВР-пептид дополнительно содержит N-концевой остаток серина с получением 18-мера (SEQ-2):
Ser-Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6 (SEQ-2)
В дополнение к SEQ-1 или предпочтительно SEQ-2, сМВР наиболее предпочтительно дополнительно включает одно из следующего:
(1) остаток Asp или Glu в пределах 4 аминокислотных остатков пептидного С- или N-конца сМВР-пептида, и -(L)nIM функционализирована аминогруппой, которая конъюгирована с карбоксилом боковой цепи указанного остатка Asp или Glu с получением амидной связи;
(2) остаток Lys в пределах 4 аминокислотных остатков пептидного С- или N-конца сМВР-пептида, и -(L)nIM функционализирована карбоксильной группой, которая конъюгирована с ε-аминогруппой боковой цепи указанного остатка Lys с получением амидной связи.
Предпочтительные сМВР-пептиды содержат 22-мерную аминокислотную последовательность (SEQ-3):
Ala-Gly-Ser-Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6-Gly-Thr (SEQ-3)
сМВР-пептиды по настоящему изобретению предпочтительно имеют X3, представляющий собой Arg.
сМВР-пептид предпочтительно дополнительно содержит, в дополнение к SEQ-1, SEQ-2 или SEQ-3, по любому из N- или С-концов линкерный пептид, выбранный из:
-Gly-Gly-Gly-Lys- (SEQ-4), -Gly-Ser-Gly-Lys- (SEQ-5) или
-Gly-Ser-Gly-Ser-Lys- (SEQ-6).
Остаток Lys линкерного пептида является наиболее предпочтительной точкой локализации для конъюгации группировки -(L)n[IM]. Особенно предпочтительные сМВР-пептиды содержат SEQ-3 вместе с линкерным пептидом SEQ-4, давая 26-мерную аминокислотную последовательность (SEQ-7):
Ala-Gly-Ser-Cysa-Tyr-Cysc-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys (SEQ-7)
сМВР-пептиды с SEQ-1, SEQ-2, SEQ-3 и SEQ-7 предпочтительно имеют Z1 и Z2, оба представляющих собой MIG, и, наиболее предпочтительно, имеют Z1, представляющий собой ацетил, и Z2, представляющий собой первичный амид.
Группировка -(L)n[IM] подходящим образом присоединена к одной из групп Z1 или Z2 или аминоксилотному остатку сМВР-пептида, который отличается от cMet-связывающей последовательности SEQ-1. Предпочтительные аминокислотные остатки и сайты конъюгации являются такими, как описано выше. Когда группировка -(L)n[IM] присоединена к Z1 или Z2, она может занимать место Z1 или Z2 при конъюгации по N- или С-концу и блокировать метаболизм in vivo таким образом.
Предпочтительные группы IM имеют распространенную делокализованную систему электронов, например, цианины, мероцианины, индоцианины, фталоцианины, нафталоцианины, трифенилметины, порфирины, пирилиевые красители, тиапирилиевые красители, скварилиевые красители, крокониевые красители, азулениевые красители, индоанилины, бензофеноксазиниевые красители, бензотиафенотиазиниевые красители, антрахиноны, нафтохиноны, индатрены, фталоилакридоны, трисфенохиноны, азокрасители, красители с внутримолекулярным и межмолекулярным переносом заряда и комплексы красителей, тропоны, тетразины, бис(дитиолен)овые комплексы, бис(бензол-дитиолат)ные комплексы, иоданилиновые красители, бис(S,O-дитиолен)овые комплексы. Флуоресцентные белки, такие как зеленый флуоресцентный белок (GFP) и модификации GFP, которые имеют различные свойства поглощения/испускания, также являются полезными. Комплексы некоторых редкоземельных металлов (например европия, самария, тербия или диспрозия) используют в некоторых контекстах, так как они являются флуоресцентными нанокристаллами (квантовые точки).
Конкретные примеры хромофоров, которые могут быть использованы, включают флуоресцеин, сульфородамин 101 (техасский красный), родамин В, родамин 6G, родамин 19, индоцианиновый зеленый, Су2, Су3В, Су3.5, Су5, Су5.5, Су7, Су7.5, Marina Blue, Pacific Blue, Oregon Green 488, Oregon Green 514, тетраметилродамин, Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 555, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680, Alexa Fluor 700 и Alexa Fluor 750. Цианиновые красители являются особенно предпочтительными. Licha et al. приводят обзор по красителям и конъюгатам с красителями для оптической визуализации in vivo [Topics Curr. Chem., 222, 1-29 (2002); Adv.Drug Deliv.Rev., 57, 1087-1108 (2005)].
Предпочтительные цианиновые красители, которые являются флуорофорами, представлены формулой II:
где каждый X' независимо выбран из: -С(СН3)2, -S-, -О- или -С[(СН2)аСН3][(СН2)bM]-, где а равен целому числу от 0 до 5, b равен целому числу от 1 до 5, и М представляет собой группу G или выбран из SO3M1 или Н;
каждый Y' независимо представляет собой 1-4 группы, выбранные из группы, состоящей из:
H, -CH2NH2, -SO3M1, -СН2СООМ1, -NCS и F, и где указанные группы Y' находятся по любому положению ароматического кольца;
Q' независимо выбран из группы, состоящей из: H, SO3M1, NH2, COOM1, аммония, сложноэфирных групп, бензила и группы G;
М1 представляет собой Н или Bc;
I равен целому числу от 1 до 3;
и m равен целому числу от 1 до 5;
где по меньшей мере один из X', Y' и Q' включает группу G;
G представляет собой реакционно-способную или функциональную группу, подходящую для присоединения к сМВР-пептиду.
Группа G взаимодействует с комплементарной группой сМВР-пептида, образуя ковалентную связь между флуорофором цианинового красителя и сМВР-пептидом. G может представлять собой реакционно-способную группу, которая может взаимодействовать с комплементарной функциональной группой пептида или, альтернативно, может включать функциональную группу, которая может взаимодействовать с реакционно-способной группой сМВР-пептида. Примеры реакционно-способных и функциональных групп включают: активные сложные эфиры; изотиоцианаты; малеимид; галогеноацетамид; галогенангидрид; гидразид; винилсульфон; дихлортриазин; фосфорамидит; гидроксил; амино; сульфгидрил; карбонил; карбоновую кислоту и тиофосфат. Предпочтительно G представляет собой активный сложный эфир.
Термин "активированный сложный эфир" или "активный сложный эфир" означает сложноэфирное производное ассоциированной карбоновой кислоты, которое является лучшей уходящей группой и поэтому обеспечивает более легкое взаимодействие с нуклеофилом, таким как амины. Примеры подходящих активных сложных эфиров представляют собой: N-гидроксисукцинимид (NHS), сульфо-сукцинимидиловый эфир, пентафторфенол, пентафтортиофенол, пара-нитрофенол, гидроксибензотриазол и РуВОР (то есть гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфония). Предпочтительные активные сложные эфиры представляют собой N-гидроксисукцинимидные или пентафторфенольные сложные эфиры, особенно N-гидроксисукцинимидные сложные эфиры.
В предпочтительном воплощении формулы II:
каждый X' выбран из группы -С(СН3)2- и -С(СН3)[(СН2)4М]-,
где М представляет собой группу G или -SO3M1;
каждый Y' представляет собой SO3M1, Н или 1-4 атома F;
каждый Q' выбран из группы G и SO3M1;
I предпочтительно равен 2, и m предпочтительно равен 3, 4 или 5;
где, когда один из X' или Q' представляет собой группу G, она наиболее предпочтительно представляет собой сукцинимидиловый сложный эфир.
Особенно предпочтительные цианиновые красители представлены формулой III:
где R1 и R2 независимо представляют собой Н или SO3M1, и по меньшей мере один из R1 и R2 представляет собой SO3M1, где М1 представляет собой Н или Bc;
R3 и R4 независимо представляют собой С1-4алкил или C1-6карбоксиалкил;
R5, R6, R7 и R8 независимо представляют собой группы Ra;
где Ra представляет собой С1-4алкил, C1-6карбоксиалкил или -(CH2)kSO3M1, где k равен целому числу 3 или 4;
при условии, что цианиновый краситель имеет суммарно 1-4 заместителя SO3M1 в группах R1, R2 и Ra.
Предпочтительные красители формулы III выбраны таким образом, чтобы присутствовала по меньшей мере одна С1-6карбоксиалкильная группа, для того чтобы облегчить конъюгацию с сМВР.
Предпочтительные индивидуальные красители формулы III перечислены в Таблице 1.
Таблица 1 | ||||
Химические структуры индивидуальных цианиновых красителей | ||||
Таблица 1 | Название красителя | |||
Су5(1) | Су5(2) | Су5** | Alexa647 | |
R1 | Н | SO3H | SO3H | SO3H |
R2 | SO3H | SO3H | SO3H | SO3H |
R3 | СН3 | СН3 | СН3 | Rf |
R4 | СН3 | СН3 | СН3 | СН3 |
R5 | СН3 | СН3 | СН3 | СН3 |
R6 | СН3 | СН3 | -(СН2)4SO3H | СН3 |
R7 | Rf | Rf | Rf | -(СН2)3SO3H |
R8 | СН3 | Et | -(СН2)4SO3H | -(СН2)3SO3H |
где Rf представляет собой -(СН2)5СООН.
Особенно предпочтительные красители формулы II представляют собой Су5** и Alexa647, причем Су5** является наиболее предпочтительным.
Когда присутствует синтетическая линкерная группа (L), она предпочтительно содержит концевые функциональные группы, которые облегчают конъюгацию с [IM] и Z1-[cMBP]-Z2. Когда L содержит пептидную цепь из 1-10 аминокислотных остатков, эти аминокислотные остатки предпочтительно выбраны из глицина, лизина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или серина. Когда L содержит группировку PEG, она предпочтительно содержит структурные единицы, полученные при олигомеризации монодисперсных PEG-подобных структур формул IA или IB:
17-амино-5-оксо-6-аза-3,9,12,15-тетраоксагептадекановая кислота формулы IA, где p равен целому числу от 1 до 10. Альтернативно, может быть использована PEG-подобная структура на основе производного пропионовой кислоты формулы IB:
где p является таким, как определено для формулы IA, и q равен целому числу от 3 до 15.
В формуле IB, p предпочтительно равен 1 или 2, и q предпочтительно равен числу от 5 до 12.
Когда линкерная группа не содержит PEG или пептидную цепь, предпочтительные группы L имеют основную цепь соединенных атомов, образующих группировку -(А)m- из 2-10 атомов, наиболее предпочтительно из 2-5 атомов, особенно предпочтительно из 2 или 3 атомов. Минимальная линкерная группа с основной цепью из 2 атомов дает преимущество в том, что визуализируемая группировка хорошо отделена, так что какое-либо нежелательное взаимодействие минимизировано.
В формуле I, n предпочтительно равен 0 или 1, наиболее предпочтительно 0, то есть не присутствует никаких линкерных групп.
Предпочтительные агенты визуализации по настоящему изобретению представлены формулой IV:
где группа (L)n[IM] присоединена к ε-аминогруппе остатка Lys. Предпочтительные агенты визуализации формулы IV имеют MIG (N-концевой Ala), представляющую собой ацетил, и MIG (С-концевой Lys), представляющую собой первичный амид. В формуле IV n предпочтительно равен нулю, и IM предпочтительно представляет собой цианиновый краситель, наиболее предпочтительно цианиновый краситель формулы II, Особенно предпочтительные агенты визуализации формулы IV имеют IM, представляющую собой Су5** или Alexa647, наиболее предпочтительно Су5**.
Пептиды формулы Z1-[cMBP]-Z2 по настоящему изобретению могут быть получены способом получения, включающим:
(1) твердофазный пептидный синтез линейного пептида, который имеет такую же пептидную последовательность, как и желаемый сМВР-пептид, и в котором Cysa и Cysb не защищены, а остатки Cysc и Cysd имеют защитные группы для тиола;
(2) обработку пептида со стадии (1) водным основанием в растворе с получением моноциклического пептида с первой дисульфидной связью, соединяющей Cysa и Cysb;
(3) удаление с Cysc и Cysd защитных групп для тиола и циклизацию с получением второй дисульфидной связи, соединяющей Cysc и Cysd, с получением желаемого бициклического пептидного продукта Z1-[cMBP]-Z2.
Термин "защитная группа" означает группу, которая ингибирует или подавляет нежелательные химические реакции, но которая предназначена быть достаточно реакционно-способной, так чтобы ее можно было удалить с интересующей функциональной группы в достаточно мягких условиях, которые не изменяют остальную часть молекулы. После удаления защиты получают желаемый продукт. Защитные группы для амино хорошо известны специалистам в данной области техники, и они подходящим образом выбраны из: Boc (где Boc представляет собой трет-бутоксикарбонил), Fmoc (где Fmoc представляет собой флуоренилметоксикарбонил), трифторацетила, аллилоксикарбонила, Dde [то есть 1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)-этил] или Npys (то есть 3-нитро-2-пиридинсульфенил). Подходящие защитные группы для тиола представляют собой Trt (тритил), Асm (ацетамидометил), t-Bu (трет-бутил), трет-бутилтио, метоксибензил, метилбензил или Npys (3-нитро-2-пиридинсульфенил). Использование других защитных групп описано в "Protective Groups in Organic Synthesis", Theorodora W. Greene и Peter G.M.Wuts, (John Wiley & Sons, 1991). Предпочтительные защитные группы для амино представляют собой Воc и Fmoc, наиболее предпочтительно Boc. Предпочтительные защитные группы для амино представляют собой Trt и Acm.
В Примерах 1 и 2 предложено дополнительное конкретное описание. Дополнительные подробности твердофазного пептидного синтеза описаны в Р. Lloyd-Williams, F. Albericio and E. Girald; Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, 1997. сМВР-пептиды лучше всего хранить в атмосфере инертного газа и выдерживать в морозильной камере. При использовании в растворе лучше избегать значений рН выше 7, так как это повышает риск скремблирования дисульфидных мостиков.
Агенты визуализации могут быть получены, как описано в третьем аспекте (ниже).
Во втором аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая агент визуализации по первому аспекту вместе с биосовместимым носителем, в форме, подходящей для введения млекопитающему.
"Биосовместимый носитель" представляет собой жидкость, в частности жидкость, в которой агент визуализации может быть суспендирован или растворен, так чтобы композиция была физиологически переносимой, то есть могла быть введена в организм млекопитающего без проявления токсичности или чрезмерного дискомфорта. Биосовместимый носитель представляет собой подходящим образом инъецируемый жидкий носитель, такой как стерильная апирогенная вода для инъекций; водный раствор, такой как физиологический раствор (который может быть преимущественно отрегулирован так, чтобы конечный продукт для инъекции был изотоническим); водный раствор одного или более чем одного вещества, регулирующего тоничность (например, соли катионов плазмы с биосовместимыми противоионами), сахара (например глюкоза или сахароза), сахарные спирты (например сорбит или маннит), гликоли (например глицерин) или другие неионные полиолы (например полиэтиленгликоли, пропиленгликоли и тому подобное). Предпочтительно, биосовместимый носитель представляет собой апирогенную воду для инъекций или изотонический физиологический раствор.
Агенты визуализации и биосовместимый носитель каждый предложены в подходящих флаконах или сосудах, включающих герметичный контейнер, который обеспечивает поддержание стерильной целостности и/или радиоактивной безопасности, а также, возможно, инертный газ в свободном пространстве над продуктом (например, азот или аргон), в то же время обеспечивая возможность добавления и извлечения растворов шприцем или канюлей. Предпочтительный такой контейнер представляет собой закрытый герметичной мембраной флакон, где газонепроницаемая крышка прижата дополнительным укупорочным средством (как правило, алюминиевым). Указанная крышка является подходящей для прокалывания шприцем или многократного прокалывания иглой для подкожных инъекций (например, герметичная крышка с прижатой мембраной), в то же время сохраняя стерильную целостность. Такие контейнеры имеют дополнительное преимущество в том, что крышка может выдерживать вакуум при необходимости (например, для смены газа в свободном пространстве над продуктом или дегазации растворов) и выдерживать изменения давления, такие как падения давления, не давая возможности при этом проникновения внешних атмосферных газов, таких как кислород или пары воды.
Предпочтительные многодозовые контейнеры включают флакон с единым содержимым (например, объемом от 10 до 30 см3), который содержит множество доз для пациента, причем разовые дозы для пациента могут таким образом быть извлечены в шприцы для клинического применения в различные интервалы времени в течение приемлемого срока годности препарата в соответствии с данной клинической ситуацией. Предварительно заполненные шприцы разработаны для содержания однократной дозы для человека, или "стандартной дозы" и, таким образом, предпочтительно представляют собой одноразовые или другие шприцы, подходящие для клинического применения. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению предпочтительно имеют дозировку, подходящую для индивидуального пациента, и предложены в подходящем шприце или контейнере, как описано выше.
Фармацевтическая композиция возможно может содержать дополнительные эксципиенты, такие как противомикробный консервант, рН-регулирующий агент, наполнитель, стабилизатор или агент, регулирующий осмоляльность. Термин "противомикробный консервант" означает агент, ингибирующий рост потенциально вредных микроорганизмов, таких как бактерии, дрожжи или плесневые грибы. Противомикробный консервант может также проявлять некоторые бактерицидные свойства, в зависимости от используемой дозировки. Основная роль противомикробного(ых) консерванта(ов) по настоящему изобретению заключается в том, чтобы ингибировать рост любого такого микроорганизма в фармацевтической композиции. Однако противомикробный консервант возможно также может быть использован для ингибирования роста потенциально вредных микроорганизмов в одном или более чем одном компоненте наборов, используемых для приготовления указанной композиции перед введением. Подходящие противомикробные консерванты включают: парабены, то есть метил-, этил-, пропил- или бутилпарабен или их смеси; бензиловый спирт; фенол; крезол; цетримид и тиомерсал. Предпочтительные противомикробные консерванты представляют собой парабены.
Термин "рН-регулирующий агент" означает соединение или смесь соединений, применяемых для обеспечения того, чтобы значение рН композиции находилось в пределах приемлемых границ (приблизительно рН от 4,0 до 10,5) для введения человеку или млекопитающему. Подходящие такие рН-регулирующие агенты включают фармацевтически приемлемые буферы, такие как трициновый, фосфатный или TRIS [то есть трис(гидроксиметил)-аминометан], и фармацевтически приемлемые основания, такие как карбонат натрия, бикарбонат натрия или их смеси. Когда композицию используют в форме набора, рН-регулирующий агент возможно может быть предложен в отдельном флаконе или контейнере, так чтобы пользователь данного набора мог регулировать значение рН как часть многостадийной процедуры.
Термин "наполнитель" означает фармацевтически приемлемый наполняющий агент, который может облегчить обработку материала во время производства и лиофилизации. Подходящие наполнители включают неорганические соли, такие как хлорид натрия, и водорастворимые сахара или сахарные спирты, такие как сахароза, мальтоза, маннит или трегалоза.
Фармацевтические композиции по второму аспекту могут быть изготовлены в асептических условиях производства (например, стерильной комнате) с получением желаемого стерильного апирогенного продукта. Предпочтительно, когда ключевые компоненты, особенно ассоциированные реагенты, а также те части оборудования, которые вступают в контакт с агентом визуализации (например, флаконы), были стерильными. Компоненты и реагенты могут быть стерилизованы способами, известными в данной области техники, включая: стерильную фильтрацию, терминальную стерилизацию с использованием, например, гамма-облучения, автоклавирования, сухого нагрева или химической обработки (например, этиленоксидом). Предпочтительно стерилизовать некоторые компоненты заранее, так чтобы требовалось осуществлять минимальное количество манипуляций. Однако, в качестве меры предосторожности, предпочтительно включать по меньшей мере стадию стерильной фильтрации в качестве конечной стадии в изготовлении фармацевтической композиции.
Фармацевтическая композиция по второму аспекту возможно может быть приготовлена из набора, как описано для четвертого аспекта ниже.
В третьем аспекте настоящего изобретения предложен способ получения агента визуализации по первому аспекту, включающий одну из стадий (1)-(4):
(1) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 представляет собой Н, и Z2 представляет собой MIG, с соединением формулы Y1-(L)n-[IM], с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по положению Z1;
(2) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 и Z2 оба представляют собой MIG, и сМВР содержит остаток Asp или Glu в пределах 4 аминокислотных остатков с C- или N-конца сМВР-пептида, а все остальные остатки Asp/Glu сМВР-пептида защищены, с соединением формулы Y2-(L)n-[IM], с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по указанному остатку Asp или Glu данного сМВР-пептида;
(3) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z3, где Z1 представляет собой MIG, и Z3 представляет собой группу Z2 или активированный сложный эфир, а все остальные остатки Asp/Glu сМВР-пептида защищены, с соединением формулы Y2-(L)n-[IM], с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по положению Z2;
(4) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 и Z2 оба представляют собой MIG, и сМВР содержит Lys в пределах 4 аминокислотных остатков с C- или N-конца сМВР-пептида, с соединением формулы Y1-(L)n-[IM], с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по остатку Lys данного сМВР-пептида;
где Z1, сМВР, Z2, MIG, L, n и IM являются такими, как определено в первом аспекте (выше), и
Z3 представляет собой группу Z2 или активированный сложный эфир;
Y1 представляет собой карбоновую кислоту, активированный сложный эфир, изотиоцианатную или тиоцианатную группу;
Y2 представляет собой аминогруппу.
Термины "активированный сложный эфир" или "активный сложный эфир" и их предпочтительные воплощения являются такими, как описано выше. Y2 предпочтительно представляет собой первичную или вторичную аминогруппу, наиболее предпочтительно первичную аминогруппу.
Соединение Z1-[cMBP]-Z2 предпочтительно имеет оба Z1 и Z2, представляющих собой MIG. Предпочтительные сМВР-пептиды и группы Z1/Z2 являются такими, как описано в первом аспекте. В частности, предпочтительно когда сМВР-пептид содержит остаток Asp, Glu или Lys для облегчения конъюгации, как описано для предпочтительных сМВР-пептидов по первому аспекту. Особенно предпочтительно, когда сМВР-пептид содержит остаток Lys, как описано на стадии (4).
Получение Z1-[cMBP]-Z2 описано в первом воплощении (выше). Пептид Z1-[cMBP]-Z3, где Z3 представляет собой активный сложный эфир, может быть получен из Z1-[cMBP]-Z2, где Z2 представляет собой ОН или биосовместимый катион (Bc), общепринятыми способами.
Оптические репортерные красители (IM), функционализированные подходящим образом для конъюгации с пептидами, доступны в продаже от GE Healthcare Limited, Atto-Tec, Dyomics, Molecular Probes и других. Большинство таких красителей доступно в виде NHS сложных эфиров.
Способы конъюгирования подходящих оптических репортеров (IM), в частности красителей, с аминокислотами и пептидами описаны Licha (см. выше), а также Flanagan et al. [Bioconj. Chem., 8, 751-756 (1997)]; Lin et al., [ibid, 13, 605-610 (2002)] и Zaheer [Mol. Imaging, 1(4), 354-364 (2002)]. В способах конъюгирования линкерной группы (L) с сМВР-пептидом используют химические технологии, аналогичные тем, в которых участвуют красители в отдельности (см. выше), и они известны в данной области техники.
В четвертом аспекте настоящего изобретения предложен набор для приготовления фармацевтической композиции по второму аспекту, содержащий агент визуализации по первому аспекту в стерильной твердой форме, так что после разбавления стерильной добавкой биосовместимого носителя по второму аспекту происходящее растворение дает желаемую фармацевтическую композицию.
В этом отношении агент визуализации и другие возможные эксципиенты, как описано выше, могут быть предложены в виде лиофилизированного порошка в подходящем флаконе или контейнере. В таком случае агент предназначен для разведения желаемым биосовместимым носителем с получением фармацевтической композиции в стерильной апирогенной форме, готовой для введения млекопитающему.
Предпочтительная стерильная твердая форма агента визуализации представляет собой лиофилизированное твердое вещество. Стерильная твердая форма предпочтительно предложена в контейнере фармацевтической категории, как описано для фармацевтической композиции (выше). Когда набор лиофилизирован, препарат возможно может содержать криопротектор, выбранный из сахарида, предпочтительно маннита, мальтозы или трицина.
В пятом аспекте настоящего изобретения предложен способ оптической визуализации организма млекопитающего in vivo, включающий использование агента визуализации по первому аспекту или фармацевтической композиции по второму аспекту с получением изображений сайтов сверхэкспрессии или локализации cMet in vivo.
Термин "оптическая визуализация" означает любой способ, в котором получают изображение, для детектирования, определения стадии заболевания или диагностики заболевания, отслеживания развития заболевания или для отслеживания лечения заболевания, на основе взаимодействия со светом в области спектра от красной до ближней инфракрасной (длина волны 600-1200 нм). Оптическая визуализация дополнительно включает все способы от прямой визуализации без использования какого-либо устройства, и включая использование устройств, таких как различные видеоизмерительные приборы, катетеры и оборудование для оптической визуализации, например автоматизированное оборудование для томографических изображений. Средства и способы измерений включают: люминесцентную визуализацию; эндоскопию; флуоресцентную эндоскопию; оптическую когерентную томографию; визуализацию по коэффициенту пропускания; регулируемую по времени визуализацию по коэффициенту пропускания; конфокальную визуализацию; нелинейную микроскопию; фотоакустическую визуализацию; акустооптическую визуализацию; спектроскопию; отражательную спектроскопию; интерферометрию; когерентную интерферометрию; диффузную оптическую томографию и опосредованную флуоресценцией диффузную оптическую томографию (системы, работающие в непрерывном режиме, временные и частотные системы), и измерение светорассеяния, поглощения, поляризации, люминесценции, времени жизни флуоресценции, квантового выхода и гашения флуоресценции, но не ограничены ими. Дополнительные подробности этих методик предложены в: (Tuan Vo-Dinh (редактор): "Biomedical Photonics Handbook" (2003), CRC Press LCC; Mycek & Pogue (редакторы): "Handbook of Biomedical Fluorescence" (2003), Marcel Dekker, Inc.; Splinter & Hopper: "An Introduction to Biomedical Optics" (2007), CRC Press LCC.
Область спектра от зеленой до ближней инфракрасной предпочтительно представлена длинами волн 600-1000 нм. Способ оптической визуализации предпочтительно представляет собой флуоресцентную эндоскопию. Организм млекопитающего по пятому аспекту предпочтительно представляет собой организм человека. Предпочтительные воплощения агента визуализации являются такими, как описано для первого аспекта (выше). В частности, предпочтительно, когда используют флуоресцентный краситель.
В способе по пятому аспекту агент визуализации или фармацевтическую композицию предпочтительно предварительно вводят в указанный организм млекопитающего. Термин "предварительно вводят" означает, что данная стадия, включающая участие лечащего врача, который дает агент визуализации пациенту, например, в виде внутривенной инъекции, уже была осуществлена до визуализации. Это воплощение включает использование агента визуализации по первому воплощению для производства диагностического агента для диагностической визуализации болезненных состояний организма млекопитающего in vivo, в которые вовлечен cMet.
Предпочтительный способ оптической визуализации по пятому аспекту представляет собой флуоресцентную отражательную визуализацию (Fluorescence Reflectance Imaging, FRI). При FRI агент визуализации по настоящему изобретению вводят субъекту, подлежащему диагностике, и затем поверхность ткани субъекта просвечивают возбуждающим светом, как правило, с возбуждением незатухающих волн (CW). Свет возбуждает репортерную молекулу (IM). Флуоресценцию от агента визуализации, которая генерируется возбуждающим светом, детектируют с использованием детектора флуоресценции. Отраженный свет предпочтительно фильтруют для отделения флуоресцентного компонента (исключительно или частично). На основе флуоресцентного свечения формируют изображение. Как правило, проводят минимальную обработку (не используя процессор для расчета оптических параметров, таких как время жизни, квантовый выход и другие), и данное изображение отображает интенсивность флуоресценции. Агент визуализации предназначен для концентрирования в пораженной области, вызывая более высокую интенсивность флуоресценции. Таким образом, болезненная область дает положительный контраст в картине интенсивности флуоресценции. Изображение предпочтительно получают с использованием ПЗС-камеры или чипа, так что возможна визуализация в режиме реального времени.
Длину волны возбуждения варьируют в зависимости от типа используемого красителя. Оборудование для генерирования возбуждающего света может представлять собой традиционный источник возбуждающего света, такой как: лазер (например ионный лазер, лазер на красителях или полупроводниковый лазер); источник галогенового света или источник ксенонового света. Различные оптические фильтры возможно могут быть использованы для получения оптимальной длины волны возбуждения.
Предпочтительный способ FRI включает следующие стадии:
(1) поверхность интересующей ткани в организме млекопитающего просвечивают возбуждающим светом;
(2) используя детектор флуоресценции, детектируют флуоресценцию от агента визуализации, генерируемую путем возбуждения визуализируемой группировки (IM);
(3) свет, детектируемый детектором флуоресценции, возможно фильтруют для отделения флуоресцентного компонента;
(4) из флуоресцентного свечения на стадиях (2) или (3) формируют изображение указанной поверхности интересующей ткани.
На стадии (1) возбуждающий свет предпочтительно представляет собой незатухающую волну (CW) по природе. На стадии (3) детектируемый свет предпочтительно фильтруют. Особенно предпочтительный способ FRI представляет собой флуоресцентную эндоскопию.
В альтернативном способе визуализации по пятому аспекту используют миграцию фотонов в частотной области (frequency-domain photon migration, FDPM). Это имеет преимущества перед способами, использующими незатухающую волну (CW), где важна более глубокая степень детектирования IM в ткани [Sevick-Muraca et al., Curr. Opin. Chem. Biol., 6, 642-650 (2002)]. Для такой частотной/временной визуализации предпочтительно, если IM имеет флуоресцентные свойства, которые можно модулировать в зависимости от глубины поражения ткани, подлежащей визуализации, и типа используемого оборудования.
Способ FDPM осуществляют следующим образом:
(а) светорассеивающую биологическую ткань указанного организма млекопитающего, имеющую гетерогенный состав, подвергают воздействию света от источника света с заранее установленной варьируемой по времени интенсивностью для возбуждения агента визуализации, при котором наблюдают многократное рассеяние возбуждающего света в указанной ткани;
(б) детектируют многократно рассеянное световое излучение от ткани в ответ на указанное воздействие;
(в) проводят количественное определение параметра флуоресценции по всей ткани на основании этого излучения путем установления ряда показателей с использованием процессора, где каждый из показателей соответствует уровню параметра флуоресценции в различных положениях в пределах этой ткани и где данный уровень параметра флуоресценции варьирует согласно гетерогенному составу этой ткани; и
(г) генерируют изображение этой ткани путем построения изображения гетерогенного состава ткани в соответствии с показателями стадии (в).
Параметр флуоресценции стадии (в) предпочтительно соответствует захвату агента визуализации и предпочтительно дополнительно включает сопоставление ряда количественных показателей в соответствии с коэффициентами поглощения и рассеяния в данной ткани до введения агента визуализации. Параметр флуоресценции стадии (в) предпочтительно соответствует по меньшей мере одному из следующих: времени жизни флуоресценции, квантовому выходу флуоресценции, выходу флуоресценции и захвату агента визуализации. Параметр флуоресценции предпочтительно не зависит от интенсивности испускания и не зависит от концентрации агента визуализации.
Количественное определение на стадии (в) предпочтительно включает: (1) установление оценочного показателя, (2) определение рассчитанного испускания как функции данного оценочного показателя, (3) сравнение рассчитанного испускания с испусканием при указанном детектировании для определения ошибки, (4) предложение модифицированного оценочного показателя флуоресценции как функции ошибки. Количественное определение предпочтительно включает определение показателей на основе математической зависимости, моделирующей поведение многократного рассеяния света данной тканью. Способ по первому варианту предпочтительно включает мониторинг метаболического свойства ткани in vivo путем детектирования варьирования указанного параметра флуоресценции.
Оптическую визуализацию по пятому аспекту предпочтительно используют для облегчения тактики ведения больных колоректальным раком (CRC). Термин "тактика ведения больных CRC" означает использование в детектировании, определении стадии заболевания, диагностике, мониторинге прогрессирования заболевания или мониторинге лечения. Дополнительные подробности подходящих способов оптической визуализации рассмотрены Sevick-Muraca et al. [Curr. Opin. Chem. Biol., 6, 642-650 (2002)].
В шестом аспекте настоящего изобретения предложен способ детектирования, определения стадии заболевания, диагностики заболевания, мониторинга прогрессирования заболевания или мониторинга лечения колоректального рака (CRC) организма млекопитающего, включающий способ оптической визуализации in vivo по пятому аспекту.
Данное изобретение проиллюстрировано неограничивающими Примерами, подробно описанными ниже. В Примере 1 предложен синтез сМВР-пептида по изобретению (Соединение 1). В Примере 2 предложен синтез родственного пептида в качестве отрицательного контроля, в котором пептидная последовательность Соединения 1 подвергнута скремблированию. В Примере 3 предложен синтез цианинового красителя Су5**, предпочтительного красителя согласно изобретению. В Примере 4 предложен синтез активного сложного эфира Су5**. В Примере 5 предложена конъюгация цианиновых красителей по изобретению с пептидами (сМВР-пептидом и контролем). Соединения 3-7 сравнивали таким образом. В Примере 6 предложен способ определения аффинности пептидов в отношении cMet in vitro. Результаты показывают, что связывание является избирательным, даже когда присоединена оптическая репортерная визуализируемая группировка (цианиновый краситель). В Примере 7 предложены данные по тестированию in vivo Соединений 5 и 7 на животной модели рака. Показаны превосходные соотношения опухоль:фон для Соединения 5, в то время как для Соединения 7 (отрицательный контроль) не выявлено никаких отличий между опухолью и фоном.
Сокращения
Использованы общепринятые однобуквенные или 3-буквенные сокращения аминокислот.
Асm: | ацетамидометил |
ACN (или MeCN): | ацетонитрил |
Boc: | трет-бутилоксикарбонил |
DCM: | дихлорметан |
DMF: | диметилформамид |
DMSO: | диметилсульфоксид |
Fmoc: | 9-флуоренилметоксикарбонил |
HBTU: | гексафторфосфат O-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетраметилурония |
ВЭЖХ: | высокоэффективная жидкостная хроматография |
HSPyU | гексафторфосфат O-(N-сукцинимидил)-N,N,N',N'-тетраметиленурония |
NHS: | N-гидрокси-сукцинимид |
NMM: | N-метилморфолин |
NMP: | 1-метил-2-пирролидинон |
Pbf: | 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил |
PBS: | забуференный фосфатом физиологический раствор |
tBu: | трет-бутил |
TFA: | трифторуксусная кислота |
TIS: | триизопропилсилан |
Trt: | тритил |
Таблица 2 | |
Структуры соединений по изобретению | |
No. | Структура соединений |
1 | AC-AGSCYCSGPPRFECWCYETEGTGGGK-NH2 |
2 | AC-TGECTCPYWEFRPCECGSYSGAGGGK-NH2 (отрицательный контроль) |
3 | |
Ac-AGSCYCSGPPRFECWCYETEGTGGGK(ε-Cy5)-NH2 | |
4 | |
(отрицательный контроль) |
5 | |
Ac-AGSCYCSGPPRFECWCYETEGTGGGK(ε-Cy5**)-NH2 | |
6 | Ac-AGSCYCSGPPRFECWCYETEGTGGGK(ε-Alexa647)-NH2 |
7 | Ac-TGECTCPYWEFRPCECGSYSGAGGGK(ε-Cy5**)-NH2 (отрицательный контроль) |
Пример 1: Синтез Соединения 1
Стадия (а): синтез защищенного линейного пептида-предшественника
Линейный пептид-предшественник имеет структуру:
Ac-Ala-Gly-Ser-Cys-Tyr-Cys(Acm)-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys(Acm)-Trp-Cys-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-GIy-Gly-Lys-NH2
Пептидил-смолу H-Ala-Gly-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Cys(Acm)-Ser(tBu)-Gly-Pro-Pro-Arg(Pbf)-Phe-Glu(OtBu)-Cys(Acm)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(ψMe,Mepro)-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Gly-Gly-Gly-Lys(Boc)-полимер синтезировали на пептидном синтезаторе Applied Biosystems 433A с использованием Fmoc-химии, начиная с 0,1 ммоль смолы Rink Amide Novagel. На следующих стадиях сочетания наносили избыток 1 ммоль предварительно активированных аминокислот (используя HBTU). В эту последовательность встраивали Glu-Thr-псевдопролин (Novabiochem 05-20-1122). Смолу переносили в продуваемый азотом аппарат и обрабатывали раствором уксусного ангидрида (1 ммоль) и NMM (1 ммоль), растворенного в DCM (5 мл) в течение 60 минут. Раствор ангидрида удаляли путем фильтрования и смолу промывали DCM и сушили в потоке азота.
Одновременное удаление защитных групп боковой цепи и отщепление пептида от смолы осуществляли в TFA (10 мл), содержащей 2,5% TIS, 2,5% 4-тиокрезола и 2,5% воды в течение 2 часов 30 минут. Смолу удаляли путем фильтрования, TFA удаляли в вакууме и к остатку добавляли диэтиловый эфир. Образованный осадок промывали диэтиловым эфиром и сушили на воздухе с получением 264 мг неочищенного пептида.
Очистка посредством препаративной ВЭЖХ (градиент: 20-30% B в течение 40 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 10 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 5µ С18 (2) 250×21,20 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 30 мин) неочищенного пептида дала 100 мг чистого линейного предшественника Соединения 1. Чистый продукт анализировали посредством аналитической ВЭЖХ (градиент: 10-40% B в течение 10 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 0,3 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 3µ С18 (2) 50×2 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 6,54 мин). Дополнительную характеристику продукта осуществляли с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1464,6, обнаружено: 1465,1).
Стадия (б): Образование моноциклического Cys4-16 дисульфидного мостика
Cys4-16; Ac-Ala-Gly-Ser-Cys-Tyr-Cys(Acm)-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys(Acm)-Trp-Cys-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys-NH2
Линейный предшественник со стадии (а) (100 мг) растворяли в смеси 5% DMSO/вода (200 мл) и рН этого раствора доводили до значения рН 6, используя аммиак. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 суток. Затем рН этого раствора доводили до значения рН 2, используя TFA, и наибольшую часть растворителя удаляли путем выпаривания в вакууме. Остаток (40 мл) впрыскивали порциями в колонку для препаративной ВЭЖХ для очистки продукта.
Очистка посредством препаративной ВЭЖХ (градиент: 0% B в течение 10 мин, затем 0-40% B в течение 40 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 10 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 5µ C18 (2) 250×21,20 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 44 мин) остатка дала 72 мг чистого моноциклического предшественника Соединения 1.
Чистый продукт (в виде смеси изомеров Р1-Р3) анализировали посредством аналитической ВЭЖХ (градиент: 10-40% B в течение 10 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой АСN/0,1% TFA, скорость потока: 0,3 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 3µ C18 (2) 50×2 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 5,37 мин (Р1); 5,61 мин (Р2); 6,05 мин (Р3)). Дополнительную характеристику продукта осуществляли с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1463,6, обнаружено: 1464,1 (Р1); 1464,4 (Р2); 1464,3 (Р3)).
Стадия (в): Образование вторичного Cys6-14 дисульфидного мостика (Соединение 1)
Моноциклический предшественник со стадии (б) (72 мг) растворяли в смеси 75% АсОН/вода (72 мл) под защитным слоем азота. Добавляли 1 М HCl (7,2 мл) и 0,05 М I2 в АсОН (4,8 мл) в указанном порядке и эту смесь перемешивали в течение 45 мин. Добавляли 1 М аскорбиновую кислоту (1 мл) с получением бесцветной смеси. Наибольшую часть растворителей выпаривали в вакууме и остаток (18 мл) разбавляли смесью вода/0,1% TFA (4 мл) и продукт очищали, используя препаративную ВЭЖХ.
Очистка посредством препаративной ВЭЖХ (градиент: 0% B в течение 10 мин, затем 20-30% B в течение 40 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 10 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 5µ C18 (2) 250×21,20 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 43-53 мин) данного остатка дала 52 мг чистого Соединения 1.
Чистый продукт анализировали посредством аналитической ВЭЖХ (градиент: 10-40% B в течение 10 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 0,3 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 3µ C18 (2) 50×2 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 6,54 мин). Дополнительное определение характеристик осуществляли с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1391,5, обнаружено: 1392,5).
Пример 2: Синтез Соединения 2
Ac-Thr-Gly-Glu-Cys-Thr-Cys(Acm)-Pro-Tyr-Trp-Glu-Phe-Arg-Pro-Cys(Acm)-Glu-Cys-Gly-Ser-Tyr-Ser-Gly-Ala-Gly-Gly-Gly-Lys-NH2
Соединение 2 представляет собой отрицательный контроль, где пептидная последовательность Соединения 1 была подвергнута скремблированию.
Стадия (а): синтез защищенного линейного пептида-предшественника
Пептидил-смолу H-Thr(tBu)-Gly-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Cys(Acm)-Pro-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Glu(OtBu)-Phe-Arg(Pbf)-Pro-Cys(Acm)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Gly-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(ψMe,Mepro)-Gly-Ala-Gly-Gly-Gly-Lys(Boc)-полимер синтезировали на пептидном синтезаторе Applied Biosystems 433A с использованием Fmoc-химии, начиная с 0,1 ммоль смолы Rink Amide Novagel. На стадиях сочетания наносили избыток 1 ммоль предварительно активированных аминокислот (используя HBTU). В эту последовательность встраивали Tyr-Ser-псевдопролин (Novabiochem 05-20-1014). Смолу переносили в продуваемый азотом аппарат и обрабатывали раствором уксусного ангидрида (1 ммоль) и NMM (1 ммоль), растворенного в DCM (5 мл) в течение 60 минут. Раствор ангидрида удаляли путем фильтрования и смолу промывали DCM и сушили в потоке азота.
Одновременное удаление защитных групп боковой цепи и отщепление пептида от смолы осуществляли в TFA (10 мл), содержащей 2,5% TIS, 2,5% 4-тиокрезола и 2,5% воды в течение 2 часов 10 минут. Смолу удаляли путем фильтрования, TFA удаляли в вакууме и к остатку добавляли диэтиловый эфир. Образованный осадок промывали диэтиловым эфиром и сушили на воздухе с получением 216 мг неочищенного пептида.
Очистка посредством препаративной ВЭЖХ (градиент: 20-30% B в течение 40 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 50 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 5µ C18 (2) 250×50 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 34,1 мин) неочищенного пептида дала чистый DX-1662 отрицательный контроль линейного предшественника, растворенного в 200 мл смеси ACN/вода. Чистый продукт анализировали посредством аналитической ВЭЖХ (градиент: 10-40% B в течение 5 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 0,6 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 3µ C18 (2) 20×2 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 3,52 мин). Дополнительную характеристику продукта осуществляли с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1464,6, обнаружено; 1464,9).
Стадия (б): Образование моноциклического Cys4-16 дисульфидного мостика
Cys4-16; Ac-Thr-Gly-Glu-Cys-Thr-Cys(Acm)-Pro-Tyr-Trp-Glu-Phe-Arg-Pro-Cys(Acm)-Glu-Cys-Gly-Ser-Tyr-Ser-Gly-Ala-Gly-Gly-Gly-Lys-NH2
К раствору отрицательного контроля линейного предшественника со стадии (а) (200 мл, см. 4.3.1) добавляли DMSO (10 мл) и рН этого раствора доводили до значения рН 7, используя аммиак. Реакционную смесь нагревали при 40°C в течение 18 часов, затем при 60°C в течение 60 мин. Значение рН этого раствора доводили до рН 2, используя TFA, и ACN удаляли путем выпаривания в вакууме. Этот остаток подвергали очистке препаративной ВЭЖХ.
Очистка посредством препаративной ВЭЖХ (градиент: 0% B в течение 5 мин, затем 20-30% B в течение 60 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой АСМ/0,1% TFA, скорость потока: 50 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 5µ C18 (2) 250×50 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 29,6 мин) остатка дала чистый отрицательный контроль моноциклического предшественника в 100 мл смеси ACN/вода. Чистый продукт анализировали посредством аналитической ВЭЖХ (градиент: 10-40% B в течение 5 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 0,6 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 3µ C18 (2) 20×2 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 3,46 мин). Дополнительное определение характеристик осуществляли с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1463,6, обнаружено: 1463,7).
Стадия (в): Образование вторичного Cys6-14 дисульфидного мостика (Соединение 2)
Cys4-16, 6-14; Ac-Thr-Gly-Glu-Cys-Thr-Cys-Pro-Tyr-Trp-Glu-Phe-Arg-Pro-Cys-Glu-Cys-Gly-Ser-Tyr-Ser-Gly-Ala-Gly-Gly-Gly-Lys-NH2
Раствор отрицательного контроля моноциклического предшественника со стадии (б) (100 мл) разбавляли АсОН (100 мл). Добавляли 1 М HCl (5 мл) и 0,05 М I2 в АсОН (7 мл) в указанном порядке под защитным слоем аргона и эту смесь перемешивали в течение 20 мин. Добавляли 1 М аскорбиновую кислоту (1 мл) с получением бесцветной смеси. Наибольшую часть растворителей выпаривали в вакууме и остаток (30 мл) разбавляли смесью вода/0,1% TFA (100 мл) и продукт очищали, используя препаративную ВЭЖХ.
Очистка посредством препаративной ВЭЖХ (градиент: 0% B в течение 10 мин, затем 20-30% B в течение 60 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 50 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 5µ C18 (2) 250×50 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 32,8 мин) данного остатка дала 30 мг чистого Соединения 2. Чистый продукт анализировали посредством аналитической ВЭЖХ (градиент: 10-40% B в течение 10 мин, где А представляет собой H2O/0,1% TFA, и В представляет собой ACN/0,1% TFA, скорость потока: 0,3 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 3µ C18 (2) 50×2 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 6,54 мин). Дополнительное определение характеристик осуществляли с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1391,5, обнаружено: 1392,5).
Пример 3: Синтез цианинового красителя 2-{(1Е,3Е,5Е)-5-[1-(5-карбоксипентил)-3,3-диметил-5-сульфо-1,3-дигидро-2H-индол-2-илиден]-пента-1,3-диенил}-3-метил-1,3-бис(4-сульфобутил)-3H-индолий-5-сульфоната (Cy5**)
(3а) 5-Метил-6-оксопентан-1-сульсЬоновая кислота
К суспензии гидрида натрия (12,0 г, 60% NaH в минеральном масле) в DMF (100 мл) добавляли по каплям этил-2-метилацетоацетат (50 г) в DMF (25 мл) при охлаждении на ледяной бане в течение 1 часа (внутренняя температура 0-4°C). Эту смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды в течение 45 мин при перемешивании, а затем снова охлаждали. Затем добавляли по каплям в течение 15 минут раствор 1,4-бутансультона (45 г) в DMF (25 мл). Конечную смесь нагревали при 60°C в течение 18 часов. Растворитель удаляли роторным испарением и остаток распределяли между водой и диэтиловым эфиром. Водный слой собирали, промывали свежей порцией диэтилового эфира и подвергали роторному испарению с получением клейкой пены. Это промежуточное вещество растворяли в воде (100 мл) и добавляли гидроксид натрия (17,8 г) в течение 15 минут при перемешивании. Эту смесь нагревали при 90°C в течение 18 часов. Значение рН охлажденной реакционной смеси доводили до ~рН 2 добавлением концентрированной соляной кислоты (~40 мл). Раствор подвергали упариванию на роторном испарителе и сушили в вакууме. Желтое твердое вещество промывали этанолом, содержащим 2% соляной кислоты (3×150 мл). Этанольный раствор фильтровали, упаривали на роторном испарителе и сушили в вакууме с получением желтого твердого вещества. Выход 70 г.
(3б) Дикалиевая соль 2,3-диметил-3-(4-сульфобутил)-3Н-индол-5-сульфоновой кислоты
4-Гидразинобензолсульфоновую кислоту (40 г), 5-метил-6-оксогептан-1-сульфоновую кислоту (из 3а; 60 г) и уксусную кислоту (500 мл) смешивали и кипятили с обратным холодильником в течение 6 часов. Растворитель отфильтровывали, выпаривали на роторном испарителе и сушили в вакууме. Твердое вещество растворяли в метаноле (1 л). К нему добавляли 2 М метанольный гидроксид калия (300 мл). Эту смесь перемешивали в течение 3 часов и затем объем растворителя сокращали на 50%, используя роторное испарение. Полученный осадок отфильтровывали, промывали метанолом и сушили в вакууме. Выход 60 г. MS (LCMS): MH+ 362. Асс. Mass: Обнаружено 362,0729. МН+=C14H20NO6S2 требует m/z 362,0732 (-0,8 млн-1).
(3в) Дикалиевая соль 2,3-диметил-1,3-бис(4-сульфобутил)-3Н-индолий-5-сульфоната
2,3-Диметил-3-(4-сульфобутил)-3Н-индол-5-сульфоновую кислоту (из 3б; 60 г) нагревали с 1,4-бутансультоном (180 г) и тетраметиленсульфоном (146 мл) при 140°C в течение 16 часов. Полученное красное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром, растирали в порошок и сушили в вакууме. Выход 60 г.
(3г) Су5** в виде TFA соли
K+-соль 1-(5'-карбоксипентил)-2,3,3-триметил-индолийбромид-5-сульфоновой кислоты (2,7 г), моногидрохлорид бис(фенилимин)малонового альдегида (960 мг), уксусный ангидрид (36 мл) и уксусную кислоту (18 мл) нагревали при 120°C в течение 1 часа с получением темно-коричнево-красного раствора. Эту реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды. К этой смеси добавляли 2,3-диметил-1,3-бис(4-сульфобутил)-3Н-индолий-5-сульфонат (из 3в; 8,1 г) и ацетат калия (4,5 г) и перемешивали в течение 18 часов при температуре окружающей среды. Полученный синий раствор осаждали с использованием этилацетата и сушили в вакууме. Неочищенный краситель очищали посредством жидкостной хроматографии (RPC18. градиент вода + 0,1% TFA/MeCN + 0,1% TFA). Фракции, содержащие основной пик красителя, собирали, объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке красителя, 2 г. УФ/Vis (вода + 0,1% ТFА): 650 нм. MS (Времяпролетная масс-спектрометрия с ионизацией методом лазерной десорбции из матрицы (MALDI-TOF)): MH+ 887,1. MH+=C38H50N2O14S4 требует m/z 887,1.
Пример 4: Синтез диизопропилэтиламинной соли 2-[(1Е,3Е,5Е)-5-(1-{6-[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]-6-оксогексил}-3,3-диметил-5-сульфо-1,3-дигидро-2H-индол-2-илиден)пента-1,3-диенил]-3-метил-1,3-бис(4-сульфобутил)-3H-индолий-5-сульфоната (NHS сложный эфир Су5**)
Су5** (Пример 3; 10 мг) растворяли в безводном DMSO (3 мл); к нему добавляли HSPyU (20 мг) и N,N'-диизопропилэтиламин (80 мкл). Полученный раствор перемешивали в течение 3 часов, по окончании которых TLC (RPC18 вода/МеСN) выявила завершение реакции. Краситель выделяли путем осаждения в этилацетате/диэтиловом эфире, отфильтровывали, промывали этилацетатом и сушили в вакууме. УФ/Vis (вода) 650 нм. MS (MALDI-TOF) MH+ 983,5. MH+=C42H53N3O16S4 требует m/z 984,16.
Пример 5: Конъюгация красителей, синтез Соединений 3-7
Cys4-16, 6-14; Ac-Ala-Gly-Ser-Cys-Tyr-Cys-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys-Trp-Cys-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys(Cy5)-NH2 (Соединение 3)
Соединение 1 (10 мг), NMM (4 мкл) и NHS сложный эфир Су5 (5,7 мг; GE Healthcare PA15104) растворяли в NMP (1 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 7 часов. Затем эту реакционную смесь разбавляли смесью 5% ACN/вода (8 мл) и продукт очищали, используя препаративную ВЭЖХ.
Очистка посредством препаративной ВЭЖХ (градиент: 5-50% B в течение 40 мин, где А представляет собой H2O/0,1% HCOOH, и В представляет собой ACN/0,1% HCOOH, скорость потока: 10 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 5µ С18 (2) 250×21,20 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 35,5 мин) неочищенного пептида дала 8,1 мг чистого Соединения 3. Чистый продукт анализировали посредством аналитической ВЭЖХ (градиент: 5-50% B в течение 10 мин, где А представляет собой H2O/0,1% HCOOH, и В представляет собой ACN/0,1% HCOOH, скорость потока: 0,3 мл/мин, колонка: Phenomenex Luna 3µ С18 (2) 50×2 мм, детектирование: УФ 214 нм, время удерживания продукта: 8,15 мин). Дополнительное определение характеристик осуществляли с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1710,6, обнаружено: 1711,0).
Соединение 4 получали аналогичным образом; масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением ( рассчитано: 1710,6, обнаружено: 1710,9).
Другие конъюгаты краситель-пептид (Соединения 5-7) получали аналогичными способами. Alexa647 был предоставлен Molecular Probes (А20106):
Пример 6: анализ поляризации флуоресценции in vitro
Принцип метода поляризации флуоресценции может быть вкратце описан следующим образом:
Монохроматический свет проходит через горизонтальный поляризующий фильтр и возбуждает флуоресцентные молекулы в образце. Только те молекулы, которые правильно ориентированы в вертикально поляризованной плоскости светопоглощения, возбуждаются и затем испускают излучение. Испускаемое излучение измеряют как в горизонтальной, так и в вертикальной плоскостях. Показатель анизотропии (А) представляет собой соотношение между интенсивностями света согласно следующему уравнению:
Измерения анизотропии флуоресценции осуществляли в 384-луночных микропланшетах в объеме 10 мкл в буфере для связывания (забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), 0,01% Tween-20, pH 7,5) с использованием планшет-ридера поляризации флуоресценции Tecan Safire (Tecan, США) при возб.646/испуск.678 нм. Концентрацию меченого красителем пептида сохраняли постоянной (20 нМ) и концентрации человеческих или мышиных c-Met/Fc химер (R&D Systems) или Semaphorin 6A (R&D Systems) варьировали в диапазоне 0-150 нМ. Смеси для связывания уравновешивали в микропланшете в течение 10 минут при 30°C. Наблюдаемое изменение в анизотропии подгоняли под уравнение:
где robs представляет собой наблюдаемую анизотропию, rfree представляет собой анизотропию свободного пептида, rbound представляет собой анизотропию связанного пептида, KD представляет собой константу диссоциации, cMet представляет собой общую концентрацию c-Met, и Р представляет собой общую концентрацию меченого красителем пептида. Это уравнение допускает, что синтетический пептид и рецептор образуют обратимый комплекс в растворе в стехиометрическом соотношении 1:1. Аппроксимацию данных проводили через нелинейную регрессию, используя программное обеспечение GraphPad Prism, с получением значения KD (связывание по одному сайту).
Соединения 3 и 4 были протестированы в отношении связывания человеческого и мышиного c-Met (Fc химера). Результаты показали, что КD составляет 3+/-1 нМ в отношении связывания Соединения 3 с человеческим с-Met. Никакого связывания не наблюдалось для Соединения 4 с человеческим с-Met. Кроме того, Соединения 3 и 4 не показали никакого связывания с мышиным c-Met в тестированном диапазоне.
С использованием этого же метода было обнаружено, что Соединение 5 имеет KD 1,1 нМ в отношении человеческого cMet.
Пример 7: тестирование Соединений 5 и 7 in vivo
(а) Животная модель
В данном исследовании использовали бестимусных мышей 54 Female BALB с/А с мутацией по гену nude (Bom). Использование этих животных одобрено местным комитетом по соблюдению этических норм исследования. BALB с/А nude представляет собой инбредную мышиную линию с нарушенной иммунологической реактивностью, имеющую высокую степень развития человеческих опухолей по сравнению с другими мышиными линиями nude. Мыши были 4-недельного возраста после прибытия и имели массу тела приблизительно 20 грамм в начале исследования. Животных содержали в индивидуальных проветриваемых клетках (IVC, Scanbur BK) с фильтруемым через высокоэффективный воздушный фильтр (НЕРА) воздухом. Животные имели неограниченный доступ к корму "Rat и Mouse nr. 3 Breeding" (Scanbur BK) и водопроводной воде, подкисляемой добавлением HCl до молярной концентрации 1 мМ (рН 3,0).
Клетки колоректального рака НСТ-15 имеют происхождение из человеческих карцином толстого кишечника и экспрессируют c-Met, как сообщалось согласно Zeng et al. [Clin. Exp. Metastasis, 21, 409-417. (2004)]. Доказано, что эта клеточная линия является онкогенной при подкожной инокуляции мышам nude [Flatmark et al., Eur. J. Cancer 40, 1593-1598 (2004)].
Клетки НСТ-15 выращивали и готовили для подкожной инокуляции в среде RPMI (Sigma, номер по каталогу # R0883) с 10% сывороткой и пенициллином/стрептомицином. Штаммы подвергали четырем пассажам и пассаж номер четыре (Р4) замораживали для хранения в жидком азоте при концентрации 3×107 клеток/флакон в культуральной среде, содержащей 5% диметилсульфоксид (DMSO). В день трансплантации клетки подвергали быстрому оттаиванию в водяной бане на 37°C (приблизительно 2 мин), промывали и ресуспендировали в PBS/2% сыворотке (центрифугирование при 1200 об/мин в течение 10 мин). Тщательное перемешивание клеток во флаконах обеспечивали каждый раз при их аспирации в дозирующий шприц. Клеточные суспензии объемом 0,1 мл инъецировали подкожно (s.c.) в лопаточную область и область спины, используя иглу с отверстием небольшого размера (25 G), в то время как животные находились под действием анестезии легким газом. Затем животных возвращали в свои клетки и оставляли для роста опухолей на 13-17 суток. Животным давали период акклиматизации по меньшей мере 5 суток перед процедурой инокуляции.
(б) Процедура
Все тестируемые вещества разбавляли PBS из лиофильно высушенного порошка. Небольшую стопку белой бумаги для принтера подвергали визуализации с получением плоскостного изображения, которое использовали для коррекции неоднородностей просвечивания. Тестируемые вещества инъецировали внутривенно в латеральную часть хвостовой вены при физической фиксации. Инъецируемый объем составлял 0,1 мл, что соответствует дозе 1 нмоль тестируемого вещества на животное. После инъекции животных возвращали в свои клетки. Животных умерщвляли непосредственно перед визуализацией путем смещения шейных позвонков. Для каждого тестируемого вещества отмечали момент времени оптимальной визуализации, основываясь на сравнении скоростей вымывания в коже и в мышечной ткани у ограниченного количества животных (n равен 1-6). Момент времени визуализации для Соединений 3 и 4 составил 120 минут после инъекции. Для каждого животного производили подкожные патологоанатомические срезы выросших опухолей. Тонкую пластинку толщиной приблизительно 1,6 мм и 3-4 мм в диаметре отделяли с края одной из опухолей. Этот срез опухоли затем подвергали визуализации против участка нормальной толстой кишки из того же самого животного.
(в) Визуализация
Визуализацию осуществляли через клинический лапароскоп, адаптированный для использования источника света для возбуждения репортера и фильтрующей системы для извлечения флуоресцентного компонента. Лазер 635 нм использовали для возбуждения репортерной молекулы. Камеру Hamamatsu или СА ERG CCD использовали в качестве детектора. Эта камера использует функцию Binning Mode 2×2 с нулевым усилением. Стандартное время воздействия для визуализации толстой кишки составляло 10 сек. Калибровочные измерения системы показывают, что это 10-секундное время воздействия с использованием данной системы визуализации животного соответствует 40-миллисекундному воздействию с использованием клинически релевантных источника света, поля зрения и расстояния до поверхности ткани. Распределение интенсивности в изображении корректировали в отношении неоднородностей излучения через систему калибровки данных. Соотношение мишень:фон рассчитывали из интересующих участков, помещенных поверх опухоли, и нормальной фоновой толстой кишки. Изображения оценивали визуально, используя стандартную систему оценки, применяемую получателем, выполняющим характеристический анализ.
(г) Результаты
Соединение 5 показало соотношение опухоль:нормальная ткань 1,46:1, а соответствующий скремблированный контрольный пептид с тем же самым красителем (Соединение 7) показал соотношение 1,04:1. С Соединением 5 имели легко идентифицируемую опухоль, в то время как ничего невозможно было различить против фона при использовании Соединения 7.
Claims (28)
1. Агент визуализации, представляющий собой конъюгат формулы I:
где Z1 присоединен к N-концу сМВР и представляет собой Н или MIG;
Z2 присоединен к С-концу сМВР и представляет собой ОН, OBC или MIG, где BC представляет собой биосовместимый катион;
сМВР представляет собой cMet-связывающий циклический пептид из 17-30 аминокислот, включающий аминокислотную последовательность (SEQ-1): Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6;
где X1 представляет собой Asn, His или Tyr;
X2 представляет собой Gly, Ser, Thr или Asn;
X3 представляет собой Thr или Arg;
X4 представляет собой Ala, Asp, Glu, Gly или Ser;
X5 представляет собой Ser или Thr;
X6 представляет собой Asp или Glu;
и каждый из Cysa-d представляет собой остаток цистеина, так что остатки а и b, а также c и d циклизованы с образованием двух отдельных дисульфидных связей;
MIG представляет собой группу, ингибирующую метаболизм, которая представляет собой биосовместимую группу, ингибирующую или подавляющую метаболизм сМВР-пептида in vivo;
L представляет собой синтетическую линкерную группу формулы -(А)m-, где каждый А независимо представляет собой -CR2-, -CR=CR-, -С≡С-, -CR2CO2-, -CO2CR2-, -NRCO-, -CONR-, -NR(C=O)NR-, -NR(C=S)NR-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2, C4-8циклогетероалкиленовую группу, С4-8циклоалкиленовую группу, С5-12ариленовую группу или С3-12гетероариленовую группу, аминокислоту, сахар или монодисперсную полиэтиленгликолевую (PEG) структурную единицу;
каждый R независимо выбран из H, С1-4алкила, С2-4алкенила, С2-4алкинила, С1-4алкоксиалкила или С1-4гидроксиалкила;
m равен целому числу от 1 до 20;
n равен целому числу 0 или 1;
IM представляет собой оптическую репортерную визуализируемую группировку, подходящую для визуализации организма млекопитающего in vivo с использованием света в диапазоне длин волн в области спектра от зеленой до ближней инфракрасной: 600-1200 нм.
где Z1 присоединен к N-концу сМВР и представляет собой Н или MIG;
Z2 присоединен к С-концу сМВР и представляет собой ОН, OBC или MIG, где BC представляет собой биосовместимый катион;
сМВР представляет собой cMet-связывающий циклический пептид из 17-30 аминокислот, включающий аминокислотную последовательность (SEQ-1): Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6;
где X1 представляет собой Asn, His или Tyr;
X2 представляет собой Gly, Ser, Thr или Asn;
X3 представляет собой Thr или Arg;
X4 представляет собой Ala, Asp, Glu, Gly или Ser;
X5 представляет собой Ser или Thr;
X6 представляет собой Asp или Glu;
и каждый из Cysa-d представляет собой остаток цистеина, так что остатки а и b, а также c и d циклизованы с образованием двух отдельных дисульфидных связей;
MIG представляет собой группу, ингибирующую метаболизм, которая представляет собой биосовместимую группу, ингибирующую или подавляющую метаболизм сМВР-пептида in vivo;
L представляет собой синтетическую линкерную группу формулы -(А)m-, где каждый А независимо представляет собой -CR2-, -CR=CR-, -С≡С-, -CR2CO2-, -CO2CR2-, -NRCO-, -CONR-, -NR(C=O)NR-, -NR(C=S)NR-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2, C4-8циклогетероалкиленовую группу, С4-8циклоалкиленовую группу, С5-12ариленовую группу или С3-12гетероариленовую группу, аминокислоту, сахар или монодисперсную полиэтиленгликолевую (PEG) структурную единицу;
каждый R независимо выбран из H, С1-4алкила, С2-4алкенила, С2-4алкинила, С1-4алкоксиалкила или С1-4гидроксиалкила;
m равен целому числу от 1 до 20;
n равен целому числу 0 или 1;
IM представляет собой оптическую репортерную визуализируемую группировку, подходящую для визуализации организма млекопитающего in vivo с использованием света в диапазоне длин волн в области спектра от зеленой до ближней инфракрасной: 600-1200 нм.
2. Агент визуализации по п.1, где, в дополнение к SEQ-1, сМВР дополнительно содержит остатки Asp или Glu в пределах 4 аминокислотных остатков с С- или N-конца сМВР-пептида, и -(L)nIM функционализирована аминогруппой, которая конъюгирована с карбоксилом боковой цепи указанного остатка Asp или Glu с образованием амидной связи.
3. Агент визуализации по п.1 или 2, где, в дополнение к SEQ-1, сМВР дополнительно содержит остаток Lys в пределах 4 аминокислотных остатков с С- или N-конца сМВР-пептида, и -(L)nIM функционализирована карбоксильной группой, которая конъюгирована с ε-аминогруппой боковой цепи указанного остатка Lys с образованием амидной связи.
4. Агент визуализации по п.1, где сМВР включает аминокислотную последовательность SEQ-2 или SEQ-3:
Ser-Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6 (SEQ-2);
Ala-Gly-Ser-Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6-Gly-Thr (SEQ-3).
Ser-Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6 (SEQ-2);
Ala-Gly-Ser-Cysa-X1-Cysc-X2-Gly-Pro-Pro-X3-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysb-Tyr-X4-X5-X6-Gly-Thr (SEQ-3).
5. Агент визуализации по п.1, где X3 представляет собой Arg.
6. Агент визуализации по п.4, где, в дополнение к SEQ-1, SEQ-2 или SEQ-3, сМВР дополнительно содержит на N- или С-конце линкерный пептид, выбранный из -Gly-Gly-Gly-Lys- (SEQ-4), -Gly-Ser-Gly-Lys- (SEQ-5) или -Gly-Ser-Gly-Ser-Lys- (SEQ-6).
7. Агент визуализации по п.6, где сМВР имеет аминокислотную последовательность (SEQ-7):
Ala-Gly-Ser-Cysa-Tyr-Cysc-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysd-Tyr-Glu-Thr-Glu-GIy-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys.
Ala-Gly-Ser-Cysa-Tyr-Cysc-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cysd-Trp-Cysd-Tyr-Glu-Thr-Glu-GIy-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys.
8. Агент визуализации по п.1, где оба Z1 и Z2 независимо представляют собой MIG.
9. Агент визуализации по п.8, где Z1=MIG = ацетил, и Z2=MIG = первичный амид.
10. Агент визуализации по п.1, где n равен 0.
11. Агент визуализации по п.1, где IM представляет собой краситель, имеющий максимум поглощения в диапазоне 600-1000 нм.
12. Агент визуализации по п.11, где IM представляет собой цианиновый краситель.
13. Агент визуализации по п.12, где цианиновый краситель представлен формулой III:
где R1 и R2 независимо представляют собой Н или SO3M1, и по меньшей мере один из R1 и R2 представляет собой SO3M1, где М1 представляет собой Н или Bc;
R3 и R4 независимо представляют собой С1-4алкил или C1-6карбоксиалкил;
R5, R6, R7 и R8 независимо представляют собой группы Ra;
где Ra представляет собой С1-4алкил, С1-6карбоксиалкил или -(CH2)kSO3M1,
где k равен целому числу 3 или 4;
при условии, что цианиновый краситель имеет суммарно от 1 до 4 заместителей SO3M1 в группах R1, R2 и Ra.
где R1 и R2 независимо представляют собой Н или SO3M1, и по меньшей мере один из R1 и R2 представляет собой SO3M1, где М1 представляет собой Н или Bc;
R3 и R4 независимо представляют собой С1-4алкил или C1-6карбоксиалкил;
R5, R6, R7 и R8 независимо представляют собой группы Ra;
где Ra представляет собой С1-4алкил, С1-6карбоксиалкил или -(CH2)kSO3M1,
где k равен целому числу 3 или 4;
при условии, что цианиновый краситель имеет суммарно от 1 до 4 заместителей SO3M1 в группах R1, R2 и Ra.
14. Агент визуализации по п.1, где сМВР является таким, как определено в п.7, Z1 и Z2 являются такими, как определено в п.9, и IM является таким, как определено в пп.3 и 13.
15. Фармацевтическая композиция для оптической визуализации in vivo, содержащая агент визуализации по любому из пп.1-14 вместе с биосовместимым носителем, в форме, подходящей для введения млекопитающему.
16. Фармацевтическая композиция по п.15 в дозировке, подходящей для индивидуального пациента, предложенная в подходящем шприце или контейнере.
17. Способ получения агента визуализации по любому из пп.1-14, включающий одну из стадий (1)-(4):
(1) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 представляет собой Н, и Z2 представляет собой MIG, с соединением формулы Y1-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по положению Z1;
(2) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 и Z2 оба представляют собой MIG, и сМВР содержит остаток Asp или Glu в пределах 4 аминокислотных остатков с С- или N-конца сМВР-пептида, а все другие остатки Asp/Glu сМВР-пептида защищены, с соединением формулы Y2-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по указанному остатку Asp или Glu данного сМВР-пептида;
(3) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[сМВР]-Z3, где Z1 представляет собой MIG, и Z3 представляет собой группу Z2 или активированный сложный эфир, а все другие остатки Asp/Glu сМВР-пептида защищены, с соединением формулы Y2-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по положению Z2;
(4) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 и Z2 оба представляют собой MIG, и сМВР содержит остаток Lys в пределах 4 аминокислотных остатков с С- или N-конца сМВР-пептида, с соединением формулы Y1-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по остатку Lys данного сМВР-пептида;
где Z1, сМВР, Z2, MIG, L, n и IM являются такими, как определено в п.1, и
Z3 представляет собой группу Z2 или активированный сложный эфир;
Y1 представляет собой карбоновую кислоту, активированный сложный эфир, изотиоцианатную или тиоцианатную группу;
Y2 представляет собой аминогруппу.
(1) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 представляет собой Н, и Z2 представляет собой MIG, с соединением формулы Y1-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по положению Z1;
(2) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 и Z2 оба представляют собой MIG, и сМВР содержит остаток Asp или Glu в пределах 4 аминокислотных остатков с С- или N-конца сМВР-пептида, а все другие остатки Asp/Glu сМВР-пептида защищены, с соединением формулы Y2-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по указанному остатку Asp или Glu данного сМВР-пептида;
(3) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[сМВР]-Z3, где Z1 представляет собой MIG, и Z3 представляет собой группу Z2 или активированный сложный эфир, а все другие остатки Asp/Glu сМВР-пептида защищены, с соединением формулы Y2-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по положению Z2;
(4) взаимодействие сМВР-пептида формулы Z1-[cMBP]-Z2, где Z1 и Z2 оба представляют собой MIG, и сМВР содержит остаток Lys в пределах 4 аминокислотных остатков с С- или N-конца сМВР-пептида, с соединением формулы Y1-(L)n-[IM] с получением агента визуализации формулы I, где [IM] конъюгирован по остатку Lys данного сМВР-пептида;
где Z1, сМВР, Z2, MIG, L, n и IM являются такими, как определено в п.1, и
Z3 представляет собой группу Z2 или активированный сложный эфир;
Y1 представляет собой карбоновую кислоту, активированный сложный эфир, изотиоцианатную или тиоцианатную группу;
Y2 представляет собой аминогруппу.
18. Способ по п.17, при котором используют стадию взаимодействия (4).
19. Набор для приготовления фармацевтической композиции по п.15 или 16, содержащий агент визуализации по любому из пп.1-14 в стерильной твердой форме и биосовместимый носитель, так чтобы после разведения стерильной добавкой биосовместимого носителя по п.15 или 16 произошло растворение с получением желаемой фармацевтической композиции.
20. Набор по п.19, где стерильная твердая форма представляет собой лиофилизированное твердое вещество.
21. Способ оптической визуализации организма млекопитающего in vivo, включающий введение агента визуализации по любому из пп.1-14 или фармацевтической композиции по п.15 или 16 с получением изображений сайтов сверхэкспрессии или локализации cMet in vivo.
22. Способ по п.21, при котором агент визуализации по любому из пп.1-14 или фармацевтическую композицию по п.15 или 16 предварительно вводят в организм указанного млекопитающего.
23. Способ по п.22, включающий стадии, на которых:
(1) поверхность интересующей ткани в организме млекопитающего просвечивают возбуждающим светом;
(2) используя детектор флуоресценции, детектируют флуоресценцию от агента визуализации, генерируемую путем возбуждения визуализируемой группировки (IM);
(3) свет, детектируемый детектором флуоресценции, возможно фильтруют для отделения флуоресцентного компонента;
(4) из флуоресцентного свечения на стадиях (2) или (3) формируют изображение указанной поверхности интересующей ткани.
(1) поверхность интересующей ткани в организме млекопитающего просвечивают возбуждающим светом;
(2) используя детектор флуоресценции, детектируют флуоресценцию от агента визуализации, генерируемую путем возбуждения визуализируемой группировки (IM);
(3) свет, детектируемый детектором флуоресценции, возможно фильтруют для отделения флуоресцентного компонента;
(4) из флуоресцентного свечения на стадиях (2) или (3) формируют изображение указанной поверхности интересующей ткани.
24. Способ по п.23, где возбуждающий свет на стадии (1) представляет собой незатухающую волну (CW) по природе.
25. Способ по п.22, при котором:
(а) светорассеивающую биологическую ткань указанного организма млекопитающего, имеющую гетерогенный состав, подвергают воздействию света от источника света с заранее установленной варьируемой по времени интенсивностью для возбуждения агента визуализации, при котором наблюдают многократное рассеяние возбуждающего света в указанной ткани;
(б) детектируют многократно рассеянное световое излучение от ткани в ответ на указанное воздействие;
(в) проводят количественное определение параметра флуоресценции по всей ткани на основании этого излучения путем установления ряда показателей с использованием процессора, где каждый из показателей соответствует уровню параметра флуоресценции в различных положениях в пределах этой ткани, и где данный уровень параметра флуоресценции варьирует согласно гетерогенному составу этой ткани; и
(г) генерируют изображение этой ткани путем построения изображения гетерогенного состава ткани в соответствии с показателями стадии (в).
(а) светорассеивающую биологическую ткань указанного организма млекопитающего, имеющую гетерогенный состав, подвергают воздействию света от источника света с заранее установленной варьируемой по времени интенсивностью для возбуждения агента визуализации, при котором наблюдают многократное рассеяние возбуждающего света в указанной ткани;
(б) детектируют многократно рассеянное световое излучение от ткани в ответ на указанное воздействие;
(в) проводят количественное определение параметра флуоресценции по всей ткани на основании этого излучения путем установления ряда показателей с использованием процессора, где каждый из показателей соответствует уровню параметра флуоресценции в различных положениях в пределах этой ткани, и где данный уровень параметра флуоресценции варьирует согласно гетерогенному составу этой ткани; и
(г) генерируют изображение этой ткани путем построения изображения гетерогенного состава ткани в соответствии с показателями стадии (в).
26. Способ по п.21, где способ оптической визуализации включает флуоресцентную эндоскопию.
27. Способ по любому из пп.21-26, где оптическую визуализацию in vivo используют при проведении детектирования, определения стадии заболевания, диагностики, мониторинга прогрессирования заболевания или мониторинга лечения колоректального рака (CRC).
28. Способ ведения больных колоректальным раком (CRC), включающий детектирование, определение стадии заболевания, диагностику, мониторинг прогрессирования заболевания или мониторинг лечения колоректального рака организма млекопитающего, включающий способ оптической визуализации in vivo по любому из пп.21-26.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0709441.0 | 2007-05-16 | ||
GB0709441A GB0709441D0 (en) | 2007-05-16 | 2007-05-16 | Peptide imaging agents |
GB0715682.1 | 2007-08-13 | ||
GB0715682A GB0715682D0 (en) | 2007-08-13 | 2007-08-13 | Peptide imaging agents |
PCT/GB2008/001696 WO2008139207A2 (en) | 2007-05-16 | 2008-05-16 | Labelled hgf binding peptides for imaging |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009140475A RU2009140475A (ru) | 2011-06-27 |
RU2473361C2 RU2473361C2 (ru) | 2013-01-27 |
RU2473361C9 true RU2473361C9 (ru) | 2013-06-20 |
Family
ID=39743846
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009140475/10A RU2473361C9 (ru) | 2007-05-16 | 2008-05-16 | Меченые пептиды, связывающие фактор роста гепатоцитов (hgf), для визуализации |
RU2009140478/15A RU2475266C2 (ru) | 2007-05-16 | 2008-05-16 | Оптические агенты визуализации |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009140478/15A RU2475266C2 (ru) | 2007-05-16 | 2008-05-16 | Оптические агенты визуализации |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8529874B2 (ru) |
EP (1) | EP2146749B1 (ru) |
JP (1) | JP2010526859A (ru) |
KR (2) | KR20150017387A (ru) |
CN (1) | CN101848734B (ru) |
AT (1) | ATE551073T1 (ru) |
AU (1) | AU2008249821B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0811210B1 (ru) |
CA (1) | CA2685553C (ru) |
ES (1) | ES2385066T3 (ru) |
IL (1) | IL201778A0 (ru) |
MX (1) | MX2009012386A (ru) |
NZ (1) | NZ581160A (ru) |
PL (1) | PL2146749T3 (ru) |
RU (2) | RU2473361C9 (ru) |
WO (1) | WO2008139207A2 (ru) |
ZA (1) | ZA200908016B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2802481C2 (ru) * | 2018-03-26 | 2023-08-29 | ДжиИ ХЕЛСКЕР ЭйЭс | Состав для оптической визуализации, способ его получения и применение |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010527922A (ja) * | 2007-05-16 | 2010-08-19 | ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ | 光学造影剤 |
GB0718967D0 (en) | 2007-09-28 | 2007-11-07 | Ge Healthcare Ltd | Peptide imaging agents |
GB0918321D0 (en) | 2009-10-20 | 2009-12-02 | Ge Healthcare As | Cyclic peptide synthesis |
JP2013534557A (ja) * | 2010-06-29 | 2013-09-05 | ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ | 色素組成物及び色素合成法 |
GB201010878D0 (en) | 2010-06-29 | 2010-08-11 | Ge Healthcare As | Dye compositiion and dye syntheses |
GB201013808D0 (en) * | 2010-08-18 | 2010-09-29 | Ge Healthcare Ltd | Peptide radiotracer compositions |
EP2625281A2 (en) * | 2010-10-06 | 2013-08-14 | EMD Millipore Corporation | Cyanine compounds, conjugates and method of use |
WO2012118909A1 (en) | 2011-03-01 | 2012-09-07 | Ge Healthcare Limited | Radiolabelled octreotate analogues as pet tracers |
GB201103696D0 (en) | 2011-03-04 | 2011-04-20 | Ge Healthcare Ltd | Technetium labelled peptides |
DE102011118029A1 (de) * | 2011-06-20 | 2012-12-20 | Universität Leipzig | Modifizierte antibiotische Peptide mit variabler systemischer Freisetzung |
GB201116733D0 (en) | 2011-09-28 | 2011-11-09 | Ge Healthcare As | Peptide margin imaging agents |
GB201116862D0 (en) | 2011-09-30 | 2011-11-09 | Ge Healthcare As | Infusion imaging method |
GB201121914D0 (en) * | 2011-12-20 | 2012-02-01 | Ge Healthcare Ltd | Method for patient selection |
US10046068B2 (en) * | 2013-03-15 | 2018-08-14 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Saccharide conjugates |
GB201314936D0 (en) | 2013-08-21 | 2013-10-02 | Ge Healthcare Ltd | Radiolabelling method |
GB201322456D0 (en) | 2013-12-18 | 2014-02-05 | Ge Healthcare Ltd | Radiotracer compositions and methods |
CN105111773B (zh) * | 2015-08-19 | 2017-06-27 | 大连理工大学 | 一类氨基菁类荧光染料及其制备方法和应用 |
GB201804835D0 (en) * | 2018-03-26 | 2018-05-09 | Ge Healthcare As | Formulation and method of preparation |
CN112129736B (zh) * | 2020-09-22 | 2022-08-02 | 四川大学华西医院 | 粘蛋白和循环肿瘤细胞的均相可视化/荧光poct检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004032936A1 (en) * | 2002-10-08 | 2004-04-22 | Amersham Plc | Improved imaging agents comprising barbituric acid derivatives |
WO2004078778A2 (en) * | 2003-03-03 | 2004-09-16 | Dyax Corp. | PEPTIDES THAT SPECIFICALLY BIND HGF RECEPTOR (cMet) AND USES THEREOF |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004039894A2 (en) | 2002-05-10 | 2004-05-13 | Carnegie Mellon University | Chiral indole intermediates and their fluorescent cyanine dyes containing functional groups |
AU2004214420A1 (en) * | 2003-02-19 | 2004-09-02 | Sicel Technologies Inc. | In vivo fluorescence sensors, systems, and related methods operating in conjunction with fluorescent analytes |
NO20034350D0 (no) * | 2003-09-29 | 2003-09-29 | Amersham Health As | Optisk avbilding av kolorektal kreft |
US7750163B2 (en) * | 2003-10-31 | 2010-07-06 | GE Healthcare U.K. Limited | Cyanine dye labelling reagents |
JP2007510643A (ja) | 2003-11-06 | 2007-04-26 | ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ | 医薬化合物 |
NO20035682D0 (no) | 2003-12-18 | 2003-12-18 | Amersham Health As | Optisk avbildning av ösofagkreft og Barretts ösofag |
WO2006073314A1 (en) * | 2005-01-06 | 2006-07-13 | Ge Healthcare As | Optical imaging |
WO2006078914A1 (en) * | 2005-01-21 | 2006-07-27 | Washington University In St. Louis | Compounds having rd targeting motifs |
GB0502277D0 (en) | 2005-02-04 | 2005-03-09 | Amersham Plc | Novel imaging agents |
ATE502048T1 (de) * | 2005-04-22 | 2011-04-15 | Univ Washington | Fluoreszentes chlorotoxinkonjugat und verfahren zur intraoperativen sichtbarmachung von krebs |
NO20053354D0 (no) * | 2005-07-11 | 2005-07-11 | Amersham Health As | Optical imaging contrast agent. |
-
2008
- 2008-05-16 KR KR1020157002055A patent/KR20150017387A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-05-16 EP EP08750628A patent/EP2146749B1/en active Active
- 2008-05-16 AU AU2008249821A patent/AU2008249821B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-05-16 WO PCT/GB2008/001696 patent/WO2008139207A2/en active Application Filing
- 2008-05-16 PL PL08750628T patent/PL2146749T3/pl unknown
- 2008-05-16 RU RU2009140475/10A patent/RU2473361C9/ru active
- 2008-05-16 NZ NZ581160A patent/NZ581160A/en unknown
- 2008-05-16 US US12/600,265 patent/US8529874B2/en active Active
- 2008-05-16 RU RU2009140478/15A patent/RU2475266C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-05-16 CA CA2685553A patent/CA2685553C/en active Active
- 2008-05-16 CN CN2008800242291A patent/CN101848734B/zh active Active
- 2008-05-16 BR BRPI0811210-0A patent/BRPI0811210B1/pt active Search and Examination
- 2008-05-16 ES ES08750628T patent/ES2385066T3/es active Active
- 2008-05-16 KR KR1020097023746A patent/KR101578225B1/ko active IP Right Grant
- 2008-05-16 MX MX2009012386A patent/MX2009012386A/es active IP Right Grant
- 2008-05-16 AT AT08750628T patent/ATE551073T1/de active
- 2008-05-16 JP JP2010507982A patent/JP2010526859A/ja active Pending
-
2009
- 2009-10-27 IL IL201778A patent/IL201778A0/en unknown
- 2009-11-13 ZA ZA2009/08016A patent/ZA200908016B/en unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004032936A1 (en) * | 2002-10-08 | 2004-04-22 | Amersham Plc | Improved imaging agents comprising barbituric acid derivatives |
RU2005109272A (ru) * | 2002-10-08 | 2006-01-27 | Джи-И Хелткер Лимитед (GB) | Улучшенные агенты визуализации, содержащие производные барбитуровой кислоты |
WO2004078778A2 (en) * | 2003-03-03 | 2004-09-16 | Dyax Corp. | PEPTIDES THAT SPECIFICALLY BIND HGF RECEPTOR (cMet) AND USES THEREOF |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
BERLIER J.E. ET AL. Quantitative Comparison of Long-wavelength Alexa Fluor Dyes to Cy Dyes: Fluorescence of the Dyes and Their Bioconjugates // The Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2003, v.51(12), pp.1699-1712. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2802481C2 (ru) * | 2018-03-26 | 2023-08-29 | ДжиИ ХЕЛСКЕР ЭйЭс | Состав для оптической визуализации, способ его получения и применение |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NZ581160A (en) | 2012-05-25 |
AU2008249821B2 (en) | 2013-08-22 |
CA2685553C (en) | 2017-03-28 |
CA2685553A1 (en) | 2008-11-20 |
BRPI0811210B1 (pt) | 2021-11-09 |
RU2473361C2 (ru) | 2013-01-27 |
US20100150843A1 (en) | 2010-06-17 |
RU2009140475A (ru) | 2011-06-27 |
KR101578225B1 (ko) | 2015-12-17 |
WO2008139207A2 (en) | 2008-11-20 |
ATE551073T1 (de) | 2012-04-15 |
RU2009140478A (ru) | 2011-06-27 |
US8529874B2 (en) | 2013-09-10 |
CN101848734A (zh) | 2010-09-29 |
BRPI0811210A2 (pt) | 2014-11-11 |
PL2146749T3 (pl) | 2012-09-28 |
IL201778A0 (en) | 2010-06-16 |
EP2146749B1 (en) | 2012-03-28 |
JP2010526859A (ja) | 2010-08-05 |
KR20150017387A (ko) | 2015-02-16 |
CN101848734B (zh) | 2013-08-28 |
KR20100016543A (ko) | 2010-02-12 |
AU2008249821A1 (en) | 2008-11-20 |
RU2475266C2 (ru) | 2013-02-20 |
ZA200908016B (en) | 2012-04-25 |
ES2385066T3 (es) | 2012-07-17 |
MX2009012386A (es) | 2009-12-03 |
EP2146749A2 (en) | 2010-01-27 |
WO2008139207A3 (en) | 2009-02-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2473361C9 (ru) | Меченые пептиды, связывающие фактор роста гепатоцитов (hgf), для визуализации | |
US8431111B2 (en) | Peptide imaging agents | |
RU2484111C9 (ru) | Агенты для оптической визуализации | |
ES2923148T3 (es) | Formulación y método de preparación | |
KR20100017102A (ko) | 광학 조영제 | |
US20110268660A1 (en) | Method for detecting dysplasia | |
WO2013045662A1 (en) | Peptide margin imaging agents | |
RU2802481C2 (ru) | Состав для оптической визуализации, способ его получения и применение | |
WO2013045650A2 (en) | Infusion imaging method |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TH4A | Reissue of patent specification |