RU2465316C1 - Штамм бактерий haemophilus influenzae в №326, стабильный продуцент капсульного полисахарида - Google Patents
Штамм бактерий haemophilus influenzae в №326, стабильный продуцент капсульного полисахарида Download PDFInfo
- Publication number
- RU2465316C1 RU2465316C1 RU2011140336/10A RU2011140336A RU2465316C1 RU 2465316 C1 RU2465316 C1 RU 2465316C1 RU 2011140336/10 A RU2011140336/10 A RU 2011140336/10A RU 2011140336 A RU2011140336 A RU 2011140336A RU 2465316 C1 RU2465316 C1 RU 2465316C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- haemophilus influenzae
- synthetic
- capsular polysaccharide
- medium
- bacterial strain
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен штамм бактерий Haemophilus influenzae b №326 (коллекция ФГБУ «ГИСК им. Л.А.Тарасевича» Минздравсоцразвития России №289), который обладает способностью стабильно синтезировать капсульный полисахарид в среду культивирования при росте на синтетической и полусинтетической питательных средах, характеризуется высокой продуктивностью (от 90 до 150 мкг/мл на синтетической и от 80 до 130 мкг/мл на полусинтетической среде) при минимальном периоде культивирования. Изобретение может быть использовано для получения капсульного полисахарида, пригодного для создания вакцинных и диагностических препаратов. 2 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения капсульного полисахарида, пригодного для создания вакцинных и диагностических препаратов. Haemophilus influenzae b №326 (коллекция ФГБУ «ГИСК им. Л.А.Тарасевича» Минздравсоцразвития России №289) обладает способностью стабильно синтезировать капсульный полисахарид при росте на синтетической и полусинтетической питательных средах.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Капсульный полисахарид, продуцируемый Haemophilus influenzae b, является основой для производства специфических для данного серотипа возбудителя вакцин, а также диагностических тест-систем. С целью получения капсульного полисахарида разрабатывают системы культивирования микроорганизмов. Определяющим фактором эффективной системы культивирования является штамм-продуцент, способный стабильно синтезировать капсульный полисахарид в среду культивирования.
Для роста бактерий Haemophilus influenzae b требуются полноценные питательные среды. Однако при культивировании вакцинных штаммов следует избегать использования питательных сред, содержащих продукты животного происхождения, так как большое количество белков, содержащихся в полноценных питательных средах, мешает процессу очистки капсульного полисахарида [WHO Technical Report Series 897. WHO Expert committee on biological standardization. Forty-ninth Report. WHO, Geneva. 2000: 29-60]. С учетом рекомендаций ВОЗ оптимальными условиями культивирования вакцинных штаммов с целью получения чистых бактериальных полисахаридов следует считать синтетические и полусинтетические питательные среды.
Поскольку штаммы Haemophilus influenzae b обладают разными продуктивными и ростовыми характеристиками, целью изобретения является штамм Haemophilus influenzae b №326 (коллекция ФГБУ «ГИСК им. Л.А.Тарасевича» Минздравсоцразвития России №289), способный стабильно синтезировать капсульный полисахарид в среду культивирования при росте на синтетической и полусинтетической средах.
Наиболее близким аналогом, с которым можно сравнивать предлагаемый штамм, является заявка на изобретение RU 2257412, 27.07.2005, С1 (Елкина С.И., Ястребова Н.Е., Орлова О.Е., Ванеева Н.П., Сергеев В.В., Апарин П.Г., Львов В.Л.: штамм Haemophilus influenzae b Mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата, в которой охарактеризованы культурально-морфологические, биохимические, антигенные свойства штамма Haemophilus influenzae b Mech №l, дана его продуктивность при росте на полусинтетической и синтетической питательных средах в количестве 50 мкг/мл и 100 мкг/мл соответственно по прошествии 6 часов от момента достижения стационарной фазы роста.
В отличие от аналога предлагаемый штамм Haemophilus influenzae b №326 (коллекция ГИСК им. Л.А.Тарасевича Минздравсоцразвития России №289) обладает рядом технических преимуществ: большая продуктивность от 80 до 130 мкг/мл на полусинтетической и от 90 до 150 мкг/мл на синтетической среде, высокая скорость роста на жидких питательных стерах (период культивирования по сравнению с аналогом короче почти в 2 раза).
Штамм Haemophilus influenzae b №326 выделен в 2006 году от больного ребенка в ходе клинико-лабораторного обследования (история болезни №62159) и характеризуется способностью стабильно синтезировать оптимальное количество капсульного полисахарида в среду культивирования при росте на синтетической и полусинтетической средах. Культура идентифицирована по микробиологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Штамм Haemophilus influenzae b №326 принят на депонирование в Государственную коллекцию патогенных микроорганизмов III и IV групп «Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасовича» Минздравсоцразвития России под №289.
Морфологические свойства Haemophilus influenzae b №326. Микроскопия окрашенного мазка: грамотрицательные бактерии в форме прямых палочек с закругленными концами 0,5-2,0 мкм в длину и 0,2-0,3 мкм в ширину, имеют капсулу, обладают полиморфизмом.
Культуральные свойства Haemophilus influenzae b №326. На твердых питательных средах - образуют мелкие прозрачные колонии, которые похожи на капельки росы. На жидких питательных средах вызывают равномерное помутнение среды. Ростовыми факторами являются гемин и никотинамидаденонуклеотид (НАД). Оптимальные условия культивирования 35-37°С в атмосфере с повышенным содержанием CO2(5-10%).
Биохимическая активность штамма Haemophilus influenzae b №326 - восстанавливает нитриты и нитраты, образует индол, ферментирует с образованием кислоты глюкозу и сахарозу, фруктозу, мальтозу, ксилозу.
Отношение штамма Haemophilus influenzae b №326 к видовым диагностическим сывороткам - относится к b серовару, с другими сыворотками не агглютинирует.
Антигенные свойства штамма Haemophilus influenzae b №326 - бактерии рода Haemophilus, вида Haemophilus influenza, серовариант b.
Штамм Haemophilus influenzae b №326 хранится в лиофилизированном состоянии в сахарозо-желатиновой среде (50% сахарозы, 50% желатины в физиологическом растворе).
Получение капсульного полисахарида при росте на синтетической и полусинтетической питательных средах штамма Haemophilus influenzae b №326.
Пример №1. Выращивание штамма Haemophilus influenzae b №326 на синтетической питательной среде. В ампулу с лиофильно высушенной культурой вносили стерильный физиологический раствор. Каплю полученной суспензии рассевали на 1,5% сердечно-мозговой агар (Difco) с добавлением 10 мг/л гемина (HEMIN CLORIDE МР Biomedicals, LLC) и 4 мг/л среды НАД (NADH Dinatriumsalz AppliChem). Затем делали посев на чашки с плотной питательной средой. Чашки помещали в термостат на 18 часов при 37°С и 5-10% CO2. Выросшую культуру подращивали в колбах емкостью 200 мл и пересевали в ферментер марки «Анкум» с жидкой синтетической питательной средой [Klein R.D., Luginbuhl G.H. Simplified media for growth of Haemophilus influenzae from clinical and normal flora sources. J. Gen. Microbiol. 1970, 113: 409-411], содержащую кроме солей факторы роста (гемин, НАД). Выращивание проводили в условиях принудительной аэрации при 37°С. В процессе культивирования биомассу равномерно перемешивали. Пробы для определения количества накапливающегося в питательной среде капсульного полисахарида отбирали каждый час. После достижения стационарной фазы выращивание заканчивали. Длительность культивирования не превышала 8 часов. Количество капсульного полисахарида в среде культивирования оценивали по результатам ракетного иммунноэлектрофореза (РИЭФ). В качестве референс-препарата использовали очищенный капсульный полисахарид. Количество капсульного полисахарида, выделяемого при глубинном культивировании, составляло от 90 до 150 мкг/мл культуральной жидкости.
Пример №2. Выращивание штамма Haemophilis influenzae b №326 в полу синтетической питательной среде. Посевную культуру готовили аналогично выше описанному способу. Внесение посевного материала проводили в питательную среду, содержащую раствор солей [Klein R.D., Luginbuhl G.H. Simplified media for growth of Haemophilus influenzae from clinical and normal flora sources. J. Gen. Microbiol. 1970, 113: 409-411], факторы роста (гемин, НАД), казеиновый пептон (PEPTON from CASEIN, AppliChem) 20 гр на литр, глюкозу 2 гр на литр. Выращивание проходило при тех же технических условиях. Количество капсульного полисахарида, выделяемого при глубинном культивировании штамма на полусинтетической питательной среде, составляло от 80 до 130 мкг/мл культуральной жидкости.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Anderson P., Pitt J., Smith D.H. Synthesis and release of polyribophosphate by Haemophilus influenzae b in vitro. Infect. Immun. 1976, Feb. 581-589.
2. Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М., «Наука», 1983, 139-143.
Claims (1)
- Штамм Haemophilus influenzae b №326, депонированный в коллекции ФГБУ «ГИСК им. Л.А.Тарасевича» Минздравсоцразвития России под №289, стабильный продуцент капсульного полисахарида в среду культивирования при росте на синтетической и полусинтетической питательных средах.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011140336/10A RU2465316C1 (ru) | 2011-10-05 | 2011-10-05 | Штамм бактерий haemophilus influenzae в №326, стабильный продуцент капсульного полисахарида |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011140336/10A RU2465316C1 (ru) | 2011-10-05 | 2011-10-05 | Штамм бактерий haemophilus influenzae в №326, стабильный продуцент капсульного полисахарида |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2465316C1 true RU2465316C1 (ru) | 2012-10-27 |
Family
ID=47147426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011140336/10A RU2465316C1 (ru) | 2011-10-05 | 2011-10-05 | Штамм бактерий haemophilus influenzae в №326, стабильный продуцент капсульного полисахарида |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2465316C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2624014C1 (ru) * | 2016-04-08 | 2017-06-30 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Штамм haemophilus influenzae spb тип в - высокоактивный продуцент капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2331075C2 (ru) * | 2006-09-22 | 2008-08-10 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (ГУ НИВС им. И.И. Мечникова) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К КАПСУЛЬНОМУ ПОЛИСАХАРИДУ Haemophilus influenzae ТИПА b |
| UA40596U (ru) * | 2006-05-16 | 2009-04-27 | Институт Проблем Безопасности Атомных Электростанций Национальной Академии Наук Украины | Энергоблок атомной электростанции |
-
2011
- 2011-10-05 RU RU2011140336/10A patent/RU2465316C1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA40596U (ru) * | 2006-05-16 | 2009-04-27 | Институт Проблем Безопасности Атомных Электростанций Национальной Академии Наук Украины | Энергоблок атомной электростанции |
| RU2331075C2 (ru) * | 2006-09-22 | 2008-08-10 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (ГУ НИВС им. И.И. Мечникова) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К КАПСУЛЬНОМУ ПОЛИСАХАРИДУ Haemophilus influenzae ТИПА b |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2624014C1 (ru) * | 2016-04-08 | 2017-06-30 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Штамм haemophilus influenzae spb тип в - высокоактивный продуцент капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7977074B2 (en) | Method of biosynthesizing tetrodotoxin | |
| Edman et al. | Listeria monocytogenes l forms i. induction, maintenance, and biological characteristics | |
| Gutierrez et al. | Interrelationship between certain bacteria and the rumen ciliate Dasytricha ruminantium | |
| RU2465316C1 (ru) | Штамм бактерий haemophilus influenzae в №326, стабильный продуцент капсульного полисахарида | |
| CN104745554B (zh) | 芽孢杆菌产蛋白酶和芽孢的发酵培养基及发酵方法 | |
| CN101701201A (zh) | 一株粪肠球菌及其应用 | |
| CN113755368B (zh) | 一株福建鸡滑液囊支原体及其培养基 | |
| RU2455351C1 (ru) | Питательная среда для культивирования дифтерийных микробов | |
| RU2388489C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2309767C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против псевдомоноза свиней | |
| Khan et al. | Biomass production of Pasteurella multocida using biofermenter | |
| CN103114053A (zh) | 产高光学纯度d-乳酸的棒状乳杆菌陕西亚种及其应用 | |
| RU2518282C1 (ru) | Питательная среда для глубинного культивирования туляремийного микроба | |
| RU2328526C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота | |
| CN103865856A (zh) | 一株耐酸长双歧杆菌JDY1017dpH及其应用 | |
| RU2049815C1 (ru) | Штамм бактерий leptospira interrogans, предназначенный для получения лептоспирозных вакцин | |
| RU2624014C1 (ru) | Штамм haemophilus influenzae spb тип в - высокоактивный продуцент капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата | |
| RU2221864C2 (ru) | Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, депонированный в вгнки под № 23 мгавмиб-деп, для производства вакцины против клебсиеллеза молодняка сельскохозяйственных животных | |
| JP4363603B2 (ja) | デロビブリオの純粋分離法及びデロビブリオの大量純粋培養法 | |
| Khaeva et al. | Isolation and Selection of Propionic Acid Bacteria Promising for Biotechnological Production | |
| RU2218177C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Salmonella enteritidis № 22, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИН И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ | |
| CN109988733A (zh) | 一种链球菌特异性固体培养基、制备方法及其应用 | |
| RU2257412C1 (ru) | Штамм haemophilus influenzae b mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата | |
| RU2571940C1 (ru) | Способ культивирования дифтерийных микробов | |
| SU1788965A3 (en) | Strain of bacteria klebsiella pneumonia usable for lipopolysaccharide preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191006 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20201116 |