RU2415419C1 - Способ оценки активности препаратов, полученных из дождевых червей - Google Patents
Способ оценки активности препаратов, полученных из дождевых червей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2415419C1 RU2415419C1 RU2009138994/15A RU2009138994A RU2415419C1 RU 2415419 C1 RU2415419 C1 RU 2415419C1 RU 2009138994/15 A RU2009138994/15 A RU 2009138994/15A RU 2009138994 A RU2009138994 A RU 2009138994A RU 2415419 C1 RU2415419 C1 RU 2415419C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- activity
- cells
- aqueous
- cyclosis
- preparations
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области фармацевтики и косметики, в частности к оценке эффективности полученных на основе дождевых червей фармацевтических и косметических препаратов. Способ оценки активности препарата, полученного из дождевых червей, по тест-реакции, в котором в качестве тест-реакции используют реакцию остановки движения цитоплазмы в клетках водных макрофитов, при этом показателем понижения активности препарата является отсутствие влияния на циклоз в клетках водных макрофитов или удлинение времени его остановки в сравнении с контрольным препаратом. Вышеописанный способ позволяет производить оценку качества вермисырья и вермипрепаратов в полевых условиях, легок в использовании, технически прост. 2 з.п. ф-лы.
Description
Предлагаемое изобретение относится к области фармацевтики и косметики, в частности включает оценку эффективности полученных на основе дождевых червей фармацевтических, косметических препаратов и биологически активных добавок - в процессе их производства, хранения и для подбора оптимальных доз.
В медицине и косметике все более широкое применение находят получаемые из дождевых червей вермипрепараты. Интерес к вермипрепаратам обусловлен их противоопухолевой, антибактериальной, антиоксидантной, иммуногенной и многими другими активностями. Известно большое число различных вермипрепаратов, но особенно широко используются такие вермипрепараты как "Люмбрикус", "Фунайкан", фибринолитический комплекс "Люмброкиназа", энзимный активатор сердца "Лонг-тонг", антимикробные пептиды люмбрицин, лизенин и т.д. Первый получают из тела половозрелого червя Е. fetida (или других родственных видов дождевых червей) в виде сухого мелкодисперсного порошка. Для изготовления "Люмброкиназы", "Лонг-тонг" из дождевых червей выделяют и очищают фракции активных белков, пептидов [Sun Zhenjun. Vermiculture and vermiprotein. China Agricultural University Press, 2003, P.367]. В связи с тем, что для производства вермипрепаратов используется живое сырье, то количество и качество биологически активных агентов, входящих в их состав, зависит от различных условий, в частности от исходного физиологического состояния дождевых червей. Поэтому столь актуальным является наличие простых методов экспрессной оценки их эффективности. К сожалению, на сегодня подобные методы практически отсутствуют.
Известен способ оценки активности фармацевтического препарата, изготовленного из дождевых червей, из "Китайская фармакопея" по активности протеаз [Китайская фармакопея, издание 1990 г., часть А, приложение, с.56]. В качестве единицы активности на грамм протеазы принимают невыпавший раствор, получаемый при гидролизе тирозина в течение одной минуты (пептиды, аминокислоты и др.) при длине волны 280 нм и содержании энзима, равном 1 мкмолю тирозина в контрольном растворе и растворе медикамента.
Ближайшим аналогом является способ оценки активности фармацевтического препарата, изготовленного из дождевых червей, из "Китайская фармакопея" по гемолизу крови кролика [Китайская фармакопея, издание 1990 г., часть А, приложение, с.56]. Венозную кровь берут шприцом из ушной вены кролика и быстро вводят в пластмассовую пробирку диаметром 2 мм. Пробирка до момента исследования хранится в морозильнике. Раствор медикамента и контрольный раствор переносится в отдельные пробирки. Подготовленный сгусток крови из пластмассовой пробирки вводится в каждую из тестируемых пробирок. Пробирки покрываются крышечками и переносятся в инкубатор с температурой 37°С. В исследуемой пробирке должен наступить гемолиз сгустка, зато в контрольной пробирке сгусток не подвергнется гемолизу.
Недостатками известных методов являются дороговизна, необходимость в обученных специалистах и соответственно оборудованная лаборатория. Рассмотренные методы не могут давать интегральную оценку активности вермипрепаратов, так как последняя складывается не только из белковой активности протеаз и гемолитических ферментов, но и из действия специфичных антимикробных пептидов, мукополисахаридов и других веществ небелковой природы.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка экспрессной оценки активности фармацевтических, косметических препаратов и биологически активных добавок из дождевых червей по остановке циклоза в клетках нителлы и клетках у основания листа элодеи.
Поставленная задача достигается помещением отдельных клеток нителлы и листочков элодеи в испытуемый раствор вермипрепарата. Затем фиксируют время остановки циклоза в клетках растений. Об активности вермипрепарата судят по времени остановки циклоза, сравнивая: контроль - пресная вода, контрольный вермипрепарат, полученный с максимальным соблюдением всех требований, и тестируемый на активность вермипрепарат.
Нами обнаружено, что фармацевтический вермипрепарат активно подавлял циклоз в клетках нителлы и элодеи. Действие ослабленного нагреванием при 100°С препарата проявлялось, а в некоторых случаях отсутствовало. Эту особенность фармацевтических вермипрепаратов можно использовать для оценки их биологической активности, эффективного использования, подбора оптимальных доз, контроля условий производства, хранения и потребления.
Способ осуществляется следующим образом.
Берут нителлу и элодею - широко распространенные и легко доступные для сбора водные макрофиты. В опытах используют гидрофиты, произрастающие в оз. Байкал, реке Ангаре и близлежащих водоемах. Для изготовления вермипрепаратов отбирают половозрелые особи дождевых червей Е. fetida Andrei boche. Для очищения кишечника и покровов от почвы дождевых червей выдерживают в течение 2-х суток в подкисленной воде без пищи. В дальнейшем живых червей гомогенизируют и лиофилизируют. Для ослабления активности часть готового вермипрепарата нагревают при 100°С в течение 30 минут. В опыте работают с водными суспензиями вермипрепаратов, для получения которых навеску вермипрепарата смешивают на магнитной мешалке с водой в массовых единицах 1:100 в течение 1 часа. Затем суспензию центрифугируют в течение 5 минут при 3000 об/мин. Концентрацию белка в супернатанте определяют по методу Лоури [Бузун Г.А, Джемухадзе К.Н., Милешко Л.Д. Определение белка в растениях с помощью амидо-черного // Физиол. растений. 1982, Т.29, Вып.1, С.198-204]. Испытуемый раствор хранят в герметичной посуде при +5°С не более суток. Контролем служила дехлорированная водопроводная вода.
Для определения активности вермипрепарата по остановке циклоза в клетках нителлы и элодеи растения и водоросли экспонируют в 1% (0,9 мг белка/мл) суспензиях вермипрепарата. Затем интенсивность движения цитоплазмы в клетках оценивают, микроскопируя их при увеличении в 100 раз.
Вермипрепарат останавливал циклоз в клетках элодеи через 4±0,3 часа, а в клетках нителлы через 2±0,1 часа. Вермипрепарат, ослабленный нагреванием, прекращал циклоз в клетках нителлы через 4±0,1 часа, и не приводил к остановке циклоза в листочках элодеи более суток.
Пример 1. Вермипрепарат суспензируют в воде, листочки высшего водного растения элодеи экспонируют в полученном после центрифугирования суспензии растворе, сравнивают время остановки циклоза в клетках растений между контролем - пресной водой, контрольным вермипрепаратом, полученным с максимальным соблюдением всех требований, и тестируемым на активность препаратом.
Пример 2. Вермипрепарат суспензируют в воде, клетки харовой водоросли нителлы экспонируют в полученном после центрифугирования суспензии растворе, сравнивают время остановки циклоза в клетках растения между контролем - пресной водой, контрольным вермипрепаратом, полученным с максимальным соблюдением всех требований, и тестируемым на активность препаратом.
Достоинствами предлагаемого нами способа являются его легкость в исполнении, техническая простота, дешевизна, экспрессность, возможность производить оценку качества вермисырья и вермипрепаратов в полевых условиях. Способ дает интегральную оценку активности вермипрепаратов в отличие от известных методов.
Claims (3)
1. Способ оценки активности препарата, полученного из дождевых червей, по тест-реакции, отличающийся тем, что в качестве тест-реакции используют реакцию остановки движения цитоплазмы в клетках водных макрофитов, при этом показателем понижения активности препарата является отсутствие влияния на циклоз в клетках водных макрофитов или удлинение времени его остановки в сравнении с контрольным препаратом.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве водного макрофита используют элодию.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве водного макрофита используют харовую водоросль нителлу.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009138994/15A RU2415419C1 (ru) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | Способ оценки активности препаратов, полученных из дождевых червей |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009138994/15A RU2415419C1 (ru) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | Способ оценки активности препаратов, полученных из дождевых червей |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2415419C1 true RU2415419C1 (ru) | 2011-03-27 |
Family
ID=44052970
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009138994/15A RU2415419C1 (ru) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | Способ оценки активности препаратов, полученных из дождевых червей |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2415419C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2622745C2 (ru) * | 2015-08-31 | 2017-06-19 | Энту Фармасьютикалс Лтд | Композиции на основе биоресурсов для профилактики или лечения сепсиса и/или связанных с сепсисом осложнений и состояний, способы профилактики и лечения сепсиса |
-
2009
- 2009-10-21 RU RU2009138994/15A patent/RU2415419C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2622745C2 (ru) * | 2015-08-31 | 2017-06-19 | Энту Фармасьютикалс Лтд | Композиции на основе биоресурсов для профилактики или лечения сепсиса и/или связанных с сепсисом осложнений и состояний, способы профилактики и лечения сепсиса |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6861298B2 (ja) | 脱毛防止又は発毛促進用注射用組成物 | |
CN103845272B (zh) | 具有抗皮肤老化作用的蚯蚓提取物及其制备方法和应用 | |
CN110218756B (zh) | 一种具有抗衰作用的富硒鲟鱼骨肽提取方法及产品 | |
CN104710511A (zh) | 一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽及其制备方法和用途 | |
CN102416195A (zh) | 胶原蛋白海绵的制备方法 | |
CN112409470A (zh) | 一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽及其制备方法和应用 | |
Tram et al. | Bacteria‐Responsive Self‐Assembly of Antimicrobial Peptide Nanonets for Trap‐and‐Kill of Antibiotic‐Resistant Strains | |
CN103630634A (zh) | 一种龟甲胶、鹿角胶及其制品的检测物及其检测方法 | |
Radu et al. | Evaluation of keratin/bacterial cellulose based scaffolds as potential burned wound dressing | |
Rana et al. | Collagen-based hydrogels for the eye: A comprehensive review | |
CN110354307A (zh) | 基于转人血小板衍生生长因子基因蚕丝的蛋白丝胶凝胶及其制备方法和应用 | |
RU2415419C1 (ru) | Способ оценки активности препаратов, полученных из дождевых червей | |
Chen et al. | Programmable scaffolds with aligned porous structures for cell cultured meat | |
US20210393501A1 (en) | Preparation method and application of recombinant mutant collagenase | |
CN101266242A (zh) | 用于检测葡萄糖转运蛋白4上膜的探针和方法 | |
Yang et al. | Biocompatibility and degradability of alginate-poly-L-arginine microcapsules prepared by high-voltage electrostatic process | |
CN108379551A (zh) | 一种组合物及其制备方法和用途 | |
JP2015180198A (ja) | 表皮セリンラセマーゼ及び/又はd−セリン量を指標とした、皮膚のバリア機能亢進薬剤のスクリーニング方法並びに皮膚バリア機能評価方法 | |
CN112028980B (zh) | 丝胶蛋白、提取方法、作为细胞抗病毒免疫增强剂和应用 | |
RU2206337C1 (ru) | Лекарственный препарат для лечения мышечных дистоний и способ его получения | |
CN103054839A (zh) | 一种杀灭抗酸染色阳性(红色)杆菌的药物 | |
CN109182320A (zh) | 一种具有强催化活性的多巴脱羧酶同源物及其制备与应用 | |
RU2425686C1 (ru) | Способ получения осажденного препарата из березового гриба чага | |
CN109939129A (zh) | 一种珍珠母液在制备细胞修复产品中的应用 | |
CN117510619B (zh) | 一种创新空间结构的重组ⅲ型人源化胶原蛋白微球及其设计、制备工艺和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20141022 |