RU2410437C1 - Method of determining bacteriostatic, bactericidal and stimulating effect of antibiotic on microorganism - Google Patents
Method of determining bacteriostatic, bactericidal and stimulating effect of antibiotic on microorganism Download PDFInfo
- Publication number
- RU2410437C1 RU2410437C1 RU2009143513/10A RU2009143513A RU2410437C1 RU 2410437 C1 RU2410437 C1 RU 2410437C1 RU 2009143513/10 A RU2009143513/10 A RU 2009143513/10A RU 2009143513 A RU2009143513 A RU 2009143513A RU 2410437 C1 RU2410437 C1 RU 2410437C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibiotic
- effect
- bactericidal
- bacteriostatic
- microorganisms
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, микробиологии, а именно к бактериологии и относится к способам определения действия антибиотика на микроорганизмы.The invention relates to medicine, microbiology, namely to bacteriology and relates to methods for determining the effect of an antibiotic on microorganisms.
Известен способ определения чувствительности микроба к антибиотику [РФ, п. 2121678, МПК7 G01N 33/48, А61К 38/19, C12Q 1/18, опубл. 10.11.1998 г.], включающий сравнение зон задержек роста исследуемого микроорганизма после контакта с бумажным диском с ампициллином с одной стороны и диском совместно с цитокином с другой стороны чашки Петри.A known method for determining the sensitivity of a microbe to an antibiotic [RF, p. 2121678, IPC 7 G01N 33/48, A61K 38/19, C12Q 1/18, publ. November 10, 1998], including comparing the zones of growth inhibition of the studied microorganism after contact with a paper disk with ampicillin on one side and a disk together with a cytokine on the other side of the Petri dish.
Недостатки способа заключаются в том, что единовременно может исследоваться только одна культура и данный способ не предусматривает количественного учета результатов. Отсутствуют контрольные данные.The disadvantages of the method are that only one culture can be studied at a time, and this method does not provide for quantitative accounting of the results. Missing control data.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ определения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотика [РФ, п. 2213780, МПК 7 C12Q 1/04, C12N 1/20, опубл. 10.10.2003 г., (прототип)], включающий разведение исследуемого антибиотика в питательной среде с индикатором и добавление в эту среду суспензии бактерий. О бактерицидном и бактериостатическом действии антибиотика в данном способе судят по отсутствию или наличию помутнения и изменению цвета среды в планшете.Closest to the claimed invention is a method for determining the bacteriostatic and bactericidal action of an antibiotic [RF, p. 2213780, IPC 7 C12Q 1/04, C12N 1/20, publ. 10.10.2003, (prototype)], including the dilution of the investigated antibiotic in a nutrient medium with an indicator and the addition of bacterial suspensions to this medium. The bactericidal and bacteriostatic effect of the antibiotic in this method is judged by the absence or presence of turbidity and a change in the color of the medium in the tablet.
Недостатками способа являются недостаточная точность регистрируемых результатов, так как учет проводится визуально. Определение действия антибиотика на микроорганизм требует проведения нескольких учетов результатов и дополнительных затрат на реагенты. В способе-прототипе невозможно определение стимулирующего действия антибиотика на микроорганизм.The disadvantages of the method are the lack of accuracy of the recorded results, since accounting is carried out visually. Determining the effect of an antibiotic on a microorganism requires several results and additional costs for reagents. In the prototype method, it is impossible to determine the stimulating effect of the antibiotic on the microorganism.
Техническим результатом изобретения является повышение точности качественной и количественной оценки бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы.The technical result of the invention is to improve the accuracy of the qualitative and quantitative assessment of the bacteriostatic, bactericidal and stimulating effects of the antibiotic on microorganisms.
Технический результат достигается тем, что в способе определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы, включающем приготовление разведений исследуемого антибиотика в питательной среде и регистрацию наличия роста микроорганизмов, новым является то, что используют 50 разных культур микроорганизмов, одновременно нанесенных на поверхность твердой питательной среды (ПА) с разными концентрациями антибиотиков, измеряют диаметр выросших колоний исследуемых микроорганизмов и определяют действие антибиотика как бактерицидное, бактериостатическое или стимулирующее при достоверном увеличении или снижении диаметра колоний по сравнению с контролем.The technical result is achieved by the fact that in a method for determining the bacteriostatic, bactericidal and stimulating effect of an antibiotic on microorganisms, including preparing dilutions of the studied antibiotic in a nutrient medium and detecting the presence of microorganism growth, it is new that 50 different cultures of microorganisms are applied simultaneously applied to the surface of a solid nutrient medium (PA) with different concentrations of antibiotics, measure the diameter of the grown colonies of the studied microorganisms and determine they show the effect of the antibiotic as bactericidal, bacteriostatic or stimulating with a significant increase or decrease in the diameter of the colonies compared to the control.
Заявляемый способ использует 50 разных культур микроорганизмов, одновременно нанесенных на поверхность твердой питательной среды (ПА) с разными концентрациями антибиотиков, позволяет дать количественную оценку действию антибиотика на исследуемые культуры, все это дает возможность статистической обработки результатов и, следовательно, повышает точность и достоверность получаемых результатов.The inventive method uses 50 different cultures of microorganisms simultaneously deposited on the surface of a solid nutrient medium (PA) with different concentrations of antibiotics, allows you to quantify the effect of the antibiotic on the studied cultures, all this makes it possible to statistical processing of the results and, therefore, increases the accuracy and reliability of the results .
Это отличие позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «новизна».This difference allows us to conclude that the proposed technical solution meets the criterion of "novelty."
Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, не выявлены в других технических решениях при изучении данной и смежных областей техники и, следовательно, обеспечивают заявляемому решению соответствие критерию «изобретательский уровень».Signs that distinguish the claimed technical solution from the prototype are not identified in other technical solutions when studying this and related areas of technology and, therefore, provide the claimed solution with the criterion of "inventive step".
Сущность изобретения поясняется чертежами:The invention is illustrated by drawings:
На фиг.1 представлено действие разных концентраций гентамицина на рост исследуемых бактерий, где 1 - контроль; 2, 3 и 4 - концентрации антибиотика: 40, 120 и 240 мкг/мл. На фиг.2 представлено действие антибиотиков дискодиффузным методом на Staphylococcus aureus 206. На фиг.3 представлено действие разных концентраций цефтазидима на рост исследуемых бактерий, где 1 - контроль; 2, 3 и 4 - концентрации антибиотика: 10, 30 и 100 мкг/мл.Figure 1 shows the effect of different concentrations of gentamicin on the growth of the studied bacteria, where 1 is the control; 2, 3 and 4 - antibiotic concentrations: 40, 120 and 240 mcg / ml. Figure 2 shows the effect of antibiotics by the disk diffusion method on Staphylococcus aureus 206. Figure 3 shows the effect of different concentrations of ceftazidime on the growth of the bacteria under study, where 1 is the control; 2, 3 and 4 - antibiotic concentrations: 10, 30 and 100 μg / ml.
Предлагаемый способ выполняется в три этапа, исследование проводят в чашках Петри.The proposed method is performed in three stages, the study is carried out in Petri dishes.
Первый этап - в пробирках со стерильным физиологическим раствором готовят разведения антибиотика в трех разных концентрациях. В пептонный агар (1% пептона, 0,5% NaCl на дистиллированной воде с 2%-ным агаром, рН 7,4), предварительно остуженный до 40°С, добавляют приготовленный ранее раствор антибиотика. Среду перемешивают и мерно (по 30 мл) разливают по чашкам Петри. Разное количество среды в чашках может исказить получаемые результаты.The first stage - in test tubes with sterile saline, antibiotic dilutions are prepared in three different concentrations. In the peptone agar (1% peptone, 0.5% NaCl in distilled water with 2% agar, pH 7.4), previously cooled to 40 ° C, add the previously prepared antibiotic solution. The medium is mixed and measured (30 ml) is poured into Petri dishes. Different amounts of medium in the cups can distort the results.
Второй этап - стерилизуют ручку и станину репликатора. Из суточных испытуемых культур по оптическому стандарту мутности на 10 единиц на стерильном 0,9%-ном растворе хлорида натрия готовят суспензию, которой пастеровскими пипетками заполняют лунки станины репликатора. Затем с помощью репликатора делают реплики (Miller, 1972) до 50 исследуемых культур одновременно на поверхность незасеянной среды с антибиотиком. Параллельно с опытом ставят контроль. Контролем служат чашки с пептонным агаром, не содержащим антибиотик, засеянными теми же испытуемыми микроорганизмами. Опытные и контрольные чашки с испытуемыми культурами в течение 18 часов инкубируют в термостате при 37°С.The second stage - sterilize the handle and bed of the replicator. From daily test cultures according to the optical turbidity standard of 10 units in a sterile 0.9% solution of sodium chloride, a suspension is prepared with which the wells of the replicator bed are filled with Pasteur pipettes. Then, using a replicator, replicas are made (Miller, 1972) of up to 50 test cultures simultaneously on the surface of an inoculated medium with an antibiotic. In parallel with experience, they put control. Controls are antibiotic-free peptone agar plates seeded with the same test microorganisms. Experimental and control plates with test cultures were incubated for 18 hours in an incubator at 37 ° C.
Третий этап - оценивают реакции исследуемых культур на действие антибиотика путем измерения и сравнения диаметров колоний в опыте и контроле. Проводят статистическую обработку результатов. Действие антибиотика на микроорганизмы определяют как бактерицидное, бактериостатическое или стимулирующее при достоверном увеличении или снижении диаметра колоний по сравнению с контролем.The third stage - assess the reaction of the studied cultures to the action of the antibiotic by measuring and comparing the diameters of the colonies in the experiment and control. Perform statistical processing of the results. The effect of the antibiotic on microorganisms is defined as bactericidal, bacteriostatic or stimulating with a significant increase or decrease in the diameter of the colonies compared to the control.
Пример 1. Определение действия гентамицина на бактерии, предоставленные бак. лабораторией Городской клинической больницы №6 им. Н.С.Карповича (бывшая ГБСМП) г.Красноярска.Example 1. Determination of the effect of gentamicin on the bacteria provided by the tank. Laboratory of the City Clinical Hospital №6 named after N.S. Karpovich (former GBSMP) Krasnoyarsk.
В эксперименте испытуемыми культурами были бактериальные штаммы: Bacillus cereus 262, Acinetobacter baumanii 190, Escherichia coli 247, Enterobacter aerogenes 264, Klebsiella pneumonii 181, Providenciae rettgeri 257, Pseudomonas aeruginosa 202, Pseudomonas aeruginosa 190, Corynebacterium xerosis 313, Enterococcus faecium 263, Staphylococcus aureus 206, Staphylococcus aureus 179. В качестве питательной среды использовали пептонный агар. Гентамицин брали в виде 4% раствора в ампулах. Готовили разведения антибиотика в физиологическом растворе в трех концентрациях - 40, 120 и 240 мкг/мл. Для последующего сравнения полученных результатов с известным дискодиффузным методом одну из концентраций (120 мкг/мл) брали равной концентрации гентамицина в бумажном диске. Приготовленные растворы добавляли в чашки Петри с предварительно остуженным до 40°С пептонным агаром. Из суточных испытуемых культур по оптическому стандарту мутности на 10 единиц на стерильном физиологическом растворе готовили суспензию. Приготовленной суспензией заполняли лунки станины репликатора и с помощью репликатора делали реплики испытуемых культур в трех повторностях на поверхность питательной среды с антибиотиком (опыт). Параллельно с опытными чашками делали реплики исследуемых культур на поверхность питательной среды без антибиотика (контроль). Далее в течение 18 часов культуры инкубировали в термостате при 37°С. Затем проводили оценку полученных результатов: измеряли и сравнивали диаметры колоний в опыте и контроле (фиг.1), проводили статистическую обработку данных. Учитывали в опыте и контроле среднюю арифметическую величину измерений диаметра колоний, ошибку средней арифметической и достоверность сравнения полученных результатов. В таблице 1 представлены результаты сравнения диаметра колоний (в мм) исследуемых бактерий в опыте (при действии гентамицина) и контроле (без гентамицина).In the experiment, the tested cultures were the bacterial strains: Bacillus cereus 262, Acinetobacter baumanii 190, Escherichia coli 247, Enterobacter aerogenes 264, Klebsiella pneumonii 181, Providenciae rettgeri 257, Pseudomonocerium aeruginosa 202, Pseudomphocomium aeruginosa 202, Pseudomphocomium aeruginosa 202, Pseudomphocomium aeruginosa 202. 206, Staphylococcus aureus 179. Peptone agar was used as a growth medium. Gentamicin was taken as a 4% solution in ampoules. Antibiotic dilutions were prepared in physiological saline in three concentrations - 40, 120, and 240 μg / ml. For subsequent comparison of the results with the known disc diffusion method, one of the concentrations (120 μg / ml) was taken equal to the concentration of gentamicin in the paper disk. The prepared solutions were added to Petri dishes with peptone agar previously cooled to 40 ° С. A suspension was prepared from daily test cultures according to the optical turbidity standard of 10 units in sterile physiological saline. The prepared suspension was filled in the wells of the bed of the replicator and using the replicator we made replicas of the tested cultures in triplicate on the surface of the nutrient medium with antibiotic (experiment). In parallel with the experimental cups, replicas of the studied cultures were made on the surface of the nutrient medium without antibiotic (control). Then, for 18 hours, cultures were incubated in an incubator at 37 ° C. Then, the results were evaluated: the diameters of the colonies were measured and compared in the experiment and control (Fig. 1), and the data were statistically processed. In the experiment and control, the arithmetic mean of the measurements of the diameter of the colonies, the arithmetic mean error and the reliability of the comparison of the results were taken into account. Table 1 presents the results of comparing the diameter of the colonies (in mm) of the studied bacteria in the experiment (under the action of gentamicin) and control (without gentamicin).
Результаты, полученные заявляемым способом, сравнили с результатами по определению действия гентамицина на бактерии диско-диффузным методом. Для этого суспензией исследуемых бактерий засевали чашку Петри с пептонным агаром и раскладывали диски, пропитанные антибиотиками (фиг.2). Далее в течение 18 часов культуры инкубировали в термостате при 37°С. Результаты учитывали путем измерения диаметров зон задержки роста в опыте и контроле. В таблице 1 дан диаметр зон задержки роста (мм) испытуемых культур при использовании дискодиффузного метода.The results obtained by the claimed method were compared with the results by determining the effect of gentamicin on bacteria by the disk-diffusion method. For this, a suspension of the studied bacteria was seeded with a Petri dish with peptone agar and the discs impregnated with antibiotics were laid out (Fig. 2). Then, for 18 hours, cultures were incubated in an incubator at 37 ° C. The results were taken into account by measuring the diameters of the zones of growth inhibition in the experiment and control. Table 1 shows the diameter of the zones of growth inhibition (mm) of the tested cultures using the disc diffusion method.
При сравнении действия гентамицина на рост исследуемых бактерий предлагаемым способом с дискодиффузным выявлено, что действия совпали в четырех случаях. В одном случае выявлено достоверное бактерицидное действие гентамицина на рост Acinetobacter baumanii 190. В трех случаях действие отсутствовало (Enterobacter aerogenes 264, Providenciae rettgeri 257, Pseudomonas aeruginosa 190). В остальных случаях результаты не совпали. Предлагаемым способом выявлено еще четыре достоверных бактерицидных действия и одно достоверное стимулирующее.When comparing the effects of gentamicin on the growth of the studied bacteria by the proposed method with disc diffusion, it was found that the actions coincided in four cases. In one case, a significant bactericidal effect of gentamicin on the growth of Acinetobacter baumanii 190 was revealed. In three cases, there was no effect (Enterobacter aerogenes 264, Providenciae rettgeri 257, Pseudomonas aeruginosa 190). In other cases, the results did not match. The proposed method revealed four more reliable bactericidal actions and one reliable stimulating.
Пример 2. Определение действия цефтазидима на бактерии, предоставленные бак. лабораторией Городской клинической больницы №6 им. Н.С.Карповича (бывшая ГБСМП) г.Красноярска, по приведенной на примере 1 схеме. Цефтазидим брали в виде порошка. Готовили разведения антибиотика в физиологическом растворе в трех концентрациях - 10, 30 и 100 мкг/мл. Для последующего сравнения результатов двух методов одну из концентраций (30 мкг/мл) брали равной концентрации цефтазидима в бумажном диске. В таблице 2 представлены результаты сравнения диаметра колоний (в мм) исследуемых бактерий в опыте (при действии цефтазидима) и контроле (без цефтазидима).Example 2. Determination of the effect of ceftazidime on the bacteria provided by the tank. Laboratory of the City Clinical Hospital №6 named after N.S. Karpovich (former GBSMP) Krasnoyarsk, according to the scheme shown in example 1. Ceftazidime was taken in powder form. Antibiotic dilutions were prepared in physiological saline in three concentrations - 10, 30, and 100 μg / ml. For subsequent comparison of the results of the two methods, one of the concentrations (30 μg / ml) was taken equal to the concentration of ceftazidime in the paper disk. Table 2 presents the results of comparing the diameter of the colonies (in mm) of the studied bacteria in the experiment (under the action of ceftazidime) and control (without ceftazidime).
При сравнении действия цефтазидима на рост исследуемых бактерий предлагаемым способом с дискодиффузным выявлено, что действия совпали в четырех случаях. В одном случае выявлено достоверное бактерицидное действие цефтазидима на рост Corynebacterium xerosis 313. В трех случаях действие отсутствовало (Escherichia coli 247, Enterobacter aerogenes 264, Enterococcus faecium 263). В остальных случаях результаты не совпали. Предлагаемым способом выявлено еще пять достоверных бактерицидных действий и два достоверных стимулирующих.When comparing the effects of ceftazidime on the growth of the studied bacteria by the proposed method with disc diffusion, it was found that the actions coincided in four cases. In one case, a significant bactericidal effect of ceftazidime on the growth of Corynebacterium xerosis 313 was detected. In three cases, there was no effect (Escherichia coli 247, Enterobacter aerogenes 264, Enterococcus faecium 263). In other cases, the results did not match. The proposed method revealed five more reliable bactericidal actions and two reliable stimulating.
Заявляемый способ позволяет дать количественную оценку действия антибиотика на исследуемые культуры. Оценка проводится путем измерения диаметра колоний испытуемых микроорганизмов в опыте и контроле с последующей статистической обработкой данных. Способ позволяет выявить не только бактериостатическое и бактерицидное действие антибиотика на микроорганизм, но и стимулирующее действие. Результаты могут быть выражены как в абсолютных, так и относительных величинах. Данным способом возможно изучение действия антибиотика на 50 исследуемых культур одновременно.The inventive method allows to quantify the effect of the antibiotic on the studied culture. Evaluation is carried out by measuring the diameter of the colonies of the tested microorganisms in the experiment and control, followed by statistical processing of the data. The method allows to identify not only the bacteriostatic and bactericidal effect of the antibiotic on the microorganism, but also the stimulating effect. Results can be expressed in both absolute and relative terms. In this way, it is possible to study the effect of antibiotic on 50 studied cultures at the same time.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009143513/10A RU2410437C1 (en) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | Method of determining bacteriostatic, bactericidal and stimulating effect of antibiotic on microorganism |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009143513/10A RU2410437C1 (en) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | Method of determining bacteriostatic, bactericidal and stimulating effect of antibiotic on microorganism |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2410437C1 true RU2410437C1 (en) | 2011-01-27 |
Family
ID=46308417
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009143513/10A RU2410437C1 (en) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | Method of determining bacteriostatic, bactericidal and stimulating effect of antibiotic on microorganism |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2410437C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108485953A (en) * | 2018-04-23 | 2018-09-04 | 莱茵技术（上海）有限公司 | A kind of germ culturing device and the method for the test of buccal cigarette bacteriostasis property |
-
2009
- 2009-11-24 RU RU2009143513/10A patent/RU2410437C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108485953A (en) * | 2018-04-23 | 2018-09-04 | 莱茵技术（上海）有限公司 | A kind of germ culturing device and the method for the test of buccal cigarette bacteriostasis property |
| CN108485953B (en) * | 2018-04-23 | 2023-08-01 | 上海新型烟草制品研究院有限公司 | Bacteria culture device and method for testing antibacterial performance of buccal cigarettes |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10696999B2 (en) | Rapid method for detection of Salmonella live vaccine strains | |
| Barry et al. | An improved single-disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly-growing pathogens | |
| US20220243248A1 (en) | Method for the rapid determination of susceptibility or resistance of bacteria to antibiotics | |
| US20080166753A1 (en) | Microbial Growth Assay | |
| CN101790683A (en) | The composition and the device that are used for diagnosing microbial infections | |
| Ren et al. | A new MSPQC for rapid growth and detection of Mycobacterium tuberculosis | |
| Slade et al. | An in vitro collagen perfusion wound biofilm model; with applications for antimicrobial studies and microbial metabolomics | |
| Bharti et al. | Heat stable antimicrobial activity of Burkholderia gladioli OR1 against clinical drug resistant isolates | |
| RU2410437C1 (en) | Method of determining bacteriostatic, bactericidal and stimulating effect of antibiotic on microorganism | |
| RU2319746C2 (en) | Method for accelerated assay of sensitivity of burckholderiae to chemopreparations | |
| US8911962B2 (en) | Method for neutralization of antibiotics in a culture medium | |
| CN110117531B (en) | Drug-resistant phenotype rapid detection drug-sensitive panel and drug-resistant phenotype rapid detection method | |
| Bitew et al. | Meso-tartrate inhibits intracellular replication of Coxiella burnetii, the causative agent of the zoonotic disease Q fever | |
| RU2666257C1 (en) | Method for determining sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics | |
| RU2752895C1 (en) | Salmonella enterica bacterial strain vgnki-11 (vkshm-b-848m) as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis | |
| EP4357778A1 (en) | Treatment of microbial infections diagnosed using the biomarker d-lactate | |
| Sismaet | Development and Optimization of Electrochemical Sensors to Detect Bacterial Pathogens for Point-Of-Care Applications | |
| KR102096662B1 (en) | Reagent for the selection assay of acinetobacter baumannii like gram negative bacteria and selection assay of acinetobacter baumannii like gram negative bacteria using the same | |
| Almosa et al. | Biofilm Formation by Clinical Acinetobacter baumannii strains and its effect on antibiotic resistance | |
| RU2156807C2 (en) | Method of determination of antilactoferrin activity in microorganisms | |
| Mustafa et al. | Application of Silver Oxide Nanoparticles as Antibiofilm and Detection of Beta Lactamase Gene in Escherichia Coli Isolated from Diabetic Mellitus Patients. | |
| RU2603085C1 (en) | Differential diagnostic nutrient medium for determining porin-dependent mechanisms of resistance to beta-lactam antibiotics in bacteria pseudomonas aeruginosa | |
| RU2518372C1 (en) | METHOD OF DETERMINING SENSITIVITY OF MICROORGANISMS OF Salmonella GENUS TO ANTIBACTERIAL AGENTS | |
| Jaber et al. | Antibiotic susceptibility of Proteus Mirabillis that isolates of Diabetic foot ulcers in Al-Diwaniyah Hospital | |
| RU2192642C2 (en) | Method for predicting clinical efficiency of antibacterial preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20121125 |