RU2666257C1 - Method for determining sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics - Google Patents
Method for determining sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics Download PDFInfo
- Publication number
- RU2666257C1 RU2666257C1 RU2017130194A RU2017130194A RU2666257C1 RU 2666257 C1 RU2666257 C1 RU 2666257C1 RU 2017130194 A RU2017130194 A RU 2017130194A RU 2017130194 A RU2017130194 A RU 2017130194A RU 2666257 C1 RU2666257 C1 RU 2666257C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibiotics
- bacterial
- antibiotic
- suspension
- determining
- Prior art date
Links
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 9
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 claims 1
- 208000012766 Growth delay Diseases 0.000 claims 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 abstract description 4
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 abstract description 3
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002260 meropenem Drugs 0.000 description 4
- DMJNNHOOLUXYBV-PQTSNVLCSA-N meropenem Chemical compound C=1([C@H](C)[C@@H]2[C@H](C(N2C=1C(O)=O)=O)[C@H](O)C)S[C@@H]1CN[C@H](C(=O)N(C)C)C1 DMJNNHOOLUXYBV-PQTSNVLCSA-N 0.000 description 4
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- JUZNIMUFDBIJCM-ANEDZVCMSA-N Invanz Chemical compound O=C([C@H]1NC[C@H](C1)SC=1[C@H](C)[C@@H]2[C@H](C(N2C=1C(O)=O)=O)[C@H](O)C)NC1=CC=CC(C(O)=O)=C1 JUZNIMUFDBIJCM-ANEDZVCMSA-N 0.000 description 2
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- WKDDRNSBRWANNC-UHFFFAOYSA-N Thienamycin Natural products C1C(SCCN)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(C(O)C)C21 WKDDRNSBRWANNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 2
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000009635 antibiotic susceptibility testing Methods 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 238000011203 antimicrobial therapy Methods 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 229960002100 cefepime Drugs 0.000 description 2
- HVFLCNVBZFFHBT-ZKDACBOMSA-N cefepime Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1(C)CCCC1 HVFLCNVBZFFHBT-ZKDACBOMSA-N 0.000 description 2
- 229960000484 ceftazidime Drugs 0.000 description 2
- NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N ceftazidime pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1=CC=CC=C1 NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N 0.000 description 2
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 2
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 2
- 229960001668 cefuroxime Drugs 0.000 description 2
- JFPVXVDWJQMJEE-IZRZKJBUSA-N cefuroxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(N)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CC=CO1 JFPVXVDWJQMJEE-IZRZKJBUSA-N 0.000 description 2
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229960000895 doripenem Drugs 0.000 description 2
- AVAACINZEOAHHE-VFZPANTDSA-N doripenem Chemical compound C=1([C@H](C)[C@@H]2[C@H](C(N2C=1C(O)=O)=O)[C@H](O)C)S[C@@H]1CN[C@H](CNS(N)(=O)=O)C1 AVAACINZEOAHHE-VFZPANTDSA-N 0.000 description 2
- 229960002770 ertapenem Drugs 0.000 description 2
- 229960002182 imipenem Drugs 0.000 description 2
- ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N imipenem Chemical compound C1C(SCC\N=C\N)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@H]([C@H](O)C)[C@H]21 ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N 0.000 description 2
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008262 antibiotic resistance mechanism Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 208000037815 bloodstream infection Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960004682 cefoperazone Drugs 0.000 description 1
- GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N cefoperazone Chemical compound O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2C(C(O)=O)=C(CSC=3N(N=NN=3)C)CS[C@@H]21 GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000011309 routine diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960005256 sulbactam Drugs 0.000 description 1
- FKENQMMABCRJMK-RITPCOANSA-N sulbactam Chemical compound O=S1(=O)C(C)(C)[C@H](C(O)=O)N2C(=O)C[C@H]21 FKENQMMABCRJMK-RITPCOANSA-N 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Разработанный способ может быть использован в бактериологических лабораториях клиник для определения чувствительности бактериальных гемокультур к антибиотикам.The invention relates to medicine, namely to laboratory diagnostics. The developed method can be used in bacteriological laboratories of clinics to determine the sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics.
Известны стандартные способы определения чувствительности гемокультур к антибиотикам, которые включают световую микроскопию с окраской по Граму, высев первичной бульонной гемокультуры на дифференциально-диагностические плотные питательные среды с последующим субкультивированием, получение чистых культур микроорганизмов, приготовление бактериальной суспензии из чистых культур микроорганизмов, инокуляцию полученной суспензией питательного агара Мюллера-Хинтона, помещение на поверхность инокулированной питательной среды бумажных дисков с тестируемыми антибиотиками, инкубацию образцов при 35°С с последующим считыванием зон задержки роста культуры микроорганизмов вокруг дисков с антибиотиками. Вместо бумажных дисков с антибиотиками могут быть использованы специальные тест-полоски, импрегнированные антибиотиком в различных концентрациях. Известен способ определения чувствительности гемокультур к антибиотикам с помощью автоматических микробиологических анализаторов, включающий световую микроскопию с окраской по Граму, высев первичной бульонной гемокультуры на дифференциально-диагностические плотные питательные среды с последующим субкультивированием, получение чистых культур микроорганизмов, приготовление бактериальной суспензии из чистых культур микроорганизмов, инокуляцию полученной суспензией специальных карт, содержащих различные антибиотики в различных концентрациях с последующим учетом результатов [Методические указания МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам», МУК 4.2.2886-11 «Идентификация микроорганизмов и определение чувствительности их к антибиотикам с применением автоматизированной системы для биохимического анализа», клинические рекомендации МАКМАХ «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам», версия 2015-02. http://www.antibiotic.ru/minzdrav/files/ docs/clrec-dsma2015.pdf].Known standard methods for determining the sensitivity of hemocultures to antibiotics, which include light microscopy with Gram stain, plating primary broth hemoculture on differential diagnostic solid nutrient media followed by subculture, obtaining pure cultures of microorganisms, preparing a bacterial suspension from pure cultures of microorganisms, inoculating the resulting suspension of nutrient Muller-Hinton agar, paper surface inoculated culture medium x disks with the test antibiotic, incubating the samples at 35 ° C followed by the read latency zones microorganism culture growth around the discs with antibiotics. Instead of paper discs with antibiotics, special test strips impregnated with antibiotic in various concentrations can be used. A known method for determining the sensitivity of hemocultures to antibiotics using automatic microbiological analyzers, including light microscopy with Gram stain, plating the primary broth hemoculture on differential diagnostic solid nutrient media with subsequent subculture, obtaining pure cultures of microorganisms, preparing a bacterial suspension from pure cultures of microorganisms, inoculation obtained suspension of special cards containing various antibiotics in various concentrations followed by results [Methodical guidelines MUK 4.2.1890-04 “Determining the sensitivity of microorganisms to antibacterial drugs”, MUK 4.2.2886-11 “Identifying microorganisms and determining their sensitivity to antibiotics using an automated system for biochemical analysis”, IACMAC clinical guidelines "Determination of the sensitivity of microorganisms to antimicrobial agents", version 2015-02. http://www.antibiotic.ru/minzdrav/files/ docs / clrec-dsma2015.pdf].
Основным недостатком данных способов является длительное время, необходимое для получения результата (обычно не менее 2 сут), что обусловлено физиологией микроорганизмов, требующих времени для накопления биомассы. Это является критичным для своевременного назначения адекватной антимикробной терапии, так как известно, что каждый час задержки с назначением антибиотика у больных с септическим шоком сопровождается приростом летальности на 6,7% [Kumar A., Roberts D., Wood К.Е. et al. Duration of hypotension before initiation of effective antimicrobial therapy is the critical determinant of survival in human septic shock. Crit. Care Med. 2006; 34 (6): 1589-1596].The main disadvantage of these methods is the long time required to obtain a result (usually at least 2 days), which is due to the physiology of microorganisms that require time to accumulate biomass. This is critical for the timely appointment of adequate antimicrobial therapy, since it is known that every hour of delay in prescribing an antibiotic in patients with septic shock is accompanied by an increase in mortality of 6.7% [Kumar A., Roberts D., Wood K.E. et al. Duration of hypotension before initiation of effective antimicrobial therapy is the critical determinant of survival in human septic shock. Crit. Care Med. 2006; 34 (6): 1589-1596].
Известен ряд альтернативных способов оценки чувствительности гемокультур к антибиотикам:A number of alternative methods are known for assessing the sensitivity of hemocultures to antibiotics:
1. Способы косвенного определения устойчивости к антибиотикам по выявлению соответствующих генетических детерминант методом полимеразной цепной реакции [Dark P., Wilson С, Blackwood В. et al. Accuracy of LightCycler SeptiFast for the detection and identification of pathogens in the blood of patients with suspected sepsis: a systematic review protocol. BMJ Open. 2012; 2 (1): е000392]. Данные способы позволяют оценить устойчивость лишь к некоторым препаратам и не охватывают всего необходимого их перечня.1. Methods for indirectly determining antibiotic resistance by detecting the corresponding genetic determinants by polymerase chain reaction [Dark P., Wilson C, Blackwood B. et al. Accuracy of LightCycler SeptiFast for the detection and identification of pathogens in the blood of patients with suspected sepsis: a systematic review protocol. BMJ Open. 2012; 2 (1): e000392]. These methods make it possible to evaluate resistance to only certain drugs and do not cover all the necessary list of them.
2. Определение устойчивости к антибиотикам на основе физико-химического анализа методом MALDI-ToF масс-спектрометрии продуктов, образующихся при инкубации исследуемого микроорганизма в растворе антимикробного препарата [Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight (MALDI-ToF) Mass Spectrometry for Detection of Antibiotic Resistance Mechanisms: from Research to Routine Diagnosis. Clin Microbiol Rev. 2013; 26 (1): 103-114]. Данная технология является в настоящее время экспериментальной и также предполагает использование в качестве субстрата чистых культур микроорганизмов.2. Determination of antibiotic resistance based on physicochemical analysis using the MALDI-ToF method of mass spectrometry of products formed during incubation of the studied microorganism in an antimicrobial solution [Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight (MALDI-ToF) Mass Spectrometry for Detection of Antibiotic Resistance Mechanisms: from Research to Routine Diagnosis. Clin Microbiol Rev. 2013; 26 (1): 103-114]. This technology is currently experimental and also involves the use of pure cultures of microorganisms as a substrate.
3. Способ определения чувствительности гемокультур к антибиотикам путем анализа в режиме реального времени микроскопических изображений, отражающих гибель микробных клеток в присутствии антибиотиков. Результат антибиотикограммы доступен в среднем через 6-6,5 ч. [Price С, Douglas I., Turtle Е. et al. Rapid identification and antimicrobial susceptibility testing of bacteria in bloodstream infections using the Accelerate ID/AST technology. ECCMID 2015; EV0493].3. A method for determining the sensitivity of hemocultures to antibiotics by analyzing in real time microscopic images reflecting the death of microbial cells in the presence of antibiotics. The result of the antibioticogram is available on average after 6-6.5 hours. [Price C, Douglas I., Turtle E. et al. Rapid identification and antimicrobial susceptibility testing of bacteria in bloodstream infections using the Accelerate ID / AST technology. ECCMID 2015; EV0493].
4. Способ экспресс-анализа in vitro чувствительности грамотрицательных бактерий к антибиотикам в биологических жидкостях по повышению уровня эндотоксина в тестируемых образцах после добавления того или иного антибиотика (заявка WO2014RU00074 20140131). Заявленная применимость данного способа ограничена только грамотрицательными бактериями.4. The method of rapid analysis in vitro of the sensitivity of gram-negative bacteria to antibiotics in biological fluids by increasing the level of endotoxin in the test samples after adding one or another antibiotic (application WO2014RU00074 20140131). The claimed applicability of this method is limited only by gram-negative bacteria.
Также известен способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам (RU №2505813 Сl, 27.01.2014), включающий забор биологического материала, инкубацию содержащихся в нем микроорганизмов на питательной среде, введение в питательную среду исследуемого антимикробного вещества с последующей оценкой результата. Исследуемое антимикробное вещество вводят в питательную среду до начала культивирования микроорганизмов в концентрации, близкой к максимально достижимой в месте забора биологического материала. Оценку чувствительности микроорганизмов к антимикробному веществу осуществляют после появления видимого роста микроорганизмов в контрольном посеве. Недостатком данного способа является недостаточная точность получаемого результата, так как ряд антибиотиков, вводимых в плотную питательную среду в процессе ее приготовления, подвергается неизбежной деградации, что делает непредсказуемой концентрацию препарата в готовой среде и не позволяет оценить получаемый результат. Данный метод использован нами в качестве наиболее близкого аналога разработанного способа.Also known is a method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances (RU No. 2505813 Cl, 01/27/2014), including the collection of biological material, incubation of the microorganisms contained in it on a nutrient medium, introducing the antimicrobial substance under study into the nutrient medium, with subsequent evaluation of the result. The studied antimicrobial substance is introduced into the nutrient medium before the start of the cultivation of microorganisms in a concentration close to the maximum attainable at the site of collection of biological material. The assessment of the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances is carried out after the appearance of visible growth of microorganisms in the control crop. The disadvantage of this method is the insufficient accuracy of the result, since a number of antibiotics introduced into a solid nutrient medium during its preparation undergoes inevitable degradation, which makes the concentration of the drug in the finished medium unpredictable and does not allow to evaluate the result. This method was used by us as the closest analogue of the developed method.
Технической проблемой является создание способа определения чувствительности бактериальных гемокультур к антибиотикам.The technical problem is the creation of a method for determining the sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics.
Техническим результатом, достигаемым при реализации настоящего изобретения, является повышение точности определения чувствительности бактериальных гемокультур к антибиотикам в условиях сокращения времени исследования за счет:The technical result achieved by the implementation of the present invention is to increase the accuracy of determining the sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics in terms of reducing research time due to:
- использования при тестировании бульонной культуры непосредственно из флакона для посева крови;- use when testing the broth culture directly from the vial for sowing blood;
- инокуляции первичной бульонной гемокультурой агара Мюллера-Хинтона;- inoculation of the primary broth hemoculture of Mueller-Hinton agar;
- использования стандартных бумажных дисков с антибиотиками, помещаемых на поверхность инокулированного агара Мюллера-Хинтона;- the use of standard paper discs with antibiotics placed on the surface of the inoculated Mueller-Hinton agar;
- осуществления инкубации при температурном режиме 37°С до появления визуально заметного роста.- incubation at a temperature of 37 ° C until a visually noticeable growth occurs.
При этом сокращение времени исследования (время получения результата антибиотикограммы сокращается до 3-5 ч) обусловлено исключением стадии получения чистой культуры, а также сокращением времени инкубации чашек с дисками.At the same time, the reduction in the study time (the time for obtaining the result of the antibioticogram is reduced to 3-5 hours) is due to the exclusion of the stage of obtaining a pure culture, as well as to a reduction in the time of incubation of plates with disks.
Кроме того, проведенные нами клинико-лабораторные исследования (исследовались различные питательные среды, варианты приготовления суспензии, режимы инкубации) продемонстрировали высокую точность определения чувствительности гемокультур к антибиотикам лишь в случае сочетания следующих компонентов тестирования: первичная бульонная гемокультура (используемая для приготовления бактериальной суспензии с плотностью 0,5 стандарта мутности по McFarland), питательный агар Мюллера-Хинтона (используемый для инокуляции приготовленной суспензией), инкубация при 37°С в суховоздушном термостате. Нами было выявлено, что именно данное сочетание компонентов создает условия для ускоренного роста микроорганизмов, отмечаемого визуально, что сокращает время проведения тестирования.In addition, our clinical and laboratory studies (various nutrient media, suspension preparation options, incubation modes were studied) demonstrated the high accuracy of determining the sensitivity of blood cultures to antibiotics only if the following testing components were combined: primary broth culture (used to prepare a bacterial suspension with a density of 0 , 5 McFarland Turbidity Standards), Müller-Hinton Nutrient Agar (used to inoculate the prepared suspension ), incubation at 37 ° C in a dry-air thermostat. We have revealed that this particular combination of components creates the conditions for the accelerated growth of microorganisms, noted visually, which reduces the time of testing.
Таким образом, применение данного способа определения чувствительности гемокультур к антибиотикам позволяет повысить точность и сократить время исследования.Thus, the use of this method for determining the sensitivity of hemocultures to antibiotics can improve accuracy and reduce the time of the study.
Сущность разработанного способа.The essence of the developed method.
Осуществляют световую микроскопию с окраской по Граму. Готовят бактериальную суспензию плотностью 0,5 стандарта мутности по McFarland, используя непосредственно первичную бульонную гемокультуру. Приготовленной суспензией инокулируют питательный агар Мюллера-Хинтона. Через 10 мин после инокуляции на поверхность агара Мюллера-Хинтона помещают бумажные диски с тестируемыми антибиотиками и инкубируют при 37°С в суховоздушном термостате до появления визуально заметного роста. Оценивают диаметр зон задержки роста микроорганизмов вокруг дисков с антибиотиками, определяя устойчивость возбудителя бактериемии к тестируемому антибиотику при выявлении зоны задержки роста, диаметр которой пропорционален уровню активности тестируемого антибиотика.Gram light microscopy is performed. Prepare a bacterial suspension with a density of 0.5 standard turbidity according to McFarland, using directly the primary broth culture. Muller-Hinton nutrient agar was inoculated with the prepared suspension. 10 minutes after inoculation, paper discs with the tested antibiotics were placed on the surface of the Mueller-Hinton agar and incubated at 37 ° C in a dry-air thermostat until a visually noticeable growth appeared. The diameter of the zones of growth inhibition of microorganisms around the discs with antibiotics is evaluated, determining the resistance of the bacteriemia pathogen to the tested antibiotic in identifying the zone of growth inhibition, the diameter of which is proportional to the activity level of the tested antibiotic.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
Содержимое флаконов с положительной гемокультурой окрашивают по Граму и подвергают микроскопии, после чего в случае наличия монокультуры осуществляют приготовление разведения для инокуляции питательного агара Мюллера-Хинтона в стандартных чашках Петри.The contents of vials with a positive hemoculture are stained by Gram and subjected to microscopy, after which, in the presence of a monoculture, a dilution is prepared to inoculate nutrient Mueller-Hinton agar in standard Petri dishes.
Плотность инокулята - 0,5 стандарта мутности по McFarland. Через 10 мин после инокуляции агара Мюллера-Хинтона на его поверхность помещают бумажные диски с тестируемыми антибиотиками.The inoculum density is 0.5 McFarland turbidity standards. 10 minutes after the inoculation of Muller-Hinton agar, paper discs with tested antibiotics were placed on its surface.
Перечень тестируемых антибиотиков выбирается произвольно в зависимости от конкретных диагностических потребностей.The list of tested antibiotics is chosen randomly depending on the specific diagnostic needs.
Инокулированный агар с дисками помещают в суховоздушный термостат, где осуществляют инкубацию при 37°С, периодически (1 раз в час, начиная с третьего часа инкубации) просматривая чашки на предмет появления визуально заметного роста.Inoculated agar with disks is placed in a dry-air thermostat, where they are incubated at 37 ° C, periodically (1 time per hour, starting from the third hour of incubation), looking at the plates for visually noticeable growth.
При появлении роста оценивают диаметр зон задержки роста микроорганизмов вокруг дисков с антибиотиками. Наличие зоны задержки роста указывает на активность тестируемого препарата, причем диаметр данной зоны пропорционален уровню активности тестируемого антибиотика. Отсутствие зоны задержки роста свидетельствует об устойчивости возбудителя бактериемии к данному антибиотику.When growth occurs, evaluate the diameter of the zones of growth inhibition of microorganisms around discs with antibiotics. The presence of a growth inhibition zone indicates the activity of the test drug, and the diameter of this zone is proportional to the level of activity of the tested antibiotic. The absence of a zone of growth inhibition indicates the resistance of the bacteriemia pathogen to this antibiotic.
Пример.Example.
Больной К., 29 лет, на фоне клинической картины системного воспаления выявлена положительная гемокультура. При микроскопическом исследовании положительной гемокультуры с окраской по Граму визуализированы грамотрицательные палочки, начата антибиотикотерапия меропенемом.Patient K., 29 years old, showed a positive blood culture against the background of the clinical picture of systemic inflammation. Microscopic examination of positive blood culture with Gram staining visualized gram-negative bacilli, and started antibiotic therapy with meropenem.
Непосредственно из первичной бульонной гемокультуры была приготовлена бактериальная суспензия плотностью 0,5 стандарта мутности по McFarland, которой был инокулирован питательный агар Мюллера-Хинтона, после чего на его поверхность были помещены бумажные диски с тестируемыми антибиотиками (цефуроксим, цефтриаксон, цефтазидим, цефоперазон/сульбактам, цефепим, эртапенем, имипенем, меропенем, дорипенем, полимиксин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, амикацин). Через 3 ч инкубации образца в суховоздушном термостате при 37°С визуально отмечено появление зон задержки роста бактериальной культуры вокруг дисков с полимиксином и амикацином. Зоны задержки роста бактериальной культуры вокруг дисков с цефуроксимом, цефтриаксоном, цефтазидимом, цефоперазоном/сульбактамом, цефепимом, эртапенемом, имипенемом, меропенемом, дорипенемом, ципрофлоксацином и левофлоксацином отсутствовали. Антибиотикотерапия меропенемом признана неэффективной, произведена замена антибиотика на полимиксин с последующей положительной динамикой состояния пациента.A bacterial suspension with a density of 0.5 McFarland turbidity standard was prepared directly from the primary broth culture, which was inoculated with Müller-Hinton nutrient agar, and then paper disks with tested antibiotics (cefuroxime, ceftriaxone, ceftazidime, cefbactone /) were placed on its surface. cefepime, ertapenem, imipenem, meropenem, doripenem, polymyxin, ciprofloxacin, levofloxacin, amikacin). After 3 h of incubation of the sample in a dry-air thermostat at 37 ° C, the appearance of zones of growth inhibition of bacterial culture around discs with polymyxin and amikacin was visually observed. Zones of growth retardation of the bacterial culture around the disks with cefuroxime, ceftriaxone, ceftazidime, cefoperazone / sulbactam, cefepime, ertapenem, imipenem, meropenem, doripenem, ciprofloxacin and levofloxacin were absent. Antibiotic therapy with meropenem was recognized as ineffective; the antibiotic was replaced with polymyxin, followed by positive dynamics of the patient's condition.
Описанный пример подтверждает точность определения чувствительности бактериальных гемокультур к антибиотикам в условиях сокращения времени исследования.The described example confirms the accuracy of determining the sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics in the conditions of reducing the study time.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017130194A RU2666257C1 (en) | 2017-08-25 | 2017-08-25 | Method for determining sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017130194A RU2666257C1 (en) | 2017-08-25 | 2017-08-25 | Method for determining sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2666257C1 true RU2666257C1 (en) | 2018-09-06 |
Family
ID=63459752
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017130194A RU2666257C1 (en) | 2017-08-25 | 2017-08-25 | Method for determining sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2666257C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2804102C1 (en) * | 2022-11-15 | 2023-09-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный аграрный университет" | Method for determining sensitivity of microorganisms to antibiotics in treatment of purulent inflammatory diseases of animals |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5935806A (en) * | 1989-10-24 | 1999-08-10 | Infectech, Inc. | Method and apparatus for speciating and identifying MAI (Mycobacterium avium-intracellulare) and testing the same for antibiotic sensitivity |
| RU2262533C2 (en) * | 2003-05-20 | 2005-10-20 | Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова | Method for assay of microorganism sensitivity to antibiotic in treatment of suppurative-inflammatory process |
| RU2505813C1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-01-27 | Виктор Вениаминович Тец | Method for determining microorganism sensitivity to antimicrobial substances |
-
2017
- 2017-08-25 RU RU2017130194A patent/RU2666257C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5935806A (en) * | 1989-10-24 | 1999-08-10 | Infectech, Inc. | Method and apparatus for speciating and identifying MAI (Mycobacterium avium-intracellulare) and testing the same for antibiotic sensitivity |
| RU2262533C2 (en) * | 2003-05-20 | 2005-10-20 | Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова | Method for assay of microorganism sensitivity to antibiotic in treatment of suppurative-inflammatory process |
| RU2505813C1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-01-27 | Виктор Вениаминович Тец | Method for determining microorganism sensitivity to antimicrobial substances |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| [он лайн] [найдено 03.05.2018] найдено в Интернет: https://medi.ru/info/11622/. * |
| ЛЕВИ М.И. Сравнение результатов анализа эффективности антибиотиков при исследовании бактериальных культур и гнойного отделяемого больных методом серийных разведений и диско-диффузионным методом. Дезинфекционное дело N4, 1999, с. 25-33. * |
| ЛЕВИ М.И. Сравнение результатов анализа эффективности антибиотиков при исследовании бактериальных культур и гнойного отделяемого больных методом серийных разведений и диско-диффузионным методом. Дезинфекционное дело N4, 1999, с. 25-33. [он лайн] [найдено 03.05.2018] найдено в Интернет: https://medi.ru/info/11622/. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2804102C1 (en) * | 2022-11-15 | 2023-09-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный аграрный университет" | Method for determining sensitivity of microorganisms to antibiotics in treatment of purulent inflammatory diseases of animals |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Idelevich et al. | How to accelerate antimicrobial susceptibility testing | |
| von Ah et al. | Isothermal micro calorimetry–a new method for MIC determinations: results for 12 antibiotics and reference strains of E. coli and S. aureus | |
| Azrad et al. | Cheap and rapid in-house method for direct identification of positive blood cultures by MALDI-TOF MS technology | |
| EP2821499B1 (en) | Method for the rapid determination of susceptibility or resistance of bacteria to antibiotics | |
| Drago et al. | Microbiological diagnosis of implant-related infections: scientific evidence and cost/benefit analysis of routine antibiofilm processing | |
| Bharadwaj et al. | Clinical impact of the use of 16S rRNA sequencing method for the identification of “difficult‐to‐identify” bacteria in immunocompromised hosts | |
| Rahman et al. | Comparison of different microscopic methods with conventional TB culture | |
| Heifets | Drug susceptibility testing | |
| JP5615712B2 (en) | Method for removing antibiotics from blood culture samples | |
| RU2666257C1 (en) | Method for determining sensitivity of bacterial hemocultures to antibiotics | |
| Saito et al. | Delayed insertion of blood culture bottles into automated continuously monitoring blood culture systems increases the time from blood sample collection to the detection of microorganisms in bacteremic patients | |
| RU2262533C2 (en) | Method for assay of microorganism sensitivity to antibiotic in treatment of suppurative-inflammatory process | |
| Karami et al. | Resistant/susceptible classification of respiratory tract pathogenic bacteria based on volatile organic compounds profiling | |
| Stratton | Advanced phenotypic antimicrobial susceptibility testing methods | |
| Zomorodian et al. | Analysis of beta-hemolysis in human blood agars by Streptococcus pyogenes | |
| Akgun et al. | Comparison of rapid and routine methods of identification and antibiotic susceptibility testing of microorganisms from blood culture bottles | |
| Sambyal et al. | Changing antibiotic sensitivity pattern in gram negative nonfermenting isolates: A study in a tertiary care hospital | |
| Lainhart et al. | New bugs and new drugs: updates in clinical microbiology | |
| RU2786394C1 (en) | Method for reducing the level of clinical material contamination when soculated on dense nutritional media for isolation of mycobacterium tuberculosis complex | |
| Cole et al. | Isolation and Identification of Aerobic and Anaerobic Bacteria | |
| RU2156807C2 (en) | Method of determination of antilactoferrin activity in microorganisms | |
| Pandey et al. | Identification and culture test | |
| Sufa et al. | Efficient Techniques for Identifying Gram-Positive Clinical Bacteria | |
| RU2292398C2 (en) | Method for presentation of hospital staphylococcus strain staphylococcus aureus | |
| Aziz | Antibiotic Susceptibility Testing: Effects Of Variability In Technical Factors On Minimum Inhibitory Concentration Using Broth Microdilution |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190826 |