RU2409673C1 - Synthetic oligonucleotide primers for detecting 1a and 1b virus subgenotypes of viral diarrhoea - bovine mucosal disease and method of applying thereof - Google Patents
Synthetic oligonucleotide primers for detecting 1a and 1b virus subgenotypes of viral diarrhoea - bovine mucosal disease and method of applying thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2409673C1 RU2409673C1 RU2009119014/10A RU2009119014A RU2409673C1 RU 2409673 C1 RU2409673 C1 RU 2409673C1 RU 2009119014/10 A RU2009119014/10 A RU 2009119014/10A RU 2009119014 A RU2009119014 A RU 2009119014A RU 2409673 C1 RU2409673 C1 RU 2409673C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- seq
- subgenotypes
- cattle
- subgenotype
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к генетической инженерии, и может быть использовано в ветеринарной вирусологии для генотипирования штаммов и изолятов вируса вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота (ВД-БС КРС).The invention relates to biotechnology, namely to genetic engineering, and can be used in veterinary virology for genotyping strains and isolates of the virus of viral diarrhea - a disease of the mucous membrane of cattle (VD-BS cattle).
До настоящего времени основным способом генотипирования штаммов и изолятов вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота является способ, основанный на накоплении вирусов в культуре клеток, выделении РНК, проведении обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции, очистку продуктов ПЦР, сиквенсе ампликонов и сравнении с известными последовательностями генома референтных штаммов (Шульпин М.И., Аянот П.К., Мищенко В.А. Индикация вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, генотипирование и филогенитический анализ изолятов, выявленных на территории Российской Федерации. Вопросы вирусологии. - 2003. - №6. - С.41-46.).Until now, the main method for genotyping strains and isolates of viral diarrhea - diseases of the mucous membranes of cattle is a method based on the accumulation of viruses in cell culture, RNA isolation, reverse transcription and polymerase chain reaction, purification of PCR products, amplicon sequencing and comparison with known sequences of the genome of reference strains (Shulpin M.I., Ayanot P.K., Mishchenko V.A. Indication of the virus of cattle viral diarrhea, genotyping and phylogenetic analysis of isolates detected in the Russian Federation. Issues of Virology. - 2003. - No. 6. - P.41-46.).
К недостаткам данного способа можно отнести необходимость получение большого количества высокоочищенных ампликонов, длительность и высокую стоимость.The disadvantages of this method include the need to obtain a large number of highly purified amplicons, duration and high cost.
Наиболее близким решением данного изобретения являются праймеры и способ генотипирования вируса ВД-БС КРС, включающий синтез олигонуклеотидных праймеров на ген NS5B и проведение гнездовой ПЦР (Gilbert A., Burton K.M., Prins S.E., Deregt D. Typing of Bovine Viral Diarrhea Viruses Directly from Blood of Persistently Infected Cattle by Multiplex PCR. Journal of clinical microbiology.- Vol.37, No.6. - p.2020-2023).The closest solution to this invention are primers and a method for genotyping VD-BS virus of cattle, including the synthesis of oligonucleotide primers for the NS5B gene and nested PCR (Gilbert A., Burton KM, Prins SE, Deregt D. Typing of Bovine Viral Diarrhea Viruses Directly from Blood of Persistently Infected Cattle by Multiplex PCR. Journal of clinical microbiology. - Vol. 37, No.6. - p.2020-2023).
Наружные праймеры для первого раунда амплификации:External primers for the first round of amplification:
5'-aagatccacccttatga(a/g)gc-3'5'-aagatccacccttatga (a / g) gc-3 '
5'-aagaagccatcatc(a/c)ccaca-3'.5'-aagaagccatcatc (a / c) ccaca-3 '.
Множественные внутренние праймеры для второго раунда ПЦР:Multiple internal primers for the second round of PCR:
5'-tggagatctttcacacaatagc-3',5'-tggagatctttcacacaatagc-3 ',
5'-gggaacctaagaactaaatc-3',5'-gggaacctaagaactaaatc-3 ',
5'-gctgtttcacccagtt(a/g)tacat-3'5'-gctgtttcacccagtt (a / g) tacat-3 '
К недостаткам данного способа можно отнести то, что он не позволяет разделять штаммы и изоляты вируса первого генотипа на субгенотипы (1а и 1b).The disadvantages of this method include the fact that it does not allow to separate strains and isolates of the virus of the first genotype into subgenotypes (1a and 1b).
Задачей изобретения является разработка синтетических олигонуклеотидных праймеров и способа выявления субгенотипов 1а и 1b вируса вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота при помощи синтетических олигонуклеотидных праймеров.The objective of the invention is the development of synthetic oligonucleotide primers and a method for identifying subgenotypes 1a and 1b of the virus of viral diarrhea - a disease of the mucous membranes of cattle using synthetic oligonucleotide primers.
Поставленная задача решается тем, что подобраны и синтезированы синтетические олигонуклеотидные праймеры для выявления субгенотипов 1а и 1b вируса вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, согласно изобретения праймеры имеют нуклеотидные последовательности: SEQ ID NO:1 5'-tcgacgccttaacatgaaggt-3', SEQ ID NO:2 5'-tcgacgctttggaggacaagc-3', SEQ ID NO:3 5'-ccatgtgccatgtacag-3'.The problem is solved in that synthetic oligonucleotide primers are selected and synthesized to detect subgenotypes 1a and 1b of the virus of viral diarrhea, a disease of the mucous membranes of cattle, according to the invention, the primers have the nucleotide sequences: SEQ ID NO: 1 5'-tcgacgccttaacatgaaggt-3 ID NO: 2 5'-tcgacgctttggaggacaagc-3 ', SEQ ID NO: 3 5'-ccatgtgccatgtacag-3'.
Задача решается также тем, что в способе применения синтетических олигонуклеотидных праймеров для выявления субгенотипов 1а и 1b вируса вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, включающий проведение ПЦР, отличающийся тем, что проводятся отдельные реакции с парами праймеров SEQ ID NO:1 5'-tcgacgccttaacatgaaggt-3' и SEQ ID NO:3 5'-ccatgtgccatgtacag-3' на субгенотип 1a, SEQ ID NO:2 5'-tcgacgctttggaggacaagc-3' и SEQ ID NO:3 5'-ccatgtgccatgtacag-3' на субгенотип 1b и случае выявления фрагмента ДНК размером 186 н.п. в каждой реакции делают заключение о наличии в исследуемом материале вируса вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота субгенотипов 1а и 1b соответственно.The problem is also solved by the fact that in the method of using synthetic oligonucleotide primers to detect subgenotypes 1a and 1b of the virus of viral diarrhea - a disease of the mucous membranes of cattle, including PCR, characterized in that separate reactions are carried out with pairs of primers SEQ ID NO: 1 5 ' -tcgacgccttaacatgaaggt-3 'and SEQ ID NO: 3 5'-ccatgtgccatgtacag-3' for subgenotype 1a, SEQ ID NO: 2 5'-tcgacgctttggaggacaagc-3 'and SEQ ID NO: 3 5'-ccatgtgccatgtagg and if a DNA fragment of 186 n.p. in each reaction, a conclusion is drawn about the presence of viral diarrhea virus in the test material, a disease of the mucous membranes of cattle subgenotypes 1a and 1b, respectively.
Техническим результатом изобретения является возможность быстро проводить дифференциацию штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС первого генотипа на субгенотипы.The technical result of the invention is the ability to quickly differentiate strains and isolates of the virus VD-BS cattle of the first genotype into subgenotypes.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Способ подбора и получения синтетических олигонуклеотидных праймеров.Example 1. The method of selection and preparation of synthetic oligonucleotide primers.
Поиск новых специфических праймеров осуществляют на основе полных геномов штаммов вируса ВД-БС КРС 1 генотипа, представленных в базе данных GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/GenbankSearch.html). Все последовательности выравнивают методом Blast, отбирают участки генома, показывающие не менее 80% гомологии с последовательностями 5'-нетранслируемого региона референтных штаммов ВД-БС КРС Oregon C24V (субгенотип 1а) и ILLC (субгенотип 1b). При помощи пакета программного обеспечения "Lasergen" проводят поиск праймеров для отобранных участков генома. Полученные последовательности нескольких пар праймеров дополнительно тестируют на специфичность с помощью моделирования ПЦР в программе "Vector NTI Suite" с последовательностями геномов всех исследованных штаммов вируса ВД-БС КРС 1 генотипа, вирусов классической чумы свиней, пограничной болезни овец и вируса ВД-БС КРС 2 генотипа. Наличие или отсутствие гомологии с указанными возбудителями являются основанием для отбора праймеров. Окончательный выбор праймеров основывают на следующих критериях: высокий индекс сходства фрагмента и РНК различных штаммов вируса, высокая температура отжига (GC-метод), большая длина консенсусов. Химический синтез праймеров осуществляют амидофосфитным методом на автоматическом синтезаторе ASM-102U. Концентрацию специфических олигонуклеотидных праймеров в маточном растворе определяют спектрофотометрическим методом.The search for new specific primers is carried out on the basis of the complete genomes of strains of the VD-BS virus of cattle of genotype 1 presented in the GenBank database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/GenbankSearch.html). All sequences are aligned using the Blast method, genomic regions are selected that show at least 80% homology with sequences of the 5'-untranslated region of reference strains of VD-BS cattle Oregon C24V (subgenotype 1a) and ILLC (subgenotype 1b). Using the Lasergen software package, primers are searched for selected genome regions. The obtained sequences of several pairs of primers are additionally tested for specificity by PCR modeling in the Vector NTI Suite program with the genome sequences of all investigated strains of VD-BS cattle virus of genotype 1, classical swine fever viruses, border sheep disease and VD-BS cattle virus of
Для подтверждения синтеза праймеров заданной последовательности проводят анализ методом электрофореза в полиакриламидном геле путем сравнения с маркером молекулярного веса pBR322/BsuRI.To confirm the synthesis of primers of a given sequence, polyacrylamide gel electrophoresis is carried out by comparison with a molecular weight marker pBR322 / BsuRI.
Фиг.1. Сравнение нуклеотидных последовательностей 5'-нетранслируемого региона штаммов вируса ВД-БС КРС 1 генотипа. Полужирным курсивом показаны нуклеотидные участки для специфического связывания с праймерами.Figure 1. Comparison of the nucleotide sequences of the 5'-untranslated region of strains of the virus VD-BS cattle 1 genotype. Bold italics indicate nucleotide regions for specific binding to primers.
Таким образом, указанный способ позволяет получать синтетические олигонуклеотидные праймеры, комплементарные высококонсервативной 5'-нетранслируемой области генома вируса ВД-БС КРС, специфичные для субгенотипов.Thus, this method allows to obtain synthetic oligonucleotide primers complementary to the highly conserved 5'-untranslated region of the VD-BS cattle virus genome specific for subgenotypes.
Пример 2. Способ применения синтетических олигонуклеотидных праймеров для выявления субгенотипов 1а и 1b вируса вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.Example 2. A method of using synthetic oligonucleotide primers to detect subgenotypes 1a and 1b of the virus of viral diarrhea - a disease of the mucous membranes of cattle.
Способ осуществляется в несколько этапов.The method is carried out in several stages.
Этап 1. Выделение РНК вируса ВД-БС КРС.Stage 1. Isolation of RNA virus VD-BS cattle.
Для выделения РНК берут суспензии штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС 1-го генотипа, выделенных в культуре клеток, а также суспензии биоматериала от животных, в которых при помощи ПЦР выявлена РНК вируса 1-го генотипа.To isolate RNA, suspensions of strains and isolates of VD-BS cattle virus of the 1st genotype isolated in cell culture, as well as a suspension of biomaterial from animals in which genotype 1 virus RNA was detected by PCR, are taken.
100 мкл осветленной суспензии вируса или биоматериала переносят в пробирку с 450 мкл лизирующего раствора, тщательно перемешивают и добавляют 25 мкл ресуспендированного сорбента, перемешивают и оставляют в штативе на 1 минуту, еще раз перемешивают, оставляют на 5 минут, а затем центрифугируют 30 сек при 10 тыс. об./мин. Удаляют супернатант, добавляют 400 мкл раствора для отмывки 1, перемешивают и центрифугируют 30 сек при 10 тыс. об./мин. Удаляют супернатант, добавляют 500 мкл раствора для отмывки 3 и повторяют процедуру. Добавляют в пробирки 400 мкл раствора для отмывки 4, тщательно ресуспендируют, центрифугируют 30 сек при 10 тыс. об./мин. Удаляют супернатант. Помещают открытые пробирки в термостат 60°С на 5-10 минут для подсушивания сорбента. Затем добавляют 40 мкл РНК-элюата, перемешивают, выдерживают 2-3 минуты при 60°С, центрифугируют.100 μl of a clarified suspension of a virus or biomaterial is transferred to a test tube with 450 μl of a lyse solution, mix thoroughly and add 25 μl of a resuspended sorbent, mix and leave in a rack for 1 minute, mix again, leave for 5 minutes, and then centrifuge for 30 seconds at 10 thousand rpm The supernatant is removed, 400 μl of washing solution 1 is added, stirred and centrifuged for 30 seconds at 10 thousand rpm. The supernatant is removed, 500 μl of
Этап 2. Проведение реакции обратной транскрипции для получения кДНК.
В пробирку, содержащую 10 мкл реакционной смеси: буфер для ОТ (50 mM Tris-HCl [рН 8.3], 3 мМ MgCl2, 75 mМ KCl, 10 мМ DTT), 0,1 мМ dNTP, 0,1 мкг праймера для ОТ, 80 е.а. M-MulV обратная транскриптаза, добавляют 10 мкл РНК-пробы, осторожно перемешивают и помещают в термостат 37°С на 30 минут. Затем добавляют 20 мкл ТЕ-буфера, тщательно перемешивают и используют для постановки ПЦР.In a test tube containing 10 μl of the reaction mixture: buffer for RT (50 mM Tris-HCl [pH 8.3], 3 mm MgCl2, 75 mm KCl, 10 mm DTT), 0.1 mm dNTP, 0.1 μg primer for RT, 80 e.a. M-MulV reverse transcriptase, add 10 μl of RNA sample, mix gently and place in a 37 ° C thermostat for 30 minutes. Then add 20 μl of TE buffer, mix thoroughly and use for PCR.
Этап 3. Амплификация участка к-ДНК вируса ВД-БС КРС.
Полимеразная цепная реакция. Для каждой пары праймеров готовят отдельную ПЦР-смесь. Состав реакционной смеси: ПЦР-буфер (60 mM Tris-HCl [рН 8.5], 1,5 мМ MgC12, 25 mM КС1, 10 мМ 2-меркаптэтанола, 0,1% Тритон Х-100), 0,2 мМ dNTP, по 0,1 мкг каждого праймера, 1.25 е.а. Taq-ДНК-полимераза, 5 мкл продукта обратной транскрипции.Polymerase chain reaction. A separate PCR mixture is prepared for each pair of primers. Composition of the reaction mixture: PCR buffer (60 mM Tris-HCl [pH 8.5], 1.5 mM MgC12, 25 mM KCl, 10 mM 2-mercaptethanol, 0.1% Triton X-100), 0.2 mM dNTP, 0.1 μg of each primer, 1.25 ea Taq DNA polymerase, 5 μl reverse transcription product.
Температурный режим проведения ПЦР: Программа амплификации состоит из следующих температурных режимов: 95°С - 5 мин - 1 цикл; 95°С - 45 сек, 55°С - 45 сек, 72°С - 1 мин - 35 циклов; 72°С - 5 мин.Temperature regime of PCR: The amplification program consists of the following temperature regimes: 95 ° С - 5 min - 1 cycle; 95 ° С - 45 sec, 55 ° С - 45 sec, 72 ° С - 1 min - 35 cycles; 72 ° C - 5 min.
Этап 4. Определение размера продуктов ПЦР.
Продукты ПЦР анализируют методом электрофореза в 2%-ном агарозном геле в стандартном трис-боратном буфере (рН 8,0).PCR products are analyzed by electrophoresis in a 2% agarose gel in standard Tris-borate buffer (pH 8.0).
10 мкл продукта ПЦР смешивают с 2 мкл буфера для нанесения образца (0.25% бромфеноловый синий, 40% сахароза) и вносят в лунку агарозного геля. Электрофорез проводят при напряжении 10 в/см длины геля до тех пор, пока краситель не пройдет от старта не менее половины геля (примерно 30 минут). Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе «Трансиллюминатор».10 μl of the PCR product is mixed with 2 μl of sample buffer (0.25% bromophenol blue, 40% sucrose) and added to an agarose gel well. Electrophoresis is carried out at a voltage of 10 V / cm of the length of the gel until the dye passes from the start of at least half of the gel (approximately 30 minutes). The results of electrophoresis are taken into account when viewing the gel in ultraviolet light with a wavelength of 254 nm on a Transilluminator instrument.
Маркер молекулярного веса 100bp.100bp molecular weight marker.
Результат ПЦР считают положительным, если продукт ПЦР соответствует размеру фрагмента в 186 нуклеотидные пары.The PCR result is considered positive if the PCR product corresponds to a fragment size of 186 nucleotide pairs.
Фиг.2 Электрофореграмма амплифицированного фрагмента генома 2 штаммов вируса ВД-БС КРС «Oregon С 24 V» и «ВК-1» (Дорожки 1 и 2 ПЦР с парой праймеров на субгенотип 1а, дорожки 3 и 4 - ПЦР с парой праймеров на субгенотип 1b, дорожка 5 - маркер молекулярного веса).Figure 2 Electrophoregram of an amplified fragment of the genome of 2 strains of VD-BS cattle virus "Oregon C 24 V" and "VK-1" (
Пример 3. Определение специфичности ПЦР.Example 3. Determination of the specificity of PCR.
Результаты опытов по определению специфичности реакции с двумя парами праймеров представлены в таблице 1.The results of experiments to determine the specificity of the reaction with two pairs of primers are presented in table 1.
«-» - отрицательный результат.Note: “+” is a positive result;
"-" - negative result.
Таким образом, предлагаемые синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ их применения обладают высокой специфичностью при выявлении РНК штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС.Thus, the proposed synthetic oligonucleotide primers and the method of their use are highly specific for the detection of RNA strains and isolates of the virus VD-BS cattle.
Пример 4. Результаты тестирования штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС, относящихся к первому генотипу.Example 4. The results of testing strains and isolates of the virus VD-BS cattle related to the first genotype.
Результаты тестирования изолятов вируса вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота 1-го генотипа представлены в таблице 2.The results of testing isolates of the virus of viral diarrhea - diseases of the mucous membranes of cattle of the 1st genotype are presented in table 2.
Таким образом, разработанные праймеры и способ их применения позволяют эффективно проводить субгенотипирование штаммов и изолятов вируса вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота 1-го генотипа, что можно использовать при изучении молекулярной эпизоотологии болезни и при планировании противоэпизоотических мероприятий.Thus, the developed primers and the method of their use allow efficient subgenotyping of strains and isolates of the virus of viral diarrhea, a disease of the mucous membranes of cattle of the 1st genotype, which can be used in the study of molecular epizootology of the disease and in the planning of antiepizootic measures.
Claims (2)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009119014/10A RU2409673C1 (en) | 2009-05-19 | 2009-05-19 | Synthetic oligonucleotide primers for detecting 1a and 1b virus subgenotypes of viral diarrhoea - bovine mucosal disease and method of applying thereof |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009119014/10A RU2409673C1 (en) | 2009-05-19 | 2009-05-19 | Synthetic oligonucleotide primers for detecting 1a and 1b virus subgenotypes of viral diarrhoea - bovine mucosal disease and method of applying thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009119014A RU2009119014A (en) | 2010-11-27 |
RU2409673C1 true RU2409673C1 (en) | 2011-01-20 |
Family
ID=44057247
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009119014/10A RU2409673C1 (en) | 2009-05-19 | 2009-05-19 | Synthetic oligonucleotide primers for detecting 1a and 1b virus subgenotypes of viral diarrhoea - bovine mucosal disease and method of applying thereof |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2409673C1 (en) |
-
2009
- 2009-05-19 RU RU2009119014/10A patent/RU2409673C1/en active
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
GILBERT S.A. ET AL, Typing of bovine viral diarrhea viruses directly from blood of persistently infected cattle by multiplex PCR, J Clin Microbiol. 1999, v. 37, no.6, p.2020-3. * |
RIDPATH J.F. ET AL, Differentiation of types 1a, 1b and 2 bovine viral diarrhoea virus (BVDV) by PCR, Mol Cell Probes, 1998, v. 12, no.2, p.101-6. FULTON R.W. ET AL, Multiple diagnostic tests to identify cattle with Bovine viral diarrhea virus and duration of positive test results in persistently infected cattle, Can J Vet Res. 2009, v.73, no.2, p.117-24. BOLIN S.R. ET AL, Genetic characterization of bovine viral diarrhea viruses isolated from persistently infected calves born to dams vaccinated against bovine viral diarrhea virus before breeding, Am J Vet Res, 2009, v.70, no.1, p.86-91. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2009119014A (en) | 2010-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Luo et al. | Development of an updated PCR assay for detection of African swine fever virus | |
Smith et al. | New real-time PCR assay using allelic discrimination for detection and differentiation of equine herpesvirus-1 strains with A2254 and G2254 polymorphisms | |
Zhao et al. | Development of a multiplex TaqMan probe-based real-time PCR for discrimination of variant and classical porcine epidemic diarrhea virus | |
CN111286559B (en) | Primer, probe and kit for detecting African swine fever virus | |
CN110938709B (en) | Enterovirus visual nucleic acid detection kit and method based on recombinase polymerase amplification technology | |
CN110438260B (en) | African swine fever virus nucleic acid test strip detection kit | |
RU2385943C2 (en) | Oligonucleotide primers, method and test system for detecting bluetongue virus genome by polymerase chain reaction in electrophoretic detection of amplification products | |
Hakhverdyan et al. | Development of a real-time PCR assay based on primer-probe energy transfer for the detection of swine vesicular disease virus | |
Zhao et al. | Establishment of a porcine parvovirus (PPV) LAMP visual rapid detection method | |
Thuy et al. | First investigation of the prevalence of parvoviruses in slaughterhouse pigs and genomic characterization of ungulate copiparvovirus 2 in Vietnam | |
Bohorquez et al. | Efficient detection of African Swine Fever Virus using minimal equipment through a LAMP PCR method | |
RU2360971C1 (en) | Method and test system to detect dna of african swine fever virus by means of specific oligonucleotide primers in polymerase chain reaction | |
Shen et al. | A Novel, Cleaved Probe-Based Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification Method for Specific and Sensitive Detection of Porcine Deltacoronavirus | |
RU2761496C2 (en) | Method for identification of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus based on real-time pcr | |
CN116814857A (en) | Cat parvovirus and kit thereof and fluorescent recombinase polymerase amplification method | |
CN107586886B (en) | Reagent and method for rapidly detecting porcine adenovirus | |
Ihira et al. | Loop-mediated isothermal amplification for discriminating between human herpesvirus 6 A and B | |
RU2511440C2 (en) | Method of quantitative determination of fixed rabies virus "moskva 3253" | |
CN114438265B (en) | Nucleic acid composition, kit and detection method for simultaneously detecting porcine delta coronavirus, reovirus and porcine kokumi virus | |
RU2409673C1 (en) | Synthetic oligonucleotide primers for detecting 1a and 1b virus subgenotypes of viral diarrhoea - bovine mucosal disease and method of applying thereof | |
RU2607025C1 (en) | Synthetic oligonucleotide primers and method for detecting rna atypical pestivirus of cattle | |
CN115786587A (en) | Primer group for multiplex PCR (polymerase chain reaction) for simultaneously detecting 4 pathogens as well as detection method and kit thereof | |
CN108866242A (en) | For identifying the half Nest RT-PCR serotype specific primer and kit of different serotypes infectious bronchitis virus live vaccine | |
CN115094164A (en) | Multiple qPCR (quantitative polymerase chain reaction) kit and detection method for ASFV (advanced specific immunodeficiency syndrome) with different gene deletion types | |
Pan et al. | Rapid detection and differentiation of wild-type and three attenuated lapinized vaccine strains of Classical swine fever virus by reverse transcription polymerase chain reaction |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD4A | Correction of name of patent owner |