RU2385936C1 - ГЕН HGFopt ФАКТОРА РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ - Google Patents
ГЕН HGFopt ФАКТОРА РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2385936C1 RU2385936C1 RU2008125409/13A RU2008125409A RU2385936C1 RU 2385936 C1 RU2385936 C1 RU 2385936C1 RU 2008125409/13 A RU2008125409/13 A RU 2008125409/13A RU 2008125409 A RU2008125409 A RU 2008125409A RU 2385936 C1 RU2385936 C1 RU 2385936C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plasmid
- gene
- growth factor
- hepatocyte growth
- hgfopt
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к технологии получения генно-инженерных конструкций с целью их применения в клеточной и генной терапии. Представлен оптимизированный для экспрессии в клетках млекопитающих ген фактора роста гепатоцитов человека. Изобретение позволяет увеличить в два раза продукцию фактора роста гепатоцитов по сравнению с использованием природного гена человека. 3 ил.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к технологии получения генно-инженерных конструкций для экспрессии трансгенов в клетках млекопитающих in vitro и in vivo с целью их применения в клеточной инженерии и в генной терапии, а именно к к фрагменту вектора - модифицированной последовательности гена фактора роста гепатоцитов, и предназначенных для трансфекции клеток млекопитающих с целью экспрессии в них белкового продукта - фактора роста гепатоцитов.
Фактор роста гепатоцитов (HGF) стимулирует регенерацию печеночной ткани, оказывает защитное действие на гепатоциты и другие клетки, предотвращая их апоптоз, а также оказывает антифиброзное действие, индуцируя синтез протеиназ внеклеточного матрикса (Gohda E., Nakamura S., Yamamoto I., Minowada J. Leuk. Lymphoma, 1995, Vol.19, pp.197-205). Помимо этого, HGF стимулирует рост сосудов (Morishita R., Aoki M., Hashiya N., Yamasaki K., Kurinami H., Shimizu S., Makino H., Takesya Y., Azuma J., Ogihara T. Curr. Gene Ther., 2004, Vol.4, pp.199-206). Наконец, HGF стимулирует миграцию резидентных стволовых клеток сердца из мест их локализации в участки повреждения, в частности при инфаркте миокарда - в зону инфаркта (Vandervelde S., van Luyn M.J., Tio R.A., Harmsen M.C. J. Mol. Cell Cardiol, 2005, Vol.39, pp.363-376).
Для продуцирования HGF используют ДНК, содержащую природный ген фактора роста гепатоцитов человека (Yang J., Chen S., Huang L., Michalopoulos G.K., Liu Y. Hepatology, 2001, Vol.33, p.848-859), однако при его использовании не удается получить высокий уровень экспрессии данного белка.
Технической задачей, решаемой авторами настоящего изобретения, являлось создание такой модифированной последовательности гена HGF, чтобы при ее включении в состав эукариотического вектора обеспечивался более высокий уровень экспрессии HGF в клетках, трансфицированных таким вектором.
Технический результат достигался модификацией природной последовательности гена HGF, в основе которой лежала вырожденность генетического кода. Последовательность модифицировали таким образом, чтобы триплеты нуклеотидов, кодирующие некоторые из аминокислот белковой последовательности фактора роста гепатоцитов, встречались в генах человека наиболее часто. При этом использовали опубликованные в открытых источниках данные по частотам встречаемости кодонов (http://del.mediaglyphs.org/mg/bf/nucs_aa.html).
На фиг.1 показана последовательность нуклеотидов гена HGFopt (верхние строчки) в сравнении с последовательностью нуклеотидов природного гена фактора роста гепатоцитов человека HGF (средние строчки). Показана также последовательность аминокислот кодируемого белкового продукта (нижние строчки). Жирным шрифтом выделена область, кодирующая белок. Подчеркнуты триплеты нуклеотидов, подвергшиеся оптимизации. Затемнены сигналы разрушения мРНК АТТТА и полиаденилирования ААТААА.
На фиг.2 приведена функциональная карта плазмиды pC4W-HGFopt.
На фиг.3 показан вестерн-блоттинг белков культуральной среды клеток НЕК293, трансфицированных плазмидой pC4W-HGFopt (дорожка 1). Для сравнения на дорожку 2 нанесен рекомбинантный фактор роста гепатоцитов человека.
Синтез гена и плазмиды осуществляли с помощью стандартной технологии и оборудования, применяемых для решения подобных задач в генной инженерии (Watson, J.D., Oilman, M., Witkowski, J., Zoller, M. Recombinant DNA, Scientific American Books, New York, 1992).
Дизайн оптимизированной последовательности нуклеотидов, кодирующей фактор роста гепатоцитов человека HGF, производили следующим образом. Используя частоты встречаемости кодонов, приведенные на вэб-сайте http://del.mediaglyphs.org/mg/bf7nucs_aa.html, среди триплетов нуклеотидов, кодирующих аминокислоты белковой последовательности природного гена HGF, выявляли такие, которые встречаются в генах человека наиболее редко. Выявленные редкие триплеты, а также соседние с ними триплеты, меняли на триплеты, кодирующие ту же аминокислоту, но при этом встречающиеся в генах человека наиболее часто. Кроме того, с целью повышения стабильности матричной РНК HGF такими же методами из кодирующей белок области природного гена HGF удаляли сигналы разрушения мРНК "АТТТА" и сигналы полиаденилирования "ААТААА" (Barreau С., Paillard L., Osbome B.H. Nucleic Acids Research, 2005, Vol.33, pp.7138-7150). В результате благодаря вырожденности генетического кода все аминокислоты природного гена HGF остались неизмененными. Полученная последовательность нуклеотидов представлена на фиг.1.
кДНК фактора роста гепатоцитов человека HGF получали методом RT-PCR с использованием в качестве матрицы суммарной РНК из печени человека и клонировали в экспрессионный вектор pcDNA3 (Invitrogen, США) с получением плазмиды pcDNA3-hHGF и в экспрессионный вектор pC4W (000 "фирма МО-НА", РФ) с получением плазмиды pC4W-hHGF. Плазмиду pC4W-HGFopt, несущую оптимизированный ген HGFopt, получали методом генно-инженерного конструирования, как описано ниже.
На первой стадии:
- химически синтезированную пару олигонуклеотидов
VEC01 (AGCTTGGCATTCCGGTACTGTTGGTAAAGCCACCATG) и
VEC02(GTACCATGGTGGCTTTACCAACAGTACCGGAATGCCA)
отжигали, смешивали и клонировали в расщепленный рестриктазами HindIII и Асс65I вектор pUC19 с получением промежуточной плазмиды pUC-KNA;
- химически синтезированную пару олигонуклеотидов
VEC03 (GCCATGGAGATCTG) и
VEC04(AATTCAGATCTCCATGGCTGCA) отжигали, смешивали и клонировали в расщепленный рестриктазами PstI и EcoRI вектор pBluescriptII-SK+ с получением промежуточной плазмиды pBSKN.
На второй стадии проводили серию реакций амплификации с использованием плазмиды pcDNA3-hHGF в качестве матрицы и пар химически синтезированных олигонуклеотидов:
- HGF3F (GCGGATCCATGTGGGTGACCAAGCTGCTG) и
HGF4R(GGGCGGGGTCGATCTTGATCAGGGTGGTC),
- HGF5F (GATCAAGATCGACCCCGCCCTGAAGATCAAGACC) и
HGF6R(GTTCCTGGTACATCTATTGGCACACTGGTC),
- HGF7F (GCCAATAGATGTACCAGGAACAAGGGCCTGCCATTC) и
HGF8R(GCTGGGCCCTGCAGGTCCTTGCCCCGGTAGCTGGAAGGC AGAAAGC),
- HGF1IF (CGGAGCTCATGCATCCAGGGCCAGGGCGAGGGCTAC) и HGF 12R (GGATTCCGGCAGTAGTTCTCCCGCAGGTCC),
- HGF13F (GGACCTGCGGGAGAACTACTGCCGGAATCC) и HGF 14R (GGCCAGATCTGGTCTGGGACAGGTTGCC),
- HGF15F (GACCAGATCTGGCCTGACCTGTTCAA) и
HGF16R(GATGTGCCGGTGCAGGTCCTCCATG),
- HGF17F (GGACCTGCACCGGCACATCTTCTGG) и
HGF18R (GCGCCCGGGTGGTCCAGGTTCACGATGGTAGG),
- HGF21F (GCGAGCTCGAAGACCAAGCAGCTGCGGGTGGTGAACG GGATCCCAAC) и
HGF22R(GCCGCAGATGTGCTTGTTTCTGTATCTCAGACTAACC),
- HGF23F (GAAACAAGCACATCTGCGGCGGCTCCCTGATCAAGGAG) и
HGF26R (GTAGTTAGGCAGGTCGATGGTGCTCACAAA),
- HGF25F (GATCAGATCTGGTGCTGATGAAGCTGGCCAGG) и
HGF26R(GTAGTTAGGCAGGTCGATGGTGCTCACAAA),
- HGF27F (ATCGACCTGCCTAACTACGGATGC) и
HGF28R(GCCACCCGCAGCAGGCCGTCGTAGTTGATCAGTCCAG),
- HGF29F (GACGGCCTGCTGCGGGTGGCCCACCTGTACATCATGGG) и
HGF30R (GCGAGCTCGAAGACCTTGTAGGTCAGGATGATCTT GTGGATCC) в качестве прямого и обратного праймеров.
В результате получали фрагменты ДНК, соответственно, HGF3-4, HGF5-6, HGF7-8, HGF11-12, HGF13-14, HGF15-16, HGF17-18, HGF21-22, HGF23-26, HGF25-26, HGF27-28, HGF29-30, которые очищали при помощи электрофореза в агарозном геле и электроэлюции.
На третьей стадии проводили серию реакций амплификации с использованием
- фрагментов ДНК HGF3-4 и HGF5-6 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF3F и HGF6R в качестве праймеров;
- фрагментов ДНК HGF5-6 и HGF7-8 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF5F и HGF8R в качестве праймеров,
- фрагментов ДНК HGF11-12 и HGF13-14 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF1 IF и HGF14R в качестве праймеров;
- фрагментов ДНК HGF15-16 и HGF17-18 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF15F и HGF18R в качестве праймеров;
- фрагментов ДНК HGF21-22 и HGF23-26 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF21F и HGF26R в качестве праймеров;
- фрагментов ДНК HGF25-26 и HGF27-28 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF25F и HGF28R в качестве праймеров;
- фрагментов ДНК HGF27-28 и HGF29-30 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF27F и HGF30R в качестве праймеров.
В результате получали фрагменты ДНК, соответственно, HGF3-6, HGF5-8, HGF11-14, HGF15-18, HGF21-26, HGF25-28, HGF27-30, которые очищали при помощи электрофореза в агарозном геле и электроэлюции.
На четвертой стадии проводили реакции амплификации с использованием
- фрагментов ДНК HGF3-6 и HGF5-8 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF3F и HGF8R в качестве праймеров;
- фрагментов ДНК HGF25-28 и HGF27-30 в качестве матрицы и олигонуклеотидов HGF25F и HGF30R в качестве праймеров.
В результате получали фрагменты ДНК, соответственно, HGF3-8 и HGF25-30, которые очищали при помощи электрофореза в агарозном геле и электроэлюции. На пятой стадии фрагмент ДНК HGF3-8
- расщепляли рестриктазами ВаmHI и Apal и клонировали в расщепленный теми же рестриктазами вектор pBluescriptII-SK+ с получением промежуточной плазмиды pBSK-HGF3-8;
- фрагмент ДНК HGF11-14 расщепляли рестриктазами BglII и SacI и клонировали в расщепленную теми же рестриктазами плазмиду pBSKN с получением промежуточной плазмиды pBSKN-HGF11-14;
- фрагмент ДНК HGF15-18 расщепляли рестриктазами BglII и SacI и клонировали в расщепленную теми же рестриктазами плазмиду pBSKN с получением промежуточной плазмиды pBSKN-HGFl 5-18;
- фрагмент ДНК HGF21-24 расщепляли рестриктазами BglII и SacI и клонировали в расщепленную теми же рестриктазами плазмиду pBSKN с получением промежуточной плазмиды pBSKN-HGF21-24;
- фрагмент ДНК HGF25-30 расщепляли рестриктазами BglII и SacI и клонировали в расщепленную теми же рестриктазами плазмиду pBSKN с получением промежуточной плазмиды pBSKN-HGF25-30.
Встраивание соответствующих последовательностей ДНК подтверждали секвенированием.
На шестой стадии
- химически синтезированную пару олигонуклеотидов HGF9S
(GGAGAACTACTGCCGGAACCC) и HGF10A (TCGAGGGTTCCGG CAGTAGTTCTCCTGCA), BamHI - SbfI фрагмент плазмиды pBSK-HGF3-8 и Xhol - EcoRI фрагмент плазмиды pcDNA3-hHGF клонировали в вектор pBluescriptII-SK+, расщепленный рестриктазами ВаmHI и EcoRI, с получением промежуточной плазмиды pBSK-HGF3-10Z;
- SacI - BglII фрагмент плазмиды рВ SKN-HGF11-14 и BglII - Smal фрагмент плазмиды pBSKN-HGF15-18 клонировали в вектор pBluescripffl-SK+, расщепленный рестриктазами SacI и SmaI, с получением промежуточной плазмиды pBSK-HGF11-18;
- химически синтезированную пару олигонуклеотидов
HGF31S (TACAAGGTGCCACAGTCCTGATATCTGCAGT) и
HGF32A (CTAGACTGCAGATATCAGGACTGTGGCACCT), SacI - BglII фрагмент плазмиды pBSKN-HGF21-24 и BglII - BbsI фрагмент плазмиды pBSKN-HGF25-30 клонировали в вектор pBluescriptII-SK+, расщепленный рестриктазами SacI и XbaI, с получением промежуточной плазмиды pBSK-HGF21-32.
Встраивание соответствующих последовательностей ДИК подтверждали секвенированием.
На седьмой стадии
- химически синтезированную пару олигонуклеотидов HGF1S
(CATGTGG) и HGF2A (GTCACCCA) и BstEII - Асс651 фрагмент плазмиды pBSK-HGF3-10Z клонировали в плазмиду pUC-KNA, расщепленную рестриктазами Ncol и Асс651,с получением промежуточной плазмиды pUC-KHGF 1-10Z;
- химически синтезированную пару олигонуклеотидов HGF19S (CGTGATCTCTTGCGCCAAGACCA) и HGF20A (TGCTTGGTCTTGGCGCAAGAGATCACG) и SacI - SmaI фрагмент плазмиды pBSK-HGF11-18 клонировали в плазмиду pBSK-HGF21-32, расщепленную рестриктазами SacI и BbsI, c получением промежуточной плазмиды pBSK-HGF11-32.
Встраивание соответствующих последовательностей ДНК подтверждали секвенированием.
На восьмой стадии NcoI - Zsp2I фрагмент плазмиды pBSKN-HGF3-10Z и Zsp2I - Асс651 фрагмент плазмиды pBSKN-HGF11-32 клонировали в плазмиду pUC-KHGF1-10Z, расщепленную рестриктазами NcoI и Асс651, с получением промежуточной плазмиды pUC-HGFopt.
Встраивание соответствующих последовательностей ДНК подтверждали рестриктным анализом полученной плазмиды.
На девятой стадии HindIII - SbfI фрагмент и SbfI - XbaI фрагмент плазмиды pUC-HGFopt клонировали в экспрессионный вектор pC4W (ООО «Фирма Мона», Москва) расщепленный рестриктазами HindIII и XbaI, с получением плазмиды pC4W-HGFopt. Правильность встраивания оптимизированного гена HGFopt и соответствие дизайну его нуклеотидной последовательности подтверждали рестриктным анализом и секвенированием полученной плазмиды. Функциональная карта плазмиды pC4W-HGFopt, предназначенной для экспрессии гена фактора роста гепатоцитов в клетках млекопитающих, представлена на фиг.2.
Эффективность заявляемого изобретения иллюстрируется следующим примером
Пример. Клетки НЕК293, высеянные в лунки 24-луночной плашки (50000 клеток на лунку) в среде DMEM, содержащей 2% эмбриональной телячьей сыворотки, трансфицировали плазмидой pC4W-HGFopt, несущей оптимизированный ген фактора роста гепатоцитов человека HGFopt. Трансфекцию проводили с использованием 1 мкг ДНК и 1 мкл реагента Липофектамин 2000 (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя. Через 24 ч после трансфекции культуральную среду заменяли на свежую. Анализировали накопление HGF в культуральной среде за следующие 48 часов. Концентрацию HGF в культуральной среде измеряли при помощи набора "Human HGF Immunoassay Kit" компании Biosource International (США) в соответствии с протоколом производителя. Согласно этим измерениям концентрация HGF в культуральной среде составляла 1,4 мкг/мл.
Для наблюдения экспрессии HGF после трансфекции клеток использовали метод вестерн-блоттинга. Электрофорез белков в 10%-ном полиакриламидном геле проводили в денатурирующих условиях в присутствии додецилсульфата натрия без добавления бета-меркаптоэтанола. На дорожки геля наносили по 30 мкл культуральной среды.
Перенос белков из геля на PVDF-мембрану (Millipore) осуществляли в полусухих условиях в стандартном буфере. После переноса мембрану проинкубировали в 5%-ном растворе обезжиренного молока в TBS-буфере (Tris buffer saline) с 0,001%-ным Tween 20 (Pierce) в течение ночи при температуре +4°С. Далее проводили инкубацию с мышиными моноклональными антителами против HGF человека фирмы R&D Systems (США), которые разводили в 500 раз в 5% обезжиренном молоке в TBS-буфере с 0,001%-ным Tween 20. Мембрану троекратно отмывали в 5%-ном растворе обезжиренного молока в TBS-буфере с 0,001%-ным Tween 20 в течение 15 минут и инкубировали с меченными пероксидазой крысиными антителами против иммуноглобулинов мыши в 5%-ном обезжиренном молоке с 0,001%-ным Tween 20 при комнатной температуре в течение 60 мин. После этого мембрану обрабатывали набором реактивов двухкомпонентной системы ECL (Pierce) и экспонировали с рентгеновской пленкой "Bio Max" (Kodak). Результаты представлены на фиг.3, где приведен вестерн-блоттинг белков культуральной среды клеток НЕК293, трансфицированных плазмидой pC4W-HGFopt (дорожка 1). Для сравнения на дорожку 2 нанесен рекомбинантный фактор роста гепатоцитов человека.
Полученные результаты о высокой эффективности плазмиды pC4W-HGFopt с использованием модифицированного гена HGFopt. Выход целевого белка по сравнению с использованием плазмиды с природным геном увеличивается примерно в 2 раза.
Claims (1)
- Ген фактора роста гепатоцитов человека, оптимизированный для экспрессии в клетках млекопитающих и обладающий последовательностью нуклеотидов, приведенной на фиг.1.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008125409/13A RU2385936C1 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | ГЕН HGFopt ФАКТОРА РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008125409/13A RU2385936C1 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | ГЕН HGFopt ФАКТОРА РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2008125409A RU2008125409A (ru) | 2009-12-27 |
RU2385936C1 true RU2385936C1 (ru) | 2010-04-10 |
Family
ID=41642552
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008125409/13A RU2385936C1 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | ГЕН HGFopt ФАКТОРА РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2385936C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2615445C2 (ru) * | 2015-05-07 | 2017-04-04 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Лекарственное средство для лечения фиброза печени, способ его получения и способ лечения фиброза печени |
RU2628706C2 (ru) * | 2015-10-05 | 2017-08-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ стимуляции ангиогенеза в ишеминизированных тканях и комбинированное лекарственное средство для осуществления способа |
-
2008
- 2008-06-25 RU RU2008125409/13A patent/RU2385936C1/ru active IP Right Revival
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
YANG J. et al. Sustained expression of naked plasmid DNA encoding hepatocyte growth factor in mice promotes liver and overall body growth, Hepatology, 2001, v.33, №4, p.848-859. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2615445C2 (ru) * | 2015-05-07 | 2017-04-04 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Лекарственное средство для лечения фиброза печени, способ его получения и способ лечения фиброза печени |
RU2628706C2 (ru) * | 2015-10-05 | 2017-08-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ стимуляции ангиогенеза в ишеминизированных тканях и комбинированное лекарственное средство для осуществления способа |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2008125409A (ru) | 2009-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2577971C2 (ru) | Система для увеличения экспрессии генов и вектор, содержащий указанную систему | |
Knappskog et al. | The level of synthesis and secretion of Gaussia princeps luciferase in transfected CHO cells is heavily dependent on the choice of signal peptide | |
Chapman-Smith et al. | Expression, biotinylation and purification of a biotin-domain peptide from the biotin carboxy carrier protein of Escherichia coli acetyl-CoA carboxylase | |
ES2227669T3 (es) | Elementos de secuencia que aumentan la expresion (ease) para sistemas de expresion de eurocariotas. | |
Mehta et al. | Identification of domains in apobec-1 complementation factor required for RNA binding and apolipoprotein-B mRNA editing | |
JP6471175B2 (ja) | 高効率分泌能を有するタンパク質分泌因子及びこれを含む発現ベクター | |
Holloway et al. | High-level expression of three members of the murine angiogenin family in Escherichia coli and purification of the recombinant proteins | |
RU2385936C1 (ru) | ГЕН HGFopt ФАКТОРА РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ | |
KR920021711A (ko) | 헤르페스 프로테아제의 제조 방법, 이의 조성물, 및 이의 용도 | |
JPH0640825B2 (ja) | 遺伝子操作による因子XIIIaの製造 | |
WO2021110119A1 (zh) | 一种高活性转座酶及其应用 | |
US20110003883A1 (en) | Allosteric trans-splicing group i ribozyme whose activity of target-specific rna replacement is controlled by theophylline | |
Kinoh et al. | Generation of optimized and urokinase-targeted oncolytic Sendai virus vectors applicable for various human malignancies | |
CN113699169A (zh) | 一种荧光素酶报告基因iGLuc、基因系统及其应用 | |
KR20220076510A (ko) | 다수의 서로 다른 비천연 아미노산을 함유하는 단백질 및 이러한 단백질의 제조 및 사용 방법 | |
Bagu et al. | Friend of GATA suppresses the GATA-induced transcription of hepcidin in hepatocytes through a GATA-regulatory element in the HAMP promoter | |
Liu et al. | Isolation and characterization of a novel human thioredoxin-like gene hTLP19 encoding a secretory protein | |
Hamada et al. | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A3 is the liver nuclear protein binding to age related increase element RNA of the factor IX gene | |
RU2385938C1 (ru) | ГЕН AGРopt АНГИОПОЭТИНА-1 | |
CN112877314B (zh) | 一种诱导型碱基编辑系统及其应用 | |
Seo et al. | C/EBPα and C/EBPβ play similar roles in the transcription of the human Cu/Zn SOD gene | |
Cairns et al. | HMG box 4 is the principal determinant of species specificity in the RNA polymerase I transcription factor UBF | |
Bryksa et al. | N-terminal modifications increase the neutral-pH stability of pepsin | |
Chen et al. | High-efficiency secretory expression of human neutrophil gelatinase-associated lipocalin from mammalian cell lines with human serum albumin signal peptide | |
CN112662676A (zh) | 一种dna编码靶向水解蛋白的多肽或者蛋白的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110626 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20120610 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190626 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20211018 |