RU2375456C2 - Испускающие свет микроорганизмы и клетки для диагностики и терапии заболеваний, связанных с пораненной или воспаленной тканью - Google Patents

Испускающие свет микроорганизмы и клетки для диагностики и терапии заболеваний, связанных с пораненной или воспаленной тканью Download PDF

Info

Publication number
RU2375456C2
RU2375456C2 RU2004135547/13A RU2004135547A RU2375456C2 RU 2375456 C2 RU2375456 C2 RU 2375456C2 RU 2004135547/13 A RU2004135547/13 A RU 2004135547/13A RU 2004135547 A RU2004135547 A RU 2004135547A RU 2375456 C2 RU2375456 C2 RU 2375456C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
protein
tissue
inflammation
growth factor
detectable
Prior art date
Application number
RU2004135547/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2004135547A (ru
Inventor
Аладар А. СЗАЛЭЙ (DE)
Аладар А. СЗАЛЭЙ
Шахрох ШАБАХАНГ (US)
Шахрох ШАБАХАНГ
Йонг А. Ю (US)
Йонг А. Ю
Original Assignee
Дженелюкс Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дженелюкс Корпорейшн filed Critical Дженелюкс Корпорейшн
Publication of RU2004135547A publication Critical patent/RU2004135547A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2375456C2 publication Critical patent/RU2375456C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1896—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes not provided for elsewhere, e.g. cells, viruses, ghosts, red blood cells, virus capsides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0063—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres
    • A61K49/0069—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the agent being in a particular physical galenical form
    • A61K49/0097—Cells, viruses, ghosts, red blood cells, viral vectors, used for imaging or diagnosis in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/025—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/66—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving luciferase
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Способ предусматривает введение субъекту бактерии, которая кодирует детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, и детектирование белка или сигнала. Способ позволяет выявить ранение, пораненную ткань, участок воспаления или воспаленную ткань. Изобретение может быть использовано в медицине. 3 н. и 30 з.п. ф-лы, 8 ил.

Description

Изобретение относится к применению микроорганизма или клетки, содержащего(ей) последовательность ДНК, кодирующую детектируемый белок или белок, способный индуцировать детектируемый сигнал, например люминесцирующий или флуоресцирующий белок, для изготовления диагностической композиции, предназначенной для диагностики и/или визуализации пораненной или воспаленной ткани или связанного с ней заболевания. Данное изобретение также относится к терапевтическому применению указанного микроорганизма или клетки, дополнительно содержащего(ей) экспрессируемую последовательность ДНК, кодирующую белок, который может быть использован для терапии, например, фермент, вызывающий гибель клеток или расщепление остатков.
Бактериемия может возникнуть вследствие травматических повреждений и хирургических вмешательств, а также из-за физиологических действий, таких как жевание или чистка зубов. Культуры клеток крови, взятой у здоровых людей до и после инвазивных процедур и физиологических действий, показывают, что если до манипуляций образцы крови являются стерильными, то после них в крови присутствуют бактерии в различных количествах в зависимости от процедур. Потенциальным результатом бактериемии является колонизация восприимчивых участков. Однако, несмотря на возникновение кратковременной бактериемии, бактериальная колонизация потенциально восприимчивых участков развивается лишь у нескольких процентов больных с высокой степенью риска. Ряд исследователей предположили, что бактерии из системы кровообращения могут колонизировать воспаленные ткани экспериментальных моделей на животных и поверхности имплантированных материалов. Неустойчивость патологических изменений у людей после бактериемии также может быть следствием сопротивляемости (резистентности) иммунной системы хозяина, непостоянства концентрации бактерий в крови при различных случаях бактериемии, а также вирулентности любого заданного штамма бактерий.
Ряд исследователей сосредоточились на изучении природы имплантированных материалов как на факторе, влияющем на способность бактерий закрепляться. Материалы, такие как нити и хирургические зажимы, которые используют для закрытия ран, являются потенциальными участками бактериальной колонизации. Инфицирование этих материалов может препятствовать заживлению ран и/или подвергать пациентов повышенному риску вторичных инфекций. Было изготовлено множество ранозаживляющих материалов с различной аффинностью к бактериям. Использование определенных материалов для закрытия ран, таких как плетеные нити, было связано с большей степенью распространения инфекции. Многоканальная (многониточная) природа шовных материалов этого типа сама по себе ведет к повышенной восприимчивости к бактериальной колонизации, а также вызывает эффект капиллярного затекания, который дает бактериям возможность проникать через ткани. Обычные имплантируемые материалы с непрерывной структурой обладают сходной аффинностью к бактериям. Протезы сердечных клапанов и суставов могут быть подвержены повышенному риску бактериальной колонизации. Принято считать, что такая повышенная восприимчивость вызвана присущей бактериям способностью более легко закрепляться на поверхности имплантатов. Альтернативное объяснение может состоять в том, что воспаление в тканях вокруг имплантатов создает среду, более подходящую для бактериальной колонизации. Помимо перечисленных возможностей еще одним фактором, который может влиять на восприимчивость участка к бактериальной колонизации, может быть степень воспаления травмированных тканей. Имплантированные материалы могут создавать временные или постоянные очаги воспаления в теле.
Присутствие имплантированных материалов не является необходимым условием бактериальной колонизации. Изменения природных анатомических структур, которые могут возникать вследствие болезненных состояний, могут порождать создание поверхностей, которые легче подвергаются бактериальной колонизации. Было выдвинуто предположение, что для распространения инфекционного эндокардита (ИЭ) поверхность клапана должна быть изменена таким образом, чтобы создать подходящий участок для бактериального присоединения и колонизации. Кроме того, микроорганизмы должны достичь этого участка и закрепиться на нем, хотя невозможно вызвать ИЭ у экспериментального животного путем инъекций бактерий, если поверхность клапана не повреждена. Повреждения со значительным завихрением создают условия, приводящие к бактериальной колонизации, в то время как повреждения с большой площадью поверхности или слабым потоком редко вовлечены в ИЭ.
Однако до настоящего времени нельзя было доказать, что временные бактериемии действительно вызывают колонизацию воспаленной или пораненной ткани, так как не существовало доступной модели, позволяющей отслеживать бактерии в живом организме, то есть позволяющей объяснить временную и пространственную взаимосвязь между бактериальными инфекциями и нездоровыми участками ткани. Более того, к сожалению, ранняя диагностика и терапия воспаленных или пораненных тканей или связанных с ними заболеваний, например, атеросклероза, эндокардита, перикардита и других, пока еще являются неудовлетворительными.
Поэтому задачей данного изобретения явилась разработка средств эффективной и надежной диагностики, а также терапии пораненной или воспаленной ткани или связанных с ней заболеваний, которые были бы лишены недостатков диагностических и терапевтических подходов, используемых в настоящее время.
Поставленная задача решена созданием настоящего изобретения, сущность которого раскрыта в формуле изобретения. В ходе экспериментальной работы, результатом которой явилось данное изобретение, было установлено, что на воспаленных тканях, например, вблизи имплантированного материала, возможно возникновение бактериальной колонизации. Поэтому, как правило, можно визуализировать воспаленные ткани посредством применения описанной далее системы по данному изобретению. Можно показать, что экспрессия генов, кодирующих испускающие свет белки у бактерий, позволяет создать генетический инструмент, дающий возможность проследить за бактериями в живом хозяине, то есть оценить динамику процесса инфицирования в живом хозяине. Наружное (внешнее) обнаружение испускающих свет бактерий позволило изобретателям осуществлять бесконтактное (неинвазивное) исследование пространственных и временных взаимосвязей между инфекциями и выраженными болезненными состояниями. Для получения испускающих свет бактерий был использован бактериальный luxab оперон, кодирующий фермент люциферазу, которая катализирует окисление восстановленного флавин-мононуклеотида (FMNE2) в присутствии субстрата, деканаля (decanal). В результате этой реакции образуется флавин-мононуклеотид (FMN), каприновая (декановая) кислота, вода и фотон света. Световые фотоны регистрируют с помощью радиографов, приборов для измерения люминесценции или с помощью устройств для визуализации световых пятен малой интенсивности. Недавно для детектирования бактерий у живых животных был использован полный бактериальный luxcdabe оперон, кодирующий как субстрат, так и фермент люциферазу. Преимущество этой системы состоит в том, что она не требует экзогенного (внешнего) введения субстрата, что делает ее идеальной для исследований in vivo.
В ходе исследований, результатом которых явилось данное изобретение, можно было продемонстрировать колонизацию пораненной или воспаленной ткани бактериями, изначально присутствующими в системе кровообращения, и можно было показать, что ткани, раздраженные имплантированными материалами, такими как нити, зажимы для закрытия ран и протезы, являются более восприимчивыми к бактериальной колонизации, следующей за бактериемией. Данные, полученные из экспериментов с аттенуированными S. typhimurium, показывают, что после внутривенной инъекции бактерии распространяются по всему телу живых животных. Поэтому разумно предположить, что бактерии достигают пораненных или воспаленных участков посредством циркуляции (кровообращения). Эти данные, детально описанные далее в примерах, открывают путь для (а) конструирования многофункциональных вирусных векторов, которые можно применять для обнаружения пораненной или воспаленной ткани на основе сигналов, таких как испускание света, или сигналов, которые могут быть визуализированы посредством отображения магнитного резонанса (Magnetic Resonance Imaging, MRI), и (б) разработки систем на основе бактериальных клеток и клеток млекопитающих в комбинации с терапевтическими генными конструктами, причем мишенью систем является пораненная или воспаленная ткань, и они предназначены для лечения заболеваний, связанных с пораненной или воспаленной тканью, таких как, например, атеросклероз. Такие системы обладают следующими преимуществами: (а) они точно нацелены на пораненную или воспаленную ткань и не затрагивают нормальную ткань, (б) экспрессия и секреция терапевтических генных конструктов находятся, предпочтительно, под контролем индуцибельного промотора, дающего возможность включать или выключать секрецию, и (в) локализация системы доставки внутри ткани может быть проверена посредством прямой визуализации до активации экспрессии гена и доставки белка. И, наконец, существует ряд способов диагностики, которые могут быть усовершенствованы или успешно заменены способом диагностики согласно данному изобретению. Например, и традиционная ангиография, и магнитно-резонансная ангиография (MRA) позволяют получать изображение кровотока через просвет сосуда для визуализации бляшки, но не прямое изображение бляшки. Метод магнитно-резонансной ангиографии (MRA) является особенно чувствительным к турбулентности, вызванной бляшкой, и, в результате, часто является неточным. Указанные недостатки можно преодолеть при применении диагностических подходов согласно данному изобретению.
Таким образом, данное изобретение относится к применению микроорганизма или клетки, содержащего(ей) последовательность ДНК, кодирующую детектируемый белок или белок, способный индуцировать детектируемый сигнал, для изготовления диагностической композиции, предназначенной для диагностики и/или визуализации пораненной или воспаленной ткани или связанного с ней заболевания. Кроме того, такие микроорганизмы также могут быть использованы для терапии, так как после визуализации пораненной или воспаленной ткани могут быть использованы, например, путем местного введения, соединения, подходящие для терапии, такие как, например, ацилированные иридоидные гликозиды из Scrophularia nodosa, кортизол, аналоги кортикостероида, колхицин, метотрексат, нестероидные противовоспалительные лекарства (NSAIDs), лефлуномид, этанерсепт, миноциклин, циклоспорин, талидомид, цитотоксический агент, 6-меркаптопурин, азатиоприн, антибиотики или один или более из перечисленных далее белков.
Данное изобретение также относится к применению микроорганизма или клетки, содержащего(ей) последовательность ДНК, кодирующую детектируемый белок или белок, способный индуцировать детектируемый сигнал, для изготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения пораненной или воспаленной ткани или связанного с ней заболевания, причем такой микроорганизм или клетка дополнительно содержит одну или более экспрессируемую последовательность ДНК, кодирующую (а) белок (белки), подходящий (подходящие) для терапии пораненной или воспаленной ткани или связанных с ней заболеваний.
Белки, подходящие для терапии пораненной или воспаленной ткани или связанных с ней заболеваний, включают в себя трансформирующий фактор роста (TGF-альфа), тромбоцитарный фактор роста (PDG-F), фактор роста кератиноцитов (KGF) и инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-1), белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста (IGFBPs), IL-4, IL-8, эндотелин-1 (ЕТ-1), фактор роста соединительной ткани (CTGF), TNF-α, фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), циклооксигеназу, ингибитор циклооксигеназы-2, инфликсимаб (infliximab, химерное моноклональное антитело к TNF-α), IL-10, липазу, протеазу, лизозим, фактор проапоптоза (pro-apoptotic factor), агонист рецептора, активируемого пролифератором пероксисомы (peroxisome proliferator-activated receptor (PRAR) agonist) и другие.
Любой микроорганизм или клетка могут быть использованы для диагностического и терапевтического применения согласно данному изобретению при условии, что он (она) реплицируется организмом, не является патогенным для организма, например, аттенуированным, распознается иммунной системой организма и так далее. Термины «микроорганизм» и «клетка» в контексте данного изобретения относятся к микроорганизмам и клеткам, которые сами по себе не имеют в качестве мишеней пораненные или воспаленные ткани (то есть они не могут различать пораненные и воспаленные ткани, с одной стороны, и аналогичные не пораненные и не воспаленные ткани, с другой), так как результаты экспериментов, лежащих в основе данного изобретения, показывают, что микроорганизмы и клетки аккумулируются в пораненной или воспаленной ткани вследствие того, что в таком окружении они не являются открытыми (легко уязвимыми) для атаки иммунной системы хозяина. Микроорганизмы и клетки аккумулируются в течение определенного времени, например, в течение от 3 до 5 дней, до тех пор, пока не будет восстановлена система васкуляризации/лимфатическая система.
В предпочтительном варианте выполнения изобретения микроорганизм или клетка содержит последовательность ДНК, кодирующую люминесцирующий и/или флуоресцирующий белок. Термин «последовательность ДНК, кодирующая люминесцирующий и/или флуоресцирующий белок» в контексте данного изобретения также включает в себя последовательность ДНК, кодирующую люминесцирующий и флуоресцирующий белок в виде фьюжн-белка.
В альтернативном предпочтительном варианте данного изобретения микроорганизм или клетка содержит последовательность ДНК, кодирующую белок, способный индуцировать сигнал, детектируемый посредством отображения магнитного резонанса (MRI), например, белок, связывающий металл. Более того, белок может связывать контрастирующий агент, хромофор или соединение, необходимый(е) для визуализации тканей.
Подходящие устройства для проведения анализа локализации или распределения люминесцирующих и/или флуоресцирующих белков в тканях хорошо известны специалистам и, кроме того, описаны в цитируемой литературе, а также в приведенных далее Примерах.
Предпочтительно, для трансфекции клеток, последовательности ДНК, кодирующие детектируемый белок или белок, способный индуцировать детектируемый сигнал, например, люминесцирующий или флуоресцирующий белок, содержатся в векторе или в векторе экспрессии. Специалисты знакомы с примерами таких систем. Последовательности ДНК могут также содержаться в рекомбинантном вирусе, содержащем подходящие кассеты экспрессии. Подходящие вирусы, которые могут быть использованы, включают в себя бакуловирус, Vaccinia, вирус Синдбис (sindbis virus), вирус Сендай (Sendai virus), аденовирус, аденоассоциированный вирус (AAV) или парвовирус, такой как MVM или Н-1. Вектор также может быть ретровирусом, таким как MoMULV, MoMuLV, HaMuSV, MuMTV, RSV или GaLV. Для экспрессии у млекопитающих подходящим промотором является, например, «моментальный ранний промотор» человеческого цитомегаловируса, (pCMV). Более того, могут быть использованы промоторы, имеющие специфичность к органам и/или тканям. Предпочтительно, последовательности ДНК, кодирующие детектируемый белок или белок, способный индуцировать детектируемый сигнал, оперативно связаны с промотором, дающим возможность высокой экспрессии. Такие промоторы, например индуцибельные промоторы, хорошо известны специалистам.
Для создания описанных выше последовательностей ДНК и конструирования векторов экспрессии или вирусов, содержащих такие последовательности ДНК, можно использовать обычные способы, известные из уровня техники. Эти способы включают в себя, например, рекомбинантные способы in vitro, синтетические способы и рекомбинантные способы in vivo, описанные, например в Sambrook и др.. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (Молекулярное клонирование. Лабораторный справочник, 2-е издание, Нью-Йорк, 1989). Способы трансфекции клеток, фенотипического отбора трансфектантов и экспрессии последовательностей ДНК с использованием описанных выше векторов известны из уровня техники.
Специалистам известны последовательности ДНК, кодирующие люминесцирующие или флуоресцирующие белки, которые могут быть использованы для осуществления данного изобретения. В течение последнего десятилетия были описаны идентификация и выделение структурных генов, кодирующих белки, испускающие свет, например, бактериальную люциферазу из Vibrio harveyi (Belas и др.. Science 218 (1982), 791-793) и Vibrio fischerii (Foran и Brown, Nucleic acids Res. 16 (1988), 177), люциферазу светляков (de Wet и др., Mol. Cell. Biol. 7 (1987), 725-737), экворин (aequorin) из Aequorea victoria (Prasher и др., Biochem. 26 (1987), 1326-1332), люциферазу Renilla из Renilla reniformis (Lorenz и др., PNAS USA 88 (1991), 4438-4442) и зеленый флуоресцентный белок из Aequorea victoria (Prasher и др., Gene 111 (1987), 229-233), что позволяет отслеживать бактерии или вирусы по испусканию света. Трансформация и экспрессия этих генов в бактериях делает возможным обнаружение бактериальных колоний с помощью камеры, позволяющей получать изображение световых пятен малой интенсивности, или отдельных бактерий под флуоресцентным микроскопом (Engebrecht и др.. Science 227 (1985), 1345-1347; Legocki и др., PNAS 83 (1986), 9080-9084; Chalfie и др., Science 263 (1994), 802-805).
Гены люциферазы были экспрессированы рядом микроорганизмов. Основанная на испускании света промоторная активация с использованием luxAB, соединенного с нитрогеназным промотором, была продемонстрирована на примере жизнедеятельности Rhizobia внутри цитоплазмы клеток инфицированных корневых клубеньков с помощью отображения световых пятен малой интенсивности (Legocki и др., PNAS 83 (1986), 9080-9084; O'Kane и др., J.Plant Mol. Biol. 10 (1988), 387-399). Результатом слияния lux А и lux В генов явился полностью функциональный белок люциферазы (Escher и др., PNAS 86 (1989), 6528-6532). Этот фьюжн-ген (Fab2) был внедрен в Bacillus subtilis и Bacillus megatherium под ксилозным промотором, а затем был введен в личинки насекомых и был введен посредством инъекции в гемолимфу червяков. Визуализацию испускания света проводили с помощью видеокамеры, позволяющей получать изображение световых пятен малой интенсивности. Движение и локализация патогенных бактерий в трансгенных растениях arabidopsis, несущих фьюжн конструкт гена патоген-активируемого PAL промотора и бактериальной люциферазы, были продемонстрированы посредством изучения культур инфекции Pseudomonas или Ervinia spp., а также растения томата и кусков картофеля при помощи устройства для визуализации световых пятен низкой интенсивности (Giacomin и Szalay, Plant Sci. 116 (1996), 59-72).
Таким образом, в предпочтительном варианте выполнения изобретения люминесцирующим или флуоресцирующим белком, присутствующим в описанных выше микроорганизме или клетке, является люцифераза, RFP (Red Fluorescent Protein, красный флуоресцентный белок) или GFP (Green Fluorescent Protein, зеленый флуоресцентный белок).
Все люциферазы, экспрессируемые бактериями, требуют для испускания света экзогенно (извне) введенных субстратов, таких как деканаль или коэлентеразин (coelenterazine). Напротив, для визуализации флуоресценции GFP субстрат не требуется, но необходим источник возбуждающего света. Совсем недавно из Xenorhabdus luminescens (Meighen и Szittner, J.Bacteriol. 174 (1992), 5371-5381) и Photobacterium leiognathi (Lee и др., Eur. J. Biochem. 201 (1991), 161-167) был выделен кластер генов, включая luxCDABE, кодирующих бактериальную люциферазу и белки для доставки деканаля внутрь клетки. Этот кластер генов был внедрен в бактерии, в результате чего было получено длительное испускание света, не зависящее от экзогенно добавленного субстрата (Femandez-Pinas и Wolk, Gene 150 (1994), 169-174). Внутрибрюшинное, внутримышечное или внутривенное введение бактерий, содержащих полную последовательность lux оперона, позволило визуализировать и установить местонахождение бактерий у живых мышей. Полученные данные показали, что свет, испускаемый люциферазой, может проникать через ткани и, в результате, может быть зарегистрирован извне (Contag и др., Mol. Microbiol. 18 (1995), 593-603).
Таким образом, в более предпочтительном варианте выполнения изобретения микроорганизм или клетка, содержащие последовательность ДНК, кодирующую люциферазу, дополнительно содержит ген, кодирующий субстрат для люциферазы.
Предпочтительно, микроорганизм является бактерией. Особенно предпочтительными являются аттенуированная Salmonella thyphimurium, аттенуированная Vibrio cholerae, аттенуированная Listeria monocytogenes или Е.coll.
Альтернативно, для диагностического и терапевтического применения согласно данному изобретению также подходят вирусы, такие как Vaccinia virus, AAV, ретровирус и другие. Предпочтительно, вирусом является Vaccinia virus.
Предпочтительно, клеткой для применения согласно данному изобретению является клетка млекопитающих, такая как стволовая клетка, которая по отношению к организму может быть аутологической или гетерологичной.
В другом предпочтительном варианте выполнения изобретения микроорганизм или клетка, подходящие для применения согласно данному изобретению, содержат ruc-gfp кассету экспрессии, содержащую последовательности кДНК люциферазы Renilla (rue) и Aequorea gfp под контролем сильного синтетического раннего/позднего (PE/L) промотора на основе Vaccinia или кассеты luxCDABE.
Согласно предпочтительному способу применения описанных выше микроорганизмов и клеток белок, подходящий для терапии заболеваний, связанных с пораненной или воспаленной тканью, таких как атеросклероз, представляет собой фермент, вызывающий гибель клетки, или фермент, вызывающий расщепление остатков, например, во внутренней части атеросклеротической бляшки, результатом чего является коллапс бляшки под действием внутрипросветного давления крови. Подходящие ферменты включают в себя липазу, протеазу, лизозим, фактор проапоптоза, агонист рецептора, активируемого пролифератором пероксисомы, и другие. В том случае, когда следует лечить воспалительную компоненту атеросклероза, подходящими соединениями являются кортизол, аналоги кортикостероида, циклооксигеназа и ингибиторы циклооксигеназы-2, колхицин, метотрексат, нестероидные противовоспалительные лекарства (NSAIDs), лефлуномид, этанерсепт, миноциклин, циклоспорин, талидомид, инфликсимаб, IL-10, 6-меркаптопурин, азатиоприн или цитотоксический агент. Некоторые из указанных соединений могут быть представлены в форме пролекарств.
Соответственно, белок, экспрессируемый микроорганизмом по данному изобретению, может представлять собой фермент, переводящий неактивное вещество (пролекарство), введенное в организм, в активное соединение.
Предпочтительно, ген, кодирующий фермент, как описано выше, направляется индуцибельным промотором, например IPTG-, антибиотик-, тепло-, рН-, свет-, металл-, аэробно-, клетка-хозяин-, лекарство-, клеточный цикл- или ткане-специфичным индуцибельным промотором, который дополнительно обеспечивает, например, перевод пролекарства в активное соединение только в ткани-мишени. Более того, система доставки согласно данному изобретению также позволяет использовать соединения, которые до настоящего времени не использовали для терапии вследствие их высокой токсичности при систематическом употреблении или вследствие того обстоятельства, что их нельзя было ввести, например, внутривенно в достаточно высоких дозах для достижения уровня внутри, например, свищей (фистул), гнойников (абсцессов) или через гемоэнцефалический барьер. Такие соединения включают в себя талидомид, цитотоксические лекарства, антибиотики и другие.
Более того, микроорганизм или клетка согласно данному изобретению может содержать ВАС (бактериальную искусственную хромосому. Bacterial Artificial Chromosome) или MAC (искусственную хромосому млекопитающих, Mammalian Artificial Chromosome), кодирующую несколько или все белки специфической направленности, например, направленные на заживление ран, такие как TNF-α, COX-2, фактор роста соединительной ткани (CTGF) и другие. Кроме того, клетка может быть кибер клеткой или кибер вирусом, кодирующим эти белки.
Описанные выше микроорганизмы и клетки для введения предпочтительно объединяют с подходящими фармацевтическими носителями. Примеры подходящих фармацевтических носителей известны из уровня техники и включают фосфатно-солевые буферные растворы, воду, эмульсии, такие как эмульсии масла в воде, различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и так далее. Такие носители могут быть изготовлены традиционными способами и введены субъекту в подходящей дозе. Введение микроорганизмов или клеток может быть осуществлено различными способами, например, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутримышечно, путем местного или интрадермального введения. Предпочтительным способом введения является внутривенная инъекция. Способ введения, естественно, зависит от природы ткани и вида микроорганизмов или клеток, содержащихся в фармацевтической композиции. Режим дозирования будет определяться наблюдающим врачом, а также будет зависеть от других клинических факторов. Как хорошо известно медицинским работникам, дозировки для любого конкретного пациента зависят от множества факторов, включая размеры пациента, площадь поверхности тела, возраст, пол, конкретное соединение, которое предполагается вводить, время и способ введения, тип и расположение ткани, общее состояние здоровья и наличие других применяемых одновременно лекарств.
Предпочтительным терапевтическим применением является изготовление фармацевтической композиции для лечения эндокардита, перикардита, воспалительного заболевания кишечника (например, болезни Крона или язвенного колита), поясничной боли (herniated nucleus pulposis), темпорального артериита, нодозного полиартериита или артрита.
В последние несколько лет появилось множество сообщений, подтверждающих наличие Chlamydia pneumoniae, Heliobacter pylori, CMV, HSV и других инфицирующих агентов внутри атеросклеротических бляшек. Присутствие таких инфицирующих агентов внутри атеросклеротической бляшки означает, что внутренняя часть бляшки является защищенным местом (средой), допускающим репликацию, так как в противном случае инфицирующие агенты были бы уничтожены иммунной системой. Более того, существует заслуживающее внимания доказательство того, что внутри атеросклеротической бляшки протекает воспалительный процесс. Соответственно, разумно предположить, что это заболевание можно диагностировать и лечить с помощью микроорганизмов или клеток по данному изобретению, которые после внутривенной инъекции проникнут внутрь атеросклеротической бляшки, где начнут реплицироваться. Через соответствующий промежуток времени бляшку можно визуализировать, используя, например, светочувствительные камеры или подходящее оборудование для получения отображения магнитного резонанса (MRI). Кроме того, указанные микроорганизмы или клетки могут дополнительно продуцировать фермент, например один из описанных выше, вызывающий уничтожение бляшек. Таким образом, еще одним предпочтительным вариантом выполнения изобретения является применение для диагностики и лечения атеросклероза.
Кроме того, предпочтительным вариантом выполнения является применение для диагностики и лечения заболевания коронарной артерии, заболевания периферических сосудов или заболевания мозговой артерии. Терапевтические воздействия по данному изобретению могут заменить такие способы лечения, как баллонная ангиопластика, введение стента, обходного имплантата коронарной артерии, эндартерэктомию сонной артерии, введение обходного аорто-бедренного имплантата и другие инвазивные процедуры. Более того, бляшки на недоступных участках, таких как основная и средняя артерии мозга, можно лечить, используя терапевтический подход согласно данному изобретению.
Для лечения ранений, трещин, хирургических порезов и ожогов микроорганизмы по данному изобретению предпочтительно используют в комбинации с белками, такими как трансформирующий фактор роста (TGF-α), тромбоцитарный фактор роста (PDG-F), фактор роста кератиноцитов (KGF) и инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1), белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста (IGFBPs), IL-4, IL-8, эндотелин-1 (ЕТ-1), фактор роста соединительной ткани (CTGF), TNF-α, фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), циклооксигеназа, ингибитор циклооксигеназы-2, инфликсимаб (infliximab, химерное моноклональное антитело к TNF-α), IL-10, липаза, протеаза, лизозим, фактор проапоптоза, агонист рецептора, активируемого пролифератором пероксисомы (или содержат экспрессируемые последовательности ДНК, кодирующие указанные белки). Для лечения инфекционных заболеваний микроорганизмы по данному изобретению предпочтительно используют в комбинации с антибиотиками. Для лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний, включая ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника и рассеянный склероз, микроорганизмы по данному изобретению предпочтительно используют в комбинации с кортизолом, аналогами кортикостероида, цикллооксигеназой и ингибиторами циклооксигеназы-2, колхицином, метотрексатом, нестероидными противовоспалительными лекарствами, лефлуномидом, этанерсептом, миноциклином, циклоспорином, талидомидом, инфликсимабом, IL-10, 6-меркаптопурином, азатиоприном или цитотоксическим агентом. Для терапии таких заболеваний, как атеросклероз, микроорганизмы по данному изобретению предпочтительно используют в комбинации с липазами, лизозимами, факторами проапоптоза, агонистами рецептора, активируемого пролифератором пероксисомы (или соответствующими последовательностями ДНК) или агентом из числа перечисленных ранее для лечения воспалительных заболеваний. Для лечения болезни Альцгеймера микроорганизмы по данному изобретению предпочтительно используют в комбинации с одним или более из агентов, перечисленных выше для лечения аутоиммунных или воспалительных заболеваний.
И, наконец, описанные ранее микроорганизмы и клетки могут быть использованы для (а) мониторинга эффективности режимов дозирования антибиотика, предпочтительно на основании испускания света и (б) сравнения устойчивости различных нитей и имплантируемых материалов к бактериальной колонизации.
Краткое описание чертежей
Фиг.1: Визуализация бактерий, введенных бестимусным мышам посредством внутривенной инъекции.
Бестимусным мышам (линия «голых» мышей) делали инъекции 1×107 аттенуированных Salmonella typhimurium (А) или 1×107 аттенуированных Vibrio cholera (В). Оба штамма трансформировали pLITE201, несущим lux оперон. Через 20 минут после инъекции бактерий в течение 1 минуты производили регистрацию фотонов.
Фиг.2: Визуализация S. typhimurium у одного животного в течение 5 дней наблюдения.
Бестимусным мышам делали инъекцию 1×107 аттенуированных S. typhimurium. На первом этапе наблюдений бактерии рассредоточились по телу животного (А). Через два дня бактерии у животного пропали за исключением раны (надреза) и области ушной метки, как показано стрелками (В). На пятый день пораненные участки зажили (С).
Фиг.3: Визуализация V.cholera у одного животного в течение 8 дней наблюдения.
Бестимусным мышам делали инъекцию 1×107 аттенуированных V.cholera. На первом этапе наблюдений бактерии визуализировались в области печени животного (А). Пять дней спустя во всем теле животного не наблюдалось бактерий, за исключением раны (надреза), как показано стрелками (В). На 8-й день пораненный участок зажил (С).
Фиг.4: Визуализация V.cholera у иммунокомпетентной мыши линии С57
1×107 аттенуированных V.cholera ввели животному внутривенно. Испускающие свет бактерии колонизировали область ушной метки на четвертый день после инъекции бактерий (показано белой стрелкой).
Фиг.5: Визуализация испускающих свет бактерий в печени крыс.
Крысам линии Sprague Dawley внутривенно ввели 1×108 аттенуированных Е.Coli, трансформированных плазмидной ДНК pLITE201, несущей оперон Iuxcdabe. Регистрацию фотонов проводили немедленно после инъекции (инфицирования) в течение одной минуты с помощью визуализатора световых пятен малой интенсивности (Low Light Imager) (Night Owl). Свечение бактерий наблюдали в печени целого живого животного.
Фиг.6: Колонизация крысиных сердец испускающими свет бактериями.
Внутривенное введение крысам 1×108 аттенуированных Е.coli, трансформированных плазмидой pLITE201, несущей оперон luxedabe, не привела к колонизации сердец контрольных животных, которые не были катетеризированы (А). Аналогичная провокация бактериемии у мышей, катетеризированных через правую сонную артерию, привела к колонизации сердца испускающими свет бактериями (В).
Фиг.7: Обнаружение остаточных бактерий в органах крыс.
Через три дня после внутривенного введения крысам 1×108 аттенуированных Е.Coli, сердце, печень и селезенку удалили и культивировали в течение ночи. Испускающие свет бактерии визуализировали с помощью визуализатора световых пятен низкой интенсивности (Hamamatsu) во всех образцах, полученных от катетеризированных крыс (А-С), в то время как у контрольных животных бактерии были обнаружены в печени (А) и селезенке (В), но не в сердце (С).
Далее изобретение объяснено с помощью приведенных ниже примеров.
Пример 1: Материалы и способы.
(A) Штаммы бактерий
Использовали непатогенный лабораторный штамм бактерий Escherichia coli, штамм DH5α, аттенуированный Salmonella typhimurium (SL7207 hisG46, DEL407 [аrоА544::Тn101] и аттенуированный Vibrio cholerae (Bengal 2 Serotyp 0139, M010DattRSI).
(Б) Плазмидные конструкты
Плазмидная ДНК pLITE201, содержащая кассету генов luxcdabe, была получена от доктора F.Marines (Voisey и Marines, Biotech. 24 (1998) 56-58).
(B) Животные-реципиенты
Самцы мышей BALB/c nu/nu пяти-шестинедельного возраста (масса тела 25-30 г) и крысы линии Sprague Dawley (масса тела 300-325 г) были приобретены у Harlan (Frederick, Мэриленд, США). Мыши линии CS7BL/6J получены из Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME, США). Все эксперименты на животных проводили согласно протоколам, утвержденным комитетом по исследованиям на животных Lorna Linda University. Животных, содержащих материалы рекомбинантной ДНК и аттенуированные патогены, содержали в центре по уходу за животными Lorna Linda University в условиях биологической безопасности 2 уровня.
(Г) Регистрация люминесценции
Непосредственно перед получением изображения животных анестезировали посредством внутрибрюшинных инъекций пентобарбитала натрия (Nembutal® натриевый раствор, Abbot Laboratories, North Chicago, Иллинойс; 60 мг/кг массы тела). Животных поместили внутрь темного ящика для регистрации фотонов и записи наложенных изображений (ARGUS 100 Low Light Imaging System, Hamamatsu, Hamamatsu, Япония и Night Owl, Berthold Technologies, GmbH and Co. KG, Bad Wildbad, Германия). Регистрацию фотонов проводили в течение 1 минуты со стороны брюшины и со стороны спины животных. Затем получали фотографическое изображение, и отображения световых пятен низкой интенсивности накладывали на фотографическое изображение для демонстрации местонахождения люминесцентной активности.
Пример 2: Колонизация кожных ранений у живых животных испускающими свет бактериями, введенными посредством внутривенной инъекции
1×107 бактерий, несущих плазмидную ДНК pLITE201, в 50 мкл вводили бестимусным мышам посредством инъекции в левую бедренную вену под анестезией для того, чтобы определить, что происходит с внутривенно введенными люминесцирующими бактериями у животных. Для того чтобы открыть бедренную вену, хирургическим скальпелем делали надрез длиной 1 см. Последующее закрытие надреза осуществляли нитями 6-0, мышей исследовали при помощи визуализатора световых пятен низкой интенсивности, а испускаемые фотоны регистрировали в течение одной минуты. Изображения каждого животного фиксировали через различные промежутки времени для изучения распространения испускающих свет бактерий по телу животных. Было установлено, что картина распределения испускающих свет бактерий после внутривенного введения бактерий мышам зависит от штамма бактерий. Инъекция аттенуированных S.typhimurium вызвала обширное распространение бактерий по телу животных (Фиг.1А). Такую картину распределения наблюдали в течение 5 минут после инъекции бактерий, и ее можно было видеть в течение одного часа наблюдений. Инъекция аттенуированных V.cholera в кровоток привела, однако, к испусканию света, которое было локализовано в печени в течение 5 минут после инъекции бактерий и оставалось видимым в печени в течение одного часа наблюдений (Фиг.1В).
Различие в картинах распределения бактерий означает различное взаимодействие этих штаммов с хозяином внутри тела животного. Исследование тех же животных через 48 часов после инъекции бактерий показало, что у животных, которым была сделана инъекция, вся наблюдаемая ранее эмиссия света ослабла и исчезла совсем за исключением воспаленных пораненных тканей, таких как область надреза и ушной метки. Воспаление в этих тканях было идентифицировано по их покраснению и отечному виду. Испускание света фиксировали в области надреза и/или воспаленной области ушной метки вплоть до 5-8 дней после инъекции, что было подтверждено более длительными временами регистрации фотонов (10 минут) (Фиг.2А-С и Фиг.3А-С). Отсутствие испускания света происходило не вследствие потери плазмидной ДНК или подавления экспрессии гена в бактериях. В других экспериментах эмиссия света у животных могла быть стойко зафиксирована вплоть до 50 дней. Аналогичные данные были получены на иммунокомпетентных мышах C57BU6J (Фиг.4), что свидетельствует о том, что эти наблюдения не ограничиваются животными с измененной иммунной системой. Тщательные обследования отдельных удаленных органов, а также образцов крови инфицированных животных подтвердило отсутствие люминесценции в этих нормальных неповрежденных тканях. Более того, экспериментальные данные показали, что колонизация поврежденных тканей является частым явлением у мышей. Двадцать четыре из 29 надрезов (82.8%) и 12 из 29 областей ушных меток (41.4%) у мышей были колонизированы бактериями, введенными посредством внутривенной инъекции. Колонизация ранений бактериями, введенными посредством внутривенной инъекции, происходит после инъекции V. cholera даже при такой низкой концентрации, как 1×105 бактериальных клеток.
Пример 3: Колонизация подвергнутых катетеризации крысиных сердец после инъекции в бедренную вену бактерий, испускающих свет.
Хирургические повреждения сердца были созданы согласно описанным ранее процедурам (Santoro и Levison, Infect. Immun. 19 (3) (1978), 915-918; Overholser и др., J.Infect. Dis. 155 (1) (1987), 107-112). Животных подвергли анестезии при помощи пентобарбитала натрия (60 мг/кг, внутрибрюшинно). Для того чтобы открыть плотную сонную артерию, выполнили срединный разрез шеи. Ввели полипропиленовый катетер и продвигали его вперед до тех пор, пока не начали чувствовать сопротивление, что указывало на то, что достигли уровня клапана аорты. Затем катетер закрепили, используя нити 10-0 (AROSurgical Instrument Corporation, Япония) и надрез закрыли, используя шелковые нити 4-0 (American Cyanamide Company, Wayne, Нью Джерси). Введение катетера вызывает раздражение и последующее воспаление клапана аорты (Santoro и Levison, 1978). Контрольным животным катетер не вводили. Бактериемию вызывали посредством введения в бедренную вену 1×108 испускающих свет бактериальных клеток Е.Coli. Сразу после инъекции наблюдение с помощью визуализатора световых пятен низкой интенсивности выявило бактериальную колонизацию в области печени (Фиг.5). Через три дня животные, подвергнутые катетеризации, устойчиво демонстрировали колонизацию сердца испускающими свет бактериями, в то время как у контрольных животных испускания света от сердца не наблюдали (Фиг.6). Для того чтобы определить возможное присутствие низких и неопределяемых уровней бактерий в тканях, сердце, печень и селезенку удалили у каждого животного и культивировали в течение ночи. У животных обеих групп обнаружено наличие испускающих свет бактерий в печени и селезенке, то есть в органах, напрямую участвующих в очистке организма от бактерий. Сильное испускание света зарегистрировано в сердцах, подвергнутых катетеризации, в отличие от сердец контрольных животных, в которых испускание света полностью отсутствовало (Фиг.7). Наличия бактерий не обнаружено в культурах после культивирования катетеров.
Полученные данные указывают на то, что испускающие свет бактерии, введенные в кровоток посредством инъекции в бедренную вену, из нормальных тканей удаляются, в то время как поврежденные или воспаленные ткани у животных с нарушенным иммунитетом или иммунокомпетентных животных представляют собой участки, продолжающие удерживать бактерии в течение длительного периода времени.

Claims (33)

1. Способ обнаружения присутствия или отсутствия ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани, в котором субъекту вводят микроорганизм, являющийся бактерией, которая кодирует детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, проводят мониторинг субъекта для обнаружения детектируемого белка или сигнала с целью выявления аккумулирования бактерий в ранении, пораненной ткани, участке воспаления или воспаленной ткани субъекта, проводя таким образом обнаружение присутствия или отсутствия ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани у субъекта, при этом субъектом является тот, у кого необходимо обнаружить присутствие или отсутствие ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани, бактерия не является патогенной или аттенуированной, бактерии аккумулируются в ранении, пораненной ткани, участке воспаления или воспаленной ткани вследствие того, что в ранении, в пораненной ткани, в участке воспаления или в воспаленной ткани бактерия оказывается защищенной от удаления иммунной системой субъекта, бактерия не нацелена на ранение, пораненную ткань, участок воспаления или воспаленную ткань, бактерия реплицируется в субъекте.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что бактерия (а) не способна различать пораненную и непораненную ткань, и/или (b) не способна различать воспаленную и невоспаленную ткань.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что бактерию вводят субъекту внутривенно.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что микроорганизм является бактерией, выбранной из группы, включающей Salmonella typhimurium, Vibrio cholerae, Listeria monocytogenes и Escherichia coli.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что кодируемый ДНК детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является белком, индуцирующим детектируемый сигнал.
6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, способен связываться с контрастирующим агентом, хромофором, или соединением, или лигандом для визуализации ранения, пораненной ткани, участка воспаления, или воспаленной ткани.
7. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, испускает детектируемый свет.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является флуоресцирующим или люминесцирующим белком.
9. Способ по п.7, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является люциферазой и/или субстратом люциферазы.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является белком, связывающим металл.
11. Способ по п.5, отличающийся тем, что белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является белком, связывающим металл.
12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что микроорганизм включает ДНК, кодирующую белок, подходящий для терапии ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани.
13. Способ обнаружения присутствия или отсутствия ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани и лечения ранения или воспаления, в котором субъекту вводят микроорганизм, являющийся бактерией, которая кодирует детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, проводят мониторинг субъекта для обнаружения детектируемого белка или сигнала с целью выявления аккумулирования бактерий в ранении, пораненной ткани, участке воспаления или воспаленной ткани субъекта, таким образом проводя обнаружение присутствия или отсутствия ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани у субъекта, при этом субъектом является тот, у кого необходимо обнаружить присутствие или отсутствие ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани, бактерия не является патогенной или аттенуированной, бактерии аккумулируются в ранении, пораненной ткани, участке воспаления или воспаленной ткани вследствие того, что в решении, в пораненной ткани, в участке воспаления или в воспаленной ткани бактерия оказывается защищенной от удаления иммунной системой субъекта, бактерия не нацелена на ранение, пораненную ткань, участок воспаления или воспаленную ткань, бактерия реплицируется в субъекте, и субъекту, у которого обнаружено ранение или воспаление, вводят соединение, подходящее для терапии ранения, пораненной ткани, участка воспаления или воспаленной ткани.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что соединение для терапии выбрано из группы, включающей ацилированные иридоидные глюкозиды, кортизол, аналоги кортикостероида, колхицины, метотрексат, нестероидные противовоспалительные лекарства, лефлуномид, этанерсепт, миноциклин, циклоспорин, талидомид, цитотоксический агент, 6-меркаптопурин и азатиоприн.
15. Способ по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что субъект имеет заболевание, выбранное из группы, включающей эндокардит, перикардит, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, язвенный колит, поясничную боль, грыжу межпозвонкового диска (herniated nucleus pulposis), темпоральный артериит, нодозный полиартериит, артрит, атеросклероз, заболевание коронарной артерии, заболевание периферических сосудов, заболевание мозговой артерии, аутоиммунное заболевание, ревматоидный артрит, рассеянный склероз и болезнь Альцгеймера.
16. Способ по п.12, отличающийся тем, что кодируемый белок для терапии является белком, выбранным из группы, включающей трансформирующий фактор роста (TGF-альфа), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), фактор роста кератиноцитов, инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-1), белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста, IL-4, IL-8, эндотелии-1, фактор роста соединительной ткани, TNF-α, фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), циклооксигеназу, ингибитор циклооксигеназы-2, инфликсимаб, IL-10, липазу, протеазу, лизозим, фактор проапоптоза, СОХ-2 и агонист PPAR.
17. Способ по п.12, отличающийся тем, что кодируемый белок для терапии является ферментом, вызывающим гибель клетки, или ферментом, вызывающим расщепление остатков.
18. Способ по п.12, отличающийся тем, что кодируемый белок для терапии является ферментом, переводящим пролекарство в активное соединение.
19. Способ по любому из пп.1-6 и 10-16, отличающийся тем, что детектируемый белок индуцирует детектируемый сигнал, который может быть обнаружен с помощью отображения магнитного резонанса.
20. Способ обнаружения присутствия или отсутствия атеросклеротической бляшки, в котором субъекту вводят микроорганизм, являющийся бактерией, которая кодирует детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, проводят мониторинг субъекта для обнаружения детектируемого белка или сигнала с целью выявления аккумулирования бактерий в атеросклеротической бляшке у субъекта, таким образом проводя обнаружение присутствия или отсутствия атеросклеротической бляшки, при этом субъектом является тот, у кого необходимо обнаружить присутствие или отсутствие атеросклеротической бляшки, бактерия не является патогенной или аттенуированной, бактерии аккумулируются в атеросклеротической бляшке вследствие того, что в ранении, в пораненной ткани, в участке воспаления или в воспаленной ткани бактерия оказывается защищенной от удаления иммунной системой, бактерия не нацелена на атеросклеротическую бляшку, и бактерия реплицируется в субъекте.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что микроорганизм кодирует белок для лечения атеросклероза.
22. Способ по п.20, отличающийся тем, что микроорганизм является бактерией, выбранной из группы, включающей Salmonella typhimurium, Vibrio cholerae, Listeria monocytogenes и Escherichia coli.
23. Способ по п.20, отличающийся тем, что кодируемый ДНК детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является белком, индуцирующим детектируемый сигнал.
24. Способ по п.22 или 23, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, способен связываться с контрастирующим агентом, хромофором, или соединением, или лигандом для визуализации атеросклеротической бляшки.
25. Способ по любому из пп.20-24, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, испускает детектируемый свет.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является флуоресцирующим или люминесцирующим белком.
27. Способ по п.25, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является люциферазой, и/или субстратом лоциферазы.
28. Способ по любому из пп.20-24, отличающийся тем, что детектируемый белок или белок, индуцирующий детектируемый сигнал, является белком, связывающим металл.
29. Способ по любому из пп.13-15, отличающийся тем, что соединение для терапии является белком, выбранным из группы, включающей трансформирующий фактор роста (TGF-альфа), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), фактор роста кератиноцитов, инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-1), белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста, IL-4, IL-8, эндотелии-1, фактор роста соединительной ткани, TNF-α, фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), циклооксигеназу, ингибитор циклооксигеназы-2, инфликсимаб, IL-10, липазу, протеазу, лизозим, фактор проапоптоза, СОХ-2 и агонист PPAR.
30. Способ по п.21, отличающийся тем, что кодируемый белок для терапии атеросклероза выбран из группы, включающей трансформирующий фактор роста (TGF-альфа), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), фактор роста кератиноцитов, инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-1), белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста IL-4, IL-8, эндотелин-1, фактор роста соединительной ткани, TNF-α, фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), циклооксигеназу, ингибитор циклооксигеназы-2, инфликсимаб, IL-10, липазу, протеазу, лизозим, фактор проапоптоза, СОХ-2 и агонист PPAR.
31. Способ по любому из пп.13-15, отличающийся тем, что соединение для терапии является ферментом, вызывающим гибель клетки, или ферментом, вызывающим расщепление остатков.
32. Способ по любому из пп.13-15, отличающийся тем, что соединение для терапии является ферментом, переводящим пролекарство в активное соединение.
33. Способ по любому из пп.20-24 и 28-32, отличающийся тем, что детектируемый белок является белком, индуцирующим детектируемый сигнал, который может быть обнаружен с помощью отображения магнитного резонанса.
RU2004135547/13A 2002-06-05 2003-06-05 Испускающие свет микроорганизмы и клетки для диагностики и терапии заболеваний, связанных с пораненной или воспаленной тканью RU2375456C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP02012552A EP1369491A1 (en) 2002-06-05 2002-06-05 Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of diseases associated with wounded or inflamed tissue
EP02012552.2 2002-06-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2004135547A RU2004135547A (ru) 2006-11-20
RU2375456C2 true RU2375456C2 (ru) 2009-12-10

Family

ID=29433119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004135547/13A RU2375456C2 (ru) 2002-06-05 2003-06-05 Испускающие свет микроорганизмы и клетки для диагностики и терапии заболеваний, связанных с пораненной или воспаленной тканью

Country Status (11)

Country Link
US (1) US8137904B2 (ru)
EP (2) EP1369491A1 (ru)
JP (1) JP4390699B2 (ru)
CN (1) CN1668758A (ru)
AT (1) ATE519857T1 (ru)
AU (2) AU2003236696A1 (ru)
CA (1) CA2488227A1 (ru)
IL (2) IL165350A0 (ru)
RU (1) RU2375456C2 (ru)
SG (1) SG165992A1 (ru)
WO (1) WO2003104485A2 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2513686C2 (ru) * 2012-08-24 2014-04-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pG1-Rm7, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО БЕЛКА G1-Rm7, И ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙ ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ И ОБЛАДАЮЩИЙ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
RU2705249C2 (ru) * 2013-07-12 2019-11-06 Дзе Чилдрен'З Хоспитал Оф Филадельфия Вектор aav и анализ на нейтрализующие антитела против aav (аденоассоциированного вируса)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1281767A3 (en) 2001-07-31 2003-05-28 Aladar A. Szalay Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of tumors
US20030228261A1 (en) * 2002-06-05 2003-12-11 Aladar Szalay Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of diseases associated with wounded or inflamed tissue
EP1369491A1 (en) 2002-06-05 2003-12-10 Aladar A. Szalay Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of diseases associated with wounded or inflamed tissue
BRPI0411526A (pt) 2003-06-18 2006-08-01 Genelux Corp vìrus de vaccinia e outros microrganismos recombinates modificados e usos dos mesmos
TW200819540A (en) 2006-07-11 2008-05-01 Genelux Corp Methods and compositions for detection of microorganisms and cells and treatment of diseases and disorders
US20090098529A1 (en) 2006-10-16 2009-04-16 Nanhai Chen Methods for attenuating virus strains for diagnostic and therapeutic uses
WO2008150496A2 (en) * 2007-05-31 2008-12-11 Genelux Corporation Assay for sensitivity to chemotherapeutic agents
JP5213075B2 (ja) 2007-06-15 2013-06-19 ジェネラックス・コーポレイション 腫瘍の画像化および／または処置のための微生物
JP2010533718A (ja) * 2007-07-18 2010-10-28 ジェネラックス・コーポレイション 腫瘍溶解性ウイルス治療に付随する副作用の処置もしくは改善用医薬の製造における化学治療剤の使用
EP2242516A1 (en) 2008-01-11 2010-10-27 Genelux Corporation Methods and compositions for detection of bacteria and treatment of diseases and disorders
US20120052003A9 (en) * 2008-05-16 2012-03-01 Szalay Aladar A Microorganisms for preventing and treating neoplasms accompanying cellular therapy
CN114262690A (zh) 2011-04-15 2022-04-01 吉恩勒克斯公司 减毒的痘苗病毒的克隆毒株及其使用方法
JP6037259B2 (ja) * 2011-04-28 2016-12-07 国立大学法人 千葉大学 一酸化窒素を探知するための形質転換用組換えベクター、およびこれを用いた一酸化窒素センサ細胞
EP2764119A2 (en) 2011-10-05 2014-08-13 Genelux Corporation Method for detecting replication or colonization of a biological therapeutic
BR112015021884A8 (pt) 2013-03-15 2019-11-26 Childrens Hospital Philadelphia vetores de plasmídeo recombinantes, partícula viral avv ou pluralidade de partículas virais, seus métodos de produção e seus usos, e composição farmacêutica
US9642586B2 (en) * 2014-08-18 2017-05-09 Siemens Aktiengesellschaft Computer-aided analysis of medical images
US9616114B1 (en) 2014-09-18 2017-04-11 David Gordon Bermudes Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity
US10676723B2 (en) 2015-05-11 2020-06-09 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
WO2018049362A1 (en) * 2016-09-12 2018-03-15 Massachusetts Institute Of Technology Transcriptional sensor for bile acids in bacteroides thetaiotaomicron
US11180535B1 (en) 2016-12-07 2021-11-23 David Gordon Bermudes Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
CN107418996A (zh) * 2017-04-19 2017-12-01 中国食品药品检定研究院 一种检测血管支架材料体外内皮化的模型制备及应用
CN109402127B (zh) * 2018-09-29 2021-12-10 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 一组与结缔组织生长因子特异性结合的高亲和力核酸适配体及其应用
US11471497B1 (en) 2019-03-13 2022-10-18 David Gordon Bermudes Copper chelation therapeutics
US10973908B1 (en) 2020-05-14 2021-04-13 David Gordon Bermudes Expression of SARS-CoV-2 spike protein receptor binding domain in attenuated salmonella as a vaccine

Family Cites Families (102)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US31643A (en) * 1861-03-05 Bons l
US213741A (en) * 1879-04-01 Improvement in portable platforms for fire and other ladders
US69491A (en) * 1867-10-01 Newark
EP0037441B1 (en) 1980-03-10 1984-05-09 Seiji Arakawa Pharmaceutical compositions useful as cellular immunopotentiator and anti-tumor agent, process for production thereof and microorganism used therein
US4442203A (en) 1981-06-30 1984-04-10 Massachusetts Institute Of Technology Gene amplification assay for detecting tumor promoters
US5833975A (en) 1989-03-08 1998-11-10 Virogenetics Corporation Canarypox virus expressing cytokine and/or tumor-associated antigen DNA sequence
US4722848A (en) * 1982-12-08 1988-02-02 Health Research, Incorporated Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus
US4778759A (en) * 1982-07-09 1988-10-18 Boyce, Thompson Institute For Plant Research, Inc. Genetic engineering in cyanobacteria
US5221623A (en) * 1986-07-22 1993-06-22 Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. Use of bacterial luciferase structural genes for cloning and monitoring gene expression in microorganisms and for tagging and identification of genetically engineered organisms
US6007806A (en) 1986-08-13 1999-12-28 Transgene S.A. Expression of a tumor-specific antigen by a recombinant vector virus and use thereof in preventive or curative treatment of the corresponding tumor
US5283187A (en) * 1987-11-17 1994-02-01 Brown University Research Foundation Cell culture-containing tubular capsule produced by co-extrusion
US5650148A (en) * 1988-12-15 1997-07-22 The Regents Of The University Of California Method of grafting genetically modified cells to treat defects, disease or damage of the central nervous system
ATE219519T1 (de) * 1989-01-23 2002-07-15 Chiron Corp Rekombinanttherapien für infektionen und hyperproliferative störungen
US5618531A (en) * 1990-10-19 1997-04-08 New York University Method for increasing the viability of cells which are administered to the brain or spinal cord
US5830702A (en) 1990-10-31 1998-11-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Live, recombinant listeria monocytogenes and production of cytotoxic T-cell response
US5863542A (en) * 1991-03-07 1999-01-26 Virogenetics Corporation Recombinant attenuated ALVAC canaryopox virus containing heterologous HIV or SIV inserts
US5212082A (en) * 1991-03-13 1993-05-18 New York University Genetically modified tyrosine hydroxylase and uses thereof
ES2107537T3 (es) * 1991-04-25 1997-12-01 Univ Brown Res Found Vehiculo inmunoaislante biocompatible implantable para suministrar productos terapeuticos seleccionados.
US5800829A (en) * 1991-04-25 1998-09-01 Brown University Research Foundation Methods for coextruding immunoisolatory implantable vehicles with a biocompatible jacket and a biocompatible matrix core
US5718902A (en) * 1991-06-17 1998-02-17 The Regents Of The University Of California Double recombinant vaccinia virus vaccines
US5411860A (en) * 1992-04-07 1995-05-02 The Johns Hopkins University Amplification of human MDM2 gene in human tumors
DE69330640T2 (de) * 1992-05-29 2002-07-04 Vivorx, Inc. Mikroverkapselung von zellen
AU7568094A (en) * 1993-08-12 1995-03-14 Cytotherapeutics, Inc. Improved compositions and methods for the delivery of biologically active molecules using genetically altered cells contained in biocompatible immunoisolatory capsules
US6491905B1 (en) 1993-09-14 2002-12-10 The Uab Research Foundation Recombinant bacterial cells for delivery of PNP to tumor cells
FR2710536B1 (fr) 1993-09-29 1995-12-22 Transgene Sa Usage anti-cancéreux d'un vecteur viral comportant un gène modulateur de la réponse immunitaire et/ou inflammatoire.
US6416754B1 (en) 1994-03-03 2002-07-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Anaerobe targeted enzyme-mediated prodrug therapy
US5550050A (en) * 1994-04-15 1996-08-27 Cytotherapeutics, Inc. Method for implanting encapsulated cells in a host
US6093700A (en) * 1995-05-11 2000-07-25 Thomas Jefferson University Method of inducing an immune response using vaccinia virus recombinants encoding GM-CSF
US6455673B1 (en) * 1994-06-08 2002-09-24 President And Fellows Of Harvard College Multi-mutant diphtheria toxin vaccines
US5650135A (en) 1994-07-01 1997-07-22 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Non-invasive localization of a light-emitting conjugate in a mammal
US6649143B1 (en) * 1994-07-01 2003-11-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Non-invasive localization of a light-emitting conjugate in a mammal
DE4425382C2 (de) * 1994-07-19 1997-08-14 Univ Hohenheim Salmonella-Lebendimpfstoff
US5858747A (en) 1994-07-20 1999-01-12 Cytotherapeutics, Inc. Control of cell growth in a bioartificial organ with extracellular matrix coated microcarriers
US5853385A (en) 1994-08-26 1998-12-29 Cytotherapeutics, Inc. Encapsulated PC12 cell transplants for treatment of Parkinson's disease
EP1016418B1 (en) * 1994-10-03 2009-12-30 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Host cell comprising a recombinant virus expressing an antigen and a recombinant virus expressing an immunostimulatory molecule
US6045802A (en) * 1994-10-03 2000-04-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Enhanced immune response to an antigen by a composition of a recombinant virus expressing the antigen with a recombinant virus expressing an immunostimulatory molecule
US5693533A (en) 1994-12-07 1997-12-02 The Goodwin Institue For Cancer Research Human breast carcinoma cell line capable of production of a spontaneously metastasizing tumor in animals for use in anticancer drug testing
US6150170A (en) 1998-05-03 2000-11-21 University Of Maryland At Baltimore Method for introducing and expressing genes in animal cells, and live invasive bacterial vectors for use in the same
US6503703B1 (en) * 1995-05-19 2003-01-07 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Identification and use of antiviral compounds that inhibit interaction of host cell proteins and viral proteins required for viral replication
US5704910A (en) * 1995-06-05 1998-01-06 Nephros Therapeutics, Inc. Implantable device and use therefor
US5837234A (en) 1995-06-07 1998-11-17 Cytotherapeutics, Inc. Bioartificial organ containing cells encapsulated in a permselective polyether suflfone membrane
US6190657B1 (en) * 1995-06-07 2001-02-20 Yale University Vectors for the diagnosis and treatment of solid tumors including melanoma
US5646298A (en) * 1995-06-07 1997-07-08 Procoron, Inc. Cyclopropylindole prodrugs
US6077697A (en) * 1996-04-10 2000-06-20 Chromos Molecular Systems, Inc. Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US6025155A (en) * 1996-04-10 2000-02-15 Chromos Molecular Systems, Inc. Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US20020160970A1 (en) 1996-04-10 2002-10-31 Gyula Hadlaczky Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US20030033617A1 (en) 1996-04-10 2003-02-13 Gyula Hadlaczky Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US5976796A (en) 1996-10-04 1999-11-02 Loma Linda University Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes
US5842431A (en) 1997-02-19 1998-12-01 Wu; Chong-Ming Rotating shuttle and presser plate arrangement
US6251384B1 (en) * 1997-04-28 2001-06-26 Anticancer, Inc. Metastasis models using green fluorescent protein (GFP) as a marker
US6232523B1 (en) * 1997-04-28 2001-05-15 Anticancer, Inc. Metastasis models using green fluorescent protein (GFP) as a marker
DE69839603D1 (de) * 1997-04-28 2008-07-24 Anticancer Inc Zierenden proteins
US6265557B1 (en) * 1997-05-09 2001-07-24 Loma Linda University Medical Center ABO histo-blood group O alleles of the baboon
US6713284B2 (en) * 1997-06-25 2004-03-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Bacterial superantigen vaccines
US6080849A (en) * 1997-09-10 2000-06-27 Vion Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified tumor-targeted bacteria with reduced virulence
US7780962B2 (en) * 1997-10-09 2010-08-24 Wellstat Biologics Corporation Treatment of neoplasms with RNA viruses
US20030044384A1 (en) * 1997-10-09 2003-03-06 Pro-Virus, Inc. Treatment of neoplasms with viruses
US6099848A (en) * 1997-11-18 2000-08-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Immunogenic compositions comprising DAL/DAT double-mutant, auxotrophic, attenuated strains of Listeria and their methods of use
US6106826A (en) * 1997-12-17 2000-08-22 Wisconsin Alumni Research Foundation Replication competent, avirulent Herpes simplex virus as a vector for neural and ocular gene therapy
DE29924318U1 (de) * 1999-01-14 2002-09-19 Fleischmann, Wilhelm, Dr.med., 74321 Bietigheim-Bissingen Verbandsmaterial
US6087168A (en) 1999-01-20 2000-07-11 Cedars Sinai Medical Center Conversion of non-neuronal cells into neurons: transdifferentiation of epidermal cells
US6713293B1 (en) * 1999-02-08 2004-03-30 Friedrich Grummt Encapsulated cells containing an amplified expression vector as a drug delivery device
US6428968B1 (en) * 1999-03-15 2002-08-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Combined therapy with a chemotherapeutic agent and an oncolytic virus for killing tumor cells in a subject
US6511967B1 (en) * 1999-04-23 2003-01-28 The General Hospital Corporation Use of an internalizing transferrin receptor to image transgene expression
WO2000073479A1 (en) * 1999-05-28 2000-12-07 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services A combined growth factor-deleted and thymidine kinase-deleted vaccinia virus vector
US6627190B2 (en) * 1999-07-12 2003-09-30 Saint Louis University Recombinant adenovirus vectors that are replication-competent in tert-expressing cells
WO2001025399A2 (en) * 1999-10-04 2001-04-12 Vion Pharmaceuticals, Inc. Non-invasive tumor imaging by tumor-targeted bacteria
US6589531B1 (en) * 2000-01-21 2003-07-08 The Regents Of The University Of California Recombinant yellow fever virus and method of use thereof
AU2001234571B9 (en) * 2000-01-26 2004-09-23 Loma Linda University Method for the evaluation of implantable materials
AU2001249297B2 (en) 2000-03-17 2006-11-23 Anticancer, Inc. Whole-body optical imaging of gene expression and uses thereof
DE10013511A1 (de) * 2000-03-20 2001-10-11 Brand Gmbh & Co Kg Mehrkanal-Pipettiereinrichtung sowie Pipettenschaft dafür
JP4231226B2 (ja) 2000-04-04 2009-02-25 新日本製鐵株式会社 圧延ｈ形鋼の製造方法
CA2341356C (en) * 2000-04-14 2011-10-11 Transgene S.A. Poxvirus with targeted infection specificity
CA2342040C (en) * 2000-09-21 2012-07-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Anaerobic bacterium as a drug for cancer gene therapy
JP3642755B2 (ja) 2000-09-21 2005-04-27 純 天野 嫌気性菌を用いた遺伝子治療用医薬
US20030031628A1 (en) * 2001-07-09 2003-02-13 Ming Zhao Imaging infection using fluorescent protein as a marker
EP1281772A1 (en) * 2001-07-31 2003-02-05 Aladar A. Szalay Light-emitting microorganisms and cells for tumour diagnosis/therapy
EP1281767A3 (en) * 2001-07-31 2003-05-28 Aladar A. Szalay Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of tumors
US20030198627A1 (en) 2001-09-01 2003-10-23 Gert-Jan Arts siRNA knockout assay method and constructs
AU2002348534A1 (en) * 2001-10-09 2003-04-22 The Children's Hospital Of Philadelphia Materials and methods for preventing or reducing scar formation
ES2431090T3 (es) 2001-11-21 2013-11-25 The Johns Hopkins University Terapia bacteriolítica de combinación para el tratamiento de tumores
CN101869716B (zh) * 2001-12-31 2013-12-11 抗癌公司 监视细菌肿瘤治疗的系统
JP2005531507A (ja) * 2002-03-02 2005-10-20 ザ ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム ストローマ細胞前駆体による抗癌物質の局所的な産生および／または送達方法
WO2003078640A2 (en) 2002-03-15 2003-09-25 Baxter International Inc. Recombinant drug-sensitive vaccinia virus as smallpox vaccine
US20030213007A1 (en) 2002-03-27 2003-11-13 Slattery Charles Wilbur Human milk produced by human mammary tissue implanted in non-human host animals and uses thereof
US7794728B2 (en) 2002-05-29 2010-09-14 The Regents Of The University Of California Attenuated Listeria spp. and methods for using the same
US20030228261A1 (en) 2002-06-05 2003-12-11 Aladar Szalay Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of diseases associated with wounded or inflamed tissue
EP1369491A1 (en) 2002-06-05 2003-12-10 Aladar A. Szalay Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of diseases associated with wounded or inflamed tissue
WO2004044175A2 (en) 2002-11-12 2004-05-27 Anticancer, Inc. Fluorescence guided cell capture
EP1512746B1 (en) 2003-08-14 2009-10-07 Genelux Corporation Method for the production of a polypeptide, RNA or other compound in tumor tissue
EP1526185B1 (en) 2003-10-22 2012-09-12 Genelux Corporation Use of a microorganism or cell to induce autoimmunization of an organism against a tumor
EP1489164A1 (en) 2003-06-18 2004-12-22 Genelux GmbH Recombinant vaccinia viruses with modified F3 genes, uses thereof
BRPI0411526A (pt) * 2003-06-18 2006-08-01 Genelux Corp vìrus de vaccinia e outros microrganismos recombinates modificados e usos dos mesmos
WO2005057488A2 (en) 2003-12-03 2005-06-23 Anticancer, Inc. Modular system for multi-color, whole body fluorescence imaging
WO2005072622A1 (en) 2004-01-26 2005-08-11 Anticancer, Inc. Whole body imaging using portable observation systems
TW200819540A (en) * 2006-07-11 2008-05-01 Genelux Corp Methods and compositions for detection of microorganisms and cells and treatment of diseases and disorders
US20090098529A1 (en) * 2006-10-16 2009-04-16 Nanhai Chen Methods for attenuating virus strains for diagnostic and therapeutic uses
WO2008150496A2 (en) * 2007-05-31 2008-12-11 Genelux Corporation Assay for sensitivity to chemotherapeutic agents
JP2010533718A (ja) * 2007-07-18 2010-10-28 ジェネラックス・コーポレイション 腫瘍溶解性ウイルス治療に付随する副作用の処置もしくは改善用医薬の製造における化学治療剤の使用
US20090136917A1 (en) * 2007-10-25 2009-05-28 Szalay Aladar A Systems and methods for viral therapy
EP2242516A1 (en) * 2008-01-11 2010-10-27 Genelux Corporation Methods and compositions for detection of bacteria and treatment of diseases and disorders
US20120052003A9 (en) 2008-05-16 2012-03-01 Szalay Aladar A Microorganisms for preventing and treating neoplasms accompanying cellular therapy

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RODRIGUEZ J.F. et а1. Expression of the firefly luciferase gene in vaccinia virus: a highly sensitive gene marker to follow virus dissemination in tissues of infected animals. Proc Natl Acad Sci USA. 1988 Mar; 85(5), 1667-71. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2513686C2 (ru) * 2012-08-24 2014-04-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pG1-Rm7, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО БЕЛКА G1-Rm7, И ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙ ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ И ОБЛАДАЮЩИЙ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
RU2705249C2 (ru) * 2013-07-12 2019-11-06 Дзе Чилдрен'З Хоспитал Оф Филадельфия Вектор aav и анализ на нейтрализующие антитела против aav (аденоассоциированного вируса)
US11408899B2 (en) 2013-07-12 2022-08-09 The Children's Hospital Of Philadelphia AAV vector and assay for anti-AAV (adeno-associated virus) neutralizing antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
SG165992A1 (en) 2010-11-29
ATE519857T1 (de) 2011-08-15
US20050249670A1 (en) 2005-11-10
IL165350A (en) 2012-03-29
EP1369491A1 (en) 2003-12-10
IL165350A0 (en) 2006-01-15
EP1509617B1 (en) 2011-08-10
EP1509617A2 (en) 2005-03-02
WO2003104485A3 (en) 2004-04-29
AU2008202946A1 (en) 2008-07-24
JP4390699B2 (ja) 2009-12-24
WO2003104485A2 (en) 2003-12-18
RU2004135547A (ru) 2006-11-20
US8137904B2 (en) 2012-03-20
CN1668758A (zh) 2005-09-14
AU2008202946B2 (en) 2011-03-24
JP2005528922A (ja) 2005-09-29
CA2488227A1 (en) 2003-12-18
AU2003236696A1 (en) 2003-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2375456C2 (ru) Испускающие свет микроорганизмы и клетки для диагностики и терапии заболеваний, связанных с пораненной или воспаленной тканью
US20030228261A1 (en) Light emitting microorganisms and cells for diagnosis and therapy of diseases associated with wounded or inflamed tissue
Muthusamy et al. Clinical evaluation of a single-use duodenoscope for endoscopic retrograde cholangiopancreatography
JP2005528922A5 (ru)
CN100415897C (zh) 用于诊断和治疗肿瘤的微生物和细胞
Farrugia et al. Mechanisms of vascular damage by systemic dissemination of the oral pathogen Porphyromonas gingivalis
Legout et al. Diagnosis and management of prosthetic vascular graft infections
Shah et al. Molecular optical imaging: applications leading to the development of present day therapeutics
CA2403090C (en) Whole-body optical imaging of gene expression and uses thereof
AU2001249297A1 (en) Whole-body optical imaging of gene expression and uses thereof
Gazzaniga et al. Harnessing colon chip technology to identify commensal bacteria that promote host tolerance to infection
CN107106707A (zh) 用于体外和体内检测革兰氏阴性细菌的分子探针
CN105101796B (zh) 衍生自b型肝炎病毒核蛋白精氨酸密集区的抗菌胜肽
JP2023547534A (ja) バクテリオファージを含む少なくとも１つの腸及び／又は胃腸の細菌種の集団を減少させる方法、ならびにバクテリオファージ及びその使用
AU2021213377A1 (en) Method, comprising bacteriophages, for reducing the population of at least one adipogenic bacterial species, and bacteriophages and the use thereof
Moon et al. In Vivo Bioluminescence Imaging for Targeting Acute Hypoxic/Ischemic Small Intestine with Engineered Salmonella typhimurium
Wang et al. Development of bioluminescent Cronobacter sakazakii ATCC 29544 in a mouse model
CN107206109A (zh) 用于体外和体内检测细菌和/或真菌的荧光多分枝探针
Mertz Phage Therapy Takes on Broad Applications
Manninen et al. Imaging after vascular gene therapy
Contag et al. Visualizing infection and gene expression in living animals
Chopra Luciferase-expressing Escherichia coli pLux-expressing E. coli

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140606