RU2362167C1 - Способ диагностики мужского бесплодия - Google Patents
Способ диагностики мужского бесплодия Download PDFInfo
- Publication number
- RU2362167C1 RU2362167C1 RU2008115047/15A RU2008115047A RU2362167C1 RU 2362167 C1 RU2362167 C1 RU 2362167C1 RU 2008115047/15 A RU2008115047/15 A RU 2008115047/15A RU 2008115047 A RU2008115047 A RU 2008115047A RU 2362167 C1 RU2362167 C1 RU 2362167C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inhibin
- diagnostics
- sperm
- ejaculate
- male sterility
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к андрологии, и касается диагностики мужского бесплодия. Способ включает изучение степени компактизации хроматина сперматозоидов, относительного содержания дефектных клеток в эякуляте, уровня ингибина В в сыворотке крови. На основании полученных данных вычисляют диагностический индекс DI, исходя из значения которого диагностируют бесплодие у мужчин или отсутствие патологии. Использование способа позволяет повысить точность диагностики бесплодия у мужчин с нормальными показателями спермограммы.
Description
Область применения: предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике.
Уровень техники
Аналогами данного изобретения являются описанные в отечественной и зарубежной литературе методы лабораторного исследования, имеющие своей целью диагностику мужского бесплодия.
1. Определение сывороточной концентрации ингибина В. Клинические исследования свидетельствуют о корреляции концентрации ингибина В с активностью сперматогенеза, что позволяет использовать его в качестве маркера локальных нарушений сперматогенеза (1,4).
2. Метод исследования повреждений ДНК сперматозоидов с применением красителя акридинового оранжевого (SCSA). Кроме индекса фрагментации ДНК метод позволяет определять процент сперматозоидов с незрелым ядром, обозначающийся как HDS. Не существует четкого референсного значения этого показателя: по данным разных авторов, нормальным считается значение HDS ниже 10% (5) либо ниже 15% (6).
Недостатком перечисленных методов является диагностика бесплодия у мужчин всего лишь по одному показателю, не применяя комплексный подход, что может неадекватно отразиться на постановке диагноза.
Прототипом предложенного способа данного изобретения является патент на изобретение «Способ диагностики мужского бесплодия» (2). В названном способе, как и в предложенном нами, оценивается состояние хроматина сперматозоидов до и после обработки гепарином, окрашенных бромистым этидием. Однако в этом способе не используется определение концентрации ингибина В и статистический метод Колмогорова-Смирнова с определением индекса подобия двух кривых. Таким образом, данный способ диагностики мужского бесплодия основан на оценке всего лишь одного лабораторного показателя, что можно отнести к недостаткам способа.
Сущность изобретения
Цель изобретения заключается в разработке способа диагностики бесплодия у мужчин с нормальными показателями спермограммы, основанного на выявлении нарушений сперматогенеза при углубленном лабораторном исследовании, включающего определение степени компактизации хроматина сперматозоидов и относительного содержания дефектных клеток в эякуляте, а также уровня ингибина В в сыворотке крови.
Способ осуществляют следующим образом: эякулят собирают методом мастурбации после 4-6 дневного полового воздержания, непосредственно в лаборатории, транспортировка материала из дома недопустима. Рекомендуется накануне исследования исключить воздействие токсических факторов (алкоголь, курение, наркотики), тяжелые физические нагрузки, гипертермические состояния (бытовые, производственные).
Забор крови проводят натощак, в утренние часы, методом венепункции в сухую чистую пробирку в количестве 5 мл.
Для определения степени компактизации хроматина сперматозоидов и уровня погибших, разрушенных клеток эякулят после разжижения помещают в две пробирки в количестве 100 мкл и добавляют 500 мкл трис-буфера. Затем пробирки центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин, после чего удаляют надосадочную жидкость. Далее осадок в обеих пробирках ресуспендируют в 250 мкл трис-буфера.
Затем в обе пробирки добавляют по 500 мкл детергента, содержащего тритон Х-100, и непрерывно встряхивают в течение 30 секунд. С целью насильственной деконденсации хроматина в одну из пробирок добавляют 50 мкл гепарина (5000 ед./мл) и инкубируют в течение 20 минут при комнатной температуре. После инкубации в обе пробирки вносят 1500 мкл цитратного буфера и 1 мкл этидия бромида. Через 5 минут проводят измерение флуоресценции ДНК сперматозоидов на проточном цитофлуориметре в красной области спектра (λ=620 нм), используя программу CELLQuest. Скорость сортировки составляет 300 клеток в секунду.
Степень компактизации хроматина сперматозоидов оценивают на основании сравнения гистограмм распределения клеток до и после насильственной деконденсации гепарином по уровню специфической флуоресценции, используя статистический метод Колмогорова-Смирнова с определением индекса подобия двух кривых n.
Относительное содержание дефектных клеток определяют по уровню неспецифической флуоресценции (М).
Определение концентрации ингибина В (IB) в сыворотке крови проводят согласно инструкциям фирм-производителей.
Для определения содержания ингибина В образцы пациентов и необходимое количество реагентов доводят до комнатной температуры и тщательно перемешивают перед проведением анализа. В лунки планшета с сорбированными анти-ингибин антителами вносят по 50 мкл стандартов, контролей, образцов пациентов. Затем в каждую лунку добавляют по 25 мкл разбавителя образцов А и по 25 мкл разбавителя образцов В и инкубируют в течение ночи (14-18 часов) при комнатной температуре. После окончания инкубации промывают лунки 3 раза деионизированной водой. Затем в каждую лунку добавляют по 50 мкл раствора биотинового коньюгата, содержащего биотинилированные анти-ингибин α-субъединица антитела, и инкубируют в течение 1,5 часов при комнатной температуре. После окончания инкубации промывают лунки промывочным буфером 6 раз и в каждую лунку добавляют по 50 мкл раствора стрептавидин-ферментного коньюгата, содержащего стрептавидиновые детектирующие антитела, меченые пероксидазой хрена. Инкубируют в течение 20 минут при комнатной температуре. Промывают лунки промывочным буфером 6 раз. По окончании инкубации процедуру отмывки повторяют, как описано выше. Добавляют по 100 мкл хромогенного раствора ТМБ в каждую лунку и инкубируют в течение 15-30 минут при комнатной температуре, после чего для остановки ферментной реакции добавляют по 100 мкл стоп-реагента. В течение 30 минут после добавления останавливающего раствора измеряют оптическую плотность при 450 нм. Измеренное поглощение прямо пропорционально концентрации присутствующего ингибина В.
Оптическую плотность образцов измеряют, используя иммуноферментный анализатор.
Для диагностики мужского бесплодия полученные значения показателей степени компактизации хроматина сперматозоидов (n) и относительного содержания погибших и разрушенных клеток (М), а также концентрацию ингибина В в сыворотке крови вводят в формулу, выведенную на основании математической обработки полученных данных методом дискриминантного анализа для расчета диагностического индекса (DI):
DI=n×0,037+М×(-0,014)+IB×0,005-2,402, где
n - степень компактизации хроматина сперматозоидов (усл. ед.);
М - относительное содержание дефектных клеток (%);
IB - концентрация ингибина В (пг/мл).
При DI менее 0 диагностируют нарушение сперматогенеза, определяющее бесплодие у мужчин (патология), а при DI более 0 делают заключение об отсутствии нарушений сперматогенеза (норма).
Предлагаемый способ дает вероятность правильной классификации (специфичность метода) - 93,3% для нормы, для патологии (информативность метода) - 81,4%. Эффективность метода 84,5%.
Пример 1. Пациент Лошаков проходил обследование по поводу бесплодного брака. При стандартном лабораторном исследовании эякулята основные показатели спермограммы (концентрация, подвижность, морфология) соответствовали значениям нормы. При углубленном исследовании показатель n составил - 29,3 усл. ед., что согласно нашему патенту (3) характеризует нарушение компактизации хроматина и незрелое состояние сперматозоидов (n<48,5), М - 82,4%, что превышает значение нормы и характеризует наличие в эякуляте большого количества дефектных клеток, концентрация ингибина В соответствовала физиологической норме - 281,6 пг/мл. По формуле определили значение диагностического индекса (DI): 29,3×0,037+82,4×(-0,014)+281,6×0,005-2,402=-1,06, что меньше нуля, а значит, у пациента имеются нарушения сперматогенеза, верифицирующие бесплодие. Проведено лечение, после которого получены следующие результаты: n - 43,1 усл. ед., М - 14,0%, IB - 290,0 пг/мл и рассчитанный по формуле DI=0,45, что больше нуля и указывает на отсутствие нарушений сперматогенеза и восстановление фертильности. В настоящее время супруга Лошакова беременна.
Пример 2. Пациент Саетов обратился в консультативное отделение по поводу бесплодного брака. При стандартном лабораторном исследовании эякулята основные показатели спермограммы (концентрация, подвижность, морфология) соответствовали значениям нормы. При углубленном исследовании показатель n составил - 55,44 усл. ед., что согласно нашему патенту (3) свидетельствует о зрелом состоянии сперматозоидов (n>48,5), М - 48,99%, что превышает допустимое для присутствия в эякуляте количество дефектных клеток, концентрация ингибина В соответствовала нижней границе физиологической нормы - 134,6 пг/мл. По формуле определили значение диагностического индекса (DI): 55,44×0,037+48,99×(-0,014)+134,6×0,005-2,402=-0,37, что меньше нуля, а значит, имеются нарушения сперматогенеза, верифицирующие бесплодие. После курса лечения получены следующие результаты: n - 54,0 усл. ед., М - 19,5%, IB - 210,0 пг/мл. Рассчитанный по формуле DI=0,37, что больше нуля и указывает на отсутствие нарушений сперматогенеза и восстановление фертильности. В настоящее время супруга Саетова беременна.
Пример 3. Пациент Софронов проходил обследование по поводу бесплодного брака. При стандартном лабораторном исследовании эякулята основные показатели спермограммы (концентрация, подвижность, морфология) соответствовали значениям нормы. При углубленном исследовании показатель n составил - 29,2 усл. ед., что согласно нашему патенту (3) характеризует нарушение компактизации хроматина и незрелое состояние сперматозоидов (n<48,5), М - 80,9%, что свидетельствует о присутствии в эякуляте дефектных клеток в количестве, большем, чем допустимая норма, концентрация ингибина В - 78,1 пг/мл (при норме 140-350 пг/мл). По формуле определили значение диагностического индекса (DI): 29,2×0,037+80,9×(-0,014)+78,1×0,005-2,402=-2,06, что меньше нуля, а значит, имеются нарушения сперматогенеза, верифицирующие бесплодие. Проведено лечение, после которого получены следующие результаты: n - 49,3 усл. ед., М - 62,1,5%, IB - 155,0 пг/мл и рассчитанный по формуле DI=-0,67, что меньше нуля и характеризует нарушения сперматогенеза. Назначен повторный курс лечения.
Таким образом, приведенные выше примеры наглядно демонстрируют, что только совокупность лабораторных показателей, характеризующих нарушение сперматогенеза, позволяет повысить точность диагностики бесплодия у мужчин с нормальными показателями спермограммы и своевременно решить вопрос о необходимости проведения терапевтической коррекции выявленных нарушений.
Источники информации
1. Долгов В.В. Лабораторная диагностика мужского бесплодия. / В.В.Долгов, С.А.Луговская, Н.Д.Фанченко, И.И.Миронова, Е.К.Назарова, Н.Г.Ракова, С.С.Раков, Т.О.Селиванов, A.M.Щелочков. // Москва, 2006.
2. Способ диагностики мужского бесплодия. Патент на изобретение №2118822. (Авторы: Филатов М.В., Воробьева О.А., Семенова Е.В., Леонтьева О.А.).
3. Способ определения зрелости сперматозоидов. Патент на изобретение №2262107. (Авторы: Чистякова Г.Н., Беломестнов С.Р., Тарасова М.Н.).
4. Bradley D. Anawalt, Richard A. Bebb, Alvin М. Matsumoto, Nigel P. Groome, Peter J. Illingworth, Alan S. Mcnelly and William J. Bremner. Semm Inhibin В Levels Reflect Sertoli Cell Function in Normal Men and Men with Testicular Dysfunction. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 1996. VoL81, №9. 3341-3345.
5. Bungum M., Humaidan P., Jepson K., Bungum L., Giwercman A. The predictive value of sperm chromatin structure assay (SCSA) parameters for the outcome of intrauterine insemination, IVF and ICSI. Human Reproduction Vol.19, №6, pp.1401-1408, 2004.
6. Schlegel P.N., Paduch D.A. Yet another test of sperm chromatin structure. Fertil Steril 2005; 84: 4: 854-859.
Claims (1)
- Способ диагностики мужского бесплодия на основании углубленного лабораторного исследования, отличающийся тем, что определяют степень компактизации хроматина сперматозоидов и относительное содержание дефектных клеток в эякуляте, а также уровень ингибина В в сыворотке крови, затем вычисляют диагностический индекс DI по формуле
DI=n·0,037+М·(-0,014)+IB·0,005-2,402,
где n - степень компактизации хроматина сперматозоидов (усл. ед.);
М - относительное содержание дефектных клеток (%);
IB - концентрация ингибина В (пг/мл),
и при значении DI меньше 0 диагностируют нарушение сперматогенеза, определяющее бесплодие у мужчин (патология), а при DI более 0 делают заключение об отсутствии патологии (норма).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008115047/15A RU2362167C1 (ru) | 2008-04-16 | 2008-04-16 | Способ диагностики мужского бесплодия |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008115047/15A RU2362167C1 (ru) | 2008-04-16 | 2008-04-16 | Способ диагностики мужского бесплодия |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2362167C1 true RU2362167C1 (ru) | 2009-07-20 |
Family
ID=41047274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008115047/15A RU2362167C1 (ru) | 2008-04-16 | 2008-04-16 | Способ диагностики мужского бесплодия |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2362167C1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2582914C2 (ru) * | 2014-03-06 | 2016-04-27 | Общество с ограниченной ответственностью Испытательный Лабораторный Центр "УНИВЕРСАЛ" | Способ диагностики аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии и диагностикум определения мужского бесплодия |
| RU2595838C1 (ru) * | 2015-04-09 | 2016-08-27 | Общество с ограниченной ответственностью Испытательный Лабораторный Центр "УНИВЕРСАЛ" | Способ определения аномалии упаковки хроматина сперматозоидов человека при мужской инфертильности с использованием биомедицинской тест-системы |
| RU2620542C1 (ru) * | 2016-05-04 | 2017-05-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) | Способ определения фертильности сперматозоидов у пациентов с идиопатическим бесплодием |
| RU2703455C1 (ru) * | 2019-04-12 | 2019-10-17 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ прогнозирования высокой степени фрагментации днк и невынашивания беременности в паре |
| RU2789239C1 (ru) * | 2022-11-24 | 2023-01-31 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики фертильности эякулята при идиопатическом бесплодии |
-
2008
- 2008-04-16 RU RU2008115047/15A patent/RU2362167C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RU 2118822 C1 (НИИ АГ им. Д.О.Отта РАМН), 10.09.1998. RU 2247371 С2 (НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН), 27.02.2005. RU 2052202 С1 (ИвНИИМД), 10.01.1996. AGARWAL A. et al. Role of sperm chromatin abnormalities and DNA damage in male infertility. Hum. Reprod. Update., 2003, Jul-Aug; 9(4): 331-45. KUMANOV P. et al. Inhibin В is a better marker of spermatogenesis than other hormones in the evaluation of male factor infertility. Fertil. SteriL, 2006, Aug; 86(2): 332-8. GIAGULLI V.A., CARBONE D., Hormonal control of inhibin В in men. J Endocrinol. Invest., 2006, Sep; 29(8): 706-13. * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2582914C2 (ru) * | 2014-03-06 | 2016-04-27 | Общество с ограниченной ответственностью Испытательный Лабораторный Центр "УНИВЕРСАЛ" | Способ диагностики аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии и диагностикум определения мужского бесплодия |
| RU2595838C1 (ru) * | 2015-04-09 | 2016-08-27 | Общество с ограниченной ответственностью Испытательный Лабораторный Центр "УНИВЕРСАЛ" | Способ определения аномалии упаковки хроматина сперматозоидов человека при мужской инфертильности с использованием биомедицинской тест-системы |
| RU2620542C1 (ru) * | 2016-05-04 | 2017-05-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) | Способ определения фертильности сперматозоидов у пациентов с идиопатическим бесплодием |
| RU2703455C1 (ru) * | 2019-04-12 | 2019-10-17 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ прогнозирования высокой степени фрагментации днк и невынашивания беременности в паре |
| RU2789239C1 (ru) * | 2022-11-24 | 2023-01-31 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики фертильности эякулята при идиопатическом бесплодии |
| RU2818459C1 (ru) * | 2023-06-20 | 2024-05-02 | Андрей Владимирович Петренко | Способ диагностики мужского бесплодия |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Feijó et al. | Diagnostic accuracy of sperm chromatin dispersion test to evaluate sperm deoxyribonucleic acid damage in men with unexplained infertility | |
| Esteves et al. | A translational medicine appraisal of specialized andrology testing in unexplained male infertility | |
| Vasan | Semen analysis and sperm function tests: How much to test? | |
| Sigman et al. | Semen analysis and sperm function assays: what do they mean? | |
| JP2002510045A (ja) | 細胞および体液における一般的診断要因を分析するためのフロー式細胞数計算器 | |
| PT2049906E (pt) | Ensaio e estojo para o prognóstico de uma implantação com sucesso na fertilização assistida | |
| Hwang et al. | Use of diagnostic testing to detect infertility | |
| Liffner et al. | Diagnostics of DNA fragmentation in human spermatozoa: Are sperm chromatin structure analysis and sperm chromatin dispersion tests (SCD‐HaloSpermG2®) comparable? | |
| Yuan et al. | Sperm DNA fragmentation valued by SCSA and its correlation with conventional sperm parameters in male partner of recurrent spontaneous abortion couple | |
| JP2019518225A (ja) | 早産を予測する方法及び組成物 | |
| RU2362167C1 (ru) | Способ диагностики мужского бесплодия | |
| JP6301310B2 (ja) | 精細胞中の細胞内感染因子の検出方法 | |
| Agarwal et al. | Interpretation of basic semen analysis and advanced semen testing | |
| US20210208154A1 (en) | Methods for diagnosing fertility of ejaculates for artificial insemination | |
| RU2430365C1 (ru) | Способ оценки микробиоценоза полости матки у женщин с полипами эндометрия в постменопаузальном периоде | |
| Moazzam et al. | From basic to contemporary semen analysis: limitations and variability. | |
| RU2697395C1 (ru) | Способ прогнозирования идиопатического бесплодия мужчин | |
| JP2007509331A (ja) | アルツハイマー病の診断のための迅速な試験 | |
| Zhang et al. | A diagnostic model to improve the predictability of natural pregnancy potential in patients with oligoasthenospermia | |
| Wakimoto et al. | Sperm immobilization test and quantitative sperm immobilization test using frozen‐thawed sperm preparation applied with computer‐aided sperm analysis | |
| Al-Darawsha et al. | Can the Prediction of Intrauterine Insemination Results by Used Aniline Blue Stain (ABS) and Sperm Chromatin Dispersion (SCD) Levels? | |
| Cui et al. | Application of real-time shear wave elastography in the assessment of male infertility | |
| Diallo et al. | Increased DNA fragmentation in patients with infertility in Dakar (Senegal) | |
| RU2804207C1 (ru) | Способ прогнозирования мужского бесплодия на основе анализа фрагментации днк сперматозоидов | |
| RU2807923C1 (ru) | Способ диагностики женской фертильности |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100417 |