RU2322450C2 - Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов - Google Patents

Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов Download PDF

Info

Publication number
RU2322450C2
RU2322450C2 RU2004134388/04A RU2004134388A RU2322450C2 RU 2322450 C2 RU2322450 C2 RU 2322450C2 RU 2004134388/04 A RU2004134388/04 A RU 2004134388/04A RU 2004134388 A RU2004134388 A RU 2004134388A RU 2322450 C2 RU2322450 C2 RU 2322450C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
azido
deoxythymidine
azt
phosphonates
water
Prior art date
Application number
RU2004134388/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2004134388A (ru
Inventor
Елена Анатольевна Широкова (RU)
Елена Анатольевна Широкова
Анастаси Львовна Хандажинска (RU)
Анастасия Львовна Хандажинская
Максим Владимирович Ясько (RU)
Максим Владимирович Ясько
Марина Константиновна Куханова (RU)
Марина Константиновна Куханова
Александр Валерьевич Шипицын (RU)
Александр Валерьевич Шипицын
Андрей Георгиевич Покровский (RU)
Андрей Георгиевич Покровский
Original Assignee
Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ" filed Critical Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ"
Priority to RU2004134388/04A priority Critical patent/RU2322450C2/ru
Priority to KR1020077013688A priority patent/KR101323698B1/ko
Priority to US11/720,250 priority patent/US7999099B2/en
Priority to PCT/RU2005/000249 priority patent/WO2006062434A1/ru
Priority to ES05763842.1T priority patent/ES2550136T3/es
Priority to EP05763842.1A priority patent/EP1829885B1/en
Priority to CN2005800467450A priority patent/CN101115765B/zh
Publication of RU2004134388A publication Critical patent/RU2004134388A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2322450C2 publication Critical patent/RU2322450C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новым 5'-фосфонатам АЗТ общей формулы (I), обладающим анти-ВИЧ активностью и применению 5'-фосфонатов АЗТ в качестве активного компонента для приготовления лекарственных средств, обладающих анти-ВИЧ активностью. В общей формуле (I):
Figure 00000001
при n=0-2,
R1=
Figure 00000002
(где Х=СН2, NH, О); R2-NH-C(O)- (где R2=Н, C1-С6алкил, С5-С7циклоалкил), HO(CH2)k- (где k=2-4); при n=0, R1=Cl3С; при n=1-6 R1=Cl-, Br-, I-, и при n=2-6: R3C(O)O- (где R3-C1-С6алкил), при n=2-6. 2 н.п. ф-лы, 2 табл.

Description

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно к новым производным нуклеозидов, а именно, к замещенным 5'-фосфонатам АЗТ. Эти соединения обладают противовирусным действием и могут быть применены для подавления репродукции вируса иммунодефицита человека.
В настоящее время в медицинской практике используется целый ряд соединений, обладающих противовирусной активностью в отношении ВИЧ. Среди них различают нуклеозидные и ненуклеозидные ингибиторы. Среди производных нуклеозидов наиболее часто применяются 3'-азидо-3'-дезокситимидин (АЗТ, Зидовудин®), 2',3'-дидезоксицитидин (ddC, Зальцитабин®), 2',3'-дидезоксиинозин (ddl, Диданозин®), 2',3'-дидезокси-2',3'-дидегидротимидин (d4T, Ставудин®) и 2',3'-дидезокси-3'-тиацитидин (ЗТС, Ламивудин®) [De Clercq, E., 2002. New development in anti-HIV chemotherapy. Biochim. Biophys. Acta, 1587, 258-275].
Механизм действия указанных соединений состоит в том, что после проникновения в инфицированные клетки они подвергаются трифосфорилированию и специфично блокируют синтез ДНК, катализируемый обратной транскриптазой ВИЧ. Высокая изменчивость ВИЧ приводит к быстрому возникновению резистентных штаммов вируса [Groschel, В., Cinatl, J.H., and CinatI J. Jr., 1997. Viral and cellular factors for resistance against antiretroviral agents. Intervirology, 40, 400-407; Antonelli, G, Turriziani, О., Verri, A., Narciso, P., Ferri, F., D'Offizi, G., and Dianzini, F., 1996. Long-term exposure to zidovudine affects in vitro and in vivo the efficiency of thymidine kinase. AIDS Res Hum Retrovir., 12, 223-228], и, следовательно, к необходимости смены препарата. К тому же из-за низкой эффективности внутриклеточных превращений используемые препараты требуют высоких доз применения, что вызывает появление выраженных токсических эффектов.
Следствиями токсичности АЗТ являются подавление деятельности клеток спинного мозга, нарушения функции печени и миопатия [Chariot, P., Drogou, I., De Lacroix-Szmania, I., Eliezer-Vanerot, M.C., Chazaud, В., Lombes, A., Schaeffer, A., and Zafrani, E.S., 1999. Zidovudine-induced mitochondrial disorder with massive liver steanosis, myopathy, lactic acidosis, and mitochondial DNA depletion. J. Hepatol. 30, 156-160; Kellam, P., Boucher, C.A., and Larder, B.A., 1992. Fifth mutations in HIV reverse transcriptase contributes to the development of high level resistance to zidovudine. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 1934-1938; Ren, J., Esnouf, R.M., Hopkins, A.L., Jones, E.Y., Kirby, I., Keeling, J., Ross, C.K., Larder, B.A., Stuart, D.I., and Stammers, D.K., 1998. 3'-Azido-3'-deoxythymidine drug resistance mutations in HIV-1 reverse transcriptase can induce long range conformational changes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 95, 9518-9523]. Быстрое выведение АЗТ из организма требует частого приема препарата. Кроме того, при длительном применении АЗТ достаточно быстро вырабатываются резистентные штаммы вируса и лечение теряет эффективность. Несмотря на все вышеперечисленные недостатки, АЗТ по-прежнему остается наиболее широко применяемым анти-ВИЧ препаратом.
Известен Н-фосфонат АЗТ (Никавир®), одобренный в России для терапии СПИД, менее токсичен, чем АЗТ [Intracellular metabolism and pharmacokinetics of 5'-hydrohenphosphonate of 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine, a prodrug of 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine. Antiviral Reserch 63 (2004), 107-113]. Действие Никавира основано на способности высвобождать АЗТ, который после внутриклеточного превращения в АЗТ-5'-трифосфат ингибирует репликацию ВИЧ. По данным фармакокинетических исследований клинические преимущества Никавира объясняются более медленным и плавным нарастанием концентрации АЗТ в крови, чем при приеме собственно АЗТ; при этом Смакс АЗТ из Никавира <Смакс АЗТ из Зидовудина, a T1/2 АЗТ из Никавира >T1/2 АЗТ из Зидовудина [Y.Skoblov et al./Antiviral Research 63 (2004) 107-113]. Тем не менее, токсичность Никавира остается достаточно высокой. Другим недостатком является возникновение резистентности к Никавиру.
Данным изобретением решена задача создания низкотоксичных производных АЗТ, обладающих способностью проникать внутрь клетки и постепенно высвобождать активный нуклеозид (АЗТ). Это позволит поддерживать внутриклеточную концентрацию препарата, достаточную для проявления терапевтического действия в течение длительного времени, и, таким образом, снизить разовую дозу препарата и/или частоту приема и уменьшить побочные эффекты.
Задача решена созданием соединений 5'-фосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин общей формулы:
Figure 00000005
при n=0-2,
Figure 00000006
(где Х=СН2, NH); R2-NH-C(O)- (где R2=C2-С6алкил, С5-С7циклоалкил), HO(CH2)k- (где k=2-4),
при n=0, R1=Cl3С-,
R1 означает Cl-, Br-, n=1-6 и R1 означает R2C(O)O- (где R2-C1-С6алкил), при n=2-6.
Новые соединения подавляют репродукцию вируса иммунодефицита человека 1-го типа в культуре перевиваемых лимфоцитов МТ-4, обеспечивают защиту клеток от цитопатогенного действия вируса и не проявляют токсичности в отношении хозяйских клеток вплоть до крайне высоких концентраций (табл.1). Из полученных экспериментальных данных видно, что исследуемые соединения, не оказывая токсического действия на клетки в эффективных концентрациях (50% токсические дозы на 2-4 порядка превышают 50% ингибирующие дозы) в высокой степени подавляют репродукцию вируса иммунодефицита 1 типа в культуре клеток МТ-4. Терапевтические индексы исследуемых соединений (IS), определяемые как отношение токсической дозы препарата к его эффективной дозе, сравнимы с таковыми для Н-фосфоната АЗТ. Вирусологические тесты проведены в соответствии с описанными ранее протоколами.
Показано, что заявляемые фосфонаты АЗТ в организме собак медленно высвобождают АЗТ, таким образом, представляя собой латентные формы АЗТ (Пример 10, табл.2). Исследования показывают, что для всех заявляемых фосфонатов единственным продуктом метаболизма, детектируемым в крови животных, является АЗТ. Фармакокинетические параметры, приведенные в табл.2, были определены по генерированному АЗТ и зависели от структуры фосфоната.
Целевые фосфонаты получали по следующей схеме в одну или несколько стадий:
Figure 00000007
где Х=Cl или ОН
Z=ClCH2-, С2Н5O2С-, СН3ОСН2-,
Cl3С-, CF3C(O)NH-(CH2)2- и др.		 Ia: n=1, R=Cl-
Ib: n=0, R=(CH3)3N+-(CH2)2-NHC(O)-
Ic: n=0, R=(CH3)2N-(CH2)2-NHC(O)-
Id: n=1, R=СН3О-
Ie: n=0, R=C6H10-NHC(O)-
If: n=0, R=NH2-(CH2)2-NHC(O)-
Ig: n=0, R=HO-(CH2)2-NHC(O)-
Ih: n=0, R=CH3-(CH2)5-NHC(O)-
Ii: n=0, R=Cl3С-
и др.
Ниже приведены конкретные примеры, раскрывающие сущность изобретения.
Пример 1.
5'-Хлорметилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (Ia).
К раствору 3'-азидо-3'-дезокситимидина (0,8 г, 3 ммоль) в триэтилфосфате (10 мл), охлажденному до 0°С, добавляли хлорметилфосфонилдихлорид (0,92 мл, 9 ммоль). Смесь перемешивали 18 часов при 18°С, разбавляли охлажденной смесью пиридина (10 мл) и воды (10 мл), перемешивали 30 минут и выливали в воду (700 мл). Раствор наносили на колонку с DEAE целлюлозой, элюировали в линейном градиенте NH4HCO3 (0→0,15 М). Целевые фракции упаривали, остаток разбавляли водой (3 мл) и дополнительно очищали на колонке с LiChroprep RP-18, элюируя водой. Целевую фракцию лиофилизовали, получали 1 г (84%) фосфоната (Ia). 1H ЯМР (D2O): 7,72 kb (1H, J=0,5 Гц, H-6), 6,27 т (1H, J=6 Гц, Н-1'), 4,55 м (1Н, Н-3'), 4,21 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,58 д (2Н, J=8,5 Гц, СН2-Р), 2,54 м (2Н, Н-2'), 1,95 д (3Н, J=0,5 Гц, 5-Ме). 31Р ЯМР (D2O): 16,03 с.
Пример 2.
5'-(Диметиламиноэтиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (Ib)
К раствору 5'-этоксикарбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (300 мг, 0,75 ммоль) в смеси диоксан-вода (1:1, 5 мл), добавляли N,N-диметиламиноэтиламин (300 мг, 3,4 ммоль). Смесь перемешивали 18 часов при 37°С, упаривали, переупаривали с водой (10 мл), остаток наносили на колонку с LiChroprep RP-8, элюировали в линейном градиенте метанола (0→30%) в 0,01 М NH4НСО3. Фракции, содержащие продукт, упаривали, и повторно очищали на колонке с LiChroprep RP-8 в тех же условиях. Целевую фракцию лиофилизовали, получали 230 мг (68%) 5'-(диметиламиноэтиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (1b). 1Н-ЯМР: 7,66 с (1H, H-6); 6,22 с (1H, J=6,5 Гц, Н-1'), 4,47 м (1H, H-3'), 4,21-4,16 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,64 т (2Н, J=5,9 Гц,
Figure 00000008
3,31 т (2Н,
Figure 00000009
2,90 с (6Н, NMe2), 2,47 т (J=6,4 Гц, 2Н, Н-2'), 1,82 с (3Н, 5-Ме). 31Р-ЯМР (D2O): -1,97 с.
5'-(Триметиламмониоэтиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (Ic).
К суспензии 5'-(диметиламиноэтиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина ((1b), 90 мг, 0,2 ммоль) в триметилфосфате (1 мл) прибавили трибутиламин (0,1 мл) и перемешивали 3 суток при 37°С. Затем упаривали, переупаривали с водой (3×10 мл), остаток наносили на колонку с LiChroprep RP-8, элюировали в линейном градиенте метанола (0→15%) в 0,01 М NN4HCO3. Фракции, содержащие продукт, упаривали, и повторно очищали на колонке с LiChroprep RP-8 в тех же условиях. Целевую фракцию лиофилизовали, получали 55 мг (61%) фосфоната (Ic). 1Н-ЯМР (D2О): 7,67 с (1H, H-6); 6,24 т (1H, J=6,5 Гц, Н-1'), 4,45 м (1H, H-3'), 4,20-4,11 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,74 т (2Н, J=6,7 Гц,
Figure 00000008
3,51 т (2Н,
Figure 00000010
3,17 с (9Н, NMe3), 2,48 м (2Н, Н-2'), 1,82 с (3Н, 5-Ме). 31Р-ЯМР (D2O): -2,30 с.
Пример 3.
5'-Метоксиметилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (Id)
Раствор пиридиниевой соли метоксиметилфосфоновой кислоты (1,2 ммоль) в пиридине (3 мл) прибавляли к раствору 3'-азидо-3'-дезокситимидина (267 мг, 1 ммоль) в пиридине (2 мл), прибавляли дициклогексилкарбодиимид (520 мг, 2,5 ммоль), реакционную массу перемешивали при комнатной температуре 10 часов и разбавляли водой (5 мл). После 30 минут дополнительного перемешивания отделяли осадок, раствор упаривали, остаток растворяли в воде (100 мл). Раствор наносили на колонку с DEAE целлюлозой в НСО3 --форме, элюировали в линейном градиенте NH4HCO3 (0→0,15 М). Целевые фракции упаривали и переупаривали с водой (3 раза по 5 мл), остаток разбавляли водой (3 мл) и наносили на колонку с LiChroprep RP-18, элюировали водой. Целевую фракцию лиофилизовали, получали 238 мг (63%) фосфоната (Ic). 1Н ЯМР (D2O): 7,66 кв (1H, J=0,5 Гц, H-6), 6,21 т (1H, J=6 Гц, Н-1'), 4,48 м (1H, H-3'), 4,15 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,68 д (2Н, J=8 Гц, СН2-Р), 3,44 д (3Н, J=0,5 Гц, ОМе), 2,52 т (2Н, J=6 Гц, Н-2'), 1,94 д (3Н, J=0,5 Гц, 5-Ме). 31Р ЯМР (D2O): 18,51 с.
Пример 4.
5'-(Циклогексиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (Ie).
Раствор 5'-этоксикарбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (80 мг, 0,2 ммоль) в циклогексиламине (1 мл) перемешивали 18 ч при комнатной температуре, а затем сконцентрировали в вакууме. Остаток растворили в воде и хроматографировали на DEAE-Toyopearl, элюировали в линейном градиенте NH4HCO3 (0→0,1 М). Получили 82 мг (87%) соединения Ie. 1Н ЯМР (D2O): 7,52 с (1H, H-6), 6,09 т (1H, J=6,5 Гц, Н-1'), 4,32 м (1H, H-3'), 3,98-4,10 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,51 м (1H, СН (ц-гексил)), 2,34 м (2Н, Н-2'), 1,75 с (3Н, 5-Ме), 1,41-1,61 м+0,95-1,16 м (10Н, 5СН2 (ц-гексил)). 31Р ЯМР (D2O): -1,34 с.
Пример 5.
5'-(Аминоэтиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (If).
К раствору 5'-этоксикарбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (80 мг, 0,2 ммоль) в этаноле (1 мл) прибавляли этилендиамин (1 мл). Через 18 ч при 37°С растворители упаривали в вакууме. Остаток растворили в воде и хроматографировали на DEAE-Toyopearl (в ОН--форме), элюировали в линейном градиенте NH4HCO3 (0→0,1 М). Получили 71 мг (85%) соединения If. 1Н ЯМР (D2O): 7,60 с (1Н, Н-6), 6,13 дд (1H, J=6,5 и 6,9 Гц, Н-1'), 4,41 м (1Н, Н-3'), 4,11 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,52 т (2Н, J=5,9 Гц,
Figure 00000011
3,12 т (2Н, J=5,9 Гц,
Figure 00000012
2,42 т (2Н, J=6,2 Гц, Н-2'), 1,82 с (3Н, 5-Ме). 31P ЯМР (D2O): -1,90 с.
Пример 6
5'-(Гидроксиэтиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (Ig).
К раствору 5'-этоксикарбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (80 мг, 0,2 ммоль) в этаноле (1 мл) прибавляли аминоэтанол (1 мл). Через 18 ч при 37°С растворители упаривали в вакууме. Остаток растворили в воде и хроматографировали на DEAE-Toyopearl, элюировали в линейном градиенте NH4НСО3 (0→0,1 М). Получили 78 мг (90%) соединения Ig. 1Н ЯМР (D2O): 7,57 с (1Н, Н-6), 6,10 дд (1Н, J=6,5 и 6,9 Гц, Н-1'), 4,36 м (1Н, Н-3'), 4,04 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,54 дд (2Н, J=5,3 и 5,6 Гц,
Figure 00000013
3,28 дд (2Н, J=5,3 и 5,6 Гц,
Figure 00000014
2,36 т (2Н, J=6,2 Гц, Н-2'), 1,77 с (3Н, 5-Ме). 31Р ЯМР (D2O): -1,41 с.
Пример 7
5'-(Гексиламино)карбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (lh).
К раствору 5'-этоксикарбонилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (80 мг, 0,2 ммоль) в этаноле (2 мл) прибавляли н-гексиламин (1 мл). Через 18 ч при 37°С растворители упаривали, остаток растворили в воде и хроматографировали на DEAE-Toyopearl, элюировали в линейном градиенте NH4НСО3 (0→0,15 М). Получили 78 мг (82%) соединения Ih. 1Н ЯМР (D2О): 7,68 с (1Н, Н-6), 6,23 т (1Н, J=6,5 Гц, Н-1'), 4,46 м (1Н, Н-3'), 4,17 м (3Н, Н-4' и Н-5'), 3,22 дд (1H, J=6,5 и 6,9 Гц, CH2N (гексил)), 2,47 м (2Н, Н-2'), 1,91 с (3Н, 5-Ме), 1,48 м+1,22 м (8Н, 4СН2 (гексил)), 0,82 дд (3Н, J=5,9 и 6,9 Гц, СН3 (гексил)). 31Р ЯМР (D2O): -1,31 с.
Пример 8
5'-Трихлорметилфосфонил-3'-азидо-3'-дезокситимидин (Ii)
Раствор пиридиниевой соли трихлорметилфосфоновой кислоты (1,2 ммоль) в пиридине (3 мл) прибавляли к раствору 3'-азидо-3'-дезокситимидина (267 мг, 1 ммоль) в пиридине (2 мл), прибавляли при перемешивании дициклогексилкарбодиимид (520 мг, 2,5 ммоль), реакционную массу перемешивали при комнатной температуре 10 часов и разбавляли водой (5 мл). После 30 минут дополнительного перемешивания отделяли осадок. Раствор наносили на колонку с DEAE целлюлозой в НСО3 --форме, элюировали в линейном градиенте NH4НСО3 (0→0,2 М). Целевые фракции упаривали и переупаривали с водой, остаток разбавляли водой (3 мл) и наносили на колонку с LiChroprep RP-8, элюировали водой. Целевую фракцию лиофилизовали, получали 252 мг (56%) фосфоната (Ii). 1Н ЯМР (D2O): 7,54 с (1H, Н-6), 6,09 т (1H, J=6,7 Гц, Н-1'), 4,36 м (1H, Н-3'), 4,26 м (2Н, Н-5'), 4,03 м (1H, Н-4'), 2,34 м (2Н, Н-2'), 1,74 с (3Н, 5-Me).31P ЯМР (D2O): 5,51 с.
Пример 9
Исследование ингибирования репродукции ВИЧ включает культивирование первично инфицированных лимфоидных клеток линии МТ-4 в присутствии исследуемых соединений, конечные концентрации которых в культуральной среде составляют 0,001-100 мкг/мл, на протяжении одного пассажа - в течение 4 суток.
Ингибирование репродукции ВИЧ в культуре чувствительных клеток определяют по снижению накопления вирусспецифического белка р24 (по данным иммуноферментного анализа), а также по увеличению жизнеспособности клеток в присутствии препарата по сравнению с контролем, определяемому на 4-е сутки культивирования при окрашивании бромидом 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ).
Оценка цитотоксичности соединений.
Цитотоксичность препарата оценивают путем добавления его разведении в бессывороточной среде RPMI-1640 к клеточной суспензии МТ-4, помещенной в лунки 96-луночного планшета ("Cel-Cult", England), до конечных концентраций 0,001-100 мкг/мл (по три лунки на каждую дозу) с последующим культивированием при 37°С в течение 4 суток. Посевная концентрация составляет 0,5×106 клеточных частиц в миллилитре. Контролем служат клетки без добавления препарата, вместо которого вносят такое же количество бессывороточной среды. Жизнеспособность клеток подсчитывают на 4 сутки культивирования, пользуясь формазановым методом (прижизненным окрашиванием клеток МТТ). Токсичность различных доз препарата определяют по жизнеспособности клеток относительно контроля, по полученным результатам строят дозозависимую кривую и определяют концентрацию, на 50% снижающую жизнеспособность клеток (CD50). Исследуемые соединения не оказывают токсического действия на клетки МТ-4 в эффективных концентрациях. Следует также отметить, что 50% токсичные дозы на 2-4 порядков превышают эффективные в отношении ВИЧ-1 дозы (таблица 1).
Влияние исследуемых соединений на репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 исследовано по известной методике.
Терапевтический индекс, или индекс селективности (IS) считают как отношение 50%-ной токсической концентрации соединения к его 50%-ной эффективной дозе (результаты представлены в таблице 1). На основании этих количественных показателей ингибирования можно судить об эффективности противовирусного действия заявляемых соединений, заключающейся в высокой степени подавления репликации ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4, сравнимой с эффективностью Никавира.
Пример 10.
Собаке весом 12 кг вводили 250 мг исследуемого вещества орально (в смеси с творогом). Через определенные промежутки времени отбирали пробы крови (1 мл) из бедренной вены. Пробы центрифугировали (10 минут, 2000 об/мин), супернатант отделяли. Из супернатанта отбирали аликвоты (0,25 мл), добавляли оксетан (0,25 мкг, как внутренний стандарт) и метанол (0,75 мл). Полученную смесь центрифугировали 3 минуты при 5000 об/мин. Супернатант отделяли и упаривали в токе воздуха при 40°С, к остатку добавляли воду (1 мл). Аликвоты (20 мкл) анализировали методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе Gynkotec, Германия; аналитическая колонка Ultrasphere ODC "Beckman", USA. Элюент: 6% ацетонитрил в 0,1% Н3PO4 (рН 2,1) в присутствии 0,15% три-этиламина. Детекция при λmax 265 нм, температура 30°С. Фармакокинетические параметры, полученные в результате анализа данных, приведены в таблице 2.
Таблица 1
Противовирусная активность фосфонатов АЗТ против ВИЧ-1 ГКВ-4046
Соединение I CD50, μМ ID50, μМ IS
n=1, R=Cl- 300 0,05-0,1 >3000
n=1, R=I- >500 1-5 >100
n=1, R=HO- >500 0,08-0,3 >1650
n=1, R=СН3О- >500 1-5 >100
n=0, R=NH2C(O)- >300 0,05-0,1 >3000
n=0, R=(CH3)3N+-(CH2)2-NHC(O)- >350 0,06-0,15 >2300
n=0, R=(CH3)2N-(CH2)2-NHC(O)- >350 0,9-2,5 >140
n=0, R=C6H10-NHC(O)- >500 0,35-1,2 >400
n=0, R=NH2-(CH2)2-NHC(O)- >350 0,3-0,7 >500
n=0, R=СН3-(СН2)5-NHC(O)- >500 0,15-0,3 >1650
n=0, R=Cl3С- >300 0,7-2,0 >150
Никавир 260 0,13 2015
Таблица 2
Фармакокинетические параметры азидотимидина после введения собаке внутрь 250 мг субстанций АЗТ, Никавира и фосфоната I (R=NH2C(O)-) в эквиваленте 250 мг АЗТ
Соединение Т1/2, часы AUC, мг. ч/литр MRT, часы CL, литр/час Тмакс, часы Cмакс, мг/литр
n=0, R=NH2C(O)- 9,6 9,24 13,9 27,0 5,0 0,74
Никавир 7,2 16,6 10,4 15,0 4,0 1,89
АЗТ 5,2 58,8 7,5 4,2 2,5 9,77
Таким образом, показано, что заявленные соединения обладают низкой токсичностью, способны эффективно ингибировать репродукцию вируса иммунодефицита человека 1 типа в культуре клеток МТ-4 и генерировать АЗТ в организме млекопитающих, обеспечивая плавное нарастание его концентрации в крови.

Claims (2)

1. 5'-Фосфонаты АЗТ, имеющие общую формулу
Figure 00000015
при n=0-2,
R1=
Figure 00000016
(где Х=СН2, NH); R2-NH-C(O)- (где R2-C2-С6алкил, С5-С7циклоалкил), HO(CH2)k- (где k=2-4);
при n=0,
R1-Cl3С-
R1 означает Cl-, Br-, n=1-6 и R1 означает R3C(О)О- (где R3-C1-С6алкил), при n=2-6.
2. Применение 5'-фосфонатов АЗТ, общей формулы
Figure 00000015
где n=0-2,
R1=
Figure 00000016
(где Х=СН2, NH, О); R2-NH-C(O)- (где R2=Н, C1-С6алкил, С5-С7циклоалкил), HO(CH2)k- (где k=2-4);
при n=0, R1=Cl3С;
R1=Cl-, Br-, I-, и при n=1-6 и R3C(О)О- (где R3-C1-С6алкил), при n=2-6, обладающих анти-ВИЧ активностью, в качестве активного компонента для приготовления лекарственных средств.
RU2004134388/04A 2004-11-25 2004-11-25 Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов RU2322450C2 (ru)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004134388/04A RU2322450C2 (ru) 2004-11-25 2004-11-25 Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов
KR1020077013688A KR101323698B1 (ko) 2004-11-25 2005-05-06 Ａｚｔ의 변형된 5'-포스포네이트 - 잠재적 항바이러스제
US11/720,250 US7999099B2 (en) 2004-11-25 2005-05-06 Modified 5′-phosphonate azidothymidine—potential anti-viral preparations
PCT/RU2005/000249 WO2006062434A1 (en) 2004-11-25 2005-05-06 Modified 5'- phosphonate azidothymidine-potential anti-viral preparations
ES05763842.1T ES2550136T3 (es) 2004-11-25 2005-05-06 Preparaciones anti-víricas potenciales de 5'-fosfanato azidotimidina modificado
EP05763842.1A EP1829885B1 (en) 2004-11-25 2005-05-06 Modified 5'- phosphonate azidothymidine-potential anti-viral preparations
CN2005800467450A CN101115765B (zh) 2004-11-25 2005-05-06 修饰的叠氮胸苷的5’-膦酸酯—潜在的抗病毒制剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004134388/04A RU2322450C2 (ru) 2004-11-25 2004-11-25 Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2004134388A RU2004134388A (ru) 2006-05-20
RU2322450C2 true RU2322450C2 (ru) 2008-04-20

Family

ID=36578174

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004134388/04A RU2322450C2 (ru) 2004-11-25 2004-11-25 Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов

Country Status (7)

Country Link
US (1) US7999099B2 (ru)
EP (1) EP1829885B1 (ru)
KR (1) KR101323698B1 (ru)
CN (1) CN101115765B (ru)
ES (1) ES2550136T3 (ru)
RU (1) RU2322450C2 (ru)
WO (1) WO2006062434A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013055252A1 (ru) 2011-10-14 2013-04-18 Закрытое Акционерное Общество " Производственно-Коммерческая Ассоциация Азт" Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4824850A (en) * 1982-05-18 1989-04-25 University Of Florida Brain-specific drug delivery
US4968788A (en) * 1986-04-04 1990-11-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Biologically reversible phosphate and phosphonate protective gruops
SU1548182A1 (ru) * 1987-12-29 1990-03-07 Институт молекулярной биологии АН СССР 5 @ -Фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, вл ющиес специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ
US5002935A (en) * 1987-12-30 1991-03-26 University Of Florida Improvements in redox systems for brain-targeted drug delivery
WO1991019727A1 (en) * 1990-06-19 1991-12-26 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research 5'-hydrogenphosphonates and 5'-methylphosphonates of sugar modified nucleosides, compositions and uses thereof
US5177064A (en) * 1990-07-13 1993-01-05 University Of Florida Targeted drug delivery via phosphonate derivatives
US7285658B2 (en) * 2002-02-28 2007-10-23 Biota, Inc. Nucleotide mimics and their prodrugs

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
r. *
Н.Б.ДЯТКИНА И ДР. Синтез 5'-фторалкилфосфонатов нуклеозидов-соединений с потенциальными противовирусными свойствами. - Биоорганическая химия. - М., 1992, т.18, №1, с.100-105. В.М.ОРЛОВ И ДР. Изучение плазменной десорбции масс-спектрометрии производных нуклеозидов и нуклеотидов. - Молекулярная биология. - М., 1994, т.28, №3, с.708-13. О.А.МАМАЕВА И ДР. Изучение анти-HIV активности 5'-фосфонатов активности азидотимидина и фтортимидина. - Молекулярная биология. - М., 1994, т.28, №1, с.137-142. М.К.КУХАНОВА И ДР. Гидролиз 5'-фосфонатов и фосфатов нуклеозидов фосфатазами различного происхождения и сыворотками крови человека и теленка. - Молекулярная биология. - М., 1992, т.26, №5, с.1148-59. А.КРАЕВСКИЙ И ДР. Новые 5'-фосфонаты, модифицированные по сахарному остатку нуклеозидов как ингибиторы продукции ВИЧ. - Молекулярная биология. - М., 1992, т.28, №3, с.624-633. Н.В.ТАРУСОВА И ДР. Ингибирование ВИЧ репродукции в клеточных культурах 5'-фосфонатами 3'-азидо-2',3'-дидеоксинуклеозидов. - Моле *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013055252A1 (ru) 2011-10-14 2013-04-18 Закрытое Акционерное Общество " Производственно-Коммерческая Ассоциация Азт" Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1

Also Published As

Publication number Publication date
US7999099B2 (en) 2011-08-16
KR20070116580A (ko) 2007-12-10
CN101115765A (zh) 2008-01-30
CN101115765B (zh) 2012-10-10
ES2550136T3 (es) 2015-11-04
EP1829885B1 (en) 2015-07-15
EP1829885A4 (en) 2013-07-10
WO2006062434A1 (en) 2006-06-15
WO2006062434A8 (fr) 2007-11-01
US20090111979A1 (en) 2009-04-30
EP1829885A1 (en) 2007-09-05
KR101323698B1 (ko) 2013-10-30
RU2004134388A (ru) 2006-05-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3523314A1 (de) Benzimidazolhaltige cyclische dinukleotide, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung zur aktivierung von stimulator von interferongenen (sting)-abhängigen signalwegen
US4880782A (en) Method of treating viral infections in humans and compositions therefor
US5141943A (en) 5-benzyl barbiturate derivatives
EP0642528A1 (fr) Composes biologiquement actifs de type phosphotriesters.
ZA200506630B (en) Anti-viral nucleoside analogs and methods for treating viral infections, especially HIV infections
WO1991000867A1 (en) 5&#39;-diphosphohexose nucleoside pharmaceutical compositions
Busso et al. Nucleotide dimers suppress HIV expression in vitro
McGuigan et al. Synthesis of some novel dialkyl phosphate derivatives of 3′-modified nucleosides as potential anti-AIDS drugs
US5215971A (en) Antiviral pharmaceutical composition comprising 5-substituted pyrimidine nucleosides
McGuigan et al. Kinase bypass: a new strategy for anti-HIV drug design
JP2941942B2 (ja) ３’―アジド―２’，３’―ジデオキシ―５―メチルシチジン抗ウィルス性組成物
EA011948B1 (ru) Фосфонатзамещенные пиримидиновые соединения (варианты), способ их получения (варианты), фармацевтическая композиция на их основе и способ лечения вирусной инфекции
EP0626970A1 (en) Dihydropyrimidine nucleosides with antiviral properties
RU2322450C2 (ru) Модифицированные 5&#39;-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов
Siddiqui et al. Chemistry and anti-HIV properties of 2'-fluoro-2', 3'-dideoxyarabinofuranosylpyrimidines
JPH10502655A (ja) ジヌクレオシド−５’，５’−ピロリン酸
McGuigan et al. Phosphate derivatives of AZT display enhanced selectivity of action against HIV1 by comparison to the parent nucleoside
RU2373218C2 (ru) 5&#39;-фосфорсодержащие производные 2&#39;,3&#39;-дидезокси-3&#39;-тиацитидина новые противовирусные агенты
US5077279A (en) 3&#39;-azido-2&#39;,3&#39;-dideoxy-5-methylcytidine anti-viral composition
RU2430103C1 (ru) Уретановые производные азт - потенциальные противовирусные препараты
RU2187509C1 (ru) Производные 5&#39;-h-фосфоната 3&#39;-азидо-3&#39;-дезокситимидина и фармацевтические композиции на их основе
RU2430104C1 (ru) Новые депо-формы зидовудина и ламивудина на основе производных фосфоновых кислот
RU2243972C1 (ru) Фосфорамидаты нуклеозидных аналогов - ингибиторы репродукции вируса иммунодефицита человека
WO1990003978A1 (en) 5-halogeno-3&#39;-fluoro-2&#39;,3&#39;-dideoxyuridine compounds and their therapeutic application
Schott et al. Synthesis, and Some Properties of, Amphiphilic Dinucleoside Phosphate Derivatives of 3′-azido-2′, 3′-dideoxythymidine (AZT)

Legal Events

Date Code Title Description
FA92 Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted)

Effective date: 20060823

FZ9A Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal)

Effective date: 20061004

FA94 Acknowledgement of application withdrawn (non-payment of fees)

Effective date: 20071009

PD4A Correction of name of patent owner
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20180426