RU2270808C2 - Biologically active composition for treatment of surface water, soil and ground from petroleum pollution - Google Patents
Biologically active composition for treatment of surface water, soil and ground from petroleum pollution Download PDFInfo
- Publication number
- RU2270808C2 RU2270808C2 RU2003116075/13A RU2003116075A RU2270808C2 RU 2270808 C2 RU2270808 C2 RU 2270808C2 RU 2003116075/13 A RU2003116075/13 A RU 2003116075/13A RU 2003116075 A RU2003116075 A RU 2003116075A RU 2270808 C2 RU2270808 C2 RU 2270808C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- petroleum
- soil
- vsb
- biologically active
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к охране окружающей среды, в частности к рекультивации и восстановлению почв и грунтов, очистке поверхностных вод, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, и может быть использовано в нефтехимической, нефтеперерабатывающей, микробиологической, пищевой, фармацевтической промышленностях с целью очистки почв, грунтов, сточных вод, содержащих промежуточные продукты окисления, различных поверхностей и емкостей. В настоящее время в биотехнологии широко используются микроорганизмы различных таксономических групп, окисляющих широкий спектр углеводородов.The invention relates to the protection of the environment, in particular to the restoration and restoration of soils and soils, the purification of surface waters contaminated with oil and oil products, and can be used in the petrochemical, oil refining, microbiological, food, pharmaceutical industries for the purification of soil, soil, wastewater containing intermediate oxidation products, various surfaces and containers. Currently, microorganisms of various taxonomic groups that oxidize a wide range of hydrocarbons are widely used in biotechnology.
Известен способ очистки почв и водоемов от нефтяных загрязнений, заключающийся в обработке загрязненной поверхности водной суспензией бактериальной культуры природного штамма Pseudomonas putida-36 в смеси с минеральным удобрением - нитроаммофоской. Способ обеспечивает высокое качество очистки - до 90% по истечении 2 месяцев после обработки, но не эффективен при температурах 6-13°С (А.С. №1428809, БИ №37 1988, Е 02 В 15/04).A known method of cleaning soils and ponds from oil pollution, which consists in treating the contaminated surface with an aqueous suspension of the bacterial culture of the natural strain Pseudomonas putida-36 in a mixture with mineral fertilizer - nitroammophos. The method provides high quality cleaning - up to 90% after 2 months after processing, but is not effective at temperatures of 6-13 ° C (A.S. No. 1428809, BI No. 37 1988, E 02 B 15/04).
Известен биопрепарат для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов, включающий аэробные нефтеокисляющие бактерии: Mycobacterium flavescens ВКПМ В-6000, Mycobacterium sp. ИЖ-4б, Rhodococcus sp. 56Д и Acinetobacter sp. HB-1 в концентрации 1,2-5,0×107 кл/мл препарата, отличающийся тем, что он дополнительно содержит нефть, сахарозу и полиэтиленгликоль при следующем соотношении, мас.%: нефть - 0,5-1, сахароза - 1-5, полиэтиленгликоль - 1-5, остальное - вода (патент RU №2191752, БИ №30, 2002, С 02 F 3/34). Недостатком этого препарата является использование трех неидентифицированных культур, дорогого углеводного источника - сахарозы, отсутствие данных по степени очистки.Known biological product for cleaning water and soil from oil and oil products, including aerobic oil-oxidizing bacteria: Mycobacterium flavescens VKPM B-6000, Mycobacterium sp. IL-4b, Rhodococcus sp. 56D and Acinetobacter sp. HB-1 at a concentration of 1.2-5.0 × 10 7 cells / ml of the drug, characterized in that it additionally contains oil, sucrose and polyethylene glycol in the following ratio, wt.%: Oil - 0.5-1, sucrose - 1-5, polyethylene glycol - 1-5, the rest is water (patent RU No. 2191752, BI No. 30, 2002, C 02 F 3/34). The disadvantage of this drug is the use of three unidentified cultures, an expensive carbohydrate source - sucrose, lack of data on the degree of purification.
Известен способ очистки почвы и водоемов от нефтяных загрязнений, включающий обработку поверхности смесью микроорганизмов и питательных веществ, отличающийся тем, что в качестве смеси микроорганизмов и питательных веществ используют сухой активный ил целлюлозно-бумажных предприятий (патент RU №2198748, БИ №5, 20.02.2003, 7 B 09 С 1/10, С 02 F 3/34, С 12 N 1/20). Недостатком способа является нестабильность активного ила очистных сооружений различных предприятий.A known method of cleaning the soil and water from oil pollution, including surface treatment with a mixture of microorganisms and nutrients, characterized in that as a mixture of microorganisms and nutrients using dry activated sludge pulp and paper enterprises (patent RU No. 2198748, BI No. 5, 20.02. 2003, 7 B 09 C 1/10, C 02 F 3/34, C 12 N 1/20). The disadvantage of this method is the instability of activated sludge treatment facilities of various enterprises.
Также известен способ очистки почвы от загрязнения нефтью и нефтепродуктами, заключающийся в том, что в загрязненные участки вводят торф, который предварительно активируют введением минеральных добавок и последующей инкубацией в мезофильном режиме в течение 3-7 суток для увеличения в нем численности углеводородокисляющих микроорганизмов (патент RU №2137559, С1, 20.09.99).Also known is a method of cleaning the soil from contamination by oil and oil products, which consists in introducing peat into the contaminated areas, which is preliminarily activated by adding mineral additives and subsequent incubation in the mesophilic mode for 3-7 days to increase the number of hydrocarbon-oxidizing microorganisms in it (RU patent No. 2137559, C1, 09/20/99).
Наиболее близким из числа технических решений является способ получения биопрепарата для очистки объектов окружающей среды от нефтезагрязнений, включающий культивирование нефтеокисляющих бактерий на питательной среде, внесение их в стерильный торф, добавление раствора минеральных солей и дополнительное поверхностное культивирование нефтеокисляющих бактерий на торфе в течение 5-7 суток (патент RU №2116145, С1, 27.07.98).The closest technical solution is a method of producing a biological product for cleaning environmental objects from oil pollution, including the cultivation of oil-oxidizing bacteria on a nutrient medium, adding them to sterile peat, adding a solution of mineral salts and additional surface cultivation of oil-oxidizing bacteria on peat for 5-7 days (patent RU No. 2116145, C1, 07.27.98).
Недостатками двух последних аналоговых биопрепаратов является необходимость дополнительной длительной операции культивирования нефтеокисляющих культур на торфе в течение 3-7 дней при 22-30°С. Эта операция повышает трудоемкость технологического процесса получения биопрепаратов.The disadvantages of the last two analogue biological products is the need for an additional long operation of the cultivation of oil-oxidizing crops on peat for 3-7 days at 22-30 ° C. This operation increases the complexity of the technological process for obtaining biological products.
Также существенным недостатком аналоговых биопрепаратов является невысокая эффективность очистки при использовании их в районах с холодным климатом.Also a significant drawback of analog biological products is the low cleaning efficiency when used in areas with a cold climate.
Целью изобретения является ускорение биодеградации различных классов нефтяных углеводородов при низких температурах.The aim of the invention is to accelerate the biodegradation of various classes of petroleum hydrocarbons at low temperatures.
Эта цель достигается путем создания биологически активной композиции, состоящей из нефтеокисляющих бактериальных культур, комплексного минерального удобрения и торфа, которая обеспечивает очистку поверхностных вод, почв и грунтов от нефтяных загрязнений и загрязнений полициклическими ароматическими углеводородами с высокой эффективностью, низкими затратами и экологически безопасным способом в широком интервале температур от 6°С до 25°С.This goal is achieved by creating a biologically active composition consisting of oil-oxidizing bacterial cultures, complex mineral fertilizers and peat, which ensures the purification of surface water, soil and soil from oil pollution and pollution by polycyclic aromatic hydrocarbons with high efficiency, low cost and environmentally friendly way in a wide temperature range from 6 ° C to 25 ° C.
Биологически активная композиция содержит в качестве нефтеокисляющих бактериальных культур четыре штамма: Rhodococcus erythropolis HX7 (патент RU №2039714), Acinetobacter oleovorum ВСБ-712 (патент RU №1809822, БИ №14, 1993), Pseudoamycolata halophobica БСБ-753 и Kibdelosporangium aridum БСБ-754.The biologically active composition contains four strains as an oil-oxidizing bacterial culture: Rhodococcus erythropolis HX7 (patent RU No. 2039714), Acinetobacter oleovorum VSB-712 (patent RU No. 1809822, BI No. 14, 1993), Pseudoamycolata halophobica BSB-Bosbum-753bibsobium-Bibo 754.
В качестве комплексного минерального удобрения используют гранулированное удобрение, содержащее, мас.%, не менее: NH4-N - 8,6; NO3-N - 4,4; P2O5 - 7,7; К2О - 17,0; MgO - 0,8; Mn - 0,16; Cu - 0,08; В - 0,09; Fe - 0,16; Zn - 0,09; Со - 0,008 (ТУ 2387-004-40300350-99). Это удобрение используется как источник питания для нефтеокисляющих бактериальных культур и стимулятор процессов деструкции нефтяных углеводородов.As a complex mineral fertilizer use granular fertilizer containing, wt.%, Not less than: NH 4 -N - 8.6; NO 3 —N — 4.4; P 2 O 5 - 7.7; K 2 O — 17.0; MgO - 0.8; Mn 0.16; Cu - 0.08; B - 0.09; Fe - 0.16; Zn 0.09; Co - 0.008 (TU 2387-004-40300350-99). This fertilizer is used as a food source for oil-oxidizing bacterial cultures and a stimulator of the processes of destruction of petroleum hydrocarbons.
В качестве носителя для нефтеокисляющих микроорганизмов и структуратора очищаемой почвы используется торф для приготовления компостов, выпускаемый в соответствии с ГОСТ Р 51661.1-2000.Peat for compost preparation is used as a carrier for oil-oxidizing microorganisms and a structurer of the cleaned soil, produced in accordance with GOST R 51661.1-2000.
В нефтезагрязненные почвы, грунты вносится биологически активная композиция в количестве 30-70 г (в зависимости от степени загрязненности) на 1 кг нефтезагрязненной почвы; в нефтезагрязненные воды в количестве 5 г на 1 литр.Biologically active composition in the amount of 30-70 g (depending on the degree of contamination) per 1 kg of oil-contaminated soil is introduced into oil-contaminated soils and soils; in oil-contaminated water in the amount of 5 g per 1 liter.
Композиция обеспечивает одновременно сорбцию нефтяных углеводородов и является носителем и источником расселения нефтеокисляющих бактериальных культур ассоциации, обеспечивающих высокую скорость деструкции углеводородов нефти, и может применяться в северных регионах страны при 6-15°С.The composition simultaneously provides for the sorption of petroleum hydrocarbons and is a carrier and source of the dispersion of oil-oxidizing bacterial cultures of the association, providing a high rate of destruction of oil hydrocarbons, and can be used in the northern regions of the country at 6-15 ° C.
Характеристика штамма Rhodococcus erythropolis HX7:Characteristic of the strain Rhodococcus erythropolis HX7:
Штамм HX7 выделен из образцов почвы, отобранных в тундре на севере Архангельской области вблизи нефтяных скважин. На основании генетических исследований 16-s рибосомальной РНК идентифицирован как Rhodococcus erythropolis.Strain HX7 was isolated from soil samples taken in the tundra in the north of the Arkhangelsk region near oil wells. Based on genetic studies of 16-s ribosomal RNA identified as Rhodococcus erythropolis.
Культурально-морфологические признаки. Клетки штамма НХ7 неподвижные, грамположительные, некислотоустойчивые, спор не образуют. При росте бактерии имеют выраженный цикл развития (палочки, кокки). Деление осуществляется, в основном, по раскалывающемуся типу, в растущих культурах доминируют V-формы. При росте на среде МПА, сусло-агаре образуют кремовые или телесные с розовым оттенком колонии, на среде Гаузе - розовые колонии.Cultural and morphological characters. The cells of strain HX7 are motionless, gram-positive, non-acid-resistant, do not form spores. With growth, bacteria have a pronounced development cycle (rods, cocci). The division is carried out mainly according to the splitting type, V-forms dominate in growing cultures. When growing on MPA medium, wort agar form creamy or flesh-colored colonies with a pink tint, pink colonies on Gauze medium.
Физиолого-биохимические признаки. Аэроб, растет при температуре 3-30°С при рН 4,5-11. В клеточной стенке содержится мезо-диаминопимелиновая кислота, арабиноза и галактоза (1V тип клеточной стенки). Штамм каталаза положительный и оксидаза отрицательный; желатин не разжижает, молоко не пентонизирует. В качестве источников азота использует соединения аммония и нитраты. Образует кислоту из следующих углеводов: глюкозы, арабинозы, салицина, лактозы, галактозы. В качестве единственного источника углерода использует глюкозу, сахарозу. Штамм способен использовать для роста сырую нефть и различные фракции нефти: н-алканов, ароматических углеводородов. А также различные продукты переработки нефти: дизельное, реактивное топлива, мазуты. Штамм способен расти в средах, содержащих до 90% нефти.Physiological and biochemical characteristics. Aerob grows at a temperature of 3-30 ° C at pH 4.5-11. The cell wall contains meso-diaminopimelic acid, arabinose and galactose (type 1V cell wall). The strain of catalase is positive and oxidase is negative; gelatin does not thin, milk does not pentonize. Ammonium compounds and nitrates are used as nitrogen sources. It forms acid from the following carbohydrates: glucose, arabinose, salicin, lactose, galactose. It uses glucose, sucrose as the sole carbon source. The strain is able to use crude oil and various fractions of oil for growth: n-alkanes, aromatic hydrocarbons. As well as various oil refining products: diesel, jet fuel, fuel oil. The strain is able to grow in environments containing up to 90% oil.
Штамм не патогенен, не обладает вирулентными и токсигенными свойствами, не диссеминирует во внутренних органах лабораторных животных, не обладает иммуногенным и аллергенным действием.The strain is not pathogenic, does not have virulent and toxigenic properties, does not disseminate in the internal organs of laboratory animals, does not have immunogenic and allergenic effects.
Клетки штамма НХ7 хорошо сохраняют жизнеспособность и нефтеокисляющую активность при -20°С в 30%-ном растворе глицерина в течение года. Клетки также хорошо сохраняются в лиофилизованном состоянии в течение 3 лет.Cells of strain HX7 well retain viability and oil-oxidizing activity at -20 ° C in a 30% glycerol solution for a year. Cells are also well preserved in a lyophilized state for 3 years.
Штамм Rhodococcus erythropolis HX7 депонирован под номером ВКПМ S -1267 в Российской коллекции промышленных микроорганизмов.The strain Rhodococcus erythropolis HX7 is deposited under VKPM number S -1267 in the Russian collection of industrial microorganisms.
Характеристика новых культур:Characteristics of new crops:
Штамм БСБ-753 выделен из воды р. Двины на средах с углеводородами различного фракционного состава и идентифицирован как Pseudoamycolata halophobica.Strain BSB-753 isolated from the water of the river. Dvina on media with hydrocarbons of various fractional composition and identified as Pseudoamycolata halophobica.
Культурально-морфологические признаки. Pseudoamycolata halophobica штамм ВСБ-753 - грамположительные подвижные палочки неправильной формы, расположенные под углом друг к другу, размер клеток 0,3×2 мкм, встречаются одиночные клетки размером до 0,7-1,0-2,5-8,0 мкм. Формируют светло-оранжевые вегетативные ветвящиеся гифы, распадающиеся на палочковидные и овальные элементы. На воздушных гифах образуются короткие цепочки спор. Наблюдаются набухшие сегменты гиф (около 3 мкм длиной) с поперечными и продольными септами. Клеточная стенка 1V типа (арабиноза) На ГРМ-агаре растут в виде серо-кремовых слизистых колоний с четко очерченным краем, на минимальной синтетической питательной среде колонии приобретают неправильную форму с выростами, напоминающими мицелиальные элементы. На МПА мелкие колонии размером 1,0-1,5 мм, центр возвышен, край ровный, поверхность матовая кремовая. На агаре Хотингера колонии мелкие 0,6-1,0 мм, к центру небольшое возвышение, поверхность матовая, край ровный.Cultural and morphological characters. Pseudoamycolata halophobica strain VSB-753 - gram-positive motile rods of irregular shape, located at an angle to each other, cell size 0.3 × 2 μm, there are single cells up to 0.7-1.0-2.5-8.0 μm in size . Light orange vegetative branching hyphae form, decaying into rod-shaped and oval elements. Short chains of spores form on aerial hyphae. Swollen hyphal segments (about 3 μm long) with transverse and longitudinal septa are observed. Cell wall of type 1V (arabinose) On timing agar grow in the form of gray-cream mucous colonies with a clearly defined edge, on a minimal synthetic nutrient medium, the colonies acquire an irregular shape with outgrowths resembling mycelial elements. On the MPA, small colonies measuring 1.0-1.5 mm in size, the center is elevated, the edge is even, the surface is matte cream. On the Hotinger agar, the colonies are small 0.6-1.0 mm, toward the center a slight elevation, the surface is dull, the edge is even.
Физиолого-биохимические признаки. Аэроб, каталазоположительный, желатину разжижает слабо, окисляет маннозу и фруктозу, молоко не сворачивает и не пептонизирует. Нитраты не восстанавливает. В МПБ умеренная муть, кольцо, осадок на дне рыхлый, индол и сероводород не образуют. Штамм хорошо растет в широком интервале температур культивирования 6, 10, 18 и 25°С. Штамм не токсичен и не патогенен.Physiological and biochemical characteristics. Aerobic, catalase-positive, weakly dilutes gelatin, oxidizes mannose and fructose, milk does not curdle and does not peptone. Nitrate does not restore. In BCH, moderate turbidity, ring, and sediment are friable at the bottom; indole and hydrogen sulfide do not form. The strain grows well in a wide range of cultivation temperatures of 6, 10, 18 and 25 ° C. The strain is not toxic and not pathogenic.
Чувствительность к антибиотикам изучена с использованием бумажных дисков, содержащих стандартные концентрации ампициллина, карбенициллина, оксациллина, стрептомицина, канамицина, левомицетина, рафампицина, тетрациклина, эритромицина, фузидина. Данные представлены в таблице 1.Antibiotic sensitivity was studied using paper disks containing standard concentrations of ampicillin, carbenicillin, oxacillin, streptomycin, kanamycin, chloramphenicol, rafampicin, tetracycline, erythromycin, fusidine. The data are presented in table 1.
Штамм Pseudoamycolata halophobica ВСБ - 753 хранится в музее коллекции микроорганизмов ООО ПКФ "БИГОР".The strain Pseudoamycolata halophobica VSB - 753 is stored in the Museum of the collection of microorganisms LLC PKF BIGOR.
Штамм ВСБ-754 выделен из воды р.Печоры на средах с углеводородами различного фракционного состава и идентифицирован как Kibdelosporangium aridum.Strain VSB-754 was isolated from the water of the Pechora River on media with hydrocarbons of various fractional composition and identified as Kibdelosporangium aridum.
Культурально-морфологические признаки. Kibdelosporangium aridum штамм ВСБ-754 - грамположительные подвижные палочки размером 0,5-1,0×2,0×7,0 мкм, неправильной формы, расположенные поодиночке или в коротких цепочках со светло-оранжевым внутриклеточным пигментом. На воздушном мицелии образуются цепочки парных, почти округлых спор и умеренно часто спорангиоподобные структуры диаметром 10-15 мкм грушевидной формы. Клеточная стенка 1V типа. Гидролизаты целых клеток содержат арабинозу, рамноза не обнаружена. На ГРМ-агаре растут в виде серо-кремовых гладко-слизистых колоний с четко очерченным краем. На МПА - мелкие (0,8-1,0 мм) колонии, к центру возвышаются равномерно, край слабо извилистый, поверхность блестящая. На агаре Хотингера колонии мелкие 0,8-1,5 мм, к центру небольшое возвышение, поверхность слабо матовая, край извилистый. На богатой среде с кровью растут более скудно, образуя выраженные слизистые колонии. Гемолиз эритроцитов не вызывают.Cultural and morphological characters. Kibdelosporangium aridum strain VSB-754 - gram-positive movable sticks 0.5-1.0 × 2.0 × 7.0 μm in size, irregularly shaped, located alone or in short chains with light orange intracellular pigment. On aerial mycelium, chains of paired, almost rounded spores and moderately often sporangi-like structures with a diameter of 10-15 μm pear-shaped form. Cell wall 1V type. Hydrolysates of whole cells contain arabinose; ramnose was not detected. On timing agar grow in the form of gray-cream smooth-mucous colonies with a clearly defined edge. On the MPA - small (0.8-1.0 mm) colonies, rise evenly to the center, the edge is slightly winding, the surface is shiny. On the Hotinger agar, the colonies are small 0.8-1.5 mm, toward the center a slight elevation, the surface is slightly dull, the edge is winding. On a rich environment with blood, they grow more sparingly, forming pronounced mucous colonies. Red blood cell hemolysis does not cause.
Физиолого-биохимические признаки. Аэроб, некислотоустойчив, каталазоположительный, желатину разжижает слабо на 21 день, молоко пептонизирует, нитраты восстанавливает. На ломтике картофеля рост хороший, поверхность блестящая, край извилистый, светло-розового цвета. В МПБ на дне образует рыхлый осадок, слабое помутнение, кольцо, пигмента нет. Ассимилирует 1-арабинозу, декстрин, рафинозу. Индол, сероводород не образуют. Штамм хорошо растет в широком интервале температур культивирования 6, 10, 18 и 25°С, рН среды 6,5-7,2. Штамм не токсичен и не патогенен.Physiological and biochemical characteristics. Aerob, non-acid-resistant, catalase-positive, slightly dilutes gelatin for 21 days, milk peptones, restores nitrates. On a slice of potato, growth is good, the surface is shiny, the edge is sinuous, light pink in color. In the BCH at the bottom forms a loose precipitate, slight turbidity, ring, no pigment. Assimilates 1-arabinose, dextrin, raffinose. Indole, do not form hydrogen sulfide. The strain grows well in a wide range of cultivation temperatures of 6, 10, 18 and 25 ° C, the pH of the medium is 6.5-7.2. The strain is not toxic and not pathogenic.
Штамм Kibdelosporangium aridum ВСБ-754 хранится в музее коллекции микроорганизмов ООО ПКФ "БИГОР".The strain Kibdelosporangium aridum VSB-754 is stored in the Museum of the collection of microorganisms LLC PKF BIGOR.
Использование новых культур Pseudoamycolata halophobica ВСБ-753 и Kibdelosporangium aridum ВСБ-754 совместно с Rhodococcus erythropolis HX7 и Acinetobacter oleovorum ВСБ-712 и с комплексным минеральным удобрением позволяет повысить эффективность разложения нефтяных углеводородов широкого диапазона (от легких до тяжелых нефтепродуктов, полиароматических соединений) и обеспечить высокую степень очистки почв при низких положительных температурах при равном соотношении всех культур.The use of new cultures of Pseudoamycolata halophobica VSB-753 and Kibdelosporangium aridum VSB-754 together with Rhodococcus erythropolis HX7 and Acinetobacter oleovorum VSB-712 and with complex mineral fertilizers can increase the efficiency of the decomposition of a wide range of petroleum hydrocarbons (from light to heavy petroleum products, poly) high degree of soil purification at low positive temperatures with an equal ratio of all crops.
Приготовление биологически активной композиции:Preparation of biologically active composition:
Для получения биомассы культур их выращивают на жидкой минеральной среде следующего состава (г/л): KNO3 - 4; КН2PO4 - 0,6; Na2HPO4 - 1,4; MgSO4 - 0,8; FeSO4 - 0,015; среды рН - 6,8-7,0. В качестве источника углерода используют 0,5-1,0% "Парекс" (содержание н-алканов C8-C19) в течение 48 часов при температуре 17°С. Иммобилизация клеток на торфе осуществляется обработкой водной суспензией с концентрацией клеток 1,2-1,5 ед. оптической плотности при объемном соотношении водной суспензии и торфа (1:2). Количество иммобилизованных нефтеокисляющих клеток достигает 107-109 кл/г. Затем в торф вносят комплексное минеральное удобрение в концентрации 7-9% масс.; нефтеокисляющие бактериальные культуры составят 1-3% массы биологически активной композиции.To obtain biomass of crops, they are grown on a liquid mineral medium of the following composition (g / l): KNO 3 - 4; KH 2 PO 4 - 0.6; Na 2 HPO 4 - 1.4; MgSO 4 - 0.8; FeSO 4 0.015; pH environment - 6.8-7.0. As a carbon source use 0.5-1.0% "Parex" (the content of n-alkanes C 8 -C 19 ) for 48 hours at a temperature of 17 ° C. Cell immobilization on peat is carried out by treatment with an aqueous suspension with a cell concentration of 1.2-1.5 units. optical density at a volume ratio of aqueous suspension and peat (1: 2). The number of immobilized oil-oxidizing cells reaches 10 7 -10 9 cells / g Then a complex mineral fertilizer is added to peat at a concentration of 7-9% of the mass .; oil-oxidizing bacterial cultures will make up 1-3% of the mass of the biologically active composition.
При внесении биологически активной композиции в иммобилизованной на торфе форме в загрязненную почву происходит адсорбция жидких нефтепродуктов на торфе. Иммобилизованные на торфе нефтеокисляющие бактериальные культуры начинают активно расти и размножаться в данной среде за счет использования нефтяных углеводородов в качестве источника углерода и энергии и минеральных солей комплексного удобрения.When a biologically active composition is introduced in a form immobilized on peat into contaminated soil, liquid petroleum products are adsorbed on peat. Oil-oxidizing bacterial cultures immobilized on peat begin to actively grow and multiply in this environment due to the use of petroleum hydrocarbons as a source of carbon and energy and mineral salts of complex fertilizers.
Способ внесения биологически активной композиции в нефтезагрязненные участки осуществляется следующим образом.The method of introducing a biologically active composition in oil-contaminated areas is as follows.
Обработку нефтезагрязненных участков (водоемы, почвы, нефтезагрязненные участки промзон) проводят в весенне-летний или осенний период при среднесуточных температурах почвы не ниже +3°С. В почвы и грунты биологически активная композиция вносится методом вспашки или перемешиванием в количестве 30-70 г (в зависимости от уровня загрязнения) на 1 кг нефтезагрязненной почвы. Если почвы сухие - осуществляется их предварительный полив. Кроме того, в течение очистки рекомендуется проводить дополнительные агротехнические мероприятия - рыхление и полив очищаемых участков. Для очистки нефтезагрязненных вод биологически активная композиция используется в концентрациях 5 г на 1 литр. В процессе очистки через 2-4 недели проводят дополнительные подкормки раствором минерального комплексного удобрения. Количество вносимого минерального комплексного удобрения варьируется в зависимости от степени загрязнения от 0,15 до 1,5 мас.%. Через месяц после проведения обработок и далее до окончания процессов очистки каждый месяц проводят химический анализ почвы (воды). Об эффективности очистки судят по уменьшению концентрации нефтяных углеводородов в пробах почвы (воды).The processing of oil-contaminated sites (ponds, soils, oil-contaminated areas of industrial zones) is carried out in the spring-summer or autumn period with average daily soil temperatures not lower than + 3 ° С. A biologically active composition is applied to soils and soils by plowing or by mixing in an amount of 30-70 g (depending on the level of contamination) per 1 kg of oil-contaminated soil. If the soil is dry - they are pre-irrigated. In addition, during the cleaning, it is recommended to carry out additional agricultural activities - loosening and watering the cleaned areas. For the purification of oil-contaminated water, the biologically active composition is used in concentrations of 5 g per 1 liter. In the cleaning process, after 2-4 weeks, additional dressing is carried out with a solution of mineral complex fertilizer. The amount of applied mineral complex fertilizer varies depending on the degree of contamination from 0.15 to 1.5 wt.%. A month after the treatments and then until the end of the cleaning processes, a chemical analysis of the soil (water) is carried out every month. The cleaning efficiency is judged by the decrease in the concentration of petroleum hydrocarbons in soil (water) samples.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами:The invention is illustrated by the following examples:
Пример 1. Использование биологически активной композиции для очистки от светлых нефтепродуктов.Example 1. The use of biologically active compositions for purification from light petroleum products.
Ассоциацию углеводородокисляющих культур Pseudoamycolata halophobica ВСБ-753, Kibdelosporangium aridum ВСБ-754, Rhodococcus erythropolis HX7 и Acinetobacter oleovorum ВСБ-712 выращивали в аэробных условиях в качалочных колбах.The association of hydrocarbon-oxidizing cultures of Pseudoamycolata halophobica VSB-753, Kibdelosporangium aridum VSB-754, Rhodococcus erythropolis HX7 and Acinetobacter oleovorum VSB-712 was grown under aerobic conditions in rocking flasks.
Очистка осуществляется в жидкой среде следующего состава г/л: KNO3 - 4; KH2PO4 - 0,6; Na2HPO4 - 1,4; MgSO4 - 0,8; FeSO4 - 0,015; рН - 6,8-7,0. В качестве единственного источника углерода использовали зимнее дизельное топливо фракции 280-340°С (ГОСТ 305-82). Концентрация дизельного топлива в среде 1 об.%, количество вносимой композиции - 1 г/200 мл среды. Время очистки - 6 суток на качалке при 180 об/мин; температура 7-10°С. Утилизация нефтяных углеводородов за это время составила - 85%.Cleaning is carried out in a liquid medium of the following composition g / l: KNO 3 - 4; KH 2 PO 4 0.6; Na 2 HPO 4 - 1.4; MgSO 4 - 0.8; FeSO 4 0.015; pH is 6.8-7.0. Winter diesel fuel of the fraction 280-340 ° С (GOST 305-82) was used as the sole carbon source. The concentration of diesel fuel in the medium is 1 vol.%, The amount of the applied composition is 1 g / 200 ml of medium. Cleaning time - 6 days on a rocking chair at 180 rpm; temperature 7-10 ° С. Utilization of petroleum hydrocarbons during this time amounted to 85%.
Пример 2. Использование биологически активной композиции для очистки от сырой нефти.Example 2. The use of biologically active compositions for the purification of crude oil.
Условия очистки такие же, как в п.1, в качестве единственного источника углерода использовали сырую нефть в концентрации 0,5%. Время очистки - 6 суток. Ассоциация обеспечивает утилизацию сырой нефти на 69%.The purification conditions are the same as in claim 1, crude oil at a concentration of 0.5% was used as the sole carbon source. The cleaning time is 6 days. The association provides for the utilization of crude oil by 69%.
Пример 3. Использование биологически активной композиции для очистки от мазута.Example 3. The use of biologically active compositions for the purification of fuel oil.
В аэробных условиях выращивали вышеперечисленную ассоциацию культур в качалочных колбах.Under aerobic conditions, the above-mentioned association of cultures was grown in rocking flasks.
Условия очистки как в примере 1. В качестве единственного источника углерода использовали флотский мазут марки Ф-5 (ГОСТ 10585-99), содержащий (%): н-алканов до 11, нафтено-изоалканов до 51,8; ароматических углеводородов до 30,1; смолисто-асфальтеновых веществ до 7,1. Время очистки 6 суток на качалке с 180 об/мин при 17-18°С. Утилизация нефтяных углеводородов составила 52%.Purification conditions as in example 1. As the only carbon source, we used naval fuel oil of grade F-5 (GOST 10585-99) containing (%): n-alkanes up to 11, naphtheno-isoalkanes up to 51.8; aromatic hydrocarbons up to 30.1; resinous asphaltene substances up to 7.1. The cleaning time of 6 days on a rocking chair from 180 rpm at 17-18 ° C. The utilization of petroleum hydrocarbons was 52%.
Пример 4. В загрязненную дизельным топливом (фракция 280-340°С (ГОСТ 305-82)) почву (концентрация 110 г/кг почвы) вносится биологически активная композиция из четырех перечисленных культур в концентрациях: 1 вариант - 4 г на 1 кг загрязненной почвы; 2 вариант - 40 г на 1 кг загрязненной почвы с клеточным титром 107-108 кл/г биопрепарата. Образуемый компост перемешивается и увлажняется. Очистка происходит при 10-12°С. Через 2 недели в почву дополнительно вносится 1% раствор комплексного минерального удобрения. Через 4 недели концентрация нефтепродуктов в очищаемой почве уменьшилась в варианте 1 - на 12%; в варианте 2 - на 25% по отношению к контрольному варианту, в который композицию не вносили, перемешали и увлажняли как опытные варианты.Example 4. In a soil contaminated with diesel fuel (fraction 280-340 ° C (GOST 305-82)) (concentration of 110 g / kg of soil), a biologically active composition of the four listed cultures is introduced in concentrations: 1 option - 4 g per 1 kg of contaminated soil; Option 2 - 40 g per 1 kg of contaminated soil with a cell titer of 10 7 -10 8 cells / g of biological product. The resulting compost is mixed and moistened. Cleaning occurs at 10-12 ° C. After 2 weeks, an additional 1% solution of complex mineral fertilizer is added to the soil. After 4 weeks, the concentration of oil in the soil being cleaned decreased in option 1 - by 12%; in option 2 - 25% in relation to the control option, in which the composition was not added, mixed and moistened as experimental options.
Пример 5. В загрязненную флотским мазутом (марка Ф-5) почву (концентрация 180 г/кг) вносится биологически активная композиция из четырех перечисленных культур в концентрации: 1 вариант - 6,5 г на 1 кг загрязненной почвы; 2 вариант - 65 г на 1 кг загрязненной почвы с клеточным титром 107-108 кл/г биопрепарата. Образуемый компост перемешивается, увлажняется и вносится дополнительное минеральное питание, как в примере 4. Очистка происходит при 16-17°С. Через 4 недели содержание нефтяных углеводородов в очищаемой почве снижается в первом варианте на 15%, во 2 варианте на 31% по отношению к контрольному варианту без внесения композиции.Example 5. A soil (concentration 180 g / kg) is contaminated with naval fuel oil (grade F-5) and a biologically active composition of the four cultures listed is applied in a concentration: 1 option - 6.5 g per 1 kg of contaminated soil; Option 2 - 65 g per 1 kg of contaminated soil with a cell titer of 10 7 -10 8 cells / g of biological product. The resulting compost is mixed, moistened and additional mineral nutrition is introduced, as in example 4. Cleaning occurs at 16-17 ° C. After 4 weeks, the content of petroleum hydrocarbons in the soil being cleaned is reduced in the first embodiment by 15%, in the second embodiment by 31% in relation to the control variant without making the composition.
Пример 6. В загрязненную сырой нефтью (концентрация 100 г/кг) почву вносили биологически активную композицию из четырех перечисленных культур в концентрации: 1 вариант - 3,4 г на 1 кг загрязненной почвы; 2 вариант - 34 г на 1 кг загрязненной почвы с клеточным титром 107-108 кл/г биопрепарата. Образуемый компост перемешивается, увлажняется и вносится дополнительное минеральное питание, как в примере 4. Через 1 месяц содержание нефтяных углеводородов в очищаемой почве снижается в первом варианте на 20%; во втором - на 32%.Example 6. In a soil contaminated with crude oil (concentration of 100 g / kg), a biologically active composition of the four listed cultures was added in a concentration of: 1 option - 3.4 g per 1 kg of contaminated soil; Option 2 - 34 g per 1 kg of contaminated soil with a cell titer of 10 7 -10 8 cells / g of biological product. The resulting compost is mixed, moistened and additional mineral nutrition is introduced, as in example 4. After 1 month, the content of petroleum hydrocarbons in the soil to be cleaned is reduced in the first embodiment by 20%; in the second - by 32%.
Таким образом, предлагаемый способ может быть использован для очистки почвы и воды от нефти, светлых и темных тяжелых нефтепродуктов с загрязненностью до 20% в условиях низких положительных температур с большой эффективностью.Thus, the proposed method can be used to clean the soil and water from oil, light and dark heavy oil products with contamination up to 20% in conditions of low positive temperatures with high efficiency.
Источники, принятые во внимание:Sources taken into account:
1. А.С. СССР №1428809, БИ №37, 1988, Е 02 В 15/04.1. A.S. USSR No. 1428809, BI No. 37, 1988, E 02 B 15/04.
2. Патент RU №2137559 С1, 20.09.99.2. Patent RU No. 2137559 C1, 09/20/99.
3. Патент RU №2116145 C1, 27.07.98.3. Patent RU No. 2116145 C1, 07/27/98.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003116075/13A RU2270808C2 (en) | 2003-05-30 | 2003-05-30 | Biologically active composition for treatment of surface water, soil and ground from petroleum pollution |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003116075/13A RU2270808C2 (en) | 2003-05-30 | 2003-05-30 | Biologically active composition for treatment of surface water, soil and ground from petroleum pollution |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003116075A RU2003116075A (en) | 2004-12-27 |
| RU2270808C2 true RU2270808C2 (en) | 2006-02-27 |
Family
ID=36114455
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003116075/13A RU2270808C2 (en) | 2003-05-30 | 2003-05-30 | Biologically active composition for treatment of surface water, soil and ground from petroleum pollution |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2270808C2 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2489485C1 (en) * | 2012-08-14 | 2013-08-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский нефтяной научно-исследовательский геологоразведочный институт" (ФГУП "ВНИГРИ") | STRAIN Rhodococcus Erythropolis, USED FOR DECOMPOSITION OF OIL |
| RU2674893C1 (en) * | 2018-04-03 | 2018-12-13 | Общество с ограниченной ответственностью "Биохим-Реагент" (ООО "Биохим-Реагент") | Association of pseudomonas hunanensis microorganism strains and acinetobacter baumannii for cleaning marine oil-contaminated water from oil products |
| RU2694593C1 (en) * | 2018-08-21 | 2019-07-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Лимнологический институт Сибирского отделения Российской академии наук (ЛИН СО РАН) | Cell growth stimulator of hydrocarbon-oxidizing rhodococcus erythropolis bacteria (versions) |
| RU2699627C2 (en) * | 2017-12-08 | 2019-09-06 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Газпром Трансгаз Краснодар" | Method for intensifying biological waste water treatment processes using activated sludge as nutrient medium for em-biopreparations |
-
2003
- 2003-05-30 RU RU2003116075/13A patent/RU2270808C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2489485C1 (en) * | 2012-08-14 | 2013-08-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский нефтяной научно-исследовательский геологоразведочный институт" (ФГУП "ВНИГРИ") | STRAIN Rhodococcus Erythropolis, USED FOR DECOMPOSITION OF OIL |
| RU2699627C2 (en) * | 2017-12-08 | 2019-09-06 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Газпром Трансгаз Краснодар" | Method for intensifying biological waste water treatment processes using activated sludge as nutrient medium for em-biopreparations |
| RU2674893C1 (en) * | 2018-04-03 | 2018-12-13 | Общество с ограниченной ответственностью "Биохим-Реагент" (ООО "Биохим-Реагент") | Association of pseudomonas hunanensis microorganism strains and acinetobacter baumannii for cleaning marine oil-contaminated water from oil products |
| RU2694593C1 (en) * | 2018-08-21 | 2019-07-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Лимнологический институт Сибирского отделения Российской академии наук (ЛИН СО РАН) | Cell growth stimulator of hydrocarbon-oxidizing rhodococcus erythropolis bacteria (versions) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Microbial decolorization of azo dyes by Proteus mirabilis | |
| CN101560483B (en) | Lipopeptide-producing bacillus pumilus and application thereof | |
| RU2565549C2 (en) | Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north | |
| US20230286844A1 (en) | Method for decontaminating environment polluted with petroleum-related material, and material used | |
| CN117603888B (en) | Bacillus cereus and application thereof in cultivation tail water treatment | |
| CN113215033B (en) | Sulfonamide antibiotic degrading bacteria and application thereof | |
| RU2378060C2 (en) | Biological preparation for cleaning of soils from contaminations with oil and oil products, method of its production and application | |
| CN110283741A (en) | One plant of rose bacillus and its application with efficient degradation polycyclic aromatic hydrocarbon function | |
| CN103923867A (en) | Mixed bacterial colony microbial preparation and application thereof in treatment of wastewater containing nitrate nitrogen | |
| US10173913B2 (en) | Process of treating buchu mercaptan production wastewater using microalgae and chitin as a nitrogen source | |
| RU2509150C2 (en) | Association of strains of bacteria-oil decomposers, and remediation method of oil-contaminated objects | |
| RU2270808C2 (en) | Biologically active composition for treatment of surface water, soil and ground from petroleum pollution | |
| RU2694610C1 (en) | Pseudomonas extremaustralis arc 38 vkpm b-13084 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2107722C1 (en) | Acinetobacter calcoaceticus, pseudomonas fluorescens, alcaligenes faecalis bacteria strains consorcium for destroying oil and petroleum products | |
| RU2299101C1 (en) | Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land | |
| RU2502569C1 (en) | Method of removing hydrocarbon contaminants from soils | |
| KR19980033946A (en) | Active microorganism culture material for wastewater treatment and its use method | |
| CN116004463A (en) | Phenol efficient degradation related flora and application thereof | |
| KR101475589B1 (en) | A novel microorganism Rhodococcus pyridinovorans EDB2 degrading aromatic compounds | |
| Nakamura et al. | A novel control process of cyanobacterial bloom using cyanobacteriolytic bacteria immobilized in floating biodegradable plastic carriers | |
| KR100459852B1 (en) | The microbial seeds for the sewage/wastewater treatment and the method for it's development | |
| RU2266958C2 (en) | Destructor microorganism strains zoogloea sp.14h, arthrobacter sp.13h, arthrobacter sp.15h, bacillus sp.3h, bacillus sp.12h, useful in remediation of ponds and soils contaminated with petroleum and petroleum product, and strain association based on the same | |
| RU2297290C1 (en) | Method of recultivation of the bleaching soil polluted with the oil products | |
| RU2039714C1 (en) | Method for decontamination of water and soil surfaces from oil | |
| RU2312719C1 (en) | Consortium of strains of hydrocarbon-oxidizing bacteria pseudomonas aeruginosa nd k3-1 and pseudomonas fluorescens nd k3-2 as hydrocarbon destructor and a method of treating oil-polluted subsurface waters |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060531 |