RU2268067C2 - Вирусные вакцины - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области медицины и касается вирусных вакцин. Сущность изобретения включает вирусные вакцины, представляющие собой вирусный антиген или вакцинный препарат, смешанный с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливинилпирролидон и полиоксидоний с содержанием полиоксидония 0,04-12 мг в дозе, против гепатита А, гепатита В, гепатита А и В и против бешенства. Преимущество изобретения заключается в повышении иммуногенности вакцины. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 6 табл., 1 ил.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к средствам иммунопрофилактики инфекционных заболеваний, и может быть использовано в противоэпидемической практике.

При решении задач повышения эффективности борьбы с инфекционными заболеваниями и их последствиями становится все более актуальным совершенствование вакцинных препаратов, использование которых может значительно облегчить осуществление полноценных противоэпидемических мероприятий за счет снижения кратности прививок при одновременном повышении резистентности к инфицированию.

Несмотря на довольно высокую эффективность коммерческих вакцин, применяемых в настоящее время для иммунизации в отношении вирусных заболеваний, ни одна из них не дает 100% профилактического эффекта. Поэтому для создания длительной стойкой защиты известные вакцины, как правило, предполагают их многократное введение в организм прививаемого. И даже после нескольких повторных введений по сложной и длительной схеме иммунизации известные вакцины формируют стойкий иммунитет не ранее, чем через 6 месяцев. Так, известная инактивированная отечественная вакцина против гепатита А «ГЕП-А-ин-ВАК» (производства НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ «Вектор», г.Новосибирск. Здесь и далее: «Иммунопрофилактика», Справочник под ред. В.К.Таточенко и Н.А.Озерковского, М., 1998 г.) вводится трехкратно, обеспечивая образование специфических антител лишь у 80% привитых. При этом для создания выраженного иммунного ответа требуется введение достаточно высоких доз препарата.

Известные вакцины против вирусов гепатита А производства зарубежных фирм (Хаврикс 720 или 1440, фирма Смит Клайн Бичем) рекомендуют водить с интервалом через шесть месяцев, что с эпидемиологических позиций недостаточно оправдано, т.к. эта инфекция на территории России характеризуется сезонным подъемом, который длится в течение 6÷7 месяцев.

Использование вакцин нового поколения - генно-инженерных препаратов, таких как рекомбинантные дрожжевые вакцины против вируса гепатита В («Эувакс-В» фирмы Пастер Мерье Коннот и «Энджерикс В фирмы Смит Кляйн Бичем), предполагает три инъекции с интервалами в один и шесть месяцев и только трехкратная иммунизация вакциной против гепатита В обеспечивает защиту привитых в 90-96% случаев.

Применение антирабических вакцинн (например, из штамма «Щелково») при вакцинации двукратным введением не дает 100% эффективности.

Снижение кратности введения вакцинных препаратов обычно достигают путем увеличения количества антигена в прививочной дозе, но это приводит к повышению числа поствакциальных побочных реакций и к увеличению реактогенности препарата, что не позволяет применять их для иммунизации детей.

Достаточно высокими иммуногенными свойствами обладают вакцины, содержащие химические соединения в виде конъюгатов вакцинных антигенов с полимерным носителем полиоксидонием (ПО) (патент РФ №2164148, МКИ А 61 К 39/145, опубл. 2001 г.) или их соединения в результате реакции комплексообразования (патент РФ №2153354, МКИ А 61 К 39/04, опубл. 2000 г.), которые в ряде случаев позволяют снизить кратность вакцинаций. Однако получение таких вакцин связано с организацией сложного химического производства и контроля за качеством препарата, а это создает различные проблемы экологического и санитарно-эпидемиологического характера. К тому же в результате химических реакций активные центры антигенов, в частности вирусов гепатита А или гепатита В, могут претерпевать модифицирующие изменения, и, как следствие, имеет место снижение специфической активности препаратов. Кроме того, готовые вакцины в виде химических или комплексных соединений не позволяют оперативно менять содержание антигенов и полимерного носителя и их соотношение в зависимости от индивидуальных особенностей прививаемого контингента, а потому использование конъюгированных форм вирусных антигенов не всегда приводит к получению максимального эффекта при иммунизации.

Известно использование полиоксидония в качестве адъюванта для повышения противовирусной активности вакцинных препаратов (патент РФ №2073031, МКИ А 61 К 31/785, опубл. 1997 г.). Однако полиоксидоний (сополимер N-окиси-1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиэтил)-1,4-этиленпиперазиний бромида) в свободном состоянии является нестабильным соединением, к условиям его хранения и применения предъявляются достаточно жесткие требования, и даже в этих условиях сохранение активности ПО в течение длительного времени затруднено, а потому его непосредственное использование в качестве адъюванта не находит широкого применения.

Таким образом, технический результат, получаемый от реализации настоящего изобретения, состоит в создании безопасной, стабильной, высокоиммуногенной вирусной вакцины, в снижении вакцинирующей дозы препарата и повышении эффективности профилактики инфекционных заболеваний.

Указанный технический результат достигается тем, что вирусная вакцина представляет собой вирусный антиген или вирусный препарат, смешанный с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливинилпирролидон и полиоксидоний, при соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин	- 0,05-0,07
Маннит	- 5-25
Поливинилпирролидон	- 4-23
Полиоксидоний	- до 100

с содержанием полиоксидония 0,04-12 мг в дозе.

Указанный технический результат достигается также тем, что вакцина против гепатита А содержит антиген вируса гепатита А (АГ ВГА) или вакцинный препарат против гепатита А, смешанный с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливинилпирролидон и полиоксидоний при соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин	- 0,05-0,07
Маннит	- 5-25
Поливинилпирролидон	- 4-23
Полиоксидоний	- до 100

с содержанием полиоксидония 0,2-2,5 мг в дозе.

При этом в качестве АГ ВГА могут быть использованы антигены, полученные из штамма ЛБА-86 вируса гепатита А в культуре перевиваемых клеток 4647 с содержанием в дозе:

АГВГА	- 20-80 ИФА ед.
Полиоксидиния	- 0,2-1,5 мг

Целесообразно в качестве вакцинного препарата использовать культуральную инактивированную вакцину гепатита А «ГЕП-А-ин-ВАК», включающую антигены, полученные из штамма ЛБА-86 вируса гепатита А в культуре перевиваемых клеток 4647 при следующем содержании компонентов в дозе:

«ГЕП-А-ин-ВАК», содержащая антигены
вируса гепатита А	- 20-80 ИФА ед,
Полиоксидиний	- 0,2-1,5 мг.

Указанный технический результат достигается также тем, что вакцина против гепатита В содержит антиген вируса гепатита В или вакцинный препарат против гепатита В, смешанный с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит поливинилпирролидон и полиоксидоний при соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин	- 0,05-0,07
Маннит	- 5-25
Поливинилпирролидон	- 4-23
Полиоксидоний	- до 100

с содержанием полиоксидония 0,1-10 мг в дозе.

При этом, в качестве антигена вируса гепатита В может быть использован поверхностный антиген вируса гепатита В HbsAg с содержанием в дозе:

HbsAg	2,5-20 мкг
Полиоксидония	0,1-10 мг

Предпочтительно в качестве вакцинного препарата против гепатита В использовать рекомбинантную инактивированную вакцину против вируса гепатита В, включающую HBsAg при следующем содержании компонентов в дозе:

Вакцина против вируса гепатита В, содержащая HbsAg	-5-20 мкг
Полиоксидоний	- 0,1-10 мг

Указанный технический результат достигается также тем, что вакцина против гепатита А и гепатита В содержит вакцинный препарат, включающий одновременно АГ ВГА и HBsAg или вакцинные препараты против гепатита А и против гепатита В, смешанные с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливинилпирролидон и полиоксидоний при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин	- 0,05-0,07
Маннит	- 5-25
Поливинилпирролидон	- 4-23
Полиоксидоний	- до 100

с содержанием полиоксидония 0,1-10 мг в дозе.

При этом в качестве АГ ВГА могут быть использованы антигены, полученные из штамма ЛБА-86 вируса гепатита А в культуре перевиваемых клеток 4647, а содержание компонентов в дозе составляет:

АГВГА	- 20-80 ИФА ед
HbsAg	- 2,5-20 мкг
Полиоксидония	- 0,1-10 мг

Целесообразно в качестве вакцинного препарата против вируса гепатита А вакцину «ГЕП-А-ин-ВАК», а в качестве препарата против гепатита В - рекомбинантную инактивированную вакцину против вируса гепатита В, включающую HbsAg при следующем содержании компонентов в дозе:

«ГЕП-А-ин-ВАК», с содержанием
АГ ВГА	- 20-80 ИФА ед
Рекомбинантная инактивированная вакцина
против вируса гепатита В,
с содержанием HbsAg	- 2,5-20 мкг
Полиоксидоний	- 0,1-10 мг

Указанный технический результат достигается также тем, что вакцина против вируса бешенства содержит препарат против вируса бешенства и иммуногенную композицию, включающую бета-каротин, маннит, поливинилпирролидон и полиоксидоний при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин	- 0,05-0,07
Маннит	- 5-25
Поливинилпирролидон	- 4-23
Полиоксидоний	- до 100

с содержанием полиоксидония 0,04-5 мг в дозе.

При этом в качестве препарата против вируса бешенства может быть использована антирабическая инактивированная культуральная вакцина, содержащая вирус бешенства с активностью не менее 2,5 МЕ, а количество полиоксидония в дозе составляет 0,04-5 мг.

Установлено, что полиоксидоний (ПО) в составе иммуногенной композиции (ИК), содержащей дополнительно бета-каротин, маннит и поливинилпирролидон обеспечивает широкий спектр иммунофармакологической активности, в том числе иммуномодулирующие и детоксикационные свойства, высокую биодоступность и способность к выведению из организма, может эффективно регулировать протекающие в организме иммунные реакции на антигенное воздействие и выступать в качестве иммуноадъюванта при вакцинации против вирусных заболеваний.

При этом выявлено, что ИК в составе вирусной вакцины может оказывать влияние на проявление степени выраженности и характер иммунного ответа на специфические антигены, способно усиливать формирование вируснейтрализующих антител и стимулировать клеточные иммунные реакции.

Использование вирусных антигенов или вакцинного препарата в сочетании с ИК, включающей ПО, бета-каротин, маннит и поливинилпирролидон и обладающей самостоятельной иммунотропной активностью, обеспечивает высокую иммуногенность вакцинации, позволяет стимулировать выработку клеток иммунной памяти и снизить, по крайней мере, вдвое прививочную дозу антигенов, сократить число прививок, существенно пролонгировать действие препарата. Обладая детоксикационными свойствами, ИК позволяет одновременно решать задачи снижения интоксикации организма, сопровождающей ряд инфекционных заболеваний.

Снижение антигенной нагрузки позволяет применять вакцины не только для иммунизации взрослых, но и детей дошкольного возраста.

Вирусная вакцина согласно настоящему изобретению может быть получена следующим образом.

Смешивают расчетные количества ПО, бета-каротина, маннита и поливинилпирролидона. Полученную ИК расфасовывают в емкости. Перед использованием ИК растворяют в физиологическом растворе до необходимой концентрации ПО. Для приготовления вакцины вирусный антиген или готовую вакцину разбавляют раствором ИК до содержания ПО в дозе вакцины 0,04-12 мг в зависимости от используемого исходного препарата.

Способ приготовления описываемых вирусных вакцин представлен на примере получения вакцины против гепатита А и вакцины против гепатита В.

Пример 1. Получение вакцины гепатита А «ГЕП-А-ин-ВАК-ПОЛ», содержащей ИК.

Антигены гепатита А из штамма ЛБА-86 выращивают на разрешенной для производства вакцин культуре перевиваемых клеток 4647 и получают в виде объединенной вирусной суспензии после инактивации и фильтрации (полуфабрикат вакцины) или в виде готовой формы, адсорбированной на гидроокиси алюминия (ГЕП-А-ин-ВАК). Начальное содержание антигена вируса гепатита А (АГ ВГА) в указанных препаратах соответствует требованиям НД на вакцину «ГЕП-А-ин-ВАК» и составляет 20÷80 ИФА ед./дозу (1 ИФА ед. соответствует 0,5 нг вирусного белка).

Смешивают 667 г полиоксидония, 206,2 г маннита, 126,2 г поливинилпирролидона и 0,6 г бета-каротина. Проверяют подлинность полученной ИК. Для этого 2,2 мг ИК растворяют в 2 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, прибавляют 30 мл 0,005 М раствора меди сульфата. Спектр, полученный в области длин волн от 550 до 800 нм, имеет максимум поглощения при 657 нм ± 3 нм (полиоксидоний).

Приготовленную таким образом ИК растворяют в 0,9%-ном растворе натрия хлорида до концентрации ПО 1 мг/мл и добавляют к полученным антигенами до содержания ПО 0,2-1,5 мг на дозу вакцины. Готовую вакцину разливают во флаконы по 0,5 мл и 1 мл.

Пример 2. Получение вакцины против вируса гепатита В.

Для приготовления вакцины против гепатита В используют рекомбинантную дрожжевую инактивированную жидкую вакцину против гепатита В «Энджерикс В» фирмы Смит Кляйн Бичем с содержанием антигена HbsAg 10 мкг в дозе для детей 0,5 мл или 20 мкг в дозе для взрослых 1,0 мл.

ИК, приготовленную аналогично примеру 1 и расфасованную в ампулы по 5 мг и 10 мг с содержанием ПО, соответственно, 3 мг и 6 мг растворяют в 1,0 мл воды или раствора натрия хлорида изотонического и смешивают с соответствующей возрасту вакцинируемого дозой коммерческой вакцины непосредственно перед введением вакцины. При этом количество ПО в детской дозе составляет 3 мг, а в дозе для взрослых - 6 мг.

Оценка иммуногенных и протективных свойств полученных вакцины против гепатита А, вакцины против гепатита В, вакцины против гепатита А и гепатита В (дивакцины) и вакцины против вируса бешенства проводилась путем исследования реакции иммунной системы и организма в целом на экспериментальных животных и в полевых клинических испытаниях на группах добровольцев. Исследования проводились на базе ГНИИ стандартизации и контроля медицинских и иммунобиологических препаратов им. Л.А.Тарасевича МЗ РФ в рамках Межведомственной научно-технической программы «Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего».

Для испытаний используют следующие препараты:

- против гепатита А - Вакцину «ГЕП-А-ин-ВАК» (производство НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ «Вектор», г.Новосибирск) и «ВАКТА», производства фирмы «Мерк Шарп Доум»;

- против гепатита - рекомбинантные дрожжевые вакцины против гепатита В «Эувакс-В» фирмы Пастер Коннот и «Энджерикс В» фирмы Смит Кляйн Бичем, а также вакцину, приготовленную из полуфабриката вакцины «Heberbiovac», Куба (НПО «Вирион», г.Томск);

- комбинированную вакцину против гепатитов А и В - «Геп-А+В-ин-ВАК» (производство ДГУ ЭПП «Вектор-БиАльгам» ГНЦ ВБ «Вектор», г.Новосибирск);

- антирабическую вакцину (производство Щелковского биокомбината)

в сочетании с ИК в различных концентрациях по ПО: 0,04 мг, 0,2 мг и 0,5 мг, на дозу.

При этом ИК содержала основного вещества ПО - 667 мг/г, маннита - 206,2 мг/г, поливинилпирролидона - 126,2 мг/г и бета-каротина - 0,6 мг/г.

Препаратом для сравнения во всех биологических экспериментах используют коммерческие вакцины (без ИК).

При вакцинации экспериментальных животных дозы и схемы введения вакцин соответствовали принципам определения иммуногенной активности соответствующих вакцин при оценке их качества.

Проведено изучение иммуногенности вирусных вакцин в полевых клинических испытаниях. При этом оценка иммунологической активности производилась в динамике после иммунизации на основании результатов определения уровней антител в сравниваемых группах наблюдения.

Ниже представлены конкретные примеры экспериментальной оценки эффективности описываемых вакцин. Результаты оценки эффективности препаратов отражены в таблицах 1-6 и на чертеже.

Пример 3. Изучение иммуногенной активности вакцины против гепатита А.

Иммуногенность вакцины оценивают в тесте активной защиты мышей. Эксперименты проводят на белых аутбредных мышах, самцах, массой 15÷20 г, сформированных в группы по 8÷10 животных.

Для определения специфических антител в сыворотке крови экспериментальных животных используют коммерческие ИФА-тест системы для выявления суммарных антител к вирусу гепатита А (ВГА).

Исследованы вакцинные препараты с различным содержанием антигена вируса гепатита А. Для этого готовую вакцину «ГЕП-А-ин-ВАК», содержащую 50 ИФА единиц (одна ИФА единица содержит 5÷7 нг вирусного белка), разводят с кратностью шага 2, 4, 8 и 16 физиологическим раствором, содержащим по аналогии с вакциной гидроокись алюминия в концентрации 0,35÷0,65 мг/мл.

Вакцину готовят «ex tempero», смешивая равные объемы вакцины и ИК, предварительно растворенной до концентраций по содержанию ПО 0,04; 0,2; 0,5 мг на дозу.

Полученную вакцину вводят однократно в объеме 1 мл внутрибрюшинным или подкожным способом.

Специфические антитела к ВГА определяют в сыворотке крови, полученной от экспериментальных животных через 28-30 дней.

Иммуногенный эффект препаратов оценивают по показателям 50% иммунизирующей дозы (ЕД₅₀), которую рассчитывают по методу Кербера, а также по уровню специфических антител к ВГА у животных, который оценивают по показателям титров.

Данные, приведенные в таблицах 1, 2 и на чертеже, показывают, что сочетанное применение вакцинного препарата с ИК независимо от способа введения вакцины, вызывает повышение иммуногенного эффекта, которое проявляется в увеличении количества животных с определяемым уровнем антител и, как следствие, в снижении показателей ЕД₅₀ по сравнению с контрольными группами животных, а также по сравнению с конъюгированной вакциной.

Полученные результаты свидетельствуют об образовании специфических антител при применении вакцины в соответствии с настоящим изобретением не только в большем проценте случаев, но и в более высоких титрах. При этом в 30% случаев у животных, получивших готовую форму вакцины в дозе 25 ИФА ед. отмечался максимальный уровень антител - 1/320 и выше при отсутствии такого уровня антител у животных контрольной группы. Высокий уровень специфических антител образуется даже при снижении иммунизирующей дозы препаратов на 50% и на 75%, что свидетельствует о значительном усилении иммуногенного эффекта вакцинации.

Наиболее выраженный иммуногенный эффект, сопровождающийся снижением показателей ЕД50 до 58% отмечен в группе животных, получивших готовую форму вакцины в сочетании с ИК в концентрации ПО 0,2 мг/дозу и 0,5 мг/дозу.

Пример 4. Изучение иммуногенной активности вакцины против гепатита В.

Оценку иммуногенной активности проводят по уровню специфических антител к вирусу гепатита В (HbsAg) и по числу сероположительных животных.

В качестве объекта исследования используют вакцину против гепатита В (ВГВ), произведенную на основе полуфабриката вакцины «Heberbiovac», Куба (ФУГП НПО «Вирион», г.Томск), в разведениях гелем алюминия гидроксида: 0,83 мкг/мл, 0,27 мкг/мл, 0,09 мкг/мл, 0,03 мкг/мл, 0,01 мкг/мл.

Обследовано 170 животных в 15 группах по 10 животных, получавших ВГВ без ИК и в смеси с ИК при содержании ПО 0,2 мг и 0,5 мг в дозе, и в контрольной группе из 20 животных, получавших только гидроокись алюминия.

Вакцину с ИК готовят непосредственно перед ее введением в виде смеси коммерческой вакцины и ИК в соотношении 1:1. Полученный препарат вводят животным внутрибрюшинно однократно в дозах 2,5, 1,25, 0,6, 0,3, 0,15 мкг/мышь. Через 30 суток индивидуально у каждого животного получают сыворотку крови. Уровень специфических антител к HbsAg определяют с помощью иммуноферментной тест-системы «Гепаностика» («Органон техника»). В качестве положительных учитываются сыворотки, в которых содержится не менее 10 mME/мл антител к HbsAg.

Результаты исследования отражены в таблице 3.

По результатам исследований установлено, что использование ИК в дозе ПО 0,2 мг/мышь повышает иммуногенную активность в три раза (ЕД₅₀ - 0,03 мкг антигена при средней оптической плотности, определяемой в положительных сыворотках, равной 0,455), что свидетельствует о том, что исследуемый препарат ПО повышает иммуногенную активность вакцины, снижая ее иммунизирующую дозу.

Пример 5. Изучение иммуногенной активности комбинированной вакцины против гепатита А и гепатита В (дивакцины).

Исследована вакцина против гепатитов А и В, содержащая вакцину против гепатитов А и В очищенную концентрированную адсорбтрованную инактивированную жидкую, производства ДГУ ЭПП «Вектор-БиАльгам» ГНЦ ВБ «Вектор» (г.Новосибирск) и ИК с полиоксидонием. Изначальное содержание антигена вируса гепатита А (АГ ВГА) составило 50 ИФА на дозу и 20 мкг Hbs Ag вируса ГВ.

С целью оценки универсальности действия вакцины с ПО дивакцина готовилась в двух вариантах по компоненту В: с применением компонента В производства НПК «Комбиотех» и вакцины «Шанвак В» в количестве по 10 мкг/мл, компонент А использовали в количестве 25-40 ИФА ед.

Эксперименты проводят на морских свинках (массой 250-300 г), белых аутбредных мышах, самцах (массой 18÷20 г) и мышах Balb/c (массой 12-14 г), сформированных в группы по 8-10 животных. Препараты с различным содержанием АГ ВГА, ВГВ и ПО вводят однократно в объеме 1,0 мл подкожно в две точки или внутрибрюшинно.

У морских свинок на 30-45 сутки берется кровь из сердца и исследуется в ИФА на содержание антител к ВГА и ВГВ.

У иммунизированных мышей из полученной на 28-30 сутки крови готовят сыворотку и определяют в ней специфические антитела к ВГА и ВГВ с помощью ИФА.

Для определения специфических антител в сыворотке крови экспериментальных животных используют коммерческие ИФА-тест системы для выявления суммарных антител к вирусу гепатита А (ВГА) и Hbs Ag. Чувствительность тест-систем, а также уровень антител в сыворотках животных определяли в сравнении с ОСО.

Иммуногенный эффект компонента А оценивают по показателям 50% иммунизирующей дозы (ЕД₅₀), которую рассчитывают по методу Кербера, а также по уровню специфических антител к ВГА и ВГВ у животных, который оценивают по показателям их титров.

Определение иммуногенности компонента В (Hbs Ag) проводили в опытах на мышах in vivo и по содержанию Hbs Ag в тесте in vitro.

Оценка иммуногенности проводилась из условия, что в тесте in vivo дивакцина должна стимулировать выработку антител к гомологичному подтипу Hbs Ag (анти-Hbs) у однократно иммунизированных мышей. Отношение дозы ОСО иммуногенной активности вакцины гепатита В (ОСО 42-28-302-00), вызывающей выработку анти- Hbs у 50% мышей (ИД₅₀) к ИД₅₀ испытуемой дивакцины должно быть не менее 0,5.

В тесте in vitro в каждой испытуемой серии дивакцины содержание Hbs Ag по сравнению с ОСО активности Hbs Ag (ОСО 42-28-311-00) должно быть в пределах ±15% от номинальной величины. Определение проводят методом трехфазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем для выявления Hbs Ag с чувствительностью не более 0,1 МЕ\мл в соответствии с инструкцией по применению.

Исследованы вакцинные препараты 19 комбинаций различных доз антигенов ВГА и ВГВ (в том числе с Hbs Ag различного происхождения), включающих ПО и без ПО. В исследуемых вариантах сочетанных форм вакцины, антигены содержались в дозах, регламентированных в нормативных документах (НД) на монопрепараты, а также уменьшенные в 2 и 4 раза при концентрациях в них ИК с ПО 100, 200 и 500 мкг на дозу.

Испытания показали, что при использовании всех указанных концентраций ИК наблюдается усиление иммунного ответа. При этом установлено, что иммуногенность дивакцины по компоненту гепатита В не зависит от происхождения Hbs Ag и от субстрата его производства.

Наиболее оптимальной по нагрузке антигенов ВГА и ВГВ и по содержанию ПО показала себя композиция вакцины, содержащая половинные дозы указанных антигенов и ПО в концентрации 200 мкг на дозу (Таблица 4).

6. Изучение эффективности иммунизации антирабической вакциной в сочетании с ИК.

Наблюдения проводят в 5-ти группах мышей. Животным первой группы вакцинацию не проводят, эти мыши служат отрицательным контролем. Животных второй группы вакцинируют внутрибрюшинно антирабической инактивированной культуральной вакциной из штамма «Щелково» (АВ) в дозе 0,25 ME (0,5 мл) двукратно с интервалом 7 дней. Дозу и схему вакцинации выбирают в соответствие с инструкцией по применению вакцины. В третьей и четвертой группах вакцинацию проводят в сочетании с ИК при содержании ПО, соответственно, 0,5 мг и 0,04 мг в дозе на животное. Животным пятой группы вводят только ИК.

На 21 день от первой вакцинации мышам всех экспериментальных групп интрацеребрально вводят вирус бешенства штамма CVS в разрешающих дозировках (5 и 50 LD₅₀). Наблюдение за животными и подсчет погибших осуществляют в течение 30 дней после разрешения.

Результаты исследования, приведенные в таблице 5, свидетельствуют об увеличении выживаемости животных, вакцинированных в соответствии с изобретением при последующем заражении вирусом. Таким образом, введение антирабической вакцины в сочетании с ИК способствует повышению уровня защиты животных при заражении вирусом бешенства, т.е. повышению эффективности специфической иммунопрофилактики против бешенства.

Полевые клинические испытания сочетанного применения вакцинных препаратов с ИК, проведенные на базах Центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем МЗ РФ, Центра санитарно-эпидемиологического надзора МО РФ и Комитета социальной защиты населения г.Москвы показали, что использование вирусных вакцин в сочетании с ИК, не приводит к повышению реактогенности и полностью безопасно, в том числе и для введения детям дошкольного возраста. При этом у детей 3÷6 лет, привитых вакцинами с ИК, наблюдается значительное снижение заболеваемости верхних дыхательных путей, детскими инфекционными и соматическими заболеваниями по сравнению с группами детей, привитых без ИК.

Во всех случаях формирование групп наблюдения проводили методом случайно-выборочного распределения.

Пример 6. Исследование иммунного ответа на введение вакцины против гепатита А «Геп-А-ин-Вак» без ИК и с ИК.

Для проведения клинических испытаний отобраны 206 человек, не имевших в крови специфических антител - анти-ВГА. Испытуемые были распределены на три группы. Лица первой группы (69 человек) были привиты коммерческой вакциной «ГЕП-А-ин-ВАК», а лица второй (69 чел.) и третьей (68 чел.) групп получили вакцину «ГЕП-А-ин-ВАК-ПОЛ» с содержанием ПО 0,5 мг и 1,5 мг на дозу вакцины соответственно. Препараты вводили в дельтовидную мышцу двукратно с интервалом 6 месяцев.

Оценку иммуногенности вакцин проводили по двум показателям - процент сероконверсий и уровень титров анти-ВГА. С этой целью были произведены три забора венозной крови: через 1 и 6 месяцев после первой вакцинации и через 1 месяц после второго введения препаратов.

Определение в сыворотках крови анти-ВГА проводили посредством ИФА с помощью коммерческой тест-системы «Вектор-геп-антитела» (ЗАО «Вектор-Майстар», г.Новосибирск) с чувствительностью от 6 мМЕ/мл до 12,5 мМЕ/мл. Положительным результатом в отношении антигенной активности препаратов принимали уровень анти-ВГА 10 мМЕ/мл и выше. Сыворотки, имевшие титр антител до 10 мМЕ/мл определялись как отрицательные.

Полученные результаты отражены в таблице 6 и, практически, полностью соответствуют данным, полученным на животных (пример 1).

Пример 6. Изучение иммуногенной активности вакцины против гепатита В.

Под наблюдением находились 2 группы лиц в возрасте 18÷21 года.

В исследованиях использовали рекомбинантную дрожжевую жидкую вакцину против гепатита В «Энджерикс В» фирмы Смит Кляйн Бичем.

Лицам первой двум группы наблюдения вводили только вакцину против гепатита В, лицам второй группы вводили ту же вакцину против гепатита В, в сочетании с ИК.

ИК в дозе 6 мг растворяли в 1 мл физиологического раствора и вводили внутримышечно в дельтовидную мышцу одновременно с введением коммерческой вакцины против гепатита В.

Схема иммунизации состояла из трех прививок, которые проводились с интервалом в 1 месяц (0-1-2).

По результатам исследований установлено, что применение ИК в сочетании с вакциной против вируса гепатита В вызвало повышение уровня СГТА после полного курса вакцинации в 1,3 раза.

Потенциальные возможности ИК в сочетании с ПО проявляются в отношении, практически, всех исследуемых вакцин. Испытания на животных дают положительный результат во всех видах испытаний. Отрицательного воздействия ПО при применении его в пределах разрешенных доз в комбинации с вакцинами не обнаружено.

Таким образом, приведенные выше примеры доказывают, что описываемые вирусные вакцины повышают специфический иммунный ответ и снижают уровень инфекционной заболеваемости различной этиологии.

Программа доклинического изучения безопасности вакцин осуществлялась в соответствии с существующими нормативными и методическими документами и включала в себя оценку острой и хронической токсичности, местного раздражающего действия, пирогенности, влияния на кровеносную систему и на центральную нервную систему, в том числе с использованием фармакологических проб.

По результатам исследований токсичности установлено, что реакций на месте введения описываемых вакцин не наблюдалось, признаков заболевания не выявлено. Результаты клинических наблюдений и клинико-медицинских исследований свидетельствуют об отсутствии отрицательного воздействия препаратов на организм.

Таблица 1. Показатели иммуногенной активности вакцины «Гап-А-ин-Вак» в сочетании с иммуногенной композицией (ИК) с содержанием полиоксидония (ПО) 0,5 мг, 0,2 мг и 0,04 мг в дозе.
Способ введения вакцины		Вакцина без ИК (контроль) ИД 50 (ИФА ед)	Вакцина + ИК
			ИД 50 (ИФА ед.)/разница с контролем
			ПО 0,5 мг		ПО 0,2 мг		ПО 0,04 мг
Цельная (внутрибрюш. введение)		5,33	3,75/1,58		3,75/1,58		4,46/0,87
Цельная (Подкожное введение)		5,99	4,44/1,55		3,50/2,49		5,59/0,4
Конъюгат АГ ВГА с ПО (Подкожное введение)		7,24	9,2/-1,96		5,29/1,95		7,24/0
Таблица 2. Количество животных, в сыворотке которых обнаружены специфические антитела к вирусу гепатита А. (Иммунные животные/% к животным в группе)
Разведение вакцины	Вакцина без ИК		Вакцина + ИК
			ПО 0,5 мг	ПО 0,2 мг		ПО 0,04 мг
Внутрибрюшинное введение (количество животных в группе 8)
Цельная	7/87,5		6/75	8/100		7/100
1/4	6/75		8/100	7/87,5		8/100
1/16	4/50		5/62,5	4/50		2/25
Подкожное введение (количество животных в группе 10)
1/2	1/10		10/100	10/100		10/100
1/4	9/90		10/100	10/100		9/90
1/8	4/40		6/60	9/90		6/66,6
1/16	3/30		4/40	4/40		1/10

Таблица 5. Выживаемость животных после заражения вирусом бешенства, вакцинированных антирабической вакциной (АВ) и при использовании ее в сочетании с ИК при содержании ПО 0,5 мг и 0,04 мг в дозе
№ группы	Условия эксперимента						Выживаемость (%)
	АВ (доза, ME)		АВ + ИКПО (Доза ПО, мг/мыш.)
1	-		-				0
2	0,25		-				30
3	0,25		0,04				44
4	0,25		0,5				56
5	-		0,5				0
Таблица 6. Исследование иммуногенности вакцины «Геп-А-ин-Вак» в сочетании с ИК
Препарат		Через 1 мес. после 1-го введения			Через 6 мес. после 1-го введения			Через 1 мес. После 2-ого введения
		СГТА		% сероконв.	СГТА	% сероконв.		СГТА	% сероконв.
«Геп-А-ин-Вак»		106,7		75,0	115,4	88,8		589,4	100,0
«Геп-А-ин-Вак» + ИК (ПО 0,5 мг)		111,3		82,5	154,0	91,1		946,8	100,0
«Геп-А-ин-Вак» + ИК (ПО 1,5 мг)		112,2		82.8	144,5	92,4		777,4	95,8

Claims (12)

1. Вирусная вакцина, характеризующаяся тем, что она представляет собой вирусный антиген или вакцинный препарат, смешанный с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливилпирролидон и полиоксидоний, при соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин 0,05-0,07 Маннит 5-25 Поливинилпирролидон 4-23 Полиоксидоний до 100

с содержанием полиоксидония 0,04-12 мг в дозе.

2. Вакцина против гепатита А, характеризующаяся тем, что она содержит антиген вируса гепатита А (АГ ВГА) или вакцинный препарат против гепатита А, смешанный с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливилипирролидон и полиоксидоний при соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин 0,05-0,07 Маннит 5-25 Поливинилпирролидон 4-23 Полиоксидоний до 100

с содержанием полиоксидония 0,2-2,5 мг в дозе.

3. Вакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит в качестве АГ ВГА антигены, полученные из штамма ЛБА-86 вируса гепатита А в культуре перевиваемых клеток 4647 с содержанием в дозе

АГ ВГА 20-80 ИФА ед. Полиоксидиния 0,2-1,5 мг

4. Вакцина по п.2, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного препарата она содержит культуральную инактивированную вакцину гепатита А "ГЕП-А-ин-ВАК", включающую антигены, полученные из штамма ЛБА-86 вируса гепатита А в культуре перевиваемых клеток 4647, при следующем содержании компонентов в дозе:

"ГЕП-А-ин-ВАК", содержащая   антигены вируса гепатита 20-80 ИФА ед. Полиоксидиний 0,2-1,5 мг

5. Вакцина против гепатита В, характеризующая тем, что она содержит антиген вируса гепатита В или вакцинный препарат против гепатита В, смешанный с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливилипирролидон и полиоксидоний при соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин 0,05-0,07 Маннит 5-25 Поливинилпирролидон 4-23 Полиоксидоний До 100

с содержанием полиоксидония 0,1-10 мг в дозе.

6. Вакцина по п.5, отличающаяся тем, что она содержит в качестве антигена вируса гепатита В поверхностный антиген вируса гепатита В HbsAg с содержанием в дозе

HbsAg 2,5-20 мкг Полиоксидония 0,1-10 мг

7. Вакцина по п.5, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного препарата против гепатита В она содержит рекомбинантную инактивированную вакцину против вируса гепатита В, включающая HBsAg, при следующем содержании компонентов в дозе:

Вакцина против вируса гепатита В,   содержащая HbsAg 5-20 мкг Полиоксидоний 0,1-10 мкм

8. Вакцина против гепатита А и гепатита В, характеризующаяся тем, что она содержит вакцинный препарат, включающий одновременно АГ ВГА и HBsAg или вакцинные препараты против гепатита А и против гепатита В, смешенные с иммуногенной композицией, включающей бета-каротин, маннит, поливилпирролидон и полиоксидоний, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин 0,05-0,07 Маннит 5-25 Поливинилпирролидон 4-23 Полиоксидоний до 100

с содержанием полиоксидония 0,1-10 мг в дозе.

9. Вакцина по п.8, отличающаяся тем, что она содержит в качестве АГ ВГА антигены, полученные из штамма ЛБА-86 вируса гепатита А в культуре перевиваемых клеток 4647, а содержание компонентов в дозе составляет

АГ ВГА 20-80 ИФА ед. HbsAg 2,5-20 мкг Полиоксидония 0,1-10 мг

10. Вакцина по п.8, отличающаяся тем, что она содержит в качестве вакцинного препарата против вируса гепатита вакцину А "ГЕП-А-ин-ВАК", а в качестве препарата против гепатита В - рекомбинантную инактивированную вакцину против вируса гепатита В, включающую HbsAg, при следующем содержании компонентов в дозе:

"ТЕП-А-ин-ВАК", с   содержанием АГ ВГА 20-80 ИФА ед Рекомбинантная инактивированная   вакцина против вируса В,   с содержанием HbsAg 2,5-20 мкг Полиоксидония 0,1-10 мг

11. Вакцина против вируса бешенства, характеризующаяся тем, что она содержит препарат против вируса бешенства и иммуногенную композицию, включающую бета-каротин, маннит, поливилпирролидон и полиоксидоний, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Бета-каротин 0,05-0,07 Маннит 5-25 Поливинилпирролидон 4-23 Полиоксидоний до 100

с содержанием полиоксидония 0,04-5 мг в дозе.

12. Вакцина по п.11, отличающаяся тем, что в качестве препарата против вируса бешенства используют антирабическую инактивированную культуральную вакцину, содержащую вирус бешенства с активностью не менее 2,5 МЕ, а количество полиоксидония в дозе составляет 0,04-5 мг.