RU2253119C1

RU2253119C1 - Method for predicting therapeutically resistant reactive depressions

Info

Publication number: RU2253119C1
Application number: RU2004124099/15A
Authority: RU
Inventors: Д.Г. Покровский (RU); Д.Г. Покровский; А.К. Зиньковский (RU); А.К. Зиньковский; А.А. Михайленко (RU); А.А. Михайленко
Priority date: 2004-08-06
Filing date: 2004-08-06
Publication date: 2005-05-27

Abstract

FIELD: medicine, psychiatry, neurology.

SUBSTANCE: the innovation deals with detecting sphingomyelins due to stream thin-layer chromatography. Moreover, one should detect the degree of depression manifestation by Hamilton's scale and determine quantitative amount of phosphatidyl ethanolamines, sphingomyelins and phosphatidyl ethanolamines to calculate laukocytic formula, and at availability of lymphocytes being above 25% and monocytes being above 5% and phosphatidyl ethanolamines value being 32.6 ± 1.6, sphingomyelins 27.6 ± 1.1 and phosphatidyl ethanolamines being 27.4 ± 2.7 it is possible to diagnose therapeutically resistant reactive depression. Method is simple at application, enables to detect pathobiochemical and immunological markers of therapeutic resistance in case of reactive depression and control patient's state both at biochemical and immunological levels due to objectivizing clinical evaluation of patient's state at monitoring therapy efficiency.

EFFECT: higher accuracy of diagnostics.

1 ex, 1 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к психиатрии и неврологии. Депрессия - одно из наиболее распространенных расстройств, встречающихся как в психиатрической, так и в соматической практике. Около 30% больных депрессиями остаются рефракторными к адекватной тимоаналептической терапии, чем обусловлена необходимость выявления способов эффективной предикции и терапии резистентных депрессий.The invention relates to medicine, namely to psychiatry and neurology. Depression is one of the most common disorders found in both psychiatric and somatic practice. About 30% of depressed patients remain refractory to adequate thymoanaleptic therapy, which necessitates the identification of effective methods for predicting and treating resistant depression.

Способ позволяет повысить точность диагностики резистентности при реактивной депрессии путем определения биохимических и иммунологических маркеров, являющихся предикторами рефрактерности к антидепрессантной терапии. В ходе тестирования выявляются лица, имеющие патобиохимические и иммунологические признаки нарушений деятельности нервной системы, которые в дальнейшем будут проявляться или уже проявляются на момент обследования депрессивной симптоматикой, резистентной к современным антидепрессантным психофармакологическим средствам. Способ обеспечивает высокую точность определения лиц с указанной симптоматикой для уточнения динамики состояния в клинике.The method allows to increase the accuracy of diagnosis of resistance in reactive depression by determining biochemical and immunological markers, which are predictors of refractoriness to antidepressant therapy. During testing, individuals with pathobiochemical and immunological signs of disorders of the nervous system are identified, which will later manifest or already appear at the time of the examination with depressive symptoms that are resistant to modern antidepressant psychopharmacological agents. The method provides high accuracy in determining persons with the specified symptoms to clarify the dynamics of the state in the clinic.

Аналогом предлагаемого изобретения авторы предлагают способ, описанный в монографии “Неврозы и перекисное окисление липидов” // Александровский Ю.А., Поюровский М.В., Незнамов Г.Г., - М.: Наука, 1991, 140 с.An analogue of the present invention, the authors propose a method described in the monograph “Neuroses and lipid peroxidation” // Alexandrovsky Yu.A., Poyurovsky MV, Neznamov GG, - M .: Nauka, 1991, 140 pp.

Выявлено, что в условиях хронического эмоционального стресса, лежащего в основе депрессивного страдания, в центральной нервной системе имеется достаточно условий для возникновения активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) по нескомпенсированному варианту. Авторами установлено, что активация ПОЛ, проявляющаяся в повышении содержания в крови гидроперекисей липидов и малонового диальдегида, наиболее выражена у больных с небольшой (до 6 мес) длительностью невротических расстройств. С увеличением давности заболевания наблюдалось постепенное уменьшение концентрации в крови больных продуктов ПОЛ, что соответствует “истощению” функциональных возможностей стресс-реализующих систем и формированию затяжных невротических состояний. При этом выявленные биохимические нарушения имеют широкую индивидуальную вариабельность, существенно снижающие их диагностическую ценность.It was revealed that under the conditions of chronic emotional stress that underlies depressive suffering, the central nervous system has enough conditions for the activation of lipid peroxidation (LPO) according to the uncompensated version. The authors found that the activation of lipid peroxidation, which manifests itself in an increase in blood levels of lipid hydroperoxides and malondialdehyde, is most pronounced in patients with a short (up to 6 months) duration of neurotic disorders. With an increase in the duration of the disease, a gradual decrease in the concentration in the blood of patients with FLOOR products was observed, which corresponds to the “depletion” of the functionality of stress-implementing systems and the formation of protracted neurotic conditions. Moreover, the revealed biochemical disturbances have wide individual variability, which significantly reduces their diagnostic value.

В качестве прототипа предлагаемого изобретения заявители предлагают “Способ диагностики невроза” // Патент № 1720000, бюлл. №10, 15.03.92. Кровь больного в объеме 0,1 мл экстрагируют смесью хлороформ : метанол 1:2 (по объему), фильтруют, трижды промывают осадок на фильтре смесью хлороформ : метанол 2:1. Фильтрат отмывают 0,02% CaCl₂, а затем трижды смесью хлороформметанол 0,02% CaCl₂ (3:48), упаривают и растворяют в 5-10 мкл смеси хлороформ : метанол 2:1. После этого исследуемый образец наносят на хроматографическую пластинку. Выделение фракции сфингомиелинов осуществляют методом проточной горизонтальной хроматографии в системе хлороформ : метанол : 7 н. аммиак 13:7:1. Идентификацию сфингомиелинов проводят по Rf=0,31, количественное содержание сфингомиелинов определяют по фосфору после проявления хроматограммы серной кислотой и рассчитывают в мкмоль фосфора на литр. При значениях 2000 мкмоль фосфора и выше диагностируют невроз.As a prototype of the invention, the applicants offer a "Method for the diagnosis of neurosis" // Patent No. 1720000, bull. No. 10, 03/15/92. The patient’s blood in a volume of 0.1 ml was extracted with a mixture of chloroform: methanol 1: 2 (by volume), filtered, the filter cake was washed three times with a mixture of chloroform: methanol 2: 1. The filtrate is washed with 0.02% CaCl ₂ and then three times with a mixture of chloroform methanol 0.02% CaCl ₂ (3:48), evaporated and dissolved in 5-10 μl of a mixture of chloroform: methanol 2: 1. After that, the test sample is applied to a chromatographic plate. The sphingomyelin fraction is isolated by horizontal flow chromatography in the chloroform: methanol system: 7 n. ammonia 13: 7: 1. Identification of sphingomyelins is carried out according to Rf = 0.31, the quantitative content of sphingomyelins is determined by phosphorus after the appearance of the chromatogram with sulfuric acid and calculated in micromole of phosphorus per liter. At values of 2000 μmol of phosphorus and higher, neurosis is diagnosed.

Недостатки прототипа, на взгляд авторов, следующие:The disadvantages of the prototype, in the opinion of the authors, are as follows:

1. Позволяет регистрировать патологическое увеличение содержания лишь одной фракции фосфолипидов (СФМ).1. Allows you to register a pathological increase in the content of only one fraction of phospholipids (SPS).

2. Не учитывает вовлеченность в генез депрессивного состояния иммунных механизмов.2. Does not take into account the involvement in the genesis of a depressed state of the immune mechanisms.

3. Неприменим для диагностики реактивных резистентных депрессий.3. Not applicable for the diagnosis of reactive resistant depression.

В отличие от рассмотренного выше способа-прототипа, предлагаемый новый способ выявляет среднестатистические результаты для когорты терапевтически резистентных больных реактивными депрессиями. Значимы показатели иммунитета в виде моноцитоза >5% и лимфоцитоза >25% в лейкоцитарной формуле общего анализа крови в сочетании с показателями фосфатидилэтаноламинов (ФЭА) - 32,6±1,6%, сфингомиелинов (СФМ) - 27,6±1,1%, и фосфатидилхолинов (ФХ) - 27,4±2,7%, (р<0,001).In contrast to the prototype method discussed above, the proposed new method reveals average results for a cohort of therapeutically resistant patients with reactive depressions. Significant indicators of immunity in the form of monocytosis> 5% and lymphocytosis> 25% in the leukocyte formula of a general blood test in combination with indicators of phosphatidylethanolamines (PEA) - 32.6 ± 1.6%, sphingomyelins (SPS) - 27.6 ± 1.1 %, and phosphatidylcholines (FC) - 27.4 ± 2.7%, (p <0.001).

Способ осуществляют следующим образом. Для оценки обмена фосфолипидов исследуют цельную кровь в объеме 0,1 мл методом проточной тонкослойной хроматографии, описанном в прототипе. Известно, что фосфолипиды, являясь основным структурно-функциональным компонентом биологических мембран, принимают непосредственное участие в процессах трансмембранного переноса всех метаболитов, участвуют в процессах возбудимости клетки, энергетическом их обмене, биосинтезе белка, а также выполняют роль вторичных мессенджеров. Доказана интенсификация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) при различных по генезу психических заболеваниях. При этом установлено, что хронический эмоциональный стресс, лежащий в основе депрессивного страдания, приводит к состоянию метаболической внутриклеточной гипоксии вследствие преобладания процессов гликолиза над окислительным фосфорилированием, то есть анаэробизма над тканевым дыханием. В этих условиях нарушается утилизация глюкозы (гликогена), что в свою очередь приводит к блокированию образования из аминоспирта сфингозида - церамида. При этом за счет активации специфических трансфераз образуется повышенное количество СФМ (часть которого расходуется на увеличение синтеза ФЭА), что может служить гиперлипогенетическим источником энергетического депо в условиях интрацеллюлярной гипоксии. Также следует принять во внимание возможные взаимопревращения ФЭА и ФХ, входящих в состав многочисленных белково-липидных комплексов. Эти реакции протекают преимущественно в митохондриальных мембранах и подтверждают данные об исключительно важном значении аминосодержащих фосфолипидов в процессах окислительного фосфорилирования. Таким образом, обнаруживаемые с помощью тонкослойной хроматографии повышение содержания СФМ, ФЭА и снижение содержания ФХ в крови больных с терапевтически резистентными реактивными депрессиями может быть обусловлено характерными для депрессивных состояний гипоксическими процессами, и как следствие, выраженными изменениями биомембран (табл.1).The method is as follows. To assess the exchange of phospholipids, whole blood is examined in a volume of 0.1 ml by the method of thin-layer flow chromatography described in the prototype. It is known that phospholipids, being the main structural and functional component of biological membranes, are directly involved in the processes of transmembrane transfer of all metabolites, participate in the processes of cell excitability, their energy metabolism, protein biosynthesis, and also act as secondary messengers. The intensification of lipid peroxidation (LPO) processes has been proven for mental diseases of various genesis. It was found that chronic emotional stress, which underlies depressive suffering, leads to a state of metabolic intracellular hypoxia due to the predominance of glycolysis processes over oxidative phosphorylation, that is, anaerobism over tissue respiration. Under these conditions, the utilization of glucose (glycogen) is disrupted, which in turn leads to blocking the formation of sphingoside - ceramide from the amino alcohol. In this case, due to the activation of specific transferases, an increased amount of SFM is formed (part of which is spent on increasing the synthesis of PEA), which can serve as a hyperlipogenetic source of energy depot under conditions of intracellular hypoxia. It is also necessary to take into account the possible interconversions of PEA and PF, which are part of numerous protein-lipid complexes. These reactions proceed mainly in mitochondrial membranes and confirm the data on the extremely important value of amino-containing phospholipids in the processes of oxidative phosphorylation. Thus, an increase in the content of SPS, PEA and a decrease in PF in the blood of patients with therapeutically resistant reactive depressions detected by thin-layer chromatography can be due to hypoxic processes characteristic of depressive states and, as a result, marked changes in biomembranes (Table 1).

Таблица 1.Table 1. Изменения содержания фосфолипидов крови (в % М±м), и показателей иммунитета у больных реактивными терапевтически резистентными депрессиями.Changes in the content of blood phospholipids (in% M ± m), and immunity indices in patients with reactive therapeutically resistant depressions. ФракцииFractions Норма (контрольная группа)Norma (control group) Терапевтически резистентная реактивная депрессияTherapeutically Resistant Reactive Depression Показатели иммунитета при терапевтически резистентной реактивной депрессииImmunity indicators for therapeutically resistant reactive depression ФЭАFEA 25,4±1,225.4 ± 1.2 32,6±1,6*32.6 ± 1.6 * Содержание лимфоцитов более 25% *Lymphocyte count more than 25% * Содержание моноцитов более 5%*The content of monocytes is more than 5% * СФМSPS 17,75±1,117.75 ± 1.1 27,6±1,1*27.6 ± 1.1 * ФХFH 46,87±2,246.87 ± 2.2 27,4±2,7*27.4 ± 2.7 * Примечание: различия между нормой и терапевтически резистентной депрессией: * - р<0,001Note: differences between normal and therapeutically resistant depression: * - p <0.001

В современных исследованиях показано, что иммунная система посредством органоспецифических иммунных реакций гуморального и клеточного типа принимает непосредственное участие в регуляции деятельности нервной систем, в частности выявлены особенности взаимосвязей иммунологических и клинических параметров при депрессивных расстройствах. Отмечено при этом, что с увеличением давности психического заболевания возрастает роль иммунной системы в патогенезе депрессии, в связи с чем повышается риск иммунодефицитных состояний.Modern studies have shown that the immune system, through organ-specific immune responses of the humoral and cellular type, is directly involved in the regulation of the activity of the nervous systems, in particular, the features of the relationship of immunological and clinical parameters in depressive disorders have been identified. It was noted at the same time that with an increase in the duration of mental illness, the role of the immune system in the pathogenesis of depression increases, and therefore the risk of immunodeficiency states increases.

Способ включает изучение лейкоцитарной формулы общего клинического анализа крови с целью выявления иммунологических маркеров резистентности депрессии к терапии. Материалом для общего клинического анализа крови является цельная капиллярная кровь. Приготовленный мазок фиксируют метиловым спиртом 5 мин, после чего окрашивают по Романовскому - Гимзе. Краска стандартная имеет в своем составе азур II, водорастворимый желтый эозин, метиловый спирт и глицерин. Рабочий раствор краски готовят путем разведения 3 капель готовой краски 1,0 мл дистиллированной воды. Продолжительность окраски 40 минут. Окрашенные мазки изучают под микроскопом с иммерсионной системой (окуляр 10, объектив 90). Для подсчета лейкоцитарной формулы пользуются 11-клавишным счетчиком, фиксирующим количества каждого вида лейкоцитов в процентах.The method includes the study of the leukocyte formula of a general clinical blood test in order to identify immunological markers of depression resistance to therapy. The material for the general clinical blood test is whole capillary blood. The prepared smear is fixed with methyl alcohol for 5 minutes, after which it is stained according to Romanovsky - Giemsa. Standard paint incorporates Azur II, water-soluble yellow eosin, methyl alcohol and glycerin. A working paint solution is prepared by diluting 3 drops of the finished paint with 1.0 ml of distilled water. Duration of painting 40 minutes. Stained smears are examined under a microscope with an immersion system (eyepiece 10, objective 90). To calculate the leukocyte formula, an 11-key counter is used that fixes the percentage of each type of leukocyte.

Выявленные у когорты терапевтически резистентных больных реактивными депрессиями среднестатистические показатели моноцитоза свидетельствуют о напряженности фагоцитарного звена иммунитета, лимфоцитоз показывает дефект клеточного звена иммунной системы, что подтверждает неоднородность и многоуровневость нейробиохимических механизмов формирования резистентности депрессии к тимоаналептической терапии.The average statistical indicators of monocytosis revealed in the cohort of therapeutically resistant patients with reactive depressions indicate the intensity of the phagocytic immunity link, lymphocytosis indicates a defect in the cellular link of the immune system, which confirms the heterogeneity and multi-level neurobiochemical mechanisms of the formation of depression resistance to thymoanaleptic therapy.

Обследовано 85 больных с реактивными депрессиями, 50 женщин и 35 мужчин от 20 до 50 лет, средний возраст 34±3,2 года. По результатам тимоаналептической терапии пациенты разделились на респондеров (40 пациентов), обнаруживших положительную динамику, и нонреспондеров (45 пациентов), у которых значимых позитивных сдвигов в процессе терапии не отмечено. Клинические исследования соответствовали критериям МКБ-10, дополнены шкалой депрессии М. Гамильтона (21 вопрос). Контроль составила группа из 50 практически здоровых лиц, сопоставимая по полу и возрасту. В обследование не включались лица, перенесшие болезнь Боткина, имеющих признаки хронического гепатита или цирроза печени. Параклинические исследования включали оценку лейкоцитарной формулы клинического анализа крови и изучение фосфолипидного спектра цельной крови методом проточной тонкослойной хроматографии.85 patients with reactive depressions, 50 women and 35 men from 20 to 50 years old, mean age 34 ± 3.2 years, were examined. According to the results of thymoanaleptic therapy, the patients were divided into responders (40 patients) who found positive dynamics and non-responders (45 patients), in whom no significant positive changes in the treatment process were noted. Clinical studies met the criteria of ICD-10, supplemented by a scale of depression of M. Hamilton (21 questions). The control was a group of 50 healthy individuals, comparable by gender and age. The examination did not include persons who had Botkin's disease with signs of chronic hepatitis or cirrhosis. Paraclinical studies included the assessment of the leukocyte formula of a clinical blood test and the study of the phospholipid spectrum of whole blood by thin-layer chromatography.

Преимущества данного способа диагностики терапевтически резистентной реактивной депрессии:The advantages of this method for the diagnosis of therapeutically resistant reactive depression:

1. При использовании в клинике позволяет обнаружить патобиохимические и иммунологические маркеры терапевтической резистентности при реактивной депрессии.1. When used in a clinic, it can detect pathobiochemical and immunological markers of therapeutic resistance in reactive depression.

2. Применение заявленного метода позволяет контролировать на биохимическом и иммунологическом уровнях состояние пациента, объективизируя клиническую оценку состояния при мониторинге эффективности лечения.2. The application of the claimed method allows you to control the patient’s state at the biochemical and immunological levels, objectifying the clinical assessment of the condition while monitoring the effectiveness of treatment.

3. Способ диагностики прост в применении, пригоден для использования в клинических условиях.3. The diagnostic method is easy to use, suitable for use in a clinical setting.

КЛИНИЧЕСКИЙ ПРИМЕР. Больная Н, 45 лет. История болезни №916. Диагноз: Дистимия. Заболевания связывается с длительной объективно неразрешимой психотравмирующей ситуацией. Клинически обнаруживает признаки депрессивного эпизода средней степени выраженности. По шкале депрессии М. Гамильтона 20,5 баллов. Проведен клинический анализ крови, выявлено лимфоцитов - 27% и моноцитов - 6%. Проба крови исследовалась методом тонкослойной хроматографии, содержание ФЭА составило - 34,2%, СФМ - 29,5% и ФХ - 25,3%, что позволяет выявить терапевтически резистентную реактивную депрессию.CLINICAL EXAMPLE. Patient N, 45 years old. Case history No. 916. Diagnosis: Dysthymia. The disease is associated with a long objectively insoluble psycho-traumatic situation. Clinically reveals signs of a depressive episode of moderate severity. On the scale of depression, M. Hamilton 20.5 points. A clinical blood test was performed, lymphocytes - 27% and monocytes - 6% were detected. A blood sample was studied by thin-layer chromatography, the PEA content was 34.2%, SPS 29.5% and PF 25.3%, which makes it possible to identify therapeutically resistant reactive depression.

Claims

A method for diagnosing therapeutically resistant reactive depressions, including the determination of sphingomyelins by thin layer chromatography, characterized in that the Hamilton scale determines the severity of depression, quantifies the content of phosphatidylethanolamines, sphingomyelins and phosphatidylethanolamines, counts the leukocyte formula and more than 5% of lymphocytes % and the value of phosphatidylethanolamines 32.6 ± 1.6, sphingomyelins 27.6 ± 1.1 and phosphatidylethanolamines 27.4 ± 2.7 diagnostics comfort of treatment-resistant depression reactive.