RU2250106C1 - Способ получения олигосахаридов хитозана (варианты) - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области медицины. Сущность изобретения заключается в том, что для получения олигосахаридов хитозана проводят 30-50-минутный ферментативный гидролиз 5% раствора хитозана. Затем в раствор дополнительно вносят хитозан до общей концентрации 10 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию до общего времени 20-24 часа. По второму варианту вначале проводят 30-50 минутный ферментативный гидролиз 5% раствора хитозана, затем в раствор дополнительно вносят хитозан до общей концентрации 10 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию в течение еще 30-50 минут. После чего в раствор вновь вносят хитозан до общей концентрации 15 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию до общего времени 20-24 часа. Согласно третьему варианту в водный раствор, содержащий органические кислоты, одновременно вносят хитозан в количестве 10-15 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию в течение 20-24 часов. Во всех вариантах в качестве органических кислот используют смесь уксусной и аскорбиновой кислот, уксусную кислоту, смесь уксусной и янтарной кислот, аскорбиновой и янтарной. Изобретение обеспечивает повышение выхода целевого продукта в 2-3 раза без снижения его показателей. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения олигосахаридов хитозана для лечения дислипопротеидемии, атеросклероза, туберкулеза, гипертонии и для использования в случае нарушения сознания при алкогольной токсикации, а также в медицинской промышленности в качестве биологически активных добавок.

Хитозан представляет собой полимер биологического происхождения. С химической точки зрения хитозан представляет собой деацетилированный, обычно более 70%, хитин (поли-2-ацетамидо-2-дезокси-Д-глюкоза).

Хитозаны, как обычные полисахариды, достаточно легко олигомеризуются различными методами, в частности ферментативной олигомеризацией.

Известен способ получения олигосахаридов хитозана для лечения расстройств печени после принятия алкоголя, включающий в себя растворение хитозана в уксусной или соляной кислоте с концентрацией хитозана до 5% с последующей олигомеризацией в присутствии ферментов. Патент КР 142373 от 31.03.1998 г.

Наиболее близким аналогом является способ получения олигосахаридов хитозана с целью получения лекарственного средства, эффективного для предотвращения заболевания почек, эффективно снижающего концентрацию неорганического фосфора в крови.

Способ заключается в том, что хитин, изготовленный из панцирей ракообразных, таких как крабы и омары, подвергают обработке горячей концентрированной щелочью до получения хитозана. Последний частично гидролизуется до получения олигосахаридов и его солей. Частичный гидролиз хитозана проводят методом, при котором хитозан разогревается вместе с кислотой, такой как уксусная. После этого удаляют кислоту или проводят нейтрализацию и обессоливание для получения порошка путем вторичной кристаллизации методом, в котором хитозан растворяют в разведенной кислоте с концентрацией хитозана до 5%, после чего следует действие ферментом, расщепляющим хитозан, например хитозаназой, с последующей фильтрацией и сушкой. Японский патент №2000344802 А от 12.12.2000 г.

К недостаткам метода следует отнести низкую производительность процесса получения олигосахаридов хитозана.

Задачей изобретения является создание нового эффективного способа получения олигосахаридов хитозана, являющегося более производительным, что проявляется в повышении выхода целевого продукта в 2-3 раза без снижения его показателей за счет повышения предела растворимости исходного продукта.

Сущность изобретения заключается в получении олигосахаридов хитозана, включающем ферментативный гидролиз хитозана в водном растворе, содержащем органические кислоты с последующей фильтрацией и сушкой.

Отличие изобретения состоит в том, что предварительно получают 5% раствор хитозана в воде и после 30-50 минут ферментативного его гидролиза в раствор дополнительно вносят хитозан до общей концентрации 10% и хитозаназу и проводят ферментацию до общего времени 20-24 часа.

Согласно второму варианту осуществления способа его отличие состоит в том, что предварительно получают 5% раствор хитозана в воде и после 30-50 минут ферментативного его гидролиза в раствор дополнительно вносят хитозан до общей концентрации 10 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию в течение 30-50 минут, после чего в раствор вновь вносят хитозан до общей концентрации 15 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию до общего времени 20-24 часа.

Согласно третьему варианту отличие предлагаемого способа состоит в том, что в водный раствор, содержащий органические кислоты, одновременно вносят хитозан в количестве 10-15 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию в течение 20-24 часов.

Во всех вариантах в качестве органических кислот используют смесь уксусной и аскорбиновой кислот, уксусную кислоту, смесь уксусной и янтарной кислот, аскорбиновой и янтарной.

Полученный продукт зарегистрирован под торговой маркой “Олигохит” №235247 от 14 января 2003 г.

Примеры конкретного осуществления способа.

Пример 1.

Хитозан (поли-2-ацетамидо-2-дезокси-Д-глюкоза) со степенью деацетилирования 98% и исходной вязкостью 32 сПз (1% р-р хитозана в 1% уксусной кислоте), полученный из крошки панциря краба путем последовательной деминерализации, депротенирования и деацетилирования (ТУ 9289-058-04689375-2001) используют для получения его 5% раствора в воде, содержащей 1,4% уксусной кислоты и 2,4% аскорбиновой кислоты. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г (производство фирмы "Lyven" Франция), взятой в количестве 1,5 ед. хитозаназы к 1 г хитозана при температуре 45°С в течение 30 мин в атмосфере азота.

Затем в реакционный раствор вновь добавляют исходный хитозан до получения его общей концентрации в растворе в количестве 10 мас.% и вводят дополнительно хитозаназу в количестве 1,5 ед. хитозаназы на 1 г добавленного хитозана. Ферментативный гидролиз продолжают при температуре 45°С. Общее время ферментативной обработки 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют через полипропиленовый фильтр, имеющий отверстия с диаметром 5 микрон, а затем сушат в распылительной сушилке PC-1,8 со скоростью подачи раствора 50 л/час, температура входящего горячего воздуха 160-170°С, а температура выходящего воздуха 60-70°С.

Полученные олигосахариды хитозана имеют вязкость 1,7 сПз. Выход олигосахаридов 95 мас.%. Молекулярно-массовое распределение олигосахаридов хитозана определялось хроматографическим анализом на хроматографической системе ВЭЖХ - система Bio-Rad XL. Элюент: фосфорный буфер (0,05 М, рН 3) с добавлением 0,5 NаNО₃, скорость потока 1,1 мл/мин. Калибровка осуществлялась по декстранам ("Pharmacia Fine Chemicals") с известной массой в диапазоне 20-250 тыс. дальтон, а так же по мальтоолигосахаридам ("Sigma") и глюкозе в области низких масс. Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов было получено в виде:

n 1=0

n 2-6=17%

n 7-12=60%

n 13-20=20%

n 20-25=3%

n>25=0

Пример 2.

Хитозан со степенью деацетилирования 95% и исходной вязкостью 32 сПз (1% раствор хитозана в 1% уксусной кислоте) используют для получения его 5% раствора в 2,4% уксусной кислоте. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г, взятой в количестве 1,5 ед. хитозаназы к 1 г хитозана при температуре 45°С в течение 30 минут. В реакционный раствор вновь добавляют хитозан до получения его общей концентрации в растворе в количестве 10 мас.% и вводят дополнительно хитозаназу в количестве 1,5 ед. хитозаназы на 1 г добавленного хитозана. Ферментативный гидролиз продолжают при температуре 45°С. Общее время ферментативной обработки 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют и сушат в условиях примера 1. Полученные олигосахариды хитозана имеют вязкость 1,7 сПз. Выход олигомеров 93 мас.%. Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов, определенное в условиях примера 1, было получено в виде:

n 1=0

n 2-6-15%

n 7-12=59%

n 13-20=23%

n 20-25=3%

n>25=0

Пример 3.

Хитозан со степенью деацетилирования 95% и исходной вязкостью 56 сПз (1% раствор хитозана в 1% уксусной кислоте) используют для получения его 5% раствора в воде, содержащей 0,3% уксусной кислоты и 3% янтарной кислоты. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г, взятой в количестве 1,5 ед. хитозана при температуре 45°С в течение 30 минут. В реакционный раствор вновь добавляют исходный хитозан до получения его общей концентрации в растворе в количестве 10 мас.% и вводят дополнительно хитозаназу в количестве 1,5 ед. хитозаназы на 1 г добавленного хитозана. Ферментативный гидролиз продолжают при температуре 45°С. Общее время ферментативной обработки 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют и сушат в условиях примера 1. Полученные олигосахариды хитозана имеют вязкость 1,72 сПз. Выход олигомеров 93 мас.%. Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов, определенное в условиях примера 1, было получено в виде:

n 1=0

n 2-6=16%

n 7-12=58%

n 13-20=22%

n 20-25=4%

n>25=0

Пример 4.

Хитозан со степенью деацетилирования 95% и исходной вязкостью 56 сПз (1% раствор хитозана в 1% уксусной кислоте) используют для получения его 5% раствора в воде, содержащей 1,6 мас.% аскорбиновой и 1,6 мас.% янтарной кислоты. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г, взятой в количестве 1,5 ед. к 1 г хитозана, в течение 30 минут в среде азота. В реакционную смесь вновь добавляют хитозан до получения его общей концентрации в растворе в количестве 10 мас.% и вводят дополнительно хитозаназу до количества 3 ед. хитозаназы на 1 г всего хитозана, находящегося в растворе, с учетом ранее добавленной хитозаназы. Ферментативный гидролиз продолжается при температуре 45°С. Общее время ферментативной обработки 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют и сушат в условиях примера 1. Полученные олигосахариды хитозана имеют вязкость 1,6 сПз. Выход олигомеров 94 мас.%.

Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов, определенное в условиях примера 1, было получено в виде:

n 1=0

n 2-6=16%

n 7-12=60%

n 13-20=21%

n 20-25=3%

n>25=0

Пример 5.

Хитозан со степенью деацетилирования 95% и исходной вязкостью 32 сПз (1% раствор хитозана в 1% уксусной кислоте) используют для получения его 5% раствора в 3,6% уксусной кислоте. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г, взятой в количестве 1,5 ед. хитозаназы к 1 г хитозана, при температуре 45°С в течение 30 минут. В реакционный раствор вновь добавляют хитозан до получения его общей концентрации в растворе в количестве 10 мас.% и вводят дополнительно хитозаназу в количестве 1,5 ед. хитозаназы на 1 г. добавленного хитозана. Ферментативный гидролиз продолжают при температуре 45°С в течение 30 мин. В реакционный раствор вновь добавляют хитозан до получения его общей концентрации в растворе в количестве 15 мас.% и вводят дополнительно хитозаназу до количества 3 ед. хитозаназы на 1 г всего хитозана, находящегося в растворе, с учетом ранее добавленной хитозаназы. Ферментативный гидролиз продолжают при температуре 45°С. Общее время ферментативной обработки 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют и сушат в условиях примера 1. Полученные олигосахариды хитозана имеют вязкость 1,62 сПз. Выход олигомеров 93 мас.%. Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов, определенное в условиях примера 1, было получено в виде:

n 1=0

n 2-6=17%

n 7-12-59%

n 13-20=20%

n 20-25=4%

n>25=следы.

Пример 6.

Тонкоизмельченный хитозан со степенью деацетилирования 95% и исходной вязкостью 32 сПз (1% раствор хитозана в 1% уксусной кислоте) вносят для получения 10% дисперсии в 2,4% уксусной кислоте. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г, взятой в количестве 3 ед. хитозаназы к 1 г введенного хитозана при температуре 45°С. После полного растворения хитозана ферментативный гидролиз хитозана продолжается до общего времени гидролиза 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют и сушат в условиях примера 1. Полученные олигосахариды хитозана имеют вязкость 1,65 сПз. Выход олигомеров 94 мас.%. Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов, определенное в условиях примера 1, было получено в виде:

n 1=0

n 2-6=18%

n 7-12=59%

n 13-20=22%

n 20-25=1%

n>25=0

Пример 7.

Тонкоизмельченный хитозан со степенью деацетилирования 95% и исходной вязкостью 32 сПз (1% раствор хитозана в 1% уксусной кислоте) вносят для получения 10% дисперсии в воде, содержащей 1,6 мас.% янтарной и 1,6 мас.% аскорбиновой кислоты. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г, взятой в количестве 3 ед. хитозаназы к 1 г введенного хитозана при температуре 45°С в среде азота. После полного растворения хитозана ферментативный гидролиз хитозана продолжается до общего времени гидролиза 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют и сушат в условиях примера 1. Полученные олигосахариды хитозана имеет вязкость 1,62 сПз. Выход олигомеров 92 мас.%. Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов, определенное в условиях примера 1, было получено в виде:

n 1=0

n 2-6=16%

n 7-12=60%

n 13-20=19%

n 20-25=5%

n>25=следы

Пример 8.

Тонкоизмельченный хитозан со степенью деацетилирования 95% и исходной вязкостью 32 сПз (1% раствор хитозана в 1% уксусной кислоте) вносят для получения 15% дисперсии в 3,6% уксусной кислоте. Ферментативный гидролиз ведут в присутствии хитозаназы с активностью 250 ед/г, взятой в количестве 3 ед. хитозаназы на 1 г введенного хитозана при температуре 45°С. После полного растворения хитозана ферментативный гидролиз хитозана продолжается до общего времени гидролиза 24 часа. Полученный гидролизат фильтруют и сушат в условиях примера 1. Полученные олигосахариды хитозана имеет вязкость 1,63 сПз. Выход олигомеров 93 мас.%. Молекулярно-массовое распределение полученных олигосахаридов, определенное в условиях примера 1, было получено в виде:

n 1=0

n 2-6=15%

n 7-12-60%

n 13-20=21%

n 20-25=4%

n>25=следы

Данные, подтверждающие клиническое применение полученного препарата.

Эффективность препарата “Олигохит” (олигосахарид хитозана) у больных с клиникой токсического действия алкоголя подтверждена испытаниями, которые проводились в Нижегородской государственной медицинской академии Н.Новгорода (Россия); ООО "Олигофарм", Н.Новгород (Россия).

С целью оценки эффективности препарата "Олигохит" (олигосахарид хитозана) у больных с клиникой токсического действия алкоголя были обследованы две сопоставимые по возрасту и клинической картине группы лиц мужского пола. Средний возраст больных составил 32±4 года. Всего обследовано 30 больных, в каждой группе было по 15 пациентов. Все больные получали базисную терапию (раствор глюкозы, аскорбиновая кислота, инсулин, витамин B₁, содовый раствор). В контрольной группе наряду с базисной терапией назначался препарат "Олигохит" в дозировке 900 мг однократно. Препарат "Олигохит" (олигосахарид хитозана) был предоставлен ООО "Олигофарм" (Н.Новгород, Россия). "Олигохит" - олигосахарид хитозана, препарат, получаемый путем ферментативного гидролиза высокомолекулярного хитозана, обладает выраженным положительным воздействием на метаболические процессы. В контрольной группе больных, получавших "Олигохит", диагноз "опьянение" (14 баллов по шкале Глазго) был установлен у четырех человек. Концентрация алкоголя в крови составляла 3±0,4 г/л. У 4 человек наблюдалось оглушение (12-13 баллов по шкале Глазго); концентрация алкоголя в крови составляла 3,5±0,3 г/л. У 4 больных выявлялся сопор (9 баллов по шкале Глазго). Концентрация алкоголя в крови у этих пациентов была 4,2±0,4 г/л. Кома диагностирована у 3 больных (6 баллов по шкале Глазго); концентрация алкоголя в крови в этой группе составляла 6,5±0,5 г/л.

Клиническая симптоматика оценивалась каждые 2-3 часа на протяжении суток. При опьянении достоверной разницы в группах выявлено не было. Больные находились под наблюдением 6±0,5 часов, выписаны в удовлетворительном состоянии. В группе больных с оглушением восстановление сознания до ясного в контрольной группе ("Олигохит") наступало через 4±0,5 часа в то время как в группе сравнения - через 6±0,4 часа. В контрольной группе больных с сопором восстановление сознания наступало через 5±1,2 часа, в то время как в группе сравнения через 7±1,0 часа. В контрольной группе, больных с комой, получавших "Олигохит", сознание восстановилось через 6±1,0 часа; в группе сравнения - через 7±1,1 часа. Астеническое состояние у всех больных, получавших "Олигохит", продолжалось всего лишь 5±2 часа, в то время как в группе сравнения 8±3 часа. Нормализация кислотно-щелочного состояния в группе контроля ("Олигохит") наступила через 8,5±0,5 часа; в группе сравнения - через 12±1,2 часа.

Результаты клинической апробации препарата “Олигохит” при дислипопротеидемии и атеросклерозе.

Исследование проводилось на базе Городской клинической больницы №5 и кафедры скорой и неотложной медицинской помощи ЦПК и ППС. Обследовано 10 больных, из них 7 женщин и 3 мужчин в возрасте от 48 до 70 лет, средний возраст 58,3 года. Все пациенты страдали цереброваскулярными заболеваниями: дисциркуляторной энцефалопатией - 3 пациента, ТИА - 2 больных, малый инсульт - 4 больных, церебральный сосудистый криз - 1. Двое пациентов, страдающих сахарным диабетом 2 типа, получали пероральные сахароснижающие средства, ИБС страдали 5 больных, в том числе у 3 в анамнезе был инфаркт миокарда. Все больные страдали артериальной гипертензией. При этом у 7 больных артериальная гипертензия была высокой, у 3 умеренной. Артериальная гипертензия коррегировалась применением гипотензивных препаратов: ИАПФ, антагонистов кальция, диуретиков, бета-блокаторов. Все больные страдали церебральным атеросклерозом. Уровень холестерина был >5,0 ммоль/л и ХС ЛПНП >3,0 ммоль/л.

Критериями исключения являлись отсутствие дислипопротеидемии, неконтролируемая артериальная гипертензия, патологическое ожирение, инсульт тяжелой степени, железодефицитная анемия, туберкулез, рак, кахексия, астма, ревматические болезни, лейкозы, травма, хирургические операции (3 мес). Биохимические показатели у больных до начала лечения были в пределах нормы: уровень глюкозы составлял 4,6 ммоль/л (кроме больных сахарным диабетом), мочевины 6,7 ммоль/л, билирубина 19,5 ммоль/л.

Все больные получали “Олигохит” в дозе 700-1050 мг в сутки. Курс лечения составлял 30-90 дней. Всем больным проводилась оценка неврологического статуса, исследовался уровень глюкозы, холестерина до и после курса терапии. При продолжительности курса более 30 дней исследования повторялись 1 раз в месяц.

Результаты исследования и обсуждение.

Снижение уровня холестерина наблюдалось у 8 больных из 10. Уровень холестерина снизился на 22% - с 7,71 до 6,1 ммоль/ л. Снижение уровня холестерина было статистически достоверным. У 4 больных уровень холестерина снизился до нормальных значений (5,1 ммоль/л). Следует отметить, что среди данных больных исходный уровень ХС выше 7 ммоль/л наблюдался только у 1 пациентки. Больные получали препарат ”Олигохит” на протяжении 30-40 дней с хорошим эффектом. Еще у 4 больных с исходным уровнем ХС выше 8 ммоль/л удалось добиться снижения уровня ХС на 15% - с 8,1 до 7,1 ммоль/л. При этом курс лечения составлял 30-90 дней. У 2 больных, несмотря на повторные курсы терапии, до 90 дней, эффекта отмечено не было. Различие в эффективности может быть связано с особенностями типа дислипопротеидемии, а именно зависит от особенностей аполипопротеидов, в частности, их изоформ. Уровень печеночных ферментов, билирубина и мочевины не изменился. Уровень глюкозы в крови на момент окончания исследования у больных, не страдавших сахарным диабетом, находился в пределах нормы. Уровень глюкозы у больных, страдавших сахарным диабетом, несколько снизился по сравнению с исходным. Побочных эффектов при применении препарата “Олигохит” отмечено не было.

Таким образом, препарат “Олигохит” показал достаточную эффективность у больных с атеросклерозом. Его целесообразно применять как основное гипохолестеринемическое средство у больных с умеренным уровнем гиперхолестеринемии и как вспомогательное средство при высоких (более 8 ммоль/л) уровнях холестерина, учитывая отсутствие гепатотоксического эффекта у него.

Рекомендуемые дозы препарата “Олигохит” для коррекции гиперхолестеринемии 700-1050 мг в сутки. Продолжительность курса 30-90 дней.

Влияние препарата "Олигохит аскорбат" (“Олигохит”) на иммунный статус больных с впервые выявленным туберкулезом легких проводилась в противотуберкулезном диспансере, Н.Новгород (Россия), ООО "Олигофарм", Н.Новгород (Россия).

При туберкулезе легких основными механизмами нарушения иммунитета являются антигены токсинов, вырабатываемые микобактериями туберкулеза, продукты метаболизма гепатотоксичных противотуберкулезных препаратов и другие токсичные вещества (алкоголь, табак, наркотики и пр.). Диспропорции иммунологических показателей при впервые выявленном туберкулезе органов дыхания характеризуются выраженной гиперпродукцией IgG при снижении IgM и незначительном повышении IgA. Целью работы было изучение влияния производного хитозана - препарата "Олигохит аскорбат" - на показатели гуморального иммунитета у больных с впервые выявленным туберкулезом легких. Были изучены показатели гуморального иммунитета у 20 больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких, из них бактериовыделение имелось у 9, деструкция - у 7 больных. Этим больным назначался "Олигохит аскорбат" в дозе 1050 мг в сутки в течение 2 месяцев. Сопоставимую контрольную группу составили также 20 больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом, соответственно ВК+ - 9 больных, полость распада в легких имелась у 7 больных. Умеренное повышение IgA имелось у 26 из 40 больных и средний его позатель составил 2,1 (±0,1) г/л. IgG был значительно выше нормы (8-16 г/л) и был увеличен у всех 40 больных обеих сопоставимых групп, при этом его средние показатели составили 31,6 (±0,7) г/л, а при распространенных деструктивных процессах достигали уровня 40 г/л. Показатели IgM оставались в норме или незначительно снижались и составляли 0,63 (±0,1) г/л.

Оценка результатов лечения осуществлялась через 2 месяца после рентгеновского, общеклинического и иммунологического контрольных исследований.

Анализ эффективности применения в комплексной патогенетической терапии туберкулеза "Олигохита аскорбата" показал, что в основной и сопоставимой группах в результате двухмесячной терапии показатели IgA и IgM менялись весьма незначительно, а уровень IgG снижался, причем при назначении "Олигохита аскорбата" более выраженно и составлял соответственно в основной группе 22,4 (±0,6) г/л, а в контрольной 26,7 г/л (±0,7). Также при применении "Олигохита аскорбата" более отчетливо нормализовались острофазовые показатели и, что особенно демонстративно, закрытие полостей деструкции через 2 месяца лечения при применении "Олигохита аскорбата" наблюдалось у 4 больных, а в контрольной группе у 2 больных.

Предварительные данные применения "Олигохита аскорбата" в комплексе патогенетической терапии у больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких показали клиническую эффективность препарата.

Влияние препарата "Олигохит аскорбат" (“Олигохит”) на ферментативную систему печени у больных туберкулезом органов дыхания проводилась в противотуберкулезном диспансере, Н.Новгород (Россия), ООО "Олигофарм", Н.Новгород (Россия).

Комплекс причин токсических изменений ферментативной системы печени у больных туберкулезом весьма разнообразен, но сводится к следующим основным факторам:

1) гепатоксическое действие антибактериальных препаратов;

2) потребление алкоголя и его дериватов, наркотиков многими социально дезадаптированными больными;

3) воздействие собственно туберкулезных токсинов.

Данные о положительном влиянии хитозана на ферментативный обмен, о стимуляции всасывания и транспортировке препаратов, принимаемых перорально, а также антибактериальном и иммуномодулирующем воздействии, обусловили его применение в патогенетической терапии туберкулеза органов дыхания. Целью работы являлось изучение влияния производного хитозана - "Олигохита аскорбата" - на показатели ферментативного обмена печени у больных туберкулезом легких.

Нами была изучена ферментативная и пигментная функция печени по основным показателям - АсАТ, АлАТ, билирубин у 46 больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких, которым в комплекс лечения в дебюте терапии включался "Олигохит аскорбат" в дозе 1050 мг в сутки в течение 2-4 месяцев. Репрезентативная контрольная группа включала 45 больных. В комплекс патогенетической терапии у всех больных обеих групп включались также гепатопротекторы, детоксикационные препараты, антиоксиданты и пр.

Исходные показатели ферментативной активности в начале лечения у первичных больных в основной и сопоставимой группах были практически одинаковы и составляли: АсАТ 0,41 (±0,2) ммоль/л, АлАТ 0,56 (±0,4) ммоль/л, показатели билирубина 22 (±2,2) ммоль/л. Очевидно исходное повышение активности аминотрансфераз и гипербилирубинемия в дебюте лечения.

Контрольные исследования проводились через 2 месяца комплексной противотуберкулезной терапии. При применении "Олигохита аскорбата" показатели АсАТ составили 0,49 (±0,2), АлАТ 0,73 (±0,4), билирубина 36 (±2,4).

В контрольной группе сопоставимые среднестатистические показатели составили: АсАТ 0,57 (±0,2), АлАТ 0,84 (±0,5), билирубина 40 (±2,2).

В процессе противотуберкулезной терапии биохимические показатели ферментативной функции печени увеличивались у больных основной и контрольной групп, что вполне объяснимо гепатотоксическим и холеостатическим действием туберкулостатических препаратов.

При включении в комплекс патогенетической терапии туберкулеза "Олигохита аскорбата" все исследуемые показатели были ниже, чем в контрольной группе.

Таким образом, включение "Олигохита аскорбата" в комплекс патогенетической терапии туберкулеза позволяет достоверно уменьшить побочное гепатоксическое воздействие противотуберкулезных препаратов при его применении в сочетании с гепатопротекторами.

Оценка эффективности препарата "Олигохит аскорбат" при включении в реабилитационный комплекс для больных с гипертонической болезнью проводилась в Военно-медицинском институте ФПС РФ, Н. Новгород (Россия).

Сердечно-сосудистые заболевания и инсульт являются в настоящее время основной причиной смертности и инвалидности населения. Гипертоническая болезнь остается основным фактором риска развития инфаркта и инсульта.

Целью работы являлось исследование эффективности восстановительного комплекса при включении в него "Олигохита аскорбата" у лиц с гипертонической болезнью на санаторно-курортном этапе их реабилитации.

В исследовании участвовали 60 человек, которые были распределены на две равные группы: контрольная, в которой применялся стандартный комплекс, и экспериментальная, в которой стандартный комплекс применялся в сочетании с "Олигохитом аскорбатом" (оптимизированный реабилитационно-восстановительный комплекс).

Для оптимизации восстановительного комплекса ввели в него "Олигохит аскорбат", который назначали по 1 капсуле (350 мг) 2 раза в день в течение 20 дней перед едой.

Стандартный восстановительный комплекс включал ЛФК, массаж воротниковой зоны, йодобромную ванну, душ веерный, электросон, магнитолазеротерапию по рефлексогенным точкам, медикаментозное лечение, фитосбор "успокоительный", а также сбалансированную диету, что является одним из важнейших условий успешной борьбы с гипертензией.

Оценка эффективности экспериментального и контрольного восстановительных комплексов производилась по следующим критериям: данные лабораторного исследования (уровень гемоглобина и содержание эритроцитов), данные объективного обследования (САД, ДАД, ЧСС). Показатели регистрировались в первый, пятый, восьмой дни и в конце пребывания в центре реабилитации.

При включении в оздоровительный комплекс препарата "Олигохит аскорбат" отмечено снижение САД в целом по группе на 7,8% (р<0,01). Это зафиксировано у 63,3% (19 человек), еще у 8 человек САД не изменилось и у 3 трех человек возросло. До начала реабилитации у 63,3% обследованных САД достигало величины 140-170 мм рт.ст.; к концу курса только 26,7% (у 8 против 19 человек) САД составило 140 мм рт.ст. (снижение в 2,4 раза).

ДАД к концу курса выздоровления снизилось на 16,6% (р<0,01); оно снизилось у 19 человек, не изменилось у 8 человек и возросло у 3 человек. До реабилитации у 19 человек (63,3%) ДАД достигало величин 90-110 мм рт.ст.; после оздоровления - у трех человек (10%) ДАД достигало величины 90 мм рт.ст., у остальных было равно 70-80 мм рт.ст. (снижение в 6,3 раза).

В целом по группе не отмечено достоверного урежения ЧСС к концу курса реабилитации. Однако оно зафиксировано у 22 человек (73,34%), у 5 человек динамики не отмечено и у 3 человек она возросла.

В исходном состоянии ЧСС была в интервале 60-90 уд./мин, к моменту отъезда в интервале 60-84 уд./мин. Соответственно у 26,7 и 16,7% ЧСС составляла 80-90 уд./мин и 80-84 уд./мин.

Концентрация гемоглобина снизилась на 2,1% (р<0,05). Это отмечено у 16 человек (53,3%), у 8 человек эта величина не изменилась и у 6 возросла.

Произошла компенсация витаминной недостаточности. Наиболее вероятная положительная динамика отмечена по витамину В6 - снижение показателя недостаточности в 2,95 раза, В₁₂, F, В₁ - в 2,5-2,4 раза, В₂, В₃ - в 2,24-2,17 раза и А, Е - в 1,84-1,88 раза.

В 1,5 раза снизился показатель, характеризующий недостаточность в организме кальция, несколько ниже (на 0,05-0,15 баллов) - меди, калия и марганца; на 0,44 балла ниже - цинка. Показатель насыщения организма железом был наиболее высоким (5,3 балла). Такой же эффект был получен по насыщению организма пищевыми волокнами (3,5 балла).

В целом сравнительные результаты лечения в экспериментальной и контрольной группах отражены в таблице.

Оцениваемый параметр	Результаты лечения в экспериментальной группе	Результаты лечения в контрольной группе
САД, мм рт.ст.,
исходное	138,2±1,47	146,7±3,0
конец курса	129,1±1,33	139,3±2,0
ДАД, мм рт.ст.,
исходное	86,4±2,0	90,6±2,0
конец курса	74,1±0,97	89,9±1,3
ЧСС, уд./мин,
исходное	74,1±1,3	72,3±1,1
конец курса	71,3±1,7	71,9±1,3
Концентрация гемоглобина в крови, г/л,
исходное	162,4±1,4	148,9±1,5
конец курса	159,1±0,6	147,1±1,8
ИЭБ, %,
исходное	40,9±2,7	Зб,47±1,05
конец курса	62,23±1,8б	54,6±1,78

1. При оценке эффективности стандартного восстановительного комплекса у больных с гипертонической болезнью получены данные, свидетельствующие о положительном влиянии терапии на здоровье реабилитантов: у 60,0% снизилось САД до величин 110-130 мм рт.ст. (р<0,05 ), ДАД - у 46,7% до 60-80 мм рт.ст. (р<0,05). Достоверного урежения ЧСС в целом не было отмечено. Однако если в исходном состоянии у 30,0% ЧСС превышало 90 уд/мин (интервал 60-96), то после курса реабилитации таких лиц не отмечено (интервал ЧСС составил 60-88). Отмечена компенсация витаминной недостаточности организма, наиболее существенная по витаминам В₆, B₁, B₂, В₁₂, F - в 2,6-2,1 раза. По витаминам А, В₃, С насыщенность организма возросла в 1,78-1,96 раза. После реабилитации наибольшая компенсация отмечена по таким минералам, как кальций (в 4,0 раза), железо (в 3,3 раза); по другим минералам (К, J, Сu, Zn, Mg) насыщенность возросла в 1,6-2,3 раза, в 1,25 раза возросла насыщенность пищевыми волокнами.

На 18,1% возрос индекс эндоэкологического благополучия, свидетельствующий об улучшении функции клеток организма.

2. Эффективность оздоровления в условиях оптимизированного восстановительного комплекса по насыщению организма витаминами, минералами и пищевыми волокнами была более значимой, чем стандартного: если в контроле кратность величины роста насыщения первыми составила 2,1 баллов, то в группе "Олигохит аскорбат" 2,6 баллов (в 1,21 раза выше, р<0,05).

Кратность насыщения организма в группе контроля и опыта по йоду и меди была равной; более значимой, чем в контроле, по кальцию, калию, железу, цинку, а по пищевым волокнам - выше в 2,7 раза.

3. Эффективность оптимизированного восстановительного комплекса по деятельности сердечно-сосудистой системы была выше: по снижению САД (в контроле оно снизилось у 5,5%, в опыте - у 7,8%), ДАД (в контроле снзилось у 10,6%, в опыте - у 16,6%), урежению ЧСС (в контроле у 30,0%, в опыте - у 73,3%), снижению концентрации гемоглобина (соответственно у 1,2 и 2,1%). Индекс эндоэкологического благополучия, свидетельствующий о деятельности клеточных функций, возрос соответственно в 1,45 и 1,52 раза.

Claims (6)

1. Способ получения олигосахаридов хитозана, включающий ферментативный гидролиз хитозана хитозаназой в водном растворе, содержащем органические кислоты, с последующей фильтрацией и сушкой, отличающийся тем, что предварительно полученный 5%-ный раствор хитозана в воде, содержащий органические кислоты, подвергают 30-50-минутному ферментативному гидролизу, после чего в раствор дополнительно вносят хитозан до общей концентрации 10 мас.% и хитозаназу и продолжают ферментацию до общего времени 20-24 ч.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве органических кислот используют уксусную кислоту, смесь уксусной и аскорбиновой кислот, уксусной и янтарной кислот, аскорбиновой и янтарной кислот.

3. Способ получения олигосахаридов хитозана, включающий ферментативный гидролиз хитозана хитозаназой в водном растворе, содержащем органические кислоты, отличающийся тем, что предварительно полученный 5%-ный раствор хитозана в воде, содержащий органические кислоты, подвергают 30-50-минутному ферментативному гидролизу, после чего в раствор дополнительно вносят хитозан до общей концентрации 10 мас.% и хитозаназу и проводят ферментацию в течение 30-50 мин, после чего в раствор вновь вносят хитозан до общей концентрации 15 мас.% и хитозаназу и продолжают ферментацию до общего времени 20-24 ч.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что в качестве органических кислот используют уксусную кислоту, смесь уксусной и аскорбиновой кислот, уксусной и янтарной кислот, аскорбиновой и янтарной кислот.

5. Способ получения олигосахаридов хитозана, включающий ферментативный гидролиз хитозана хитозаназой в водном растворе, содержащем органические кислоты, отличающийся тем, что в водный раствор, содержащий органические кислоты, одновременно вносят хитозан в количестве 10-15 мас.% и хитозаназу и проводят ферментативный гидролиз в течение 20-24 ч.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве органических кислот используют уксусную кислоту, смесь уксусной и аскорбиновой кислот, уксусной и янтарной кислот, аскорбиновой и янтарной кислот.