RU2233875C2 - Стимулятор роста клеток бактерий escherichia coli - Google Patents
Стимулятор роста клеток бактерий escherichia coli Download PDFInfo
- Publication number
- RU2233875C2 RU2233875C2 RU2000129026/13A RU2000129026A RU2233875C2 RU 2233875 C2 RU2233875 C2 RU 2233875C2 RU 2000129026/13 A RU2000129026/13 A RU 2000129026/13A RU 2000129026 A RU2000129026 A RU 2000129026A RU 2233875 C2 RU2233875 C2 RU 2233875C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- anion
- growth
- stimulating agent
- escherichia coli
- mixture
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области прикладной микробиологии, а именно к стимуляторам роста бактериальных культур. Стимулятор роста клеток бактерий Escherichia coli представляет собой смесь водорастворимых солей органических кислот при следующем соотношении их анионов в смеси (мол.%): ацетат-анион 14-48; лактат-анион 6-29; сукцинат-анион 12-59; глутамат-анион 0,1-21. В качестве катионов солей могут быть использованы металлы 1 или 2 групп Периодической системы Д.И. Менделеева или аммоний. Стимулятор обладает эффективным воздействием на клетки Е.coli и имеет стандартизированный состав. 2 з.п.ф-лы, 5 табл.
Description
Изобретение относится к области прикладной микробиологии, а именно к способам культивирования бактерий, а именно к стимуляторам роста бактериальных культур.
Известно использование в качестве стимуляторов роста производных карбоматов (фруктоолигосахаридов, изомальтоолигосахаридов, циклодекстрина, ациллактамов и т.д.) (А.С. СССР №1746663, 1994, кл С 07 С 271/58; акц. заявка Японии №59-53834, 1984, кл. C 12 N 1/05; патент США №4782045, 1989, кл. C 12 N 1/00; акц. заявка Японии №63-71171, 1988, кл. C 12 N 1/00).
Недостатками указанных стимуляторов являются сложности синтеза, узкий спектр действия, т.е. проявление стимулирующего эффекта по отношению к узкому спектру микроорганизмов, необходимость введения в культуральную жидкость посторонних веществ.
Известен природный стимулятор роста микроорганизмов широкого спектра действия, получаемый путем последовательной ультрафильтрации водных растворов лизоэнзимного препарата Streptomyces recifensis subsp. lyticus 2435 через ультрафильтрационные мембраны УАМ-50, -100, -150, -200 (Бабенко Ю.С. и др. Биотехнология, №4, 1992, с.26-29).
Недостатком стимулятора является невозможность получения высокоактивного препарата в связи с существенными потерями активности в ходе его фракционирования.
Прототипом заявляемого изобретения является разработанный авторами стимулятор клеток Escherichia coli (E.coli), получаемый из клеток микроорганизмов, помещенных в дистиллированную воду на 5-9 суток (патент РФ №1638156, 1991, кл. C 12 N 1/00//1/38).
Недостатком стимулятора являлись нестандартность и неопределенность состава, что не позволяло получить достаточно стабильные результаты при промышленном производстве.
Задачей, стоявшей перед авторами, было создание нового стимулятора роста E. coli, не содержащего чужеродных веществ для микроорганизмов и имеющего воспроизводимый состав.
Указанная задача была решена использованием в качестве биостимулятора композиции, содержащей смесь водорастворимых солей органических кислот при следующем соотношении их анионов в смеси (мол.%):
ацетат–анион 14-48
лактат–анион 6-29
сукцинат-анион 12-59
глутамат–анион 0,1-21
В качестве катионов, содержащих водорастворимые соли, используют, как правило, металлы 1 или 2 групп Периодической системы Д.И. Менделеева или аммоний.
Стимулятор, как правило, используют в концентрации от 0.5 до 10 мас.% от массы культуральной жидкости.
Биостимулятор может быть получен как путем смешения индивидуальных химических веществ, так и с использованием природных или искусственных смесей. В последнем случае он вводится в культуральную жидкость как часть более сложных рецептур.
Промышленная применимость биостимулятора иллюстрируется следующими примерами.
ПРИМЕР 1. Для выращивания клеток Е.coli М-17 использовали среду М-9 с концентрацией глюкозы 0,5 г/л. В питательную среду добавляли различные композиции заявленного биостимулятора в виде смеси натриевых солей в количестве 5% от общей массы сухих компонентов среды. Каждую из солей растворяли в дистиллированной воде, стерилизовали кипячением и вносили в среду культивирования до требуемых концентраций. Молярные соотношения солей в композициях указаны в таблице 1.
Культивирование проводили на термостатированной качалке при 37°С, контролируя рост по оптической плотности D460. Результаты действия биостимулятора определяли по относительному приросту биомассы через 5 часов культивирования. Для этого рассчитывали изменение D460 через 5 часов роста в опытной (с добавлением биостимулятора) культуре и делили на изменение оптической плотности в контрольной культуре. Результаты действия биостимуляторов приведены в таблице 1.
ПРИМЕР 2. В культуру E.coli вводили в концентрации 5.0% биостимуляторов, полученных по примеру 1, и биостимулятор в составе смесей, выделенных из культуральной жидкости (экзометаболитов) по одной из нижеследующих технологий:
1 способ. Клетки Е.coli М-17 выращивали в ферментере Microferm (New Brunswick) на среде М-9 до стационарной фазы (3·1010 клеток/мл). Экзометаболиты выделяли путем последовательного фильтрования (фильтры “Владипор” с пределом задержания 10-15 кДа) и лиофильного высушивания полученной культуральной жидкости. Анализ состава экзометаболитов проводили методами 1Н-ЯМР-спектроскопии и аминокислотного анализа AccQ-Tag Method. При необходимости в полученную смесь (экзометаболит 1) добавляют химические добавки до получения состава, приведенного в таблице 2.
2 способ. Клетки, выращенные до стационарной фазы, как описано выше, после отделения культуральной жидкости суспендировали в дистиллированной воде в концентрации 5·1010 клеток/мл и инкубировали в ней в течение 5-7 суток при 20°С. Экзометаболиты выделяли и идентифицировали так же, как и в первом способе. При необходимости в полученную смесь (экзометаболит 2) добавляют химические добавки до получения состава, приведенного в таблице 2.
Результаты действия биостимуляторов на рост E.coli М-17 и E.coli К-12 приведены в таблицах 3 и 4 соответственно.
Пример 3. Влияние биостимулятора на рост Е.coli М-17 в смешанной культуре
E.coli M-17 выращивали вместе с Salmonella enteritidis. Для выращивания использовали среду М-9 с концентрацией глюкозы 0,25 г/л и добавкой аминопептида (4,8 мл на 1 л среды). Начальная концентрация клеток в среде составляла 6,3·105 кл/мл. Из них 61% были клетки E.coli. В питательную среду добавляли композиции, полученные в примере 2, в количестве 5 мкл раствора на 1 мл среды. Соответственно, концентрации солей в среде получились в 4 раза меньше показанных в таблице 2.
Культивирование проводили в стационарных условиях при 37°С в течение 4 часов. Остановку роста осуществляли путем помещения пробирок в ледяную воду на 10 мин. Прирост биомассы оценивали по данным высевов на среду Эндо (табл.5).
Полученные результаты свидетельствуют, что новая композиция обладает стимулирующим воздействием на клетки E.coli и может быть использована как для культивирования биомассы микроорганизмов, так и для уменьшения доли патогенных микроорганизмов в различных средах.
Claims (3)
1. Стимулятор роста бактерий Escherichia coli, содержащий водорастворимые соли органических кислот, отличающийся тем, что содержание анионов органических кислот в смеси составляет, мол.%:
Ацетат-анион 14-48
Лактат-анион 6-29
Сукцинат-анион 12-59
Глутамат-анион 0,1-21
2. Стимулятор по п.1, отличающийся тем, что в качестве катионов водорастворимых солей он содержит металлы 1 или 2 групп Периодической системы Д.И. Менделеева или аммоний.
3. Стимулятор по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит экзометаболиты Escherichia coli.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000129026/13A RU2233875C2 (ru) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Стимулятор роста клеток бактерий escherichia coli |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000129026/13A RU2233875C2 (ru) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Стимулятор роста клеток бактерий escherichia coli |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000129026A RU2000129026A (ru) | 2003-02-20 |
RU2233875C2 true RU2233875C2 (ru) | 2004-08-10 |
Family
ID=33412014
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000129026/13A RU2233875C2 (ru) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Стимулятор роста клеток бактерий escherichia coli |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2233875C2 (ru) |
-
2000
- 2000-11-22 RU RU2000129026/13A patent/RU2233875C2/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mosher et al. | Nutritional requirements of the pathogenic mold Trichophyton interdigitale | |
Medill et al. | A synthetic medium for the L type colonies of Proteus | |
RU2233875C2 (ru) | Стимулятор роста клеток бактерий escherichia coli | |
Little et al. | A practical liquid medium for cultivation of Trypanosoma cruzi in large volumes | |
US4386066A (en) | Immunogenic complex from N. gonorrhoeae | |
RU2245362C2 (ru) | Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба | |
Gause | Some physiological properties of dextral and of sinistral forms in Bacillus mycoides flügge | |
RU2644248C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба | |
Miller Jr et al. | The influence of inorganic salts on the multiplication of gonococcus | |
SU1544803A1 (ru) | Штамм дрожжей RноDотоRILа GLUтINIS VaR.GLUтINIS, используемый дл кормлени гидробионтов | |
SU1638156A1 (ru) | Способ получени аутоактиватора роста дл культивировани ЕSснеRIснIа coLI | |
SU904325A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
RU2681116C2 (ru) | Питательная среда плотная для хранения микроба чумы | |
RU2121000C1 (ru) | Питательная среда для выращивания микобактерий | |
SU1541257A1 (ru) | Способ получени L-триптофана | |
RU2301256C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования холерного вибриона | |
SU1513029A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани бифидобактерий | |
SU1222676A1 (ru) | Способ получени питательной основы микробиологических сред | |
SU498940A1 (ru) | Способ получени -лизина | |
RU2687373C2 (ru) | Способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов при глубинном выращивании с использованием жидкой питательной среды минимизированного состава | |
SU1712408A1 (ru) | Питательна среда дл получени спор СLоSтRIDIUм SpoRoGeNeS | |
SU1693060A1 (ru) | Питательна среда дл вы влени SтарнYLососсUS aUReUS | |
RU2124366C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных и птиц | |
RU2270856C2 (ru) | Питательная среда для глубинного культивирования чумного микроба вакцинного антибиотико-резистентного штамма eb р2 | |
RU1792615C (ru) | Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20061123 |