RU2226404C2 - Способ выявления и уничтожения эпителиальных раковых клеток - Google Patents
Способ выявления и уничтожения эпителиальных раковых клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2226404C2 RU2226404C2 RU2001132076/15A RU2001132076A RU2226404C2 RU 2226404 C2 RU2226404 C2 RU 2226404C2 RU 2001132076/15 A RU2001132076/15 A RU 2001132076/15A RU 2001132076 A RU2001132076 A RU 2001132076A RU 2226404 C2 RU2226404 C2 RU 2226404C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- marking agent
- agent
- cells
- mitochondrial
- cancer cells
- Prior art date
Links
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 90
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 54
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 46
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 36
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims abstract description 29
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 6
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 claims description 4
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 claims description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 28
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 9
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 3
- -1 alcian blue Chemical compound 0.000 description 3
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000001016 thiazine dye Substances 0.000 description 3
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 2
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 2
- 206010061523 Lip and/or oral cavity cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000012829 chemotherapy agent Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOMZMNZEXMAQQW-UHFFFAOYSA-N 2,5,11-trimethyl-6h-pyrido[4,3-b]carbazol-2-ium-9-ol;acetate Chemical compound CC([O-])=O.C[N+]1=CC=C2C(C)=C(NC=3C4=CC(O)=CC=3)C4=C(C)C2=C1 BOMZMNZEXMAQQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OALHHIHQOFIMEF-UHFFFAOYSA-N 3',6'-dihydroxy-2',4',5',7'-tetraiodo-3h-spiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3-one Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 OALHHIHQOFIMEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKAJSJJFBSOMGS-UHFFFAOYSA-N 3,6-diamino-10-methylacridinium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2[N+](C)=C(C=C(N)C=C3)C3=CC2=C1 KKAJSJJFBSOMGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- SRAVWPVICTXESG-UHFFFAOYSA-N [4-(2,4-diamino-5-methylphenyl)iminocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]-dimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C(C)=CC(N=C2C=CC(C=C2)=[N+](C)C)=C1N SRAVWPVICTXESG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229940023020 acriflavine Drugs 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- TTWYZDPBDWHJOR-IDIVVRGQSA-L adenosine triphosphate disodium Chemical compound [Na+].[Na+].C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O TTWYZDPBDWHJOR-IDIVVRGQSA-L 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 229960001506 brilliant green Drugs 0.000 description 1
- HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N brilliant green cation Chemical compound C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229950000549 elliptinium acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 208000037828 epithelial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009841 epithelial lesion Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229950008849 furazolium chloride Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 150000002321 glycerophosphoglycerophosphoglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 201000003911 head and neck carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMPJXUZSXKJUQI-UHFFFAOYSA-N hydron;3-(5-nitrofuran-2-yl)-5,6-dihydroimidazo[2,1-b][1,3]thiazole;chloride Chemical compound Cl.O1C([N+](=O)[O-])=CC=C1C1=CSC2=NCCN12 FMPJXUZSXKJUQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- RNUAEUWXRHCGKX-UHFFFAOYSA-N oxythiamine chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)NC1=O RNUAEUWXRHCGKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- INCIMLINXXICKS-UHFFFAOYSA-M pyronin Y Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](C)C)C=C2OC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 INCIMLINXXICKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SOUHUMACVWVDME-UHFFFAOYSA-N safranin O Chemical compound [Cl-].C12=CC(N)=CC=C2N=C2C=CC(N)=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 SOUHUMACVWVDME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 229940063683 taxotere Drugs 0.000 description 1
- 150000003510 tertiary aliphatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004897 thiazines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/006—Biological staining of tissues in vivo, e.g. methylene blue or toluidine blue O administered in the buccal area to detect epithelial cancer cells, dyes used for delineating tissues during surgery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления и уничтожения эпителиальных раковых клеток. Сущность изобретения состоит в избирательной маркировке митохондрий раковых клеток путем доставки к эпителиальным раковым клеткам катионного суправитального митохондриального маркирующего агента. Агент также может включать в себя продукт реакции маркирующего агента и препарата для химиотерапии рака или быть в смеси с ним. Техническим результатом является выявление и избирательное уничтожение эпителиальных раковых клеток в присутствии нормальных клеток. 2 с. и 8 з.п.ф-лы.
Description
Родственная заявка
Данная заявка представляет собой частичное продолжение одновременно рассматриваемой международной заявки PCT/US 00/05387, поданной 28 февраля 2000 г. и озаглавленной "Способ выявления и уничтожения эпителиальных раковых клеток".
Область изобретения
Данная заявка относится к способам выявления эпителиального рака.
В другом отношении изобретение относится к способам избирательного уничтожения эпителиальных раковых клеток.
В еще одном аспекте изобретение касается способов выявления эпителиальных раковых клеток в присутствии нормальных клеток и/или избирательного уничтожения таких клеток, при которых митохондрии раковых клеток удерживают митохондриальный маркирующий агент в течение времени, достаточного для обеспечения возможности идентификации и/или уничтожения таких клеток.
Определения
Используемые здесь следующие термины имеют указанные значения:
Термины "рак" или "раковые" клетки используются в широком смысле для включения инвазивных раковых клеток, клеток рака in situ и клеток при тяжелой дисплазии.
"Митохондриальный маркирующий агент" обозначает соединение, которое избирательно захватывается митохондриями живых раковых клеток и избирательно удерживается в раковых клетках в течение времени, достаточного для обеспечения возможности их идентификации и/или уничтожения, или инкапаситации.
"Уничтожение" клеток обозначает либо действие, вызывающее смерь клеток, апоптоз, либо изменения клеток, которые делают клетки неспособными к репродукции и метастазированию.
"Аддукт" обозначает ковалентный или нековалентный продукт реакции митохондриального маркирующего агента и средства для химиотерапии рака.
"Адъювант" обозначает митохондриальный маркирующий агент, который в комбинации с другим химиотерапевтическим средством вызывает улучшенное уничтожение раковых клеток либо синергически, либо вследствие дополнительных эффектов с другим средством.
Предпосылки изобретения
В данной области известны диагностические процедуры in vivo для выявления злокачественных или предраковых эпителиальных поражений или карцином с использованием композиций, которые избирательно "окрашивают" ткани, имеющие патологический характер вследствие дисплазии, гиперплазии, онкогенеза и других активных поверхностных поражений. В этих диагностических способах используется краситель, придающий цвет раковому субстрату, который затем может выявляться под светом при видимой длине волн, или флюоресцентный краситель, придающий цвет субстрату, который затем может выявляться при освещении светом с длиной волн, выходящей за пределы видимого спектра.
Например, процедуры с использованием флюоресцеина и производных флюоресцеина раскрыты в публикации Chenz, Chinese Journal of Stomatology (27:44-47 (1992)) и Filurin (Stomatologiia (Russian) 72:44-47 (1993)). Эти процедуры связаны с применением красителя с последующим исследованием под ультрафиолетовым светом для выявления раковой/предраковой ткани, которая избирательно флюоресцентна. В другой процедуре предшествующего уровня техники используется омывание эпителия толуидином синим с последующим обычным визуальным исследованием для выявления любой избирательно окрашенной ткани. Такие процедуры раскрыты, например, в патентах, выданных Burkett (US 6086852), Tucci (US 5372801) и Mashberg (US 4321251). Применение других тиазиновых красителей и оксазиновых красителей аналогичным образом раскрыто в патенте США №5882627, выданном на имя Pomerantz.
До настоящего времени теоретически считалось, что такие красители избирательно "маркировали" раковые ткани, потому что краситель задерживался в относительно более крупных интерстициальных пространствах между клетками раковой ткани и не мог эффективно проникать в более плотные межклеточные соединения нормальной ткани или избирательно удерживаться в таких относительно меньших пространствах.
В противовес представлению, что толуидин синий избирательно маркирует раковую эпителиальную ткань потому, что он избирательно удерживается в относительно более крупных интерстициальных пространствах между раковыми клетками, механизм такого избирательного окрашивания эпителиальной ткани катионными красителями, например, такими красителями, как родамин, флюоресцеины, оксазин и тиазиновые красители (включая толуидиновый синий) и другими катионными суправитальными маркирующими агентами, заключается в избирательном захвате и избирательном удерживании агента в митохондриях раковых клеток. Этот избирательный митохондриальный захват и удерживание, очевидно, вызваны более высоким электрическим потенциалом (отрицательным зарядом на внутренней стороне мембраны) митохондрий раковых клеток, по сравнению с митохондриями нормальных клеток (см., например, публикации Chen et al.. Cancer Cells 1. The Transformed Phenotype, 75-85 (Cold Spring Harbor Laboratory, 1984); Lampidis, et al., Cancer Research 43, 716-720 (1983). Действительно, избирательная маркировка раковых клеток и удерживание в митохондриях раковых клеток суправитальных катионных красителей и других суправитальных маркирующих агентов связаны с одной из очень характерных черт раковых клеток, которая, как представляется, ответственна за их быстрый клонирующий рост и способность метастазировать, а именно то, что более высокий электрический потенциал митохондрий раковых клеток является источником клеточной энергии и является движущей силой для продукции клетками АТФ (аденозинтрифосфата).
Сущность изобретения
В настоящее время найден способ выявления in vivo раковых эпителиальных клеток с помощью избирательной маркировки их митохондрий.
В другом отношении, был найден способ лечения для избирательного уничтожения раковых клеток в присутствии нормальных клеток.
Способы выявления, предложенные в настоящей заявке, включают стадии доставки катионного суправитального миохондриального маркирующего агента к ткани в очаге предполагаемого ракового участка на эпителии (который содержит и нормальные, и раковые клетки), вызывая, таким образом, захват и избирательное удерживание указанного агента в митохондриях раковых клеток. Затем раковые клетки могут выявляться любым подходящим способом, например инструментальным или визуальным исследованием под видимым светом или светом с избирательной невидимой длиной волн.
В еще одном варианте реализации после захвата митохондриями маркирующего агента на очаг предполагаемого ракового участка наносится омывающий реагент, увеличивая таким образом скорость высвобождения агента из митохондрий нормальных клеток и дополнительно увеличивая избирательность диагностических способов.
В соответствии с другим важным вариантом реализации изобретения, предоставляется способ избирательного уничтожения эпителиальных раковых клеток, включающий стадию контактирования раковых клеток в очаге предполагаемого ракового участка с катионным суправитальным митохондриальным маркирующим агентом для того, чтобы вызвать гибель клеток или сделать раковые клетки по существу неспособными к размножению. Маркирующий агент может быть доставлен к раковым клеткам в однократной дискретной дозе или постоянно, или повторными дискретными дозами с использованием омывающего реагента после каждой такой дозы или без него.
В еще одном варианте реализации изобретения предоставляется способ повышения избирательности и способности противораковых химиотерапевтических средств уничтожать раковые клетки, включающий стадии либо (1) образования продукта реакции катионного суправитального агента и химиотерапевтического средства и доставки продукта реакции к раковым эпителиальным клеткам, либо (2) комбинирования катионного суправитального агента с противораковым химиотерапевтическим средством для повышения избирательности или способности химиотерапевтического средства уничтожать раковые клетки или с помощью дополнительного, или синергического эффектов, или с использованием их обоих.
Эти и другие варианты реализации изобретения будут очевидны для специалистов в данной области, и изобретение будет лучше понятно из следующих примеров, которые предоставлены для иллюстрации изобретения, а не как характерезующие объем притязаний, который определен только прилагаемой формулой изобретения.
При осуществлении изобретения и в следующих рабочих примерах катионные суправитальные митохондриальные маркирующие агенты включают красители, в том числе толуидиновый синий О, алциан синий, малахит зеленый, феносафранин, акрифлавин, пиронин Y, толуилен синий и бриллиантовый зеленый; и "не красящие" соединения, в том числе пеонидин, окситиамин, тиемоний йодид, эллиптиний ацетат и фуразолий хлорид.
В соответствии с предпочтительным в настоящее время вариантом реализации изобретения, предпочтительными митохондриальными маркирующими агентами являются красители класса оксазина и тиазина. Тиазиновые красители особенно предпочтительны, в частности, толуидиновый синий О, Азур А, Азур В и их аналоги с замещением кольца и N-замещенные аналоги.
Для того чтобы избирательно всасываться и удерживаться в митохондриях раковых клеток, маркирующий агент или продукт реакции маркирующего агента + химиотерапевтического средства должны иметь молекулярную массу ниже приблизительно 5000. Кроме того, ввиду выраженных различий избирательной маркировки и терапевтической активности различных близко родственных аналогов, представляется, что молекулярная структура маркирующего агента заметно воздействует на его способность избирательно маркировать и/или уничтожать живые раковые клетки в присутствии нормальных живых клеток. Эти различия способности маркировки клеток и их уничтожения связаны со структурными признаками, например, локализацией и типом кольцевых заместителей и N-заместителей, молекул маркирующего агента, которые определяют один или несколько или даже все следующие механизмы действия:
1. Структура молекулы маркирующего агента, например положение и природа кольцевых и N-заместителей на катионной молекуле, воздействует на доступность положительного заряда и препятствует способности маркирующего агента или “сгрудившихся” их групп притягиваться отрицательными зарядами на митохондриальных мембранах или внутри митохондрий.
2. Структура молекулы маркирующего агента позволяет ей вклиниваться в "груду" или скапливаться по внешней поверхности митохондриальной ДНК раковых клеток.
3. Структура молекулы маркирующего агента позволяет ей или их сгрудившимся группам связываться со специфическими активными участками, например четырьмя специфическими белками, в митохондриях и/или осаждаться кардиолипинами на внутренней поверхности митохондриальной мембраны.
4. Структура маркирующего агента воздействует на его восстановительный потенциал и его тенденцию изменяться в незаряженную "лейко" форму.
5. Структура маркирующего агента воздействует на его кислотность (рКа) и, в свою очередь, на способность катионного маркирующего агента к депротонированию при физиологическом рН. Таким образом, катионная форма красителя может притягиваться к внешней поверхности митохондриальной мембраны, после чего катион красителя может потерять протон и одновременно потерять свой положительный заряд, освобождая вследствие этого нейтральную форму красителя, которая может легче проникать через неполярный матрикс мембраны и получать доступ к внутренней среде митохондрия.
Межмолекулярные взаимодействия механизмов 1 (краситель - мембрана), 2 (пара краситель - основание или краситель - краситель) и 3 (краситель - белок или краситель - липид) зависят от гидрофобности-липофильности красителя, которую можно оценить с помощью различных средств, одним из которых является коэффициент распределения между водным раствором и органическим растворителем низкой полярности, таким как 1-октанол (т.е., величин логарифма Р). Механизмы 4 и 5 зависят от гидрофобности-липофильности вследствие воздействия дифференциального растворения реагента и продукта на восстановительный потенциал (окисленные формы в сравнении с восстановленными формами) и рКа (нейтральные формы в сравнении с заряженными формами). Например, гидрофобность препятствует растворению протонированных третичных алифатических аминов (R3NH-), снижая посредством этого их кислотность относительно вторичных аминов (R2NH ).
В соответствии с предпочтительным в настоящее время вариантом реализации изобретения, используется катионный суправитальный маркирующий агент, имеющий величину логарифма Р от приблизительно -1,0 до приблизительно 5.
Следующие примеры представлены для того, чтобы предоставить возможность специалистам в данной области понять и осуществить изобретение и определить предпочтительный в настоящее время вариант реализации. Эти примеры приведены только для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения объема притязаний, который определяется только прилагаемой формулой изобретения.
Пример 1
Захват и удерживание митохондриальных маркирующих агентов в живых клетках карциномы
Различные концентрации различных катионных маркирующих агентов (100, 50, 10 и 1 мкг/мл) готовят в среде RPMI, укомплектованной 20% фетальной телячей сывороткой, 1 мМ глутамином, гидрокортизоном, инсулином, трансферрином, эстрадиолом, селеном и гормоном роста.
Клетки карциномы в течение 5 мин инкубируют при 37°С в инкубаторах для тканевой культуры в 5% СО2 и при относительной влажности 95% с каждым агентом и концентрацией в них и затем дважды промывают 1% уксусной кислотой с использованием 2-минутной инкубации. После инкубации и промывания клетки собирают через 30 мин, 1 ч, 2 ч, 4 ч и 8 ч. Затем клетки экстрагируют 2-бутанолом и анализируют спектрофотометрией для количественного определения маркирующего агента.
Результаты показывают, что существует зависимость скорости накопления маркирующего агента в митохондриях и клеток карциномы и нормальных клеток и избирательности высвобождения маркирующего агента из раковых клеток от концентрации, но эта зависимость от концентрации начинает становиться менее выраженной. Концентрация насыщения для толуидина синего О наступает при концентрации 10 мкг/мл и выше. Аналогичным образом определяют концентрации насыщения для других маркирующих агентов. Остальные эксперименты проводят при концентрации 10 мкг/мл для толуидина синего О и при определенных таким образом концентрациях насыщения для других маркирующих агентов, если не указано иного.
Пример 2
Локализация агентов в митохондриях живых клеток
После инкубации и промывания различных клеточных линий с использованием различных катионных маркирующих агентов анализируют локализацию агентов в митохондриях, используя конфокальную микроскопию высокого разрешения и фазово-контрастную микроскопию.
Живые клетки культивируют в ростовой среде, укомплектованной 20% фетальной телячей сывороткой и факторами роста при температуре, поддерживаемой на уровне 37°С. Эти клетки накапливают и удерживают маркирующие агенты в митохондриях. Когда эти клетки затем сохраняют в лишенной агента среде, клетки карциномы удерживают агент дольше, чем около 1 ч, но нормальные эпителиальные клетки высвобождают агент в пределах приблизительно 15 мин.
В отличие от живых клеток, мертвые клетки или клетки, обработанные агентами, которые рассеивают потенциал митохондриальной мемебраны, теряют окрашивание митохондрий и накапливают агенты в ядре.
Пример 3
Высвобождение агентов из митохондрий с рассеиванием потенциала митохондриальной мемебраны
Известные агенты, которые изменяют митохондриальный электрический потенциал, используют для предварительной обработки эпителиальных раковых клеток с последующей обработкой катионными суправитальными митохондриальными маркирующими агентами. Эти агенты для предварительной обработки включают азидные и цианидные препараты и динитрофенол.
Эпителиальные раковые клетки также предварительно обрабатывают различными красителями, а затем подвергают последующей обработке этими известными агентами. Анализируют высвобождение красителей из клеток или перенос красителей в другие субклеточные компартменты, включая ядро.
Клетки, предварительно обработанные этими агентами, не накапливают красители в митохондриях, и митохондрии предварительно окрашенных клеток высвобождают краситель после последующей обработки этими агентами.
Пример 4
Эксплантаты ткани плоскоклеточных карцином
Свежие эксплантаты резецированных эпителиальных карцином анализируют для выявления захвата и удерживания маркирующего агента. После резекции производят микродиссекцию карцином от окружающих тканей, разрезают на секции размером 3 мм и сохраняют в виде культур тканевых эксплантатов при 37°С. Затем эти эксплантаты инкубируют с различными агентами, а после этого экстрагируют для количественного определения агента.
Карциномы ротовой полости (SqCHN) характеризуются быстрым захватом и длительным удерживанием этих агентов. Агенты начинают высвобождаться из клеток приблизительно через 1 ч культивирования в среде, не содержащей агент. Однако агенты высвобождаются быстрее, когда клетки инкубируют в среде, которая не содержит факторов роста, фетальной телячей сыворотки и других добавок к среде. Эти агенты также быстрее высвобождаются, когда клетки выращивают в неблагоприятных условиях, таких, как более низкие температуры.
Пример 5
Тканевые эксплантаты нормальных эпителиальных клеток
Клетки, полученные хирургическим путем из здоровых областей эпителия ротовой полости, культивируют как нормальные эпителиальные культуры. Затем эти культуры инкубируют с маркирующими агентами для анализа захвата и удерживания агентов.
В отличие от клеток карциномы, нормальные эпителиальные клетки быстро высвобождают эти агенты из их митохондрий и гораздо быстрее из клеток. К 10-15 мин большая часть агента высвобождается из митохондрий.
Пример 6
Аддукты маркирующего агента - химиотерапевтического средства
Вместо агентов примеров 1-5 используют следующие аддукты катионных митохондриальных маркирующих агентов и различных известных химиотерапевтических средств по существу с аналогичными результатами, за исключением того, что существенно улучшаются интенсивность уничтожения раковых клеток и избирательность химиотерапевтического средства.
Маркирующий агент Химиотерапевтическое средство
Толуидин синий О Метотрексат
Родамин 123 Азотистый иприт
Пример 7
Адъювантные композиции
Следующие комбинации известных средств химиотерапии рака с митохондриальными маркирующими агентами проявляют синергический или, по меньшей мере, дополнительный эффект уничтожения раковых клеток
Химиотерапевтическое средство Катионный маркирующий агент
Таксол Толуидин синий
Таксотер Азур А
Винкристин Алциан синий
Избирательные терапевтические эффекты
В следующих примерах лекарственную субстанцию толуидина синего получают в соответствии с процедурами получения, раскрытыми в патенте США №6086852, выданном Burkett 11 июля 2000 г. Затем компоненты лекарственной субстанции фракционируют и отделяют полупрепаративной ВЭЖХ, получая аналоги, идентифицированные в патенте "852, как представленные пиками 5, 6, 7 и 8. Соединения, представленные пиками 7 и 8, представляют собой региоизомеры, имеющие кольцевую метиловую группу в положении -2 (пик 8) и в положении -4 (пик 7). Соединение, представленное пиком 5, представляет собой N-деметилированное производное пика 1, а соединение, представленное пиком 6, представляет собой N-деметилированное производное пика 8.
Пример 8
Соединения, представленные пиками 5, 6, 7 и 8, полученные во время фракционирования толуидина синего О, анализируют для выявления их избирательной токсичности по отношению к живым клеткам карциномы ротовой полости (SqCHN), в сравнении с живыми нормальными эпителиальными клетками ротовой полости. Отдельные культуры плоскоклеточного рака и нормальных эпителиальных клеток инкубируют с фракциями различных красителей, а затем промывают средой без красителя. Затем клетки повторно инкубируют в ростовой среде и наблюдают в течение периода 8 дней для определения степени уничтожения клеток. Соединение пика 6 приводит к гибели 95% клеток карциномы, в сравнении с лишь 20% уничтожения нормальных клеток. Соединение пика 8 проявляет гибель 89% клеток карциномы, тогда как оно вызывает гибель лишь 20% нормальных клеток. Таким образом, избирательное удерживание соединений пиков 6 и 8 избирательно токсично по отношению к клеткам карциномы.
Избирательное введение в митохондрии катионных красителей ведет к разрушению митохондриального электрического потенциала, который является источником клеточной энергии и движущей силой продукции АТФ (аденозинтрифосфата) в клетках. Способность клеток карциномы быстро делиться и метастазировать зависит от доступности этих источников большей энергии.
Однако представляется, что воздействия на электрический заряд не являются единственным действующим механизмом, потому что соединения, представленные пиком 5 и пиком 7, также являются катионными красителями, но тем не менее они не проявляют аналогичной избирательной токсичности по отношению к карциномам, которую демонстрируют соединения пика 6 и пика 8. Таким образом, как представляется, соединения пиков 6 и 8 имеют другие молекулярные свойства, которые приводят к их избирательной токсичности по отношению к клеткам карциномы.
Пример 9
Терапевтические характеристики соединений пиков 6 и 8 определяются с помощью дальнейших тестов in vitro, проведенных таким же образом, как в примере 8, с использованием других изолятов клеток карциномы и нормальных эпителиальных клеток. Профиль тестирования включает другие плоскоклеточные карциномы головы и шеи, пищевода, легких, шейки матки и кожи, а также другие типы раковых опухолей, включая аденокарциномы, лимфомы и саркомы. Тесты in vivo "задержки опухолевого роста" и "анализ обратного развития опухоли" с использованием пораженных опухолями животных, включая карциномы головы, шеи и легких, имплантированные мышам Balb-C, проводят для анализа терапевтической пользы этих соединений in vivo. Эти дополнительные тесты in vitro и in vivo подтверждают избирательную токсичность соединений пиков 6 и 8 по отношению к более широкому разнообразию типов раковых клеток.
Claims (10)
1. Диагностический способ выявления in vivo раковых эпителиальных клеток с помощью избирательной маркировки их митохондрий, включающий доставку к эпителию катионного суправитального митохондриального маркирующего агента.
2. Способ избирательного уничтожения эпителиальных раковых клеток, включающий доставку к эпителию катионного суправитального митохондриального маркирующего агента, причем митохондриальный маркирующий агент имеет молекулярную массу ниже, чем приблизительно 5000.
3. Способ по п.2, в котором агент представляет собой продукт реакции катионного суправитального митохондриального маркирующего агента и препарата для химиотерапии рака, причем митохондриальный маркирующий агент или продукт реакции маркирующего агента и препарата для химиотерапии рака имеет молекулярную массу ниже, чем приблизительно 5000.
4. Способ по п.2, в котором агент доставляется к эпителиальным раковым клеткам в комбинации с другим препаратом для химиотерапии рака, который избирательно уничтожает раковые клетки посредством другого механизма, отличного от механизма, которым агент уничтожает раковые клетки.
5. Способ по п.1 или 2, в котором катионный суправитальный митохондриальный маркирующий агент имеет молекулярную структуру, которая не препятствует притяжению положительного заряда молекулы маркирующего агента отрицательными зарядами на митохондриальных мембранах.
6. Способ по п.1 или 2, в котором катионный суправитальный митохондриальный маркирующий агент имеет молекулярную структуру, которая позволяет маркирующему агенту связываться со специфическим участком в митохондриях.
7. Способ по п.1 или 2, в котором катионный суправитальный митохондриальный маркирующий агент имеет молекулярную структуру, которая будет вклиниваться в митохондриальной ДНК или скапливаться вдоль нее.
8. Способ по п.1 или 2, в котором катионный суправитальный митохондриальный маркирующий агент имеет молекулярную структуру, которая воздействует на его восстановительный потенциал для обеспечения возможности его изменения в незаряженную лейкоформу перед, во время или после входа в митохондрии.
9. Способ по п.1 или 2, в котором катионный суправитальный митохондриальный маркирующий агент имеет молекулярную структуру, которая будет депротонирована при физиологическом рН.
10. Способ по п.1 или 2, в котором катионный суправитальный митохондриальный маркирующий агент имеет Log Р от 0 до 5.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| USPCT/US00/05387 | 2000-02-28 | ||
| PCT/US2000/005387 WO2001064110A1 (en) | 2000-02-28 | 2000-02-28 | Method for detecting and killing epithelial cancer cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001132076A RU2001132076A (ru) | 2003-08-27 |
| RU2226404C2 true RU2226404C2 (ru) | 2004-04-10 |
Family
ID=21741108
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001132076/15A RU2226404C2 (ru) | 2000-02-28 | 2001-02-27 | Способ выявления и уничтожения эпителиальных раковых клеток |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1214101A4 (ru) |
| JP (1) | JP2003525044A (ru) |
| KR (2) | KR100907122B1 (ru) |
| CN (1) | CN100544770C (ru) |
| AU (2) | AU2000237154A1 (ru) |
| BR (1) | BR0104747A (ru) |
| CA (1) | CA2370741A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ20013861A3 (ru) |
| IL (1) | IL146141A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA01010886A (ru) |
| NO (1) | NO20015242L (ru) |
| NZ (1) | NZ515202A (ru) |
| RU (1) | RU2226404C2 (ru) |
| WO (2) | WO2001064110A1 (ru) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2000237154A1 (en) * | 2000-02-28 | 2001-09-12 | Zila, Inc. | Method for detecting and killing epithelial cancer cells |
| IL148341A0 (en) * | 2000-06-30 | 2002-09-12 | Zila Inc | Rhodamine diagnostic agent and diagnostic methods for detection of epithelial cancer |
| EP1322339A4 (en) * | 2000-09-26 | 2004-05-26 | Zila Inc | METHOD FOR EARLY Predicting the Occurrence of INVASIVE CANCER. |
| MXPA04002659A (es) * | 2001-12-14 | 2004-06-18 | Zila Inc | Analisis molecular dirigido por tincion para pronostico y diagnostico de cancer. |
| US7081261B2 (en) * | 2002-05-14 | 2006-07-25 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Resistant starch prepared by isoamylase debranching of low amylose starch |
| US6890571B2 (en) | 2002-05-14 | 2005-05-10 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Slowly digestible starch product |
| US6929817B2 (en) | 2002-05-14 | 2005-08-16 | National Starch & Chemical Investment Holding Corporation | Slowly digestible starch product |
| JP2005535605A (ja) * | 2002-06-04 | 2005-11-24 | ジラ バイオテクノロジー・インク | トルイジンブルーｏ薬剤および形成異常組織のインビボ染色と化学療法処置におけるその用途 |
| BRPI0419122A (pt) * | 2004-09-30 | 2007-12-11 | Zila Biotechnology Inc | método direcionado por luz para detectar e ajudar uma avaliação adicional de tecido mucoso anormal |
| ES2732623T3 (es) | 2005-01-06 | 2019-11-25 | Innate Pharma Sa | Tratamientos y métodos de combinación anti-KIR |
| MY189329A (en) | 2009-07-15 | 2022-02-04 | Nutricia Nv | Mixture of non-digestible oligosaccharides for stimulating the immune system |
| CN103185713B (zh) * | 2011-12-29 | 2015-12-09 | 闫文广 | 用于上皮组织肿瘤细胞的检测剂组合物及其制备方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4321251A (en) * | 1979-12-19 | 1982-03-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Detection of malignant lesions of the oral cavity utilizing toluidine blue rinse |
| US5194373A (en) * | 1985-06-06 | 1993-03-16 | Thomas Jefferson University | Method of determining endothelial cell coverage of a prosthetic surface |
| US4816395A (en) * | 1985-12-19 | 1989-03-28 | Peralta Cancer Research Institute | Method for predicting chemosensitivity of anti-cancer drugs |
| WO1993008847A1 (en) * | 1991-10-31 | 1993-05-13 | Ctm Associates, Inc. | Biological stain composition, method of preparation and method of use for delineation of epitheleal cancer |
| KR100342342B1 (ko) * | 1996-01-16 | 2002-08-22 | 자일러, 인코포레이티드 | 구강암및전암성질환의체내검출을위한방법및조성물 |
| US6086852A (en) * | 1997-11-13 | 2000-07-11 | Zila, Inc. | In vivo stain composition, process of manufacture, and methods of use to identify dysplastic tissue |
| WO2000038715A2 (en) * | 1998-12-23 | 2000-07-06 | G.D. Searle & Co. | Use of an integrin antagonist and radiation in the treatment of neoplasia |
| AU2000237154A1 (en) * | 2000-02-28 | 2001-09-12 | Zila, Inc. | Method for detecting and killing epithelial cancer cells |
| US6967015B1 (en) * | 2000-07-20 | 2005-11-22 | Zila, Inc. | Diagnostic method for detecting dysplastic epithelial tissue |
| EP1322339A4 (en) * | 2000-09-26 | 2004-05-26 | Zila Inc | METHOD FOR EARLY Predicting the Occurrence of INVASIVE CANCER. |
-
2000
- 2000-02-28 AU AU2000237154A patent/AU2000237154A1/en not_active Abandoned
- 2000-02-28 WO PCT/US2000/005387 patent/WO2001064110A1/en active Application Filing
-
2001
- 2001-02-27 KR KR1020017013731A patent/KR100907122B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-02-27 KR KR1020087020377A patent/KR20080080681A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-02-27 IL IL14614101A patent/IL146141A0/xx unknown
- 2001-02-27 JP JP2001563152A patent/JP2003525044A/ja active Pending
- 2001-02-27 CA CA002370741A patent/CA2370741A1/en not_active Abandoned
- 2001-02-27 CN CNB018006604A patent/CN100544770C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-27 EP EP01916271A patent/EP1214101A4/en not_active Ceased
- 2001-02-27 NZ NZ515202A patent/NZ515202A/en unknown
- 2001-02-27 WO PCT/US2001/006318 patent/WO2001064255A1/en active Application Filing
- 2001-02-27 AU AU43316/01A patent/AU785489B2/en not_active Ceased
- 2001-02-27 RU RU2001132076/15A patent/RU2226404C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-02-27 BR BR0104747-7A patent/BR0104747A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-02-27 MX MXPA01010886A patent/MXPA01010886A/es active IP Right Grant
- 2001-02-27 CZ CZ20013861A patent/CZ20013861A3/cs unknown
- 2001-10-26 NO NO20015242A patent/NO20015242L/no not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BERNAL SD. Anticarcinoma Activity in vivo of Rhodamine 123, а mitochondrial Specific Dye, Science, 14 October 1983, v. 222, №4620, р.169-171. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2370741A1 (en) | 2001-09-07 |
| IL146141A0 (en) | 2002-07-25 |
| EP1214101A4 (en) | 2005-04-13 |
| EP1214101A1 (en) | 2002-06-19 |
| KR100907122B1 (ko) | 2009-07-09 |
| NO20015242L (no) | 2001-11-29 |
| CZ20013861A3 (cs) | 2002-08-14 |
| KR20020000222A (ko) | 2002-01-05 |
| NZ515202A (en) | 2003-05-30 |
| WO2001064110A1 (en) | 2001-09-07 |
| MXPA01010886A (es) | 2002-05-06 |
| WO2001064255A1 (en) | 2001-09-07 |
| AU2000237154A1 (en) | 2001-09-12 |
| AU785489B2 (en) | 2007-11-15 |
| KR20080080681A (ko) | 2008-09-04 |
| NO20015242D0 (no) | 2001-10-26 |
| AU4331601A (en) | 2001-09-12 |
| CN100544770C (zh) | 2009-09-30 |
| JP2003525044A (ja) | 2003-08-26 |
| BR0104747A (pt) | 2002-09-17 |
| CN1365288A (zh) | 2002-08-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Han et al. | A ratiometric fluorescent probe for imaging and quantifying anti-apoptotic effects of GSH under temperature stress | |
| RU2226404C2 (ru) | Способ выявления и уничтожения эпителиальных раковых клеток | |
| JP3612343B2 (ja) | クロロフィルとバクテリオクロロフィルの誘導体、それらの製造法及びそれら誘導体を含んで成る製剤組成物 | |
| US20190282661A1 (en) | Methods of treating breast cancer | |
| US20080051646A1 (en) | Probe for cellular oxygen | |
| CN108815537A (zh) | 一种肿瘤细胞靶向特异性荧光探针及其制备方法与应用 | |
| Longoni et al. | Apoptosis and adaptive responses to oxidative stress in human endothelial cells exposed to cyclosporin A correlate with BCL‐2 expression levels | |
| Chen et al. | Subcellular Localization of Merocyanine 540 (MC540) and Induction of Apoptosis in Murine Myeloid Leukemia Cells¶ | |
| Vuong et al. | Hypericin incorporation and localization in fixed HeLa cells for various conditions of fixation and incubation | |
| US6649144B1 (en) | Method for detecting and killing epithelial cancer cells | |
| US20030017158A1 (en) | Method for detecting and killing epithelial cancer cells | |
| Machado et al. | Factors affecting the site and degree of localization of tetracycline in sarcoma 37 tumors | |
| RU2713151C1 (ru) | Конъюгат флуоресцентного красителя с веществом пептидной природы, включающим псма-связывающий лиганд на основе производного мочевины для визуализации клеток, экспрессирующих псма, способ его получения и применения | |
| BRPI0612367A2 (pt) | solução para a marcação de células ou de tecidos, kit, método de marcação ex vivo de células ou de um tecido, uso de uma solução e método de diagnóstico in vitro de um cáncer ou de uma displasia | |
| Jiang et al. | Mitochondrial Ca2+ overload in primary cultures of rat renal cortical epithelial cells by cytotoxic concentrations of cyclosporine: a digitized fluorescence imaging study | |
| Winkelman et al. | Staining with tetraphenylporphinesulfonate in vivo | |
| Chen et al. | Protective effect of melatonin on renal injury of rats induced by bile duct ligation | |
| CN115531554B (zh) | 合成致死纳米药物组合载体及其在制备治疗gbm靶向药物上的应用 | |
| Sharma et al. | Photodynamic action of merocyanine 540 on carcinoma of cervix cells | |
| CN102988517A (zh) | 龙芽草抗肝癌活性组分及其用途 | |
| WO2024152405A1 (zh) | 一种诊疗一体化核酸锚定型荧光探针及其制备方法和应用 | |
| Fioretti et al. | Monitoring of hematoporphyrin injected in humans and clinical prospects of its use in gynecologic oncology | |
| Veilleux | Acridine orange fluorescence of mast cells as influenced by fixation | |
| Bachmann et al. | Evaluation of interacellular tamoxifen-induced fluorescence in tamoxifen-resistant human breast adenocarcinoma cells | |
| US20050222117A1 (en) | Chlorophyll and its derivatives for cancer photodynamic therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20071003 |
|
| RH4A | Copy of patent granted that was duplicated for the russian federation |
Effective date: 20071010 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100228 |