RU2218937C2 - Адъювант - Google Patents
Адъювант Download PDFInfo
- Publication number
- RU2218937C2 RU2218937C2 RU2001133996A RU2001133996A RU2218937C2 RU 2218937 C2 RU2218937 C2 RU 2218937C2 RU 2001133996 A RU2001133996 A RU 2001133996A RU 2001133996 A RU2001133996 A RU 2001133996A RU 2218937 C2 RU2218937 C2 RU 2218937C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- adjuvant
- colloidal gold
- solution
- immunization
- gold
- Prior art date
Links
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 11
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N gold(1+) Chemical compound [Au+] ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 5
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000607477 Yersinia pseudotuberculosis Species 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000901 systemic toxic effect Toxicity 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и иммунологии. В качестве адъюванта используют коллоидный раствор золота. Изобретение позволяет снизить токсичность вакцин, повысить их иммуногенную активность и обеспечить стабильность вакцин при хранении. 4 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и иммунологии, а именно к препаратам, стимулирующим антителообразование, и может быть использовано в области медицины и ветеринарии для конструирования и производства высокоэффективных вакцин.
Адъюванты - вещества или смеси веществ, в т.ч. в виде суспензий и эмульсий, вызывающие усиление образования антител к сложным антигенам, таким как бактерии и вирусы. Адъюванты усиливают образование специфических антител, связывающих именно антигенные детерминанты возбудителя заболевания, тогда как иммуномодуляторы активизируют все компоненты иммунной системы.
Наиболее распространенными в настоящее время адъювантами для вакцин (бактериальных и вирусных) являются эмульсии вода-масло в присутствии эмульгирующих веществ или суспензии неорганических веществ (см. патент РФ 2058154, МПК А 61 39135, патент РФ 1743027, МПК А 61 К 39/135, патент РФ 1730763, МПК А 61 К 39/39, заявка WO 09701133, МПК А 61 К 9/14, патент США 5312620, МПК А 61 К 31/765).
Однако препараты на основе масляных эмульсий и суспензий неорганических веществ, как правило, склонны к расслоению фаз, часто реактогенны, их иммунные свойства изменяются со временем. Большинство таких адъювантов вызывают локальные и системные токсические явления. Кроме того, препараты, приготовленные на их основе, обладают повышенной вязкостью, что затрудняет их введение.
Известен адъювант, содержащий смесь биологического компонента - липополисахарида из клеток сине-зеленых водорослей с минеральным маслом и поверхностно-активным веществом (см. а.с. СССР 1297285, МПК А 61 К 45/05).
Известны также адъюванты для биопрепаратов на основе липосом (см. патент РФ 2107493, МПК А 61 94127, патент США 485388, МПК А 61 К).
Липосомальные адъюванты дают более сильную иммуногенную реакцию, но более сложны в изготовлении, требуют больших материальных затрат.
Задачей настоящего изобретения является разработка адъюванта, позволяющего создавать вакцины, обладающие низкой токсичностью, повышенной иммуногенной активностью и обеспечивающего стабильнсть вакцин при хранении.
Поставленная задача достигается тем, что в качестве адъюванта используют коллоидный раствор золота.
Предложенный адъювант одновременно выполняет функцию растворителя при добавлении в препарат на основе лиофилизированной вакцины.
Иммуногенные свойства раствора коллоидного золота (КЗ), позволяющие использовать его в качестве адъюванта и растворителя при введении антигенов во время иммунизации ранее, не были известны. Впервые метод получения растворов коллоидного золота с заданными свойствами (размерами частиц) был разработан G.Frens, Nature Phys.Sci.1973 v.241 p.20-22.
Коллоидные растворы золота применяются в биологии и медицине как цитохимические маркеры в иммунологических диагностикумах и в электронной микроскопии (см. De Mey J., Moeremans М. The preparation of colloidal gold probes and their use as marker in microscopy // hi: Advanced techniques in biological electron microscopy/ Ed.Koehler J.K.-Berlin: Springer-Veriag, 1986. v. 3, p.229-271; Colloidal Gold: principls, methods and applications/ Ed. Hagat М. А.-San Diego: Academic Press, 1989. v.l, p.538; v.2-p.484). Известно применение препарата коллоидного золота для получения антител к низкомолекулярным веществам (см. ЕР 0232717, МПК G 01 N 33/531). Однако в данном патенте препараты коллоидных металлов рассматриваются как носители низкомолекулярных веществ, а не как адъювант.
Коллоидный раствор золота с диаметром частиц в диапазоне 10-100 нм получают посредством добавления к кипящему 0,01% водному раствору золотохлористоводородной кислоты раствора цитрата натрия в концентрации, варьируемой в зависимости от требуемого размера частиц. Диапазон эффективных концентраций коллоидного золота в вакцинах в большинстве случаев зависит от стабильности полученного коньюгата (комплекса иммуноактивных компоненов вакцины с коллоидным золотом). Этот параметр называется "золотым числом" и определяется эмпирически с помощью реакции коагуляции в концентрированных растворах NaCl. Например, для большинства простых молекул полимеров (белки, углеводы, синтетические полимеры) эффективные концентрации коллоидного золота составляют от 108 до 1013 частиц золота на 1 мл раствора (или 10-100 мкг золота на 1 мл раствора). Препараты вакцин имеют больший разброс значений, т.к. состоят из большого количества макромолекул разных видов.
Предложенный адъювант обеспечивает устойчивый иммунитет при проведении специфической иммунопрофилактики и позволяет снизить трудоемкость процесса иммунизации.
Для доказательства иммуногенности раствора коллоидного золота был выбран стандартный слабоиммунный антиген (AГ) - бычий сывороточный альбумин (БСА) и антиген клеточной стенки бактерий Y.Pseudotuberculosis. В качестве адъюванта сравнения использовали полный адъювант Фрейда (ПАФ).
Пример 1.
Исследования проводили на половозрелых крысах в количестве 30 штук. Объекты делили на 5 групп по 6 животных в каждой группе и иммунизировали по следующей схеме (таблица 1).
Иммунизацию проводили четырехкратно с интервалом в 2 недели. Препараты вводились внутримышечно в объеме 0,1 мл в область конечности.
Забор крови проводили методом декапитации по следующей схеме:
1) через неделю после второй иммунизации,
2) через неделю после третьей иммунизации,
3) через 15 дней после четвертой иммунизации.
1) через неделю после второй иммунизации,
2) через неделю после третьей иммунизации,
3) через 15 дней после четвертой иммунизации.
После первой иммунизации образование антител было незначительным.
Адсорбцию БСА на коллоидное золото осуществляли по следующей методике.
Раствор БСА готовился в концентрации 1000 мкг/мл в фосфатном буферном растворе. Раствор коллоидного золота готовили по стандартной методике: концентрация частиц золота 1012 на 1 мл раствора. При этом "золотое число" данного раствора было 10 мкг БСА/мл. При такой концентрации не происходит выпадение коллоидного золота в осадок после добавления избытка хлорида натрия. Количество (титр) антител определяли в реакции гемаглютинации (РГА) по общепринятой методике.
Данные по проведенным исследованиям приведены в таблице 2.
Пример 2.
Исследование проводили на половозрелых кроликах в количестве 6 штук породы шиншилла. Объекты делили на три группы по 2 животных в каждой группе и иммунизировали по следующей схеме (таблица 3).
Иммунизацию проводили двукратно с интервалом в 2 недели. После второй иммунизации проводилась реиммунизация. Препараты вводились внутримышечно.
Забор крови проводили из ушной вены по следующей схеме:
1) через неделю после первой иммунизации,
2) через неделю после второй иммунизации,
3) через неделю после реимунизации.
1) через неделю после первой иммунизации,
2) через неделю после второй иммунизации,
3) через неделю после реимунизации.
Антиген Y.Pseudotuberculosis получали по общепринятой методике (обработкой ультразвуком с последующим осаждением компонентов клеточной стенки). Иммунологическая активность полученного антигена определялась методом иммунодиффузии с поливалентой йерсениозной сывороткой. Концентрацию полученного АГ приводили к значению 100 мкг/мл по белку.
Раствор коллоидного золота готовили по стандартной методике. Концентрация частиц золота 1012 на 1 мл раствора. Препарат АГ смешивался с раствором коллоидного золота, как указано в таблице 3. Количество (титр) антител определяли в реакции гемаглютанации (РГА) по общепринятой методике.
Результаты титра образования антител к АГ приведены в таблице 4.
Таким образом, приведение данные показывают эффективность коллоидного золота в качестве адъюванта. Кроме того, раствор коллоидного золота может быть использован не только как адъювант, но и как адъювант и растворитель одновременно.
Claims (1)
- Применение коллоидного раствора золота в качестве адъюванта для вакцин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001133996A RU2218937C2 (ru) | 2001-12-13 | 2001-12-13 | Адъювант |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001133996A RU2218937C2 (ru) | 2001-12-13 | 2001-12-13 | Адъювант |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001133996A RU2001133996A (ru) | 2003-09-10 |
| RU2218937C2 true RU2218937C2 (ru) | 2003-12-20 |
Family
ID=32065743
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001133996A RU2218937C2 (ru) | 2001-12-13 | 2001-12-13 | Адъювант |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2218937C2 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0232717A2 (en) * | 1986-01-10 | 1987-08-19 | Shiosaka Sadao | Antibody specific to low-molecular weight substance and method of producing the same by using colloidal metal particles as carrier |
| RU2084242C1 (ru) * | 1994-05-05 | 1997-07-20 | Хабаровский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии | Способ получения вакцины против клещевого энцефалита на основе растворимого антигена |
-
2001
- 2001-12-13 RU RU2001133996A patent/RU2218937C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0232717A2 (en) * | 1986-01-10 | 1987-08-19 | Shiosaka Sadao | Antibody specific to low-molecular weight substance and method of producing the same by using colloidal metal particles as carrier |
| RU2084242C1 (ru) * | 1994-05-05 | 1997-07-20 | Хабаровский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии | Способ получения вакцины против клещевого энцефалита на основе растворимого антигена |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107157933B (zh) | 一种蛋白自组装新型纳米疫苗及其制备方法 | |
| KR100642877B1 (ko) | 면역치료에 유용한 항원조성물 | |
| US4816253A (en) | Novel mutant strain of Listeria monocytogenes and its use in production of IgM antibodies and as an immunotherapeutic agent | |
| JPH04500203A (ja) | インフルエンザワクチンおよび新規なアジュバント | |
| JPH01501064A (ja) | ワクチンとその製法 | |
| US5895653A (en) | Adjuvant based on colloidal iron compounds | |
| Allison et al. | Immunological adjuvants and their mode of action | |
| US4590181A (en) | Synthetic immunoregulators and methods of use and preparation | |
| US4493825A (en) | Purified and antigenically selective vaccines for domestic animals | |
| JP2025500683A (ja) | アルミニウムナノ結晶送達系、ならびにアルミニウムナノ結晶送達系及びワクチン抗原分子の結合に基づく自己組織化粒子アジュバントワクチン | |
| CA1337047C (en) | Gamma inulin compositions | |
| CN1059279A (zh) | 对弱疫苗抗原提供胸腺相关帮助的脂质体 | |
| CA1079634A (en) | Antigens bound to exterior surface of microvesicles | |
| CN108421035A (zh) | 一种基于壳聚糖的纳米颗粒疫苗及其制备方法和应用 | |
| US4470967A (en) | Lectin-containing anti-viral vaccines for domestic animals and method of preparation | |
| RU2218937C2 (ru) | Адъювант | |
| Jiskoot et al. | Immunogenic activity of gonococcal protein I in mice with three different lipoidal adjuvants delivered in liposomes and in complexes | |
| CN108368260B (zh) | 含有角鲨烯的基于两亲性聚氨基酸聚合物的疫苗佐剂组合物 | |
| AU744308B2 (en) | Antigen vectors in the form of multilamellar vesicles | |
| CN108114279B (zh) | 一种由棒状纳米氢氧化铝辅佐的铜绿假单胞菌疫苗的制备方法 | |
| RU2214278C1 (ru) | Адьювант для биопрепаратов | |
| JP4331798B2 (ja) | アレルゲン処方 | |
| JP3414395B2 (ja) | 人工的に製造したウィルスのエンベロープ | |
| JP7086000B2 (ja) | 体液性親和性の加速に関する方法及び組成物 | |
| RU2218175C2 (ru) | Способ стимуляции образования антител при иммунизации лабораторных животных |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20131214 |