RU2203940C1 - Штамм aspergillus fumigatus №6, используемый для получения антигена - Google Patents
Штамм aspergillus fumigatus №6, используемый для получения антигена Download PDFInfo
- Publication number
- RU2203940C1 RU2203940C1 RU2001129311/13A RU2001129311A RU2203940C1 RU 2203940 C1 RU2203940 C1 RU 2203940C1 RU 2001129311/13 A RU2001129311/13 A RU 2001129311/13A RU 2001129311 A RU2001129311 A RU 2001129311A RU 2203940 C1 RU2203940 C1 RU 2203940C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- aspergillus fumigatus
- antigen
- preparing
- fumigatus
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению антигена. Для получения антигена используют штамм Asp.fumigatus 6, выделенный из фекалий больного теленка. При культивировании штамма 6 в питательной среде получают антиген - полисахарид. Получаемый антиген используют для получения препаратов против аспергиллеза сельскохозяйственных животных. Штамм Asp.fumigatus 6 обладает повышенной спорообразующей активностью, отсутствием патогенности и наличием иммуногенных свойств. 3 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологии, в частности к микологии, и может быть использовано для получения антигенов, применяемых при приготовлении диагностических и иммуногенных препаратов против аспергиллеза сельскохозяйственных животных и птицы.
Максимальное получение антигенов прямо пропорционально продуктивности штамма по ряду признаков, главным из которых является интенсивность спорообразования.
Указанный признак, а также низкая токсигенность и выраженные иммуногенные свойства определяют целесообразность использования штамма для производства дагностикумов и конструирования вакцинных препаратов.
Известен штамм Aspergillus flavus Link ВНИИА 335 А - продуцент микотоксина коевой кислоты (см. патент РФ 2046137 по кл. С 12 N 1/00, опуб. 20.10.95 г.).
Однако этот штамм обладает повышенной токсинообразующей способностью. Кроме того, он продуцирует микотоксин - коевую кислоту, не имеющую определяющего значения в антигенном наборе у Aspergillus fumigatus, и не может быть использован при конструировании биопрепаратов.
Известен также штамм Aspergillus fumigatus 4238 - продуцент фумагиллина (см. патент РФ 2077587, по кл. С 12 Р 1/06, опуб. 20.04.97 г.).
Однако антиген данного штамма может быть использован только для профилактики и лечения нозематоза пчел и амебиаза плотоядных.
Наиболее близким к заявляемому является штамм Aspergillus fumigatus 157/32 - продуцент белковых антигенов (см. патент РФ 2172342 по кл. С 12 N 1/14, опуб. 20.08.01 г.).
Однако данный штамм нельзя использовать для получения антигена - полисахарида. Кроме того, данный штамм обладает низкой спорообразующей активностью.
Изобретение направлено на решение задачи создания нового штамма - Aspergillus fumigatus 6, обладающего высокой спорообразующей активностью, отсутствием патогенности (низкой токсигенностью) и наличием иммуногенных свойств.
Штамм Aspergillus fumigatus 6 выделен в Саратовской научно-исследовательской ветеринарной станции (НИВС) из фекалий больного теленка 1,5-месячного возраста, депонирован во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и кормов (ВГНКИ), хранится в Саратовской НИВС.
Штамм Aspergillus fumigatus 6 характеризуется следующими признаками.
Морфологические признаки
Аспергиллы представлены ветвящимися переплетающимися гифами 3-5 мкм ширины с поперечными перегородками. Органы плодоношения имеют фляжкообразные утолщения на концах гиф с цепочками спор по периферии. В окрашенных по Граму мазках аспергиллы представлены в виде грамположительных гиф и их фрагментов.
Аспергиллы представлены ветвящимися переплетающимися гифами 3-5 мкм ширины с поперечными перегородками. Органы плодоношения имеют фляжкообразные утолщения на концах гиф с цепочками спор по периферии. В окрашенных по Граму мазках аспергиллы представлены в виде грамположительных гиф и их фрагментов.
Культуральные признаки
На пластинчатом агаре Сабуро через 24-48 ч роста при 37oС образуется беловатый пушистый налет. Через 72-96 ч вырастает массивная колония круглой формы с зеленовато-голубоватым оттенком в центре и белой каймой по периферии. В бульоне Сабуро на 3 сутки культивирования отмечается поверхностный рост культуры бархатистого вида темно-зеленого цвета.
На пластинчатом агаре Сабуро через 24-48 ч роста при 37oС образуется беловатый пушистый налет. Через 72-96 ч вырастает массивная колония круглой формы с зеленовато-голубоватым оттенком в центре и белой каймой по периферии. В бульоне Сабуро на 3 сутки культивирования отмечается поверхностный рост культуры бархатистого вида темно-зеленого цвета.
Антигенные свойства
Штамм Aspergillus fumigatus 6 обладает свойствами липополисахарида и продуцирует комплекс токсинов: фумагиллин, фумигатин, глиотоксин и треморген в незначительных количествах.
Штамм Aspergillus fumigatus 6 обладает свойствами липополисахарида и продуцирует комплекс токсинов: фумагиллин, фумигатин, глиотоксин и треморген в незначительных количествах.
Чувствительность к антибиотикам: зона задержки роста культуры штамма левориновыми дисками составляет 9 мм, нистатиновыми - 8 мм.
У штамма отсутствует ауксотрофность.
Вирулентные свойства
Внутрибрюшинное введение культуры штамма в концентрации до 1•108 спор/мл в объеме 0,5 мл гибели белых мышей не вызывает. При внутривенном введении культуры в объеме 0,5 мл: LД100 - 1•108 спор/мл, LД50 - 1•107 спор/мл, LД0 - 5•106 спор/мл. Гибель на 2-5 сутки.
Внутрибрюшинное введение культуры штамма в концентрации до 1•108 спор/мл в объеме 0,5 мл гибели белых мышей не вызывает. При внутривенном введении культуры в объеме 0,5 мл: LД100 - 1•108 спор/мл, LД50 - 1•107 спор/мл, LД0 - 5•106 спор/мл. Гибель на 2-5 сутки.
Штамм относится к III группе патогенности - условно патогенный.
Штамм Aspergillus fumigatus 6 поддерживается методом периодических пересевов на искусственных питательных средах по признаку споробразования и культурально-морфологическим свойствам. В работе со штаммом мутагены не использовались.
Пассажирования на животных не требуется.
Штамм хранят на агаре Сабуро в течение не более 15-30 сут, с последующим пересевом вначале на бульон Сабуро, а затем на агар Сабуро. Оптимальный способ хранения штамма - в ампулах в лиофилизированном состоянии при температуре 4oС до 1 года.
Пример 1
Штамм Aspergillus fumigatus 6 выращивают при 37oС на питательных средах: Сабуро, Чапека или разработанной Саратовской НИВС по патенту РФ 2093569, опуб. 20.10.97 г., содержащей, мас.%:
Глюкоза - 4-5
Гидролизат лактальбумина - 0,45-0,55
Сыворотка крови крупного рогатого скота - 9-11
Солевой раствор Хенкса - Остальное
Солевой раствор Хенкса содержит, г:
Хлористый натрий (NaCl) - 0,8
Хлористый калий (КСl) - 0,04
Сернокислый магний (MgSO4•7Н2О) - 0,01
Хлористый магний (MgCl•6H2O) - 0,01
Двузамещенный фосфорнокислый натрий (Na2HPO4) - 0,006
Однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2РO4) - 0,06
Хлористый кальций (СаСl2) - 0,014
Феноловый красный - 0,002
Бидистиллированная вода - До 100
рН-7-7,2
При культивировании штамма на жидких питательных средах штамм выращивают в течение 12-15 сут, а при инкубировании на плотных питательных средах - в течение 6-12 сут.
Штамм Aspergillus fumigatus 6 выращивают при 37oС на питательных средах: Сабуро, Чапека или разработанной Саратовской НИВС по патенту РФ 2093569, опуб. 20.10.97 г., содержащей, мас.%:
Глюкоза - 4-5
Гидролизат лактальбумина - 0,45-0,55
Сыворотка крови крупного рогатого скота - 9-11
Солевой раствор Хенкса - Остальное
Солевой раствор Хенкса содержит, г:
Хлористый натрий (NaCl) - 0,8
Хлористый калий (КСl) - 0,04
Сернокислый магний (MgSO4•7Н2О) - 0,01
Хлористый магний (MgCl•6H2O) - 0,01
Двузамещенный фосфорнокислый натрий (Na2HPO4) - 0,006
Однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2РO4) - 0,06
Хлористый кальций (СаСl2) - 0,014
Феноловый красный - 0,002
Бидистиллированная вода - До 100
рН-7-7,2
При культивировании штамма на жидких питательных средах штамм выращивают в течение 12-15 сут, а при инкубировании на плотных питательных средах - в течение 6-12 сут.
Спорообразование штамма испытано методом подсчета клеток в камере Горяева с использованием фазоконтрастного устройства по формуле:
(a•4000•1000):b=x,
где а - число сосчитанных клеток;
b - число малых квадратов камеры.
(a•4000•1000):b=x,
где а - число сосчитанных клеток;
b - число малых квадратов камеры.
Результаты спорообразования штамма Aspergillus fumigatus 6 представлены в таблицах 1 и 2.
Пример 2
Штамм Aspergillus fumigatus 6 культивируют на питательной среде, разработанной Саратовской НИВС по патенту РФ 2093569, состав которой описан в примере 1. Культивирование осуществляют в течение 12 сут при температуре 37oС. Затем осуществляют фильтрацию через мембрану "Владипор" 3 для освобождения от мицелия культуры штамма. Вносят раствор формалина 0,4%-ной концентрации и добавляют масляный адъювант в соотношении 5 ч. антигена и 1 ч. адъюванта.
Штамм Aspergillus fumigatus 6 культивируют на питательной среде, разработанной Саратовской НИВС по патенту РФ 2093569, состав которой описан в примере 1. Культивирование осуществляют в течение 12 сут при температуре 37oС. Затем осуществляют фильтрацию через мембрану "Владипор" 3 для освобождения от мицелия культуры штамма. Вносят раствор формалина 0,4%-ной концентрации и добавляют масляный адъювант в соотношении 5 ч. антигена и 1 ч. адъюванта.
Полученным антигеном иммунизировали лабораторных животных. В последующем их подвергали заражению вирулентным штаммом Aspergillus fumigatus. В качестве контроля использовали неиммунизированных животных.
Результаты иммунизации представлены в таблице 3.
Таким образом, предлагаемый штамм Aspergillus fumigatus 6 обладает высокой спорообразующей способностью, а в антигенном отношении - иммуногенностью.
Claims (1)
- Штамм Aspergillus fumigatus 6, депонирован в коллекции ВГНКИ, используемый для получения антигена.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001129311/13A RU2203940C1 (ru) | 2001-10-31 | 2001-10-31 | Штамм aspergillus fumigatus №6, используемый для получения антигена |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001129311/13A RU2203940C1 (ru) | 2001-10-31 | 2001-10-31 | Штамм aspergillus fumigatus №6, используемый для получения антигена |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2203940C1 true RU2203940C1 (ru) | 2003-05-10 |
Family
ID=20254045
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001129311/13A RU2203940C1 (ru) | 2001-10-31 | 2001-10-31 | Штамм aspergillus fumigatus №6, используемый для получения антигена |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2203940C1 (ru) |
-
2001
- 2001-10-31 RU RU2001129311/13A patent/RU2203940C1/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4568639A (en) | Method for the commercial production of helminths antigens | |
Klieneberger | Pleuropneumonia-like organisms of diverse provenance: some results of an enquiry into methods of differentiation | |
Klieneberger-Nobel | Focus on bacteria | |
RU98100430A (ru) | Культивирование lawsonia intracellularis, вакцины против lawsonia intracellularis и диагностические агенты | |
AU5103293A (en) | Immortalized cells and uses therefor | |
CN105385601B (zh) | 一种蝗虫微孢子虫及其悬浮培养方法和应用 | |
RU2416634C1 (ru) | Штамм бактерий halobacterium salinarum - продуцент бактериородопсина | |
RU2203940C1 (ru) | Штамм aspergillus fumigatus №6, используемый для получения антигена | |
Chu | Variation of Bacillus anthracis with special reference to the non-capsulated avirulent variant | |
RU2538158C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
RU2209243C1 (ru) | Штамм candida albicans № 253, используемый для получения антигена | |
RU2288002C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против энтерококковой инфекции нутрий | |
RU2043770C1 (ru) | Способ получения вакцины против некробактериоза животных | |
RU2316345C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
RU2308969C1 (ru) | ЖИВАЯ ТУЛЯРЕМИЙНАЯ ВАКЦИНА Nik-sp. Francisella tularensis | |
RU2085584C1 (ru) | Способ получения рекомбинантных туляремийных микроорганизмов - продуцентов факторов вирулентности, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies, holarctica r5s - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica shu, рекомбинантный штамм francisella tularensis holarctica rn4 - продуцент фактора вирулентности pseudomonas pseudomallei c 141, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies holarctica r1a - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica b 399 a cole | |
RU2521651C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ, Moraxella bovoculi "СХ-Ч6 N-ДЕП" ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМОВ И ВАКЦИН ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО КЕРАТОКОНЪЮКТИВИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | |
GB2152510A (en) | Method for the production of helminths vaccines | |
RU2145353C1 (ru) | Штамм бактерий moraxella bovis "г97-вниви", используемый для изготовления диагностикумов и вакцин против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота | |
RU2247577C2 (ru) | Вакцина для специфической профилактики хламидиоза свиней | |
RU2707289C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота | |
RU2301077C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий | |
RU2230567C2 (ru) | Вакцина против аспергиллёза | |
RU2054293C1 (ru) | Способ получения вакцины против бруцеллеза | |
SU1669980A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае сноLеRае - продуцент дермонекротического фактора |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20041101 |