RU2202800C2 - Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа - Google Patents

Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа Download PDF

Info

Publication number
RU2202800C2
RU2202800C2 RU2000117886A RU2000117886A RU2202800C2 RU 2202800 C2 RU2202800 C2 RU 2202800C2 RU 2000117886 A RU2000117886 A RU 2000117886A RU 2000117886 A RU2000117886 A RU 2000117886A RU 2202800 C2 RU2202800 C2 RU 2202800C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
dot
sol
immunoassay
corpuscular
solution
Prior art date
Application number
RU2000117886A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2000117886A (ru
Inventor
Т.Ю. Загоскина
Е.П. Голубинский
А.И. Калиновский
А.А. Докорина
Original Assignee
Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока filed Critical Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока
Priority to RU2000117886A priority Critical patent/RU2202800C2/ru
Publication of RU2000117886A publication Critical patent/RU2000117886A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2202800C2 publication Critical patent/RU2202800C2/ru

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно - к лабораторной диагностике. Способ осуществляется путем приготовления золя серебра и добавления полученного золя к водному раствору противобруцеллезного IgG. Далее полученную смесь стабилизируют внесением фосфатного буфера, содержащего сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия. Способ приготовления диагностикума дешев, технологичен, доступен, позволяет отказаться от дорогостоящего оснащения, обеспечивает высокую чувствительность и специфичность результатов дот-иммуноанализа.

Description

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно - к лабораторной диагностике, и может быть использовано для приготовления диагностикума с целью обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа.
Несмотря на то что в практике здравоохранения используется ряд методов для обнаружения антигенов бруцелл, они, к сожалению, не лишены ряда существенных недостатков. Поэтому усовершенствование существующих и разработка новых современных методов лабораторной диагностики бруцеллеза являются актуальными.
В последнее время в практических лабораториях для обнаружения антигенов бруцелл используют либо метод флуоресцирующих антител, либо иммуноферментный анализ (Т. Ю. Загоскина, С.П. Меринов. Характеристика рутинных методов выявления антигенов бруцелл // Журн. инфекцион. патологии. - 1998. - Т. 5. - 4. - С. 12-17). Однако их широкое внедрение ограничено отсутствием качественных коммерческих диагностикумов, а также необходимостью соответствующего приборного обеспечения лабораторий.
Наиболее близким к предлагаемому является способ приготовления диагностикума для обнаружения антигенов бруцелл с помощью противобруцеллезных IgG, меченных коллоидным золотом (Загоскина Т.Ю., Марков Е.Ю., Калиновский А.И., Голубинский Е.П. Использование специфических антител, меченных частицами коллоидного золота, для обнаружения антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа // Журн. микробиол. - 1998. - 6. - С. 64-68). Однако данный способ имеет существенные недостатки: предполагает использование дорогостоящих (импортных) реактивов - золотохлористоводородной кислоты и лактата серебра - и оборудования - ультрацентрифуги.
Цель изобретения - удешевление, повышение технологичности и доступности способа приготовления диагностикума.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве маркера противобруцеллезных IgG используют золь серебра, который получают обработкой 0,035%-ного раствора азотно-кислого серебра равным объемом 0,05%-ного раствора боргидрида натрия. Созревший золь дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, добавляют к водному раствору противобруцеллезных IgG в соотношении по объему 10: 1. Через 30 мин после добавления последней порции золя в диагностикум вносят равный объем фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.
Сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемое техническое решение отличается от известного тем, что в качестве золя коллоидного металла используют золь серебра, который готовят восстановлением из водного раствора 0,035%-ного азотно-кислого серебра равным объемом 0,05%-ного раствора боргидрида натрия. Полученный золь дробно, в три приема с интервалом по 10 минут, добавляют к раствору противобруцеллезного IgG в соотношении по объему 10: 1, соответственно, через 30 минут после добавления последней порции золя в смесь вносят равный объем фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.
Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения "новизна".
Проведенный анализ патентной и специальной литературы показал, что предлагаемый способ отличается не только от прототипа, но и от других технических решений в данной и смежных областях. Так, авторами не найден способ приготовления диагностикума для дот-иммуноанализа на основе противобруцеллезного IgG, меченного коллоидным серебром, который бы использовался для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл. Предлагаемые режимы приготовления диагностикума позволяют достичь поставленной цели - удешевление, повышение технологичности и доступности способа приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа. При этом способ прост, но эффективен, позволяет получать качественный диагностикум, не используя дорогостоящих реактивов и оборудования. Данный диагностикум может производиться и применяться в клинических, ветеринарных и научно-исследовательских лабораториях, занимающихся диагностикой бруцеллеза.
Таким образом, предлагаемый способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа соответствует критериям "изобретательский уровень" и "промышленная применимость".
Предлагаемый способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа выполняется следующим образом: к 0,0035 г азотно-кислого серебра, растворенного в 10 мл дистиллированной воды, добавляют равный объем 0,005%-ного водного раствора боргидрида натрия. Смесь встряхивают в течение 15 мин при комнатной температуре для созревания золя, который дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, добавляют к 2 мл водного раствора противобруцеллезного IgG концентрацией 0,8 мг/мл. Через 30 мин после добавления последней порции золя в реакционную смесь вносят равный объем 0,02 М фосфатного буфера рН 7,2, содержащего 2% БСА, 20% телячьей фетальной сыворотки и 0,04% азида натрия и выдерживают 30 мин.
Пример. К 0,0035 г азотно-кислого серебра, растворенного в 10 мл дистиллированной воды, добавляют равный объем 0,005%-ного водного раствора боргидрида натрия. Смесь встряхивают в течение 15 мин при комнатной температуре для созревания золя, который дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, добавляют к 2 мл водного раствора противобруцеллезного IgG концентрацией 0,8 мг/мл. Через 30 мин после добавления последней порции золя в реакционную смесь вносят равный объем 0,02 М фосфатного буфера рН 7,2, содержащего 2% БСА, 20% телячьей фетальной сыворотки и 0,04% азида натрия и выдерживают 30 мин.
Диагностикум, приготовленный данным способом, апробирован в дот-иммуноанализе при исследовании 250 проб (штаммы бруцелл всех известных видов, искусственно контаминированные объекты внешней среды, материал от больных людей и экспериментальных животных). Чувствительность дот-иммуноанализа при использовании диагностикума составила ≥6,1•104 м.к./мл корпускулярных и ≥9 нг/мл растворимых антигенов бруцелл. Ложноположительных результатов с гетерологичными микроорганизмами не отмечалось. Аналогичные данные получены при исследовании материала в дот-иммуноанализе с IgG, меченными коллоидным золотом. Однако предлагаемый диагностикум значительно дешевле, доступнее, технологичнее, способ его приготовления прост, не требуется оснащения дорогостоящими реактивами и оборудованием. Использование диагностикума в дот-иммуноанализе позволяет быстро и качественно осуществлять обнаружение корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл.

Claims (1)

  1. Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа, включающий приготовление золя коллоидного металла и добавление его к раствору иммуноглобулина G, отличающийся тем, что в качестве золя коллоидного металла используют золь серебра, который готовят обработкой 0,035%-ного водного раствора азотно-кислого серебра равным объемом 0,05%-ного раствора боргидрида натрия, затем его дробно, в три приема с интервалом по 10 мин добавляют к раствору противобруцеллезного IgG в соотношении по объему 10:1 соответственно, через 30 мин после добавления последней порции золя в смесь вносят равный объем фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.
RU2000117886A 2000-07-05 2000-07-05 Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа RU2202800C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000117886A RU2202800C2 (ru) 2000-07-05 2000-07-05 Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000117886A RU2202800C2 (ru) 2000-07-05 2000-07-05 Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2000117886A RU2000117886A (ru) 2002-09-10
RU2202800C2 true RU2202800C2 (ru) 2003-04-20

Family

ID=20237428

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2000117886A RU2202800C2 (ru) 2000-07-05 2000-07-05 Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2202800C2 (ru)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ЗАГОСКИНА Т.Ю., МАРКОВ Е.Ю., КАЛИНОВСКИЙ А.И., ГОЛУБИНСКИЙ Е.П. Использование специфических антител, меченных частицами коллоидного золота, для обнаружения антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа. - Ж. "Микробиология", 1998, № 6, с.64-68. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7713715B2 (en) Method for diagnosing infections
JP2001515598A (ja) 電気化学ルミネセンスを使用した水伝播性寄生虫の検出
DK174032B1 (da) Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler
CN111273017A (zh) 一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒
Maynard et al. Hepatitis-associated antigen in chimpanzees
NZ528008A (en) Pretreatment kit for saliva and pretreatment method for saliva
JP4268358B2 (ja) 抗体および免疫学的測定方法
EP3508849A1 (en) Antibody measurement method using antigen-carrying insoluble carrier particles on which antigen is immobilized by different methods, and reagent for antibody measurement
RU2360252C1 (ru) Диагностикум и тест-система для определения активности антирабических сывороток и препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина in vitro методом дот-иммуноанализа
EP0431682B1 (en) Buffered wash composition, insolubilizing composition, test kits and method of use
CN103149357B (zh) 一种利用竞争法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡
RU2202800C2 (ru) Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа
EP0079145B1 (en) Reagent for use in diagnosis of syphilis and preparation thereof
AU2021104366A4 (en) KIT FOR DETECTING DUST MITE COMPONENT-SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN E (sIgE)
US4582699A (en) Assay of immunoglobulin A protease and the rapid diagnosis of gonorrhea
RU2202798C2 (ru) Способ приготовления диагностикума для детекции противобруцеллезных антител в сыворотках крови методом дот-иммуноанализа
JPH04355339A (ja) 微量検体採取用具
RU2756202C1 (ru) Способ получения магнитных иммуносорбентов для селективного концентрирования F. tularensis из объектов окружающей среды с последующей детекцией методом MALDI-TOF MS
RU2754465C1 (ru) Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) при клостридиозах животных
EP1192469A1 (en) Assay
WO1994015216A1 (en) Process for obtaining a diagnostic reagent for detecting antigens and antibodies of infectious and other illnesses
JP4217516B2 (ja) ストレプトコッカス・ミュータンスに対するポリクローナル抗体の製造方法
JP2000131319A (ja) 簡易抗体検査方法及び検査用キット
RU2196335C1 (ru) Способ определения гетерогенных антигенов, сходных для микроорганизмов и органов человека и животного
JPH02107969A (ja) 歯周病の診断用試薬及び方法