RU2202800C2 - Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа - Google Patents
Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2202800C2 RU2202800C2 RU2000117886A RU2000117886A RU2202800C2 RU 2202800 C2 RU2202800 C2 RU 2202800C2 RU 2000117886 A RU2000117886 A RU 2000117886A RU 2000117886 A RU2000117886 A RU 2000117886A RU 2202800 C2 RU2202800 C2 RU 2202800C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dot
- sol
- immunoassay
- corpuscular
- solution
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно - к лабораторной диагностике. Способ осуществляется путем приготовления золя серебра и добавления полученного золя к водному раствору противобруцеллезного IgG. Далее полученную смесь стабилизируют внесением фосфатного буфера, содержащего сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия. Способ приготовления диагностикума дешев, технологичен, доступен, позволяет отказаться от дорогостоящего оснащения, обеспечивает высокую чувствительность и специфичность результатов дот-иммуноанализа.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно - к лабораторной диагностике, и может быть использовано для приготовления диагностикума с целью обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа.
Несмотря на то что в практике здравоохранения используется ряд методов для обнаружения антигенов бруцелл, они, к сожалению, не лишены ряда существенных недостатков. Поэтому усовершенствование существующих и разработка новых современных методов лабораторной диагностики бруцеллеза являются актуальными.
В последнее время в практических лабораториях для обнаружения антигенов бруцелл используют либо метод флуоресцирующих антител, либо иммуноферментный анализ (Т. Ю. Загоскина, С.П. Меринов. Характеристика рутинных методов выявления антигенов бруцелл // Журн. инфекцион. патологии. - 1998. - Т. 5. - 4. - С. 12-17). Однако их широкое внедрение ограничено отсутствием качественных коммерческих диагностикумов, а также необходимостью соответствующего приборного обеспечения лабораторий.
Наиболее близким к предлагаемому является способ приготовления диагностикума для обнаружения антигенов бруцелл с помощью противобруцеллезных IgG, меченных коллоидным золотом (Загоскина Т.Ю., Марков Е.Ю., Калиновский А.И., Голубинский Е.П. Использование специфических антител, меченных частицами коллоидного золота, для обнаружения антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа // Журн. микробиол. - 1998. - 6. - С. 64-68). Однако данный способ имеет существенные недостатки: предполагает использование дорогостоящих (импортных) реактивов - золотохлористоводородной кислоты и лактата серебра - и оборудования - ультрацентрифуги.
Цель изобретения - удешевление, повышение технологичности и доступности способа приготовления диагностикума.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве маркера противобруцеллезных IgG используют золь серебра, который получают обработкой 0,035%-ного раствора азотно-кислого серебра равным объемом 0,05%-ного раствора боргидрида натрия. Созревший золь дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, добавляют к водному раствору противобруцеллезных IgG в соотношении по объему 10: 1. Через 30 мин после добавления последней порции золя в диагностикум вносят равный объем фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.
Сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемое техническое решение отличается от известного тем, что в качестве золя коллоидного металла используют золь серебра, который готовят восстановлением из водного раствора 0,035%-ного азотно-кислого серебра равным объемом 0,05%-ного раствора боргидрида натрия. Полученный золь дробно, в три приема с интервалом по 10 минут, добавляют к раствору противобруцеллезного IgG в соотношении по объему 10: 1, соответственно, через 30 минут после добавления последней порции золя в смесь вносят равный объем фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.
Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения "новизна".
Проведенный анализ патентной и специальной литературы показал, что предлагаемый способ отличается не только от прототипа, но и от других технических решений в данной и смежных областях. Так, авторами не найден способ приготовления диагностикума для дот-иммуноанализа на основе противобруцеллезного IgG, меченного коллоидным серебром, который бы использовался для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл. Предлагаемые режимы приготовления диагностикума позволяют достичь поставленной цели - удешевление, повышение технологичности и доступности способа приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа. При этом способ прост, но эффективен, позволяет получать качественный диагностикум, не используя дорогостоящих реактивов и оборудования. Данный диагностикум может производиться и применяться в клинических, ветеринарных и научно-исследовательских лабораториях, занимающихся диагностикой бруцеллеза.
Таким образом, предлагаемый способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа соответствует критериям "изобретательский уровень" и "промышленная применимость".
Предлагаемый способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа выполняется следующим образом: к 0,0035 г азотно-кислого серебра, растворенного в 10 мл дистиллированной воды, добавляют равный объем 0,005%-ного водного раствора боргидрида натрия. Смесь встряхивают в течение 15 мин при комнатной температуре для созревания золя, который дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, добавляют к 2 мл водного раствора противобруцеллезного IgG концентрацией 0,8 мг/мл. Через 30 мин после добавления последней порции золя в реакционную смесь вносят равный объем 0,02 М фосфатного буфера рН 7,2, содержащего 2% БСА, 20% телячьей фетальной сыворотки и 0,04% азида натрия и выдерживают 30 мин.
Пример. К 0,0035 г азотно-кислого серебра, растворенного в 10 мл дистиллированной воды, добавляют равный объем 0,005%-ного водного раствора боргидрида натрия. Смесь встряхивают в течение 15 мин при комнатной температуре для созревания золя, который дробно, в три приема с интервалами по 10 мин, добавляют к 2 мл водного раствора противобруцеллезного IgG концентрацией 0,8 мг/мл. Через 30 мин после добавления последней порции золя в реакционную смесь вносят равный объем 0,02 М фосфатного буфера рН 7,2, содержащего 2% БСА, 20% телячьей фетальной сыворотки и 0,04% азида натрия и выдерживают 30 мин.
Диагностикум, приготовленный данным способом, апробирован в дот-иммуноанализе при исследовании 250 проб (штаммы бруцелл всех известных видов, искусственно контаминированные объекты внешней среды, материал от больных людей и экспериментальных животных). Чувствительность дот-иммуноанализа при использовании диагностикума составила ≥6,1•104 м.к./мл корпускулярных и ≥9 нг/мл растворимых антигенов бруцелл. Ложноположительных результатов с гетерологичными микроорганизмами не отмечалось. Аналогичные данные получены при исследовании материала в дот-иммуноанализе с IgG, меченными коллоидным золотом. Однако предлагаемый диагностикум значительно дешевле, доступнее, технологичнее, способ его приготовления прост, не требуется оснащения дорогостоящими реактивами и оборудованием. Использование диагностикума в дот-иммуноанализе позволяет быстро и качественно осуществлять обнаружение корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл.
Claims (1)
- Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа, включающий приготовление золя коллоидного металла и добавление его к раствору иммуноглобулина G, отличающийся тем, что в качестве золя коллоидного металла используют золь серебра, который готовят обработкой 0,035%-ного водного раствора азотно-кислого серебра равным объемом 0,05%-ного раствора боргидрида натрия, затем его дробно, в три приема с интервалом по 10 мин добавляют к раствору противобруцеллезного IgG в соотношении по объему 10:1 соответственно, через 30 мин после добавления последней порции золя в смесь вносят равный объем фосфатного буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин, телячью фетальную сыворотку и азид натрия.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000117886A RU2202800C2 (ru) | 2000-07-05 | 2000-07-05 | Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000117886A RU2202800C2 (ru) | 2000-07-05 | 2000-07-05 | Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000117886A RU2000117886A (ru) | 2002-09-10 |
RU2202800C2 true RU2202800C2 (ru) | 2003-04-20 |
Family
ID=20237428
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000117886A RU2202800C2 (ru) | 2000-07-05 | 2000-07-05 | Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2202800C2 (ru) |
-
2000
- 2000-07-05 RU RU2000117886A patent/RU2202800C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЗАГОСКИНА Т.Ю., МАРКОВ Е.Ю., КАЛИНОВСКИЙ А.И., ГОЛУБИНСКИЙ Е.П. Использование специфических антител, меченных частицами коллоидного золота, для обнаружения антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа. - Ж. "Микробиология", 1998, № 6, с.64-68. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7713715B2 (en) | Method for diagnosing infections | |
JP2001515598A (ja) | 電気化学ルミネセンスを使用した水伝播性寄生虫の検出 | |
DK174032B1 (da) | Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler | |
CN111273017A (zh) | 一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒 | |
Maynard et al. | Hepatitis-associated antigen in chimpanzees | |
NZ528008A (en) | Pretreatment kit for saliva and pretreatment method for saliva | |
JP4268358B2 (ja) | 抗体および免疫学的測定方法 | |
EP3508849A1 (en) | Antibody measurement method using antigen-carrying insoluble carrier particles on which antigen is immobilized by different methods, and reagent for antibody measurement | |
RU2360252C1 (ru) | Диагностикум и тест-система для определения активности антирабических сывороток и препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина in vitro методом дот-иммуноанализа | |
EP0431682B1 (en) | Buffered wash composition, insolubilizing composition, test kits and method of use | |
CN103149357B (zh) | 一种利用竞争法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡 | |
RU2202800C2 (ru) | Способ приготовления диагностикума для обнаружения корпускулярных и растворимых антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа | |
EP0079145B1 (en) | Reagent for use in diagnosis of syphilis and preparation thereof | |
AU2021104366A4 (en) | KIT FOR DETECTING DUST MITE COMPONENT-SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN E (sIgE) | |
US4582699A (en) | Assay of immunoglobulin A protease and the rapid diagnosis of gonorrhea | |
RU2202798C2 (ru) | Способ приготовления диагностикума для детекции противобруцеллезных антител в сыворотках крови методом дот-иммуноанализа | |
JPH04355339A (ja) | 微量検体採取用具 | |
RU2756202C1 (ru) | Способ получения магнитных иммуносорбентов для селективного концентрирования F. tularensis из объектов окружающей среды с последующей детекцией методом MALDI-TOF MS | |
RU2754465C1 (ru) | Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) при клостридиозах животных | |
EP1192469A1 (en) | Assay | |
WO1994015216A1 (en) | Process for obtaining a diagnostic reagent for detecting antigens and antibodies of infectious and other illnesses | |
JP4217516B2 (ja) | ストレプトコッカス・ミュータンスに対するポリクローナル抗体の製造方法 | |
JP2000131319A (ja) | 簡易抗体検査方法及び検査用キット | |
RU2196335C1 (ru) | Способ определения гетерогенных антигенов, сходных для микроорганизмов и органов человека и животного | |
JPH02107969A (ja) | 歯周病の診断用試薬及び方法 |