RU2202796C2 - Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон - Google Patents
Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон Download PDFInfo
- Publication number
- RU2202796C2 RU2202796C2 RU2000100660A RU2000100660A RU2202796C2 RU 2202796 C2 RU2202796 C2 RU 2202796C2 RU 2000100660 A RU2000100660 A RU 2000100660A RU 2000100660 A RU2000100660 A RU 2000100660A RU 2202796 C2 RU2202796 C2 RU 2202796C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- prednisolone
- sample
- solution
- activity
- supernatant
- Prior art date
Links
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии. Способ обеспечивает повышение эффективности лечения за счет определения индивидуальной сорбционной активности эритроцитов пациента к преднизолону до применения в комплексе лечебных мероприятий иммунофармакотерапии. Проводят постановку реакции клеточной иммуносорбции и получение надосадочной жидкости, при этом выделенную эритромассу инкубируют с раствором преднизолона в концентрации 1 мкг/мл в равных объемах в течение 60 мин, центрифугируют и получают надосадочную жидкость, затем в первую пробу вносят 0,05 мл среды 199, во вторую - 0,05 мл раствора преднизолона в исходной концентрации и в третью - 0,05 мл надосадочной жидкости, полученной после инкубации преднизолона с эритромассой, затем во все пробы добавляют 0,05 мл раствора нитросинего тетразолия и 0,1 мл цельной крови пациента, после чего инкубируют, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость, из клеточного осадка готовят мазки, фиксируют метанолом и окрашивают нейтральным красным, подсчитывают процентное содержание нейтрофилов, в цитоплазме которых содержатся гранулы диформазана, затем оценивают биологическую активность преднизолона в первой опытной пробе по проценту снижения НТС-активности нейтрофилов в сравнении с контрольной пробой без преднизолона и определяют сорбционную активность эритроцитов по разнице показателей в пробе с надосадочной жидкостью и в пробе с раствором преднизолона.
Description
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, в именно к иммунологии, и может применяться в иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, нагруженных, например, преднизолоном в комплексе лечебных мероприятий при различных хронических воспалительных заболеваниях, сопровождающихся признаками гиперактивации иммунной системы.
Наиболее близким к предлагаемому является способ определения сорбционной активности рецепторного аппарата эритроцитов человека. Сущность известного способа заключается в следующем: кровь больного берут в количестве 4-5 мл в пробирку, содержащую 0,1 мл 2,5 тыс. ЕД гепарина, эритроциты отмывают трехкратным центрифугированием 5-7 минут при 1500 об/мин в фосфатно-солевом буфере. Отмытые эритроциты разводят фосфатно-солевым буфером до получения 3-5% суспензии и 1,5 мл полученной суспензии инкубируют при комнатной температуре в течение 40-45 минут с 1,5 мл разведенной мышиной сыворотки. По окончании инкубации смесь центрифугируют и измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости против контрольной пробы на спектрофотометре. Контрольная проба представляет собой 1,5 мл мышиной сыворотки взятого разведения, к которым добавляют 1,5 мл фосфатно-солевого буфера и обрабатывают также, как опытную пробу. Полученное значение сравнивают со средним донорским контролем и разность отражает сорбционную активность рецепторного аппарата эритроцитов человека (1).
Однако известный способ обладает определенными недостатками, а именно:
известный способ определения сорбционной активности позволяет судить о функциональном состоянии рецепторного аппарата эритроцитов человека и прогнозе в отношении выздоровления, в то время, как предлагаемый способ может быть применен для оценки сорбционной активности эритроцитов в отношении конкретного препарата и возможности проведения в комплексе лечебных мероприятий иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, нагруженных преднизолоном при различных заболеваниях, сопровождающихся гиперактивацией иммунной системы.
известный способ определения сорбционной активности позволяет судить о функциональном состоянии рецепторного аппарата эритроцитов человека и прогнозе в отношении выздоровления, в то время, как предлагаемый способ может быть применен для оценки сорбционной активности эритроцитов в отношении конкретного препарата и возможности проведения в комплексе лечебных мероприятий иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, нагруженных преднизолоном при различных заболеваниях, сопровождающихся гиперактивацией иммунной системы.
Исходя из известного уровня технологий определения сорбционной активности эритроцитов была поставлена задача: повысить эффективность лечения за счет определения индивидуальной сорбционной способности эритроцитов пациента к преднизолону до применения в комплексе лечебных мероприятий иммунофармакотерапии.
Поставленная задача решена следующим образом.
Определение способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон выполняют путем постановки реакции клеточной иммуносорбции и получения надосадочной жидкости. Новым в предлагаемом способе является то, что выделенную эритромассу инкубируют с раствором преднизолона в концентрации 1 мкг/мл в равных объемах в течение 60 минут, центрифугируют и получают надосадочную жидкость. Затем в первую пробу вносят 0,05 мл среды 199, во вторую пробу 0,05 мл раствора преднизолона в исходной концентрации и в третью пробу 0,05 мл надосадочной жидкости, полученной после инкубации преднизолона с эритромассой. Затем во все пробы добавляют 0,05 мл раствора нитросинего тетразолия и 0,1 мл цельной крови пациента. После чего инкубируют, центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Из клеточного осадка готовят мазки, фиксируют метанолом и окрашивают нейтральным красным, подсчитывают процентное содержание нейтрофилов, в цитоплазме которых содержатся гранулы диформазана. Затем оценивают биологическую активность преднизолона в первой опытной пробе по проценту снижения НСТ-активности нейтрофилов в сравнении с контрольной пробой без преднизолона и определяют сорбционную активность эритроцитов по разнице показателей в пробе с раствором преднизолона в исходной концентрации и в пробе с надосадочной жидкостью и при выявлении разницы между этими показателями более 5% считают целесообразным проведение экстракорпоральной иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, обработанных раствором преднизолона.
Поясняем существенность отличительных признаков предлагаемого способа иммунофармакотерапии.
При инкубации эритромассы с раствором преднизолона эритроциты обладают способностью неспецифически сорбировать и концентрировать на своей поверхности преднизолон и при введении в организм оказывать регуляторное воздействие на процессы лимфопролиферации, лежащие в основе иммунного ответа.
Полученную после инкубации и центрифугирования эритромассы с раствором преднизолона в исходной концентрации надосадочную жидкость используют для постановки НСТ-теста для оценки сорбционной способности эритроцитов, определяемой по степени падения биологической активности преднизолона после его инкубации с эритроцитами.
Первую пробу с добавлением 0,05 мл среды 199 используют как контрольную для последующего сравнения с опытными пробами.
Вторую пробу с добавлением 0,05 мл раствора преднизолона в концентрации 1 мкг/мл используют для оценки биологической активности преднизолона в сравнении с контрольной пробой.
Третью пробу с добавлением 0,05 мл надосадочной жидкости, полученной после инкубации преднизолона в исходной концентрации с эритромассой, используют для оценки сорбционной способности эритроцитов по степени падения биологической активности препарата в сравнении со второй пробой.
Добавление во все пробы 0,05 мл растворимого красителя нитросинего тетразолия и 0,1 мл цельной крови пациента с последующей инкубацией в термостате при температуре 37oС и центрифугирование необходимо для приготовления мазков и определения процентного содержания нейтрофилов, в цитоплазме которых содержатся гранулы нерастворимого диформазана.
Биологическую активность преднизолона оценивают по проценту снижения НСТ-активности нейтрофилов в пробе с добавлением раствора преднизолона в исходной концентрации по сравнению с контрольной пробой без преднизолона.
Наличие и величину сорбционной активности эритроцитов вычисляют по разнице показателей пробы с надосадочной жидкостью и пробы с раствором преднизолона в исходной концентрации.
5 процентная разница исключает сшибку при подсчете НСТ-позитивных клеток и предполагает получение достоверных результатов при решении вопроса о целесообразности проведения у конкретного пациента экстракорпоральной иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, обработанных преднизолоном в комплексе лечебных мероприятий.
Проведенные патентные исследования по подклассу G 01 N 33/53, A 61 К 37/02 и анализ научно-медицинской информации, отражающей существующий уровень способов определения сорбционной способности эритроцитов периферической крови, не выявили технологий, идентичных предложенной. Таким образом, предлагаемый способ определения эритроцитов человека сорбировать преднизолон является новым.
Взаимосвязь и взаимодействие существенных приемов предлагаемого способа определения способности эритроцитов человека сорбироватъ преднизолон обеспечивает достижение нового медицинского результата в решении поставленной задачи, а именно: повысить эффективность лечения за счет определения индивидуальной сорбционной способности эритроцитов пациента к преднизолону.
Предлагаемый способ может быть широко применен в практическом здравоохранении, так как может быть воспроизведен неоднократно и не требует использования дорогостоящего оборудования и реактивов.
Сущность предлагаемого способа определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон заключается в следующем.
Производят забор крови пациента из локтевой вены в стерильных условиях на гепарине из расчета 25 ЕД на 1 мл крови, часть которой используют для получения эритромассы путем трехкратной отмывки в изотоническом растворе хлорида натрия. Равные объемы отмытой эритромассы и раствора преднизолона в концентрации 1 мкг/мл инкубируют в термостате при 37oC в течение 1 часа. После инкубации взвесь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 минут, снимают надосадочную жидкость, которую используют в дальнейших исследованиях. Постановку НСТ-теста проводят в планшетах для иммунологических исследований. В первую пробу вносят 0,05 мл среды 199, во вторую - 0,05 мл раствора преднизолона в концентрации 1 мкг/мл, в третью - 0,05 мл надосадочной жидкости, подученной после эритросорбции. Во все пробы вносят раствор нитросинего тетразолия в объеме 0,05 мл и 0,01 мл цельной крови пациента. Пробы инкубируют в термостате при 37oC и в течение 30 минут, центрифугируют 10 минут при 1000 об/мин. Из клеточного осадка готовят мазки, фиксируют метанолом, окрашивают нейтральным красным и определяют процентное содержание нейтрофилов, содержащих в цитоплазме гранулы диформазана (НСТ-позитивных клеток).
Биологическую активность преднизолона в пробе с его исходной концентрацией и в пробе с надосадочной жидкостью, полученной после инкубации раствора преднизалона с эритромассой, вычисляют в процентах снижения НСТ-активности нейтрофилов в сравнении с показателем контрольной пробы без преднизолона. Сорбционную активность эритроцитов человека к преднизолону вычисляют по разнице показателей в пробе с надосадочной жидкостью и в пробе с раствором преднизолона и при выявлении разницы между этими показателями более 5 процентов считают целесообразным проведение экстракорпоральной иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, обработанных раствором преднизолона.
Сущность предлагаемого способа поясняется клиническими примерами.
Пример 1. Больной У., 52 года. Диагноз: несросшийся диафизарный перелом правой большеберцовой кости, хронический остеомиелит, ИДС гипосупрессорного типа с признаками гиперактивации фагоцитов.
Сорбционную активность эритроцитов (САЭ) оценивали по способности преднизолона в концентрации 1 мкг/мл подавлять активность нейтрофилов перед и после инкубации его с эритроцитами, инкубацию осуществляли в термостате при температуре 37oC в течение 1 часа после смешивания равных объемов эритромассы с раствором преднизолона. САЭ вычисляли в процентах падения биологической активности преднизолона после инкубации его с эритроцитами.
В контрольной пробе без преднизолона процент НСТ-активности составил 62%. В 1-й опытной пробе (с добавлением раствора преднизолона в исходной концентрации) НСТ-активность нейтрофилов составила 46%. Во второй опытной пробе (с добавлением надосадочной жидкости после инкубации эритроцитов с преднизолоном) НСТ-активность нейтрофилов - 57%. Показатель САЭ составил 11% (57% - 46%=11%).
При определении способности эритроцитов больного сорбировать преднизолон показатель НСТ-активности нитрофилов в пробе с надосадочной жидкостью, полученной после инкубации эритромассы пациента с раствором преднизолона в исходном концентрации превысил показатель НСТ-активности в пробе с добавлением преднизолона. Таким образом, данному больному целесообразно проведение экстракорпоральной иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, обработанных раствором преднизолона в комплексе лечебных мероприятий с целью снижения гиперактивации иммунной системы.
Пример 2. Больная Д., 19 лет. Диагноз: первично-открытый инфицированный двойной перелом средней трети правой большеберцовой кости со смещением, некроз мягких тканей в средней трети правой голени, инфицированная рана правой стопы, НДС гиперсупрессорного типа выраженного характера с признаками гиперактивации фагоцитирующих лейкоцитов.
В контрольной пробе (без преднизолона) процент НСТ-активности нейтрофилов составил 77%. В 1-й опытной пробе (с добавлением раствора преднизолона в исходной концентрации) НСТ-активность составила 58%. Во 2-й опытной пробе (с добавлением надосадочной жидкости после инкубации эритромассы с раствором преднизолона) HСT-активность нейтрофилов - 54%. Показатель САЭ составил 5% (58 - 54%=4%).
Следовательно, при определении способности эритроцитов данной больной сорбировать преднизолон показатель НСТ-активности нейтрофилов в пробе с надосадочной жидкостью, полученной после инкубации эритромассы с раствором преднизолона превышает показатель НСТ-активности в пробе с раствором преднизолона в исходной концентрации не более чем на 5%. Проведение экстракорпоральной иммунофармакотерапии с использованием аутоэритроцитов, обработанных преднизолоном нецелесообразно, ввиду низкой сорбционной активности эритроцитов.
Таким образом, предлагаемый "Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон" позволяет по сравнению с известными технологиями повысить эффективность лечения за счет определения индивидуальной сорбционной способности эритроцитов пациента к преднизолону до применения в комплексе лечебных мероприятий иммунофармакотерапии.
Источник информации
1. А.С. СССР N1778707, БИ 44, G 01 N 33/531.
1. А.С. СССР N1778707, БИ 44, G 01 N 33/531.
Claims (1)
- Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон путем постановки реакции клеточной иммуносорбции и получения надосадочной жидкости, отличающийся тем, что выделенную эритромассу инкубируют с раствором преднизолона в концентрации 1 мкг/мл в равных объемах в течение 60 мин, центрифугируют и получают надосадочную жидкость, затем в первую пробу вносят 0,05 мл среды 199, во вторую - 0,05 мл раствора преднизолона в исходной концентрации и в третью 0,05 мл надосадочной жидкости, полученной после инкубации преднизолона с эритромассой, затем во все пробы добавляют 0,05 мл раствора нитросинего тетразолия и 0,1 мл цельной крови пациента, после чего инкубируют, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость, из клеточного осадка готовят мазки, фиксируют метанолом и окрашивают нейтральным красным, подсчитывают процентное содержание нейтрофилов, в цитоплазме которых содержатся гранулы диформазана, затем оценивают биологическую активность преднизолона в первой опытной пробе по проценту снижения НСТ-активности нейтрофилов в сравнении с контрольной пробой без преднизолона и определяют сорбционную активность эритроцитов по разнице показателей в пробе с надосадочной жидкостью и в пробе с раствором преднизолона.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000100660A RU2202796C2 (ru) | 2000-01-10 | 2000-01-10 | Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000100660A RU2202796C2 (ru) | 2000-01-10 | 2000-01-10 | Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000100660A RU2000100660A (ru) | 2001-09-20 |
RU2202796C2 true RU2202796C2 (ru) | 2003-04-20 |
Family
ID=20229247
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000100660A RU2202796C2 (ru) | 2000-01-10 | 2000-01-10 | Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2202796C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492486C1 (ru) * | 2012-06-15 | 2013-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) | Способ оценки сорбционной способности клетки |
-
2000
- 2000-01-10 RU RU2000100660A patent/RU2202796C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Исследование системы крови в клинической практике. Под ред. Г.И. КОЗИНЦА и др. - М.: Триада-Х, 1997, с.94-105. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492486C1 (ru) * | 2012-06-15 | 2013-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) | Способ оценки сорбционной способности клетки |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Serjeant et al. | A whole blood solubility and centrifugation test for sickle cell hemoglobin: a clinical trial | |
Parving et al. | Increased urinary albumin-excretion rate in benign essential hypertension | |
Spaet et al. | Defective platelets in essential thrombocythemia | |
Rasi et al. | Haemophiliacs with factor VIII inhibitors in Finland: prevalence, incidence and outcome | |
JPS63500264A (ja) | 哺乳動物およびその代りのテストキットにおける病理学的条件の存在とモニタリングを決定する方法 | |
JPH11507948A (ja) | 一酸化窒素を含有する薬剤学的組成物 | |
Arlow et al. | Bile acid—mediated postcholecystectomy diarrhea | |
JPH02193069A (ja) | 血液中の顆粒球除去方法及びこれに用いる顆粒球除去装置 | |
RU2202796C2 (ru) | Способ определения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон | |
Sonntag et al. | Anaphylatoxins in fresh‐frozen plasma | |
Fitz-Patrick et al. | Pituitary apoplexy: the importance of skull roentgenograms and computerized tomography in diagnosis | |
Adamis et al. | The proconvertin test: a simplified method and its application to the study of anticoagulant processes | |
AJZEN et al. | Renal vein renin and juxtaglomerular activity in sodium-depleted subjects | |
Larsen | Studies of the bodyhematocrit phenomenon: dynamic hematocrit of a large vessel and initial distribution space of albumin and fibrinogen in the whole body | |
SHARE et al. | Is vasopressin in the circulation of the dog freely filterable? | |
Josselson et al. | Bretylium kinetics in renal insufficiency | |
JP2954239B2 (ja) | 全血用簡易血液凝固能検査用具 | |
Perez et al. | Cation-exchange chromatography of guanidine derivatives in plasma of patients with chronic renal failure. | |
Mundal et al. | Effect of cold pressor test and awareness of hypertension on platelet function in normotensive and hypertensive women | |
Al Ghadeer et al. | Cerebral venous sinus thrombosis is a reversible complication of ulcerative colitis | |
Perkins et al. | Assay of blood coagulation factors in heparinized blood | |
Sideman et al. | Removal of bilirubin from the blood of jaundiced infants | |
Hume | Platelet entrapment in glass spheres: clinical and experimental application. | |
RU2286580C1 (ru) | Способ диагностики начинающихся нарушений агрегационной функции тромбоцитов | |
Hebert et al. | Measurement of the fractional uptake of macromolecules by the renal vascular bed compared to other vascular beds |