RU2186574C1 - Препарат поливалентного бактериофага против синегнойной палочки, штаммы бактериофага bacteriophagum pseudomonas aeruginosa спбгма им. и.и. мечникова №05, №03, №06 и №07, используемые при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки - Google Patents
Препарат поливалентного бактериофага против синегнойной палочки, штаммы бактериофага bacteriophagum pseudomonas aeruginosa спбгма им. и.и. мечникова №05, №03, №06 и №07, используемые при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки Download PDFInfo
- Publication number
- RU2186574C1 RU2186574C1 RU2001102027/13A RU2001102027A RU2186574C1 RU 2186574 C1 RU2186574 C1 RU 2186574C1 RU 2001102027/13 A RU2001102027/13 A RU 2001102027/13A RU 2001102027 A RU2001102027 A RU 2001102027A RU 2186574 C1 RU2186574 C1 RU 2186574C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- pseudomonas aeruginosa
- bacteriophage
- preparation
- strains
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Выделены 4 бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И.И. Мечникова 05, 03, 06 и 07, на основе которых получен препарат Combiphage, содержащий смесь этих бактериофагов в соотношении фаговых частиц: штамм 05 - 10-60%, штамм 03 - 10-60%, штамм 06 - 10-60%, штамм 07 - 10-60%. Использование препарата синегнойного фага Combiphage позволило снизить частоту внутрибольничных заражений гнойно-септическими инфекциями, вызванными синегнойной палочкой, в 4-5 раз. 5 с. и 1 з.п.ф-лы, 1 табл.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к препаратам медицинского назначения на основе бактериофагов против синегнойной палочки.
К настоящему времени известны различные фаги к Pseudomonas aeruginosa (Р. aeruginosa), используемые как в диагностических целях, гак и для лечения гнойно-воспалительных заболеваний (авт. св. СССР 1472500,1987, кл. С 12 N 7/00). Описанные бактериофаги были выделены из образцов сточных вод.
Однако данные фаги имели неоднородную структуру и представляли собой смесь клонов бактериофагов. Кроме того следует отметить, что при исследовании подобных фагов в лечебных целях возможна их инактивация различными факторами гнойного экссудата (Н.W. Ackermann, M.S. Dubow. 1987. Viruses of Prokariotes. vol. I General properties of bacteriophages. CRC PRESS, Boca Raton, FL P.152).
Известен штамм пилеоспецифического бактериофага P. aeruginosa ГНЦ ПМ 03 ( пат. РФ 2112800, 1998, кл. C 12 N 7/00), проявляющий высокую литическую активность против синегнойной палочки. Штамм может быть использован для поливалентного лечебного препарата, однако штамм не является симбиотическим по отношению к другим штаммам данного препарата, кроме того воздействие его на бактерию весьма ограничено, т.к. пили не являются единственным фактором патогенности бактерий.
Прототипом заявляемого изобретения в отношении объектов "штамм" является штамм бактериофага P. aeruginosa, зарегистрированный в коллекции ГНЦ ПМ 02 (пат. РФ 2113476, 1998, кл.С12 N 7/00). Фаг имеет широкий спектр литического действия по отношению к патогенным штаммам P. aeruginosa, однако оказался недостаточно эффективен для борьбы с госпитальными штаммами синегнойной палочкой, что вызывает необходимость поиска новых штаммов бактериофагов и технологий получения поливалентного препарата против синегнойной палочки, в частности на основе разработки технологии получения симбиотических фаговых препаратов.
В настоящее время для борьбы с патогенными штаммами Р. aeru-ginosa используются, как правило, комплексные препараты-пиобак-териофаги (пат. РФ 2036232, 1995, кл. C 12 N 3/00; пат. РФ 2153534, 1999, кл. C 12 N 7/00). Однако при лечении конкретного заболевания активность препарата снижается из-за сильного разбавления фагов, что делает его мало эффективным против госпитальных штаммов. Кроме того в ряде случаев наличие большого числа посторонних белков, содержащихся в "балластных" для данного случая фагов, может приводить к нежелательным осложнениям, что делает актуальным создание препарата бактериофагов, обладающего селективным воздействием на P. aeruginosa.
Прототипом заявляемого препарата является препарат бактериофага к P. aeruginosa, получаемый выращиванием смеси бактериофагов с литической активностью 10-7-10-8, который затем очищают и смешивают с раствором хинозола, ланолина и касторового масла (пат. РФ 1704462, 1990, кл. C 12 N 7/00). Недостатком данного препарата является относительно невысокая активность и нестабильность состава, обусловленная особенностями его получения.
Задачей, стоявшей перед авторами, являлась создание препарата бактериофага, обладающего повышенным спектром литической активности для борьбы с гнойно-септическими инфекциями, вызванными, в частности, госпитальными штаммами P. aeruginosa.
Указанная задача создания препарата решалась путем отбора ингредиентов предварительным скринингом штаммов бактериофага, отбором штаммов, спектр литической активности которых в отношении госпитальных штаммов коллекции бактерий совпадает на 20-40%, с последующим их раздельным культивированием на культурах микроорганизмов, находящихся на логарифмической стадии роста, и объединением фаговых препаратов в конечный препарат. Более полное совпадение спектра литической активности приводит к появлению конкуренции между фагами, большие различия между фагами не позволяют создать устойчивого препарата.
В результате проведенных исследований было выделено 4 бактериофага, депонированные 29 июня 2000 г. в коллекции бактериофагов кафедры эпидемиологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова (СПбГМА им. И.И. Мечникова) под 03, 05, 06 и 07, на базе которых был создан новый препарат, получивший условное наименование Combiphage.
Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И.И. Мечникова 05 (условное наименование Psph-I) был выделен из клинического материала - гнойного отделяемого из раны больного хроническим остеомиелитом бедренной кости. Бактериофаг Psph-I депонирован 29 июня 2000 г. в коллекции бактериофагов кафедры эпидемиологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова (СПбГМА им. И.И. Мечникова) под 05.
Бактериофаг характеризуется следующими свойствами:
Морфологические признаки:
Головка гексогональной формы размером 62-68 нм, хвостовой отросток 137-142 нм.
Морфологические признаки:
Головка гексогональной формы размером 62-68 нм, хвостовой отросток 137-142 нм.
На газоне чувствительных бактериальных культур Р. aeruginosa фаг Psph-I образует прозрачные пятна лизиса диаметром 1.5-2.0 мм. Центр прозрачный, край четкий, вторичный рост отсутствует.
Серологические характеристики.
Фаг не инактивируется антисыворотками, полученными к другим бактериальным вирусам P. aeruginosa из коллекции СПбГМА им. И.И. Мечникова (11 различных форм) Константа инактивации фага гомологической антисывороткой (К) составляет 85 мин-1.
Тип нуклеиновой кислоты штамма фага - ДНК.
Физико-химические свойства фага:
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течение 40 мин при 55oС. Пределы допустимых значений рН, при которых литическая активность фага не изменяется, составляют 5-11.
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течение 40 мин при 55oС. Пределы допустимых значений рН, при которых литическая активность фага не изменяется, составляют 5-11.
Устойчив к хлороформу
Литический спектр бактериальною вируса
Для оценки круга штаммов-хозяев фага была использована коллекция P. aeruginosa из 280 штаммов. Фаг обладает способностью лизировать 65% культур синегнойной палочки (182 штамма P. aeruginosa).
Литический спектр бактериальною вируса
Для оценки круга штаммов-хозяев фага была использована коллекция P. aeruginosa из 280 штаммов. Фаг обладает способностью лизировать 65% культур синегнойной палочки (182 штамма P. aeruginosa).
Диапазон специфичности: лизирует P. aeruginosa, не лизирует дизентерийные палочки (шигеллы Зонне, Флекснера), свежевыделенные и музейные штаммы кишечной палочки и другие представители нормальной микрофлоры.
Бактериальные штаммы для поддержания и размножения бактериофага P.aeruginosa штамм Ра-34 и Ра-65
Оптимальные условия размножения:
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-34 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Оптимальные условия размножения:
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-34 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Условия хранения: бактериофаг Psph-I сохраняет литические свойства при хранении при температуре +4oС-+6oС в пептонной воде в течение 1 года.
Периодичность пересевов 1 год.
Способ размножения: при воспроизведении фага в клетке-хозяине продолжительность латентного периода составляет 45-50 мин, урожайность - 75-80 частиц на одну клетку.
Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И.И. Мечникова 03, (условное наименование Psph-G) был выделен из клинического материала - гнойного отделяемого из раны больного хроническим остеомиелитом правой большеберцовой кости. Бактериофаг Psph-G депонирован 29 июня 2000 г. в коллекции бактериофагов кафедры эпидемиологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова (СПбГМА им. И.И. Мечникова) под 03.
Бактериофаг характеризуется следующими свойствами:
Морфологические признаки:
Головка гексогональной формы размером 58-65 нм, хвостовой отросток 120-130 нм. На газоне чувствительных бактериальных культур Р. aeruginosa фаг Psph-G образует прозрачные пятна лизиса диаметром 1.5-2.0 мм. Центр прозрачный, край четкий, вторичный рост отсутствует.
Морфологические признаки:
Головка гексогональной формы размером 58-65 нм, хвостовой отросток 120-130 нм. На газоне чувствительных бактериальных культур Р. aeruginosa фаг Psph-G образует прозрачные пятна лизиса диаметром 1.5-2.0 мм. Центр прозрачный, край четкий, вторичный рост отсутствует.
Серологические характеристики:
Фаг не инактивируется антисыворотками, полученными к другим бактериальным вирусам P. aeruginosa из коллекции СПбГМА им. И.И. Мечникова (11 различных форм). Константа инактивации фага гомологической антисывороткой (К) составляет 80 мин-1.
Фаг не инактивируется антисыворотками, полученными к другим бактериальным вирусам P. aeruginosa из коллекции СПбГМА им. И.И. Мечникова (11 различных форм). Константа инактивации фага гомологической антисывороткой (К) составляет 80 мин-1.
Тип нуклеиновой кислоты штамма фага - ДНК.
Физико-химические свойства фага:
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течение 30 мин при 55oС.
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течение 30 мин при 55oС.
Литическая активность не изменяется в пределах рН 5-9. Устойчив к хлороформу.
Литический спектр бактериального вируса.
Для оценки круга штаммов-хозяев фага была использована коллекция P. aeruginosa из 280 штаммов. Фаг обладает способностью лизировать 46% культур синегнойной палочки (153 штамма P. aeruginosa).
Диапазон специфичности: лизирует P. aeruginosa, не лизирует дизентерийные палочки (шигеллы Зонне, Флекснера), свежевыделенный и музейные штаммы кишечной палочки и другие представители нормальной микрофлоры.
Бактериальные штаммы для поддержания и размножения бактериофага - Р. aeruginosa штаммы Ра-49, Ра-54
Оптимальные условия размножения
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-49 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Оптимальные условия размножения
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-49 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Условия хранения: бактериофаг сохраняет литические свойства при хранении при температуре +4oС-+6oС в пептонной воде в течение 1 года.
Периодичность пересевов - 1 год.
Способ размножения: при воспроизведении фага в клетке-хозяине продолжительность латентного периода составляет 50-60 мин, урожайность - 60-70 частиц на одну клетку.
Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И.И. Мечникова 06 (условное наименование Psph-M) был выделен из клинического материала - из гнойного отделяемого с поверхности ожоговой раны. Бактериофаг Psph-I депонирован 29 июня 2000 г. в коллекции бактериофагов кафедры эпидемиологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова (СПбГМА им. И.И. Мечникова) под 06.
Бактериофаг характеризуется следующими свойствами:
Морфологические признаки:
Головка гексогонапьной формы размером 60-70 нм, хвостовой отросток 135-145 нм. На газоне чувствительных бактериальных культур P. aeruginosa фаг образует прозрачные пятна лизиса диаметром 1.5-2.0 мм. Центр прозрачный, край четкий, вторичный рост отсутствует.
Морфологические признаки:
Головка гексогонапьной формы размером 60-70 нм, хвостовой отросток 135-145 нм. На газоне чувствительных бактериальных культур P. aeruginosa фаг образует прозрачные пятна лизиса диаметром 1.5-2.0 мм. Центр прозрачный, край четкий, вторичный рост отсутствует.
Серологические характеристики:
Фаг не инактивируется антисыворотками, полученными к другим бактериальным вирусам P. aeruginosa из коллекции СПбГМА им. И.И. Мечникова (11 различных форм). Константа инактивации фага гомологической антисывороткой (К) составляет 53 мин-1.
Фаг не инактивируется антисыворотками, полученными к другим бактериальным вирусам P. aeruginosa из коллекции СПбГМА им. И.И. Мечникова (11 различных форм). Константа инактивации фага гомологической антисывороткой (К) составляет 53 мин-1.
Тип нуклеиновой кислоты штамма фага - ДНК.
Физико-химические свойства фага
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течение 30 мин при 55oС.
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течение 30 мин при 55oС.
Литическая активность не изменяется в пределах рН 5-9.
Устойчив к хлороформу.
Литический спектр бактериального вируса.
Для оценки круга штаммов-хозяев фага была использована коллекция P. aeruginosa из 205 штаммов. Фаг обладает способностью лизировать 62% культур синегнойной палочки (127 штамма P. aeruginosa).
Диапазон специфичности: лизирует P. aeruginosa, не лизирует дизентерийные палочки (шигеллы Зонне, Флекснера), свежевыделенные и музейные штаммы кишечной палочки и другие представители нормальной микрофлоры.
Бактериальные штаммы для поддержания и размножения бактериофага -P. aeruginosa штаммы Ра-113, Pa-145, Pa-165.
Оптимальные условия размножения
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-113 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-113 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Условия хранения: бактериофаг Psph-M сохраняет литические свойства при хранении при температуре +4oС-+6oС в среде в течение 1 года.
Периодичность пересевов 1 год.
Способ размножения: при воспроизведении фага в клетке-хозяине продолжительность латентного периода составляет 50-55 мин, урожайность - 55-60 частиц на одну клетку.
Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И.И. Мечникова 07 (условное наименование Psph-B) был выделен из клинического материала - гнойного отделяемого из раны больного с хроническим остеомиелитом седалищной кости. Бактериофаг депонирован 29 июня 2000 г. в коллекции бактериофагов кафедры эпидемиологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова (СПбГМА им. И.И. Мечникова) под 07.
Бактериофаг характеризуется следующими свойствами:
Морфологические признаки:
Головка гексогональной формы размером 67-70 нм, хвостовой отросток 131-144 нм. На газоне чувствительных бактериальных культур P. aeruginosa фаг образует прозрачные пятна лизиса диаметром 1.5-2.0 мм. Центр прозрачный, край четкий, вторичный рост отсутствует.
Морфологические признаки:
Головка гексогональной формы размером 67-70 нм, хвостовой отросток 131-144 нм. На газоне чувствительных бактериальных культур P. aeruginosa фаг образует прозрачные пятна лизиса диаметром 1.5-2.0 мм. Центр прозрачный, край четкий, вторичный рост отсутствует.
Серологические характеристики:
Фаг не инактивируется антисыворотками, полученными к другим бактериальным вирусам P. aeruginosa из коллекции СПбГМА им. И.И. Мечникова (11 различных форм). Константа инактивации фага гомологической антисывороткой (К) составляет 62 мин-1.
Фаг не инактивируется антисыворотками, полученными к другим бактериальным вирусам P. aeruginosa из коллекции СПбГМА им. И.И. Мечникова (11 различных форм). Константа инактивации фага гомологической антисывороткой (К) составляет 62 мин-1.
Тип нуклеиновой кислоты штамма фага - ДНК
Физико-химические свойства фага
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течении 40 мин при 55oС. Литическая активность не изменяется в пределах рН 5-9. Устойчив к хлороформу.
Физико-химические свойства фага
Фаг не инактивируется при нагревании суспензии в течении 40 мин при 55oС. Литическая активность не изменяется в пределах рН 5-9. Устойчив к хлороформу.
Литический спектр бактериального вируса.
Для оценки круга штаммов-хозяев фага была использована коллекция P. aeruginosa из 186 штаммов. Фаг обладает способностью лизировать 31% культур синегнойной палочки (58 штаммов P. aeruginosa).
Диапазон специфичности: лизирует P. aeruginosa, не лизирует дизентерийные палочки (шигеллы Зонне, Флекснера), свежевыделенный и музейные штаммы кишечной палочки и другие представители нормальной микрофлоры.
Бактериальные штаммы для поддержания и размножения бактериофага - P. aeruginosa штаммы Ра-96, Ра-129.
Оптимальные условия размножения
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-96 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Условия культивирования. Штамм фага размножается на чувствительной культуре синегнойной палочки Ра-96 на обычных питательных средах (пептонная вода, простой питательный агар) при температуре 37oС, вызывая при этом просветление пептонной воды после 6-часовой инкубации, а на простом питательном агаре образуя прозрачные колонии правильной формы после 16-18- часовой инкубации.
Условия хранения: ,актериофаг Psph-Е сохраняет литические свойства при хранении при температуре +4oС-+6oС в среде в течение 1 года.
Периодичность пересевов 1 год.
Способ размножения: при воспроизведении фага в клетке-хозяине продолжительность латентного периода составляет 55-60 мин, урожайность - 45-55 частиц на одну клетку.
Препарат бактериофагов Combiphage получают смешением отдельно выращенных бактериофагов в заданных параметрах. Он содержит смесь штаммов бактериофагов Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И.И. Мечникова 05, 03, 06 и 07 в следующем соотношении фаговых частиц, %:
штамм 05 - 10-60
штамм 03 - 10-60
штамм 06 - 10-60
штамм 07 - 10-60
Препарат может быть получен в виде взвеси в пептонной воде или в сухом виде.
штамм 05 - 10-60
штамм 03 - 10-60
штамм 06 - 10-60
штамм 07 - 10-60
Препарат может быть получен в виде взвеси в пептонной воде или в сухом виде.
Штаммы фагов были протестированы на наборе из 20 госпитальных штаммов P. aeruginosa, выделенных из клинического материала от пациентов травматологического, ожогового и урологического стационаров и максимально отличающихся по серотипу, фаготипу и чувствительности к антибиотикам. Спектр литической активности штаммов фагов перекрывался на 20-40%. Препарат, полученный таким способом, обладает способностью лизировать более 81% культур госпитальных штаммов синегнойной палочки, выделенных в стационарах различного профиля в Санкт-Петербурге.
Пример 1. Способ выделения фага Psph-I
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (гнойного отделяемого из раны больного хроническим остеомиелитом бедренной кости). Материал был засеян в пептонную воду вместе с двумя различными штаммами P. aeruginosa Pa-34 и Ра-65, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (гнойного отделяемого из раны больного хроническим остеомиелитом бедренной кости). Материал был засеян в пептонную воду вместе с двумя различными штаммами P. aeruginosa Pa-34 и Ра-65, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Проверка литической активности производилась путем нанесения капель фильтрата фаголизата на использованные в процессе инкубации штаммы синегнойной папочки, посеянные "газоном" на простом питательном агаре. Учет результатов производился после 18-20-часовой инкубации чашек в при температуре 37oС. На месте капель фаголизата на обоих штаммах P. aeruginosa отмечались стерильные пятна диаметром, равным размеру нанесенной капли (10-11 мм), свидетельствовавшие о лизисе бактериальных клеток.
В дальнейшем проводилось повышение титра литической активности путем последовательных пассажей штамма бактериофага на высокочувствительной культуре синегнойной палочки Ра-34 в бульоне. После инкубации штамма синегнойной палочки в пептонной воде до середины логарифмической фазы роста добавлялся штамм бактериофага из расчета 1:30, смесь инкубировалась при температуре 37oС в течение 16-18 ч.
Активность полученного фаголизата проверялась на простом питательном агаре на данном штамме синегнойной палочки после предварительного фильтрования. Последовательные пассажи фага проводились до получения стерильных пятен без образования колоний вторичного роста синегнойной палочки на месте капель фага (до полного лизиса всех бактериальных клеток). Титр активности штамма бактериофага проверялся методом Аппельмана. Титр штамма бактериофага 10-8.
Пример 2. Способ выделения фага 03
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (гнойного отделяемого из раны больного хроническим остеомиелитом правой большеберцовой кости). Материал был засеян в пептонную воду вместе с 4 различными штаммами P. aeruginosa Pa-49, Pa-54, Pa-60, Pa-68, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (гнойного отделяемого из раны больного хроническим остеомиелитом правой большеберцовой кости). Материал был засеян в пептонную воду вместе с 4 различными штаммами P. aeruginosa Pa-49, Pa-54, Pa-60, Pa-68, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Проверка литической активности производилась путем нанесения капель фильтрата фаголизата на использованные в процессе инкубации штаммы синегнойной палочки, посеянные "газоном" на простом питательном агаре. Учет результатов производился после 18-20-часовой инкубации чашек в при температуре 37oС. На месте капель фаголизата на обоих штаммах P. aeruginosa отмечались стерильные пятна диаметром, равным размеру нанесенной капли (10-12 мм), свидетельствовавшие о лизисе бактериальных клеток.
В дальнейшем проводилось повышение титра литической активности путем последовательных пассажей штамма бактериофага на высокочувствительной культуре синегнойной палочки Ра-49 в бульоне. После инкубации штамма синегнойной палочки в пептонной воде до середины логарифмической фазы роста добавлялся штамм бактериофага из расчета 1:30, смесь инкубировалась при температуре 37oС в течение 16-18 ч.
Активность полученного фаголизата проверялась на простом питательном агаре на данном штамме синегнойной палочки после предварительного фильтрования. Последовательные пассажи фага проводились до получения стерильных пятен без образования колоний вторичного роста синегнойной палочки на месте капель фага (до полного лизиса всех бактериальных клеток). Титр активности штамма бактериофага проверялся методом Аппельмана. Титр штамма бактериофага 10-7.
Пример 3. Способ выделения фага 06
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (из гнойного отделяемого с поверхности ожоговой раны). Материал был засеян в пептонную воду вместе с двумя различными штаммами P. aeruginosa Pa-113, Ра-145, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (из гнойного отделяемого с поверхности ожоговой раны). Материал был засеян в пептонную воду вместе с двумя различными штаммами P. aeruginosa Pa-113, Ра-145, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Проверка литической активности производилась путем нанесения капель фильтрата фаголизата на использованные в процессе инкубации штаммы синегнойной палочки, посеянные "газоном" на простом питательном агаре. Учет результатов производился после 18-20-часовой инкубации чашек при температуре 37oС. На месте капель фаголизата на обоих штаммах P. aeruginosa отмечались стерильные пятна диаметром, равным размеру нанесенной капли (10-12 мм), свидетельствовавшие о лизисе бактериальных клеток.
В дальнейшем проводилось повышение титра литической активности путем последовательных пассажей штамма бактериофага на высокочувствительной культуре синегнойной палочки Ра-113 в бульоне. После инкубации штамма синегнойной палочки в пептонной воде до середины логарифмической фазы роста добавлялся штамм бактериофага из расчета 1:30, смесь инкубировалась при температуре 37oС в течение 16-18 ч.
Активность полученного фаголизата проверялась на простом питательном агаре на данном штамме синегнойной палочки после предварительного фильтрования. Последовательные пассажи фага проводились до получения стерильных пятен без образования колоний вторичного роста синегнойной палочки на месте капель фага (до полного лизиса всех бактериальных клеток). Титр активности штамма бактериофага проверялся методом Аппельмана. Титр штамма бактериофага 10-7.
Пример 4. Способ выделения фага 07
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (гнойного отделяемого из раны больного с хроническим остеомиелитом седалищной кости). Материал был засеян в пептонную воду вместе с двумя различными штаммами P. aeruginosa Pa-96, Ра-129, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Штамм бактериофага был получен из клинического материала (гнойного отделяемого из раны больного с хроническим остеомиелитом седалищной кости). Материал был засеян в пептонную воду вместе с двумя различными штаммами P. aeruginosa Pa-96, Ра-129, обладающими высокой чувствительностью к фагам. После 18-часовой инкубации в термостате при температуре 37oС фаголизат профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 2 мкм.
Проверка литической активности производилась путем нанесения капель фильтрата фаголизата на использованные в процессе инкубации штаммы синегнойной палочки, посеянные "газоном" на простом питательном агаре. Учет результатов производился после 18-20-часовой инкубации чашек в при температуре 37oС. На месте капель фаголизата на обоих штаммах P. aeruginosa отмечались стерильные пятна диаметром, равным размеру нанесенной капли (10-12 мм), свидетельствовавшие о лизисе бактериальных клеток.
В дальнейшем проводилось повышение титра литической активности путем последовательных пассажей штамма бактериофага на высокочувствительной культуре синегнойной палочки Ра-96 в бульоне. После инкубации штамма синегнойной палочки в пептонной воде до середины логарифмической фазы роста добавлялся штамм бактериофага из расчета 1:30, смесь инкубировалась при температуре 37oС в течение 16-18 ч.
Активность полученного фаголизата проверялась на простом питательном агаре на данном штамме синегнойной палочки после предварительного фильтрования. Последовательные пассажи фага проводились до получения стерильных пятен без образования колоний вторичного роста синегнойной палочки на месте капель фага (до полного лизиса всех бактериальных клеток). Титр активности штамма бактериофага проверялся методом Аппельмана. Титр штамма бактериофага 10-7.
Пример 5. Способ получения препарата Combiphage.
Препарат бактериофагов против синегнойной палочки был получен путем предварительного выделения четырех штаммов бактериофагов, их анализа, отдельного друг от друга культивирования их в присутствии госпитальных штаммов P. aeruginosa в экспоненциальной фазе роста, очистки и механического смешивания бактериофагов, полученным по примерам 1-4 в различных соотношениях.
Результаты испытаний полученного препарата приведены в таблице.
Пример 6. Применение препарата Combiphage
Препарат Combiphage, состоящий из смеси штаммов бактериофагов Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa 05, 03. 06 и 07 в соотношении фаговых частиц 30: 30: 30:10 и использовался в виде суспензии в пептонной воде был применен для лечения 15 пациентов, страдавших различными инфекциями, вызванными синегнойной палочкой (инфекции мочевыводящих путей, пневмонии, остеомиелиты, хронические нейротрофические язвы, ожоговая раневая инфекция). Во всех случаях применения препарата отмечался выраженный положительный клинический эффект. У пациентов с инфекциями мочеполовых путей и пневмонией быстро улучшалось общее состояние, температура снижалась, явления воспаления в пораженных органах стихали. У больных с гнойными ранами происходило очищение от некротизированных тканей, появлялись грануляции, ускорялось заживление.
Препарат Combiphage, состоящий из смеси штаммов бактериофагов Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa 05, 03. 06 и 07 в соотношении фаговых частиц 30: 30: 30:10 и использовался в виде суспензии в пептонной воде был применен для лечения 15 пациентов, страдавших различными инфекциями, вызванными синегнойной палочкой (инфекции мочевыводящих путей, пневмонии, остеомиелиты, хронические нейротрофические язвы, ожоговая раневая инфекция). Во всех случаях применения препарата отмечался выраженный положительный клинический эффект. У пациентов с инфекциями мочеполовых путей и пневмонией быстро улучшалось общее состояние, температура снижалась, явления воспаления в пораженных органах стихали. У больных с гнойными ранами происходило очищение от некротизированных тканей, появлялись грануляции, ускорялось заживление.
Кроме оценки клинического эффекта на отдельных больных проводилась оценка возможности достижения противоэпидемического эффекта на популяции пациентов гнойного отделения травматологического стационара. После начала применения препарата синегнойного фага Combiphage в стационаре отмечалось резкое снижение частоты внутрибольничных заражений гнойносептическими инфекциями, вызванными P.aeruginosa, с 40,8 до 8,9%.
Claims (5)
1. Препарат бактериофагов против синегнойной палочки, содержащий бактериофаг, компоненты питательной среды и вспомогательные добавки, отличающийся тем, что в качестве бактериофага он содержит смесь штаммов бактериофагов Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И.И.Мечникова 05, 03, 06 и 07 в соотношении фаговых частиц, %:
Штамм 05 - 10-60
Штамм 03 - 10-60
Штамм 06 - 10-60
Штамм 07 - 10-60
2. Препарат бактериофагов по п.2, отличающийся тем, что он представляет собой суспензию бактериофагов в пептонной воде.
Штамм 05 - 10-60
Штамм 03 - 10-60
Штамм 06 - 10-60
Штамм 07 - 10-60
2. Препарат бактериофагов по п.2, отличающийся тем, что он представляет собой суспензию бактериофагов в пептонной воде.
3. Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И. И. Мечникова 05, используемый при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки.
4. Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И. И. Мечникова 03, используемый при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки.
5. Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И. И. Мечникова 06, используемый при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки.
6. Штамм бактериофага Bacteriophagum Pseudomonas aeruginosa СПбГМА им. И. И. Мечникова 07, используемый при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001102027/13A RU2186574C1 (ru) | 2001-01-24 | 2001-01-24 | Препарат поливалентного бактериофага против синегнойной палочки, штаммы бактериофага bacteriophagum pseudomonas aeruginosa спбгма им. и.и. мечникова №05, №03, №06 и №07, используемые при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001102027/13A RU2186574C1 (ru) | 2001-01-24 | 2001-01-24 | Препарат поливалентного бактериофага против синегнойной палочки, штаммы бактериофага bacteriophagum pseudomonas aeruginosa спбгма им. и.и. мечникова №05, №03, №06 и №07, используемые при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2186574C1 true RU2186574C1 (ru) | 2002-08-10 |
Family
ID=20245135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001102027/13A RU2186574C1 (ru) | 2001-01-24 | 2001-01-24 | Препарат поливалентного бактериофага против синегнойной палочки, штаммы бактериофага bacteriophagum pseudomonas aeruginosa спбгма им. и.и. мечникова №05, №03, №06 и №07, используемые при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2186574C1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011162733A1 (ru) * | 2010-06-23 | 2011-12-29 | Rozenfeld Vladislav | Антибактериальный и/или противогрибковый компонент, обладающий свойством специфически связываться с бактериями и/или грибами |
| US8105579B2 (en) | 2003-07-23 | 2012-01-31 | Biocontrol Limited | Bacteriophage-containing therapeutic agents |
| US8475787B2 (en) | 2007-03-09 | 2013-07-02 | Bio-Control Limited | Beneficial effects of bacteriophage treatments |
| RU2580248C2 (ru) * | 2009-02-06 | 2016-04-10 | Текнофахе, Инвестигасао Э Десенвольвименто Эм Биотекнолохия, Са | Бактериофаг, обладающий активностью против pseudomonas aeruginosa, белки бактериофага и способы их применения |
-
2001
- 2001-01-24 RU RU2001102027/13A patent/RU2186574C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8105579B2 (en) | 2003-07-23 | 2012-01-31 | Biocontrol Limited | Bacteriophage-containing therapeutic agents |
| US8388946B2 (en) | 2003-07-23 | 2013-03-05 | Biocontrol Limited | Bacteriophage-containing therapeutic agents |
| US9687514B2 (en) | 2003-07-23 | 2017-06-27 | Biocontrol Limited | Bacteriophage-containing therapeutic agents |
| US8475787B2 (en) | 2007-03-09 | 2013-07-02 | Bio-Control Limited | Beneficial effects of bacteriophage treatments |
| RU2580248C2 (ru) * | 2009-02-06 | 2016-04-10 | Текнофахе, Инвестигасао Э Десенвольвименто Эм Биотекнолохия, Са | Бактериофаг, обладающий активностью против pseudomonas aeruginosa, белки бактериофага и способы их применения |
| RU2580248C9 (ru) * | 2009-02-06 | 2018-01-17 | Текнофахе, Инвестигасао Э Десенвольвименто Эм Биотекнолохия, Са | Бактериофаг, обладащий активностью против pseudomonas aeruginosa, белки бактериофага и способы их применения |
| RU2671110C2 (ru) * | 2009-02-06 | 2018-10-29 | Текнофахе, Инвестигасао Э Десенвольвименто Эм Биотекнолохия, Са | Бактериофаги, белки бактериофагов и способы их применения |
| WO2011162733A1 (ru) * | 2010-06-23 | 2011-12-29 | Rozenfeld Vladislav | Антибактериальный и/или противогрибковый компонент, обладающий свойством специфически связываться с бактериями и/или грибами |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Winters et al. | Effects of aloe extracts on human normal and tumor cells in vitro | |
| RU2455355C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИОФАГА Pseudomonas aeruginosa, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ОСНОВЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АСЕПТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА ПРОТИВ СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ | |
| Loeffler et al. | Report of the commission for research on foot-and-mouth disease | |
| JP2011036246A (ja) | アシネトバクター・バウマニのファージ | |
| JP7492337B2 (ja) | ファージ療法 | |
| CN115252576B (zh) | 基于工程化细菌外膜囊泡的溶瘤病毒静脉递送系统及其构建方法和应用 | |
| JP4723807B2 (ja) | 細菌感染を治療するための多価バクテリオファージの調製方法 | |
| RU2186574C1 (ru) | Препарат поливалентного бактериофага против синегнойной палочки, штаммы бактериофага bacteriophagum pseudomonas aeruginosa спбгма им. и.и. мечникова №05, №03, №06 и №07, используемые при приготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки | |
| RU2113476C1 (ru) | Штамм бактериофага pseudomonas aeruginosa гнц пм n 02, используемый при изготовлении поливалентного лечебного препарата против синегнойной палочки | |
| RU2112800C1 (ru) | Штамм пилеспецифического бактериофага pseudomonas aeruginosa гнцпм n 03, используемый для приготовления лечебного препарата против синегнойной палочки | |
| Kamer et al. | Characterization of newly isolated bacteriophage to control multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa colonizing incision wounds in a rat model: in vitro and in vivo approach | |
| Bjuggren et al. | The Pfeiffer Bacillus in Otitis in Children a Sero-Bacteriological and Clinical Study | |
| Esmat et al. | Antibiotics and phage sensitivity as interventions for controlling Escherichia coli isolated from clinical specimens | |
| JPH07108857B2 (ja) | 炎症過程及びアレルギー性疾患の予防及び治療のための細菌性製剤 | |
| CN115125216A (zh) | 一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用 | |
| Erol et al. | The effect of phage-antibiotic combination strategy on multidrug-resistant Acinetobacter baumannii biofilms | |
| RU2306563C1 (ru) | Способ определения чувствительности микроорганизмов к жидкому комбинированному бактериофагу | |
| CN113201506A (zh) | 一株高效裂解碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌噬菌体及其应用 | |
| Heckman et al. | Pyocine typing of Pseudomonas aeruginosa: clinical and epidemiologic aspects | |
| US2011225A (en) | Antigen and process of producing it | |
| RU2808830C1 (ru) | Штамм бактериофага Pseudomonas phage Ka2 для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, вызываемых Pseudomonas aeruginosa | |
| CN110747177A (zh) | 一株鲍曼不动杆菌噬菌体及医用用途 | |
| Jacox et al. | A case report of an unusual lung abscess due to Cl. perfringens (B. welchi) | |
| JPH02503746A (ja) | 乳酸製品の製造方法 | |
| Jasim et al. | Phage Cocktails Against Highly Multi-Drug Resistant Acinetobacter baumanii. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040125 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent | ||
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20061016 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070125 |