RU2178178C1

RU2178178C1 - Method of determination of urine protein

Info

Publication number: RU2178178C1
Application number: RU2000115687/14A
Authority: RU
Inventors: В.Л. Эвентов; М.Ю. Андрианова; О.Н. Сэпп; С.В. Никитенко
Original assignee: Российский научный центр хирургии РАМН
Priority date: 2000-06-21
Filing date: 2000-06-21
Publication date: 2002-01-10

Abstract

FIELD: medicine, clinical laboratory diagnosis, biochemistry. SUBSTANCE: method involves analysis of urine by measurement of electric resistance values before and after its filtration through filter with size pores 2-3 nm. Protein concentration in urine sample is calculated by difference of electric resistance values. EFFECT: simplified assay, decreased time of analysis. 3 tbl

Description

Изобретение относится к способам экспресс-диагностики, и может быть использовано в лабораторных условиях и в операционной при экстренном измерении концентрации белка в моче (например, при операции пересадки почки). Из известных способов определения концентрации белка в моче наиболее точным является фотометрический. Он основан на биуретовой реакции. Для его реализации необходим ряд реактивов:
1 - изотонический раствор NaCl,
2 - 0,2 моль/л раствор NaOH,
3 - 0,5% раствор KJ,
4 - К, Na виннокислый, 4-х водный (сегнетова соль)
5 - CuSO₄•5H₂O,
6 - калибровочный раствор альбумина (100 г/л в физрастворе).The invention relates to methods for rapid diagnosis, and can be used in laboratory conditions and in the operating room for emergency measurement of protein concentration in the urine (for example, during kidney transplant surgery). Of the known methods for determining the concentration of protein in urine, the most accurate is photometric. It is based on a biuret reaction. For its implementation, a number of reagents are required:
1 - isotonic NaCl solution,
2 - 0.2 mol / L NaOH solution,
3 - 0.5% KJ solution,
4 - K, Na tartrate, 4-aqueous (Rochelle salt)
5 - CuSO ₄ • 5H ₂ O,
6 - calibration solution of albumin (100 g / l in saline).

Ход определения концентрации белка в моче. The course of determining the concentration of protein in the urine.

Из реактивов 2, 3, 4, 5 приготавливают биуретовый реактив. 0,1 мл исследуемой мочи смешивают с 5 мл рабочего биуретового раствора. Через 30 мин производят измерение на фотометре при длине волны 500-550 нм против холостой пробы. Расчет количества белка ведется по калибровочному графику. From reagents 2, 3, 4, 5, a biuret reagent is prepared. 0.1 ml of the test urine is mixed with 5 ml of a working biuret solution. After 30 minutes, a measurement is made on a photometer at a wavelength of 500-550 nm against a blank sample. Calculation of the amount of protein is carried out according to the calibration schedule.

Недостатками этого способа являются необходимость в расходуемых реактивах, большая трудоемкость и длительность (не менее 40 мин) исследования. Кроме того, ручной фотометрический метод исключает возможность мониторинга измерений и автоматического вывода информации на компьютер или принтер [1] . The disadvantages of this method are the need for consumable reagents, the large complexity and duration (at least 40 minutes) of the study. In addition, the manual photometric method excludes the possibility of monitoring measurements and automatically outputting information to a computer or printer [1].

Задачей предложенного способа измерения концентрации белка в моче является упрощение и сокращение времени определения белка. The objective of the proposed method for measuring protein concentration in urine is to simplify and reduce the time for determining protein.

Поставленная задача в способе определения концентрации белка в моче, включающем исследование мочи, достигается измерением электросопротивления мочи до и после ее фильтрации через фильтр с порами в 2-3 нм, после чего по разнице величин электросопротивлений определяют концентрацию белка в моче. The task in the method for determining the concentration of protein in the urine, including the study of urine, is achieved by measuring the electrical resistance of the urine before and after filtering it through a filter with pores of 2-3 nm, after which the protein concentration in the urine is determined by the difference in the values of electrical resistance.

Предлагаемый способ в медицинской и патентной литературе на обнаружен, что позволяет сделать вывод о соответствии его критерию "новизна". The proposed method is not found in the medical and patent literature, which allows us to conclude that it meets the criterion of "novelty."

Сущность предлагаемого изобретения состоит в том, что электросопротивление мочи измеряют до и после ее фильтрации через фильтр с порами в 2-3 нм, после чего по разнице величин электросопротивлений определяют концентрацию белка в моче. The essence of the invention lies in the fact that the electrical resistance of urine is measured before and after its filtration through a filter with pores of 2-3 nm, after which the protein concentration in the urine is determined by the difference in the values of electrical resistance.

Измерение электросопротивления мочи до и после ее фильтрации позволяет определить электросопротивление мочи, содержащей белок и очищенной от него, а разница величин электросопротивлений линейно соответствует концентрации белка в моче. Это доказано нами в ходе экспериментальных работ. Концентрация белка в моче прямо пропорционально связана с электросопротивлением мочи (табл. 1), а абсолютная разница величин электросопротивлений соответствует концентрации белка в моче (табл. 2). Использование фильтра с порами в 2-3 нм (2•l0^-9м) позволяет достичь полной очистки мочи от белка. Размеры молекулы белка, например альбумина, составляют 4-6 нм. Уменьшение размеров пор фильтра увеличивает время фильтрации и может привести к отфильтровыванию других веществ, что повлияет на изменение суммарного электросопротивления.Measurement of the electrical resistance of urine before and after its filtration makes it possible to determine the electrical resistance of urine containing protein and purified from it, and the difference in the values of electrical resistance linearly corresponds to the concentration of protein in urine. This is proved by us in the course of experimental work. The concentration of protein in the urine is directly proportional to the electrical resistance of the urine (Table 1), and the absolute difference in the values of electrical resistance corresponds to the concentration of protein in the urine (Table 2). Using a filter with pores of 2-3 nm (2 • l0 ^-9 m) allows you to achieve complete purification of urine from protein. The size of a protein molecule, for example albumin, is 4-6 nm. Reducing the pore size of the filter increases the filtration time and can lead to the filtering of other substances, which will affect the change in the total electrical resistance.

Способ осуществляется следующим образом: исследуемую мочу вводят шприцом в датчик измерения электросопротивления и определяют общее электросопротивление мочи, после чего мочу пропускают через фильтр с порами в 2-3 нм и повторно определяют ее электросопротивление. Затем по разнице величин электросопротивлений определяют концентрацию белка в моче (табл. 2). The method is as follows: the test urine is injected with a syringe into the electrical resistance measurement sensor and the total electrical resistance of the urine is determined, after which the urine is passed through a filter with pores of 2-3 nm and its electrical resistance is determined again. Then, the concentration of protein in the urine is determined by the difference in the values of electrical resistivity (Table 2).

Сравнительное определение концентрации белка в моче фотометрическим и предлагаемым способом:
180 мл мочи здорового человека разделены на 9 порций по 20 мл. В 8 порций добавлен альбумин и в них получена концентрация белка от 10 до 80 г/л. Измерение концентрации белка в каждой порции проводились трижды фотометрическим и предлагаемым способом. Полученные результаты отражены в табл. 3.A comparative determination of the concentration of protein in urine by the photometric and proposed method:
180 ml of the urine of a healthy person are divided into 9 servings of 20 ml. Albumin was added in 8 servings and a protein concentration of 10 to 80 g / L was obtained. Measurement of protein concentration in each portion was carried out three times by the photometric and proposed method. The results are shown in table. 3.

Анализ полученных данных показывет, что точность предлагаемого способа определения белка в моче примерно на 1% выше фотометрического, а затрачиваемое на измерение время в 9-10 раз меньше. Analysis of the obtained data shows that the accuracy of the proposed method for determining protein in urine is approximately 1% higher than photometric, and the time taken to measure it is 9-10 times less.

Измерение электросопротивлений и пересчет разницы в концентрацию белка легко автоматизируются, что позволяет создать автоматический анализатор белка. Measurement of electrical resistance and conversion of differences in protein concentration are easily automated, which allows you to create an automatic protein analyzer.

Предлагаемый способ позволяет значительно сократить время определения концентрации белка в моче (до 5 мин), отказаться от использования химических реактивов, и упростить процесс измерения (табл. 3). The proposed method can significantly reduce the time to determine the concentration of protein in the urine (up to 5 min), abandon the use of chemicals, and simplify the measurement process (table. 3).

Предлагаемый способ определения концентрации белка в моче прошел испытания в отделении пересадки почки РНЦХ РАМН и найдет широкое применение в лабораторной и клинической практике. The proposed method for determining the concentration of protein in the urine has been tested in the kidney transplantation department of the Russian Scientific Center of Medical Sciences and will be widely used in laboratory and clinical practice.

Источники информации
1. Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике. Под редакцией проф. В. В. Меньшикова. М. , 1987, с. 174, 175.Sources of information
1. Reference. Laboratory research methods in the clinic. Edited by prof. V.V. Menshikov. M., 1987, p. 174, 175.

Claims

A method for determining the concentration of protein in urine, including a urine test, characterized in that the electrical resistance of the urine is measured before and after it is filtered through a filter with pores of 2-3 nm, after which the protein concentration in the urine is determined by the difference in electrical resistivity.