RU2147130C1 - Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта - Google Patents
Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта Download PDFInfo
- Publication number
- RU2147130C1 RU2147130C1 RU98115512A RU98115512A RU2147130C1 RU 2147130 C1 RU2147130 C1 RU 2147130C1 RU 98115512 A RU98115512 A RU 98115512A RU 98115512 A RU98115512 A RU 98115512A RU 2147130 C1 RU2147130 C1 RU 2147130C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemoglobin
- feces
- reagent
- specific
- crosses
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологическим методам обнаружения скрытой крови, и может быть использовано для диагностики кровотечений из желудочно-кишечного тракта и для контроля за динамикой процесса. Осуществляют постановку реакции коагглютинации (РКОА) с использованием специфически направленных стафилококковых реагентов (СНСР) для определения гемоглобина или эритроцитов человека. В суспензию кала предварительно добавляют магнитный стафилоккоковый реагент и осаждают ее в магнитном поле. Затем готовят двукратные разведения, с которыми проводят РКОА со специфическими антигемоглобиновым и антиэритроцитарным реагентами. Учет РКОА осуществляют по четырехкрестной системе. Рассчитывают кровопотери по формулам:
YHb = Х • 4•6 мкг/см3,
где YHb - искомое количество гемоглобина; Х - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста; 4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала; 6 мкг/см3 - показатель чувствительности специфического противогемоглобинового реагента,
YEr = X • 4 • 2,75 • 105 клеток/см3, где YEr искомое количество эритроцитов; Х - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста; 4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала, 2,75 • 105 клеток/см3 - показатель чувствительности специфического противоэритроцитарного реагента. Различие между обнаружением только гемоглобина или и гемоглобина и эритроцитов позволяет предположить источник кровотечения. Способ позволяет повысить точность с возможностью количественного определения гемоглобина и эритроцитов экспрессным методом.
YHb = Х • 4•6 мкг/см3,
где YHb - искомое количество гемоглобина; Х - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста; 4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала; 6 мкг/см3 - показатель чувствительности специфического противогемоглобинового реагента,
YEr = X • 4 • 2,75 • 105 клеток/см3, где YEr искомое количество эритроцитов; Х - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста; 4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала, 2,75 • 105 клеток/см3 - показатель чувствительности специфического противоэритроцитарного реагента. Различие между обнаружением только гемоглобина или и гемоглобина и эритроцитов позволяет предположить источник кровотечения. Способ позволяет повысить точность с возможностью количественного определения гемоглобина и эритроцитов экспрессным методом.
Description
Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологическим методам обнаружения скрытой крови, и может быть использовано для диагностики кровотечений из желудочно-кишечного тракта и для контроля за динамикой процесса.
Известен способ определения кровопотерь из желудочно-кишечного тракта путем исследования кала, заключающийся в том, что фотоэлектроколориметрически определяют содержание гемоглобина в суспензии суточного кала и уровень гемоглобина в крови больного и по отношению концентрации гемоглобина в кале к концентрации в крови устанавливают объем кровопотери (Патент N 1127928 кл G 01 N 33/48, 1981).
Недостатками данного способа являются трудоемкость и необходимость соблюдения диеты в течение трех дней перед исследованием.
Наиболее близким аналогом к предлагаемому изобретению является способ определения человеческого гемоглобина в фекалиях, включающий в себя иммунохимическую реакцию, т. е. реакцию между антителом и антигеном, при использовании адсорбции специфических антител к гемоглобину человека на твердой фазе и последующего определения наличия гемоглобина с помощью ферментативной реакции.
Способ основывается на двухфазном анализе скрытой крови, соединяющем высокочувствительный анализ с использованием гваяковой смолы с иммунохимическим анализом (Патент N 1496643, кл. G 01 N 33/48, 1989).
Недостатком данного способа является трудоемкость и невозможность дифференциации гемоглобина и эритроцитов, что снижает диагностическую ценность теста.
Технический результат заключается в создании экспрессного способа определения скрытой крови и повышении его точности с возможностью количественного определения компонентов крови, а именно - гемоглобина и эритроцитов.
Задача решается за счет применения тест-набора для определения скрытой крови иммуносорбционным методом на основе реакции коагглютинации (РКОА), включающего следующие компоненты:
1) специфический антигемоглобиновый реагент (реагент A),
2) специфический антиэритроцитарный реагент (реагент В),
3) положительный контроль (гемоглобин),
4) отрицательный контроль (0,9% раствор NaCI),
5) магнитный стафилококковый реагент (реагент C).
1) специфический антигемоглобиновый реагент (реагент A),
2) специфический антиэритроцитарный реагент (реагент В),
3) положительный контроль (гемоглобин),
4) отрицательный контроль (0,9% раствор NaCI),
5) магнитный стафилококковый реагент (реагент C).
Сущность изобретения заключается в постановке реакции коагглютинации (РКОА) с использованием высокоспецифических и чувствительных специфически направленных стафилококковых реагентов (СНСР) для определения гемоглобина или эритроцитов человека. Комбинация РКОА и предварительной истощающей сорбции кала на магнитном сорбенте "Магнобас", нагруженном белком A золотистого стафилококка штамма Cowan I, позволит устранить ложноположительные результаты анализа, а также необходимость в контроле за пищевым режимом.
Способ осуществляется следующим образом.
Пробу фекалий (1 см3) суспендируют в 1 мл 0,9% раствора NaCl. К 1 мл суспензии кала добавляют 1 мл реагента С, перемешивают и осаждают в постоянном магнитном поле. Таким образом достигается не только истощение иммуноглобулинов в исследуемой пробе, но и оседание крупных частиц кала, что облегчает учет результатов РКОА. Далее готовят двукратные разведения истощенной суспензии кала, которые исследуют в РКОА со специфическим реагентом A и (или) реагентом В. Параллельно готовят отрицательный и положительный контроли. Реакцию учитывают визуально при наличии выраженной РКОА в положительном контроле и отсутствии РКОА в отрицательном контроле. Учет реакции проводят по четырехкрестной системе, а затем делают расчет по формуле:
YHb=X•4•6 мкг/см3,
где YHb - искомое количество гемоглобина,
X - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста,
4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала,
6 мкг/см3 - показатель чувствительности специфического противогемоглобинового реагента (полученный опытным путем).
YHb=X•4•6 мкг/см3,
где YHb - искомое количество гемоглобина,
X - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста,
4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала,
6 мкг/см3 - показатель чувствительности специфического противогемоглобинового реагента (полученный опытным путем).
Для определения количества эритроцитов расчет проводят по формуле:
YEr=X•4•2,75•105 клеток/см3,
где YEr - искомое количество эритроцитов,
X - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста,
4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала,
2,75•105 клеток/см3 - показатель чувствительности специфического противоэритроцитарного реагента (полученный опытным путем).
YEr=X•4•2,75•105 клеток/см3,
где YEr - искомое количество эритроцитов,
X - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста,
4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала,
2,75•105 клеток/см3 - показатель чувствительности специфического противоэритроцитарного реагента (полученный опытным путем).
Анализ с помощью тест-набора для определения скрытой крови иммуносорбционным методом на основе РКОА позволяет обнаружить гемоглобин человека, а также эритроциты человека или их фрагменты и дать количественную оценку, что повышает точность способа и особенно важно как для диагностики патологического процесса, так и для наблюдения за его динамикой. Проведение анализа не требует специального оборудования, соблюдения диеты и занимает 10-15 минут.
Пример 1.
Больной С. 30 лет, находился на лечении в гастроэнтерологическом отделении ГКБ N 2 с диагнозом: Неспецифический язвенный колит, легкое течение. Хронический гастродуоденит, обострение. В анамнезе - стул со слизью и кровью. На момент исследования визуально кровь в кале не определялась, амидопириновая проба была отрицательной. 1 см3 кала больного помещают в емкость и добавляют 1 мл 0,9% раствора NaCI, суспендируют. Затем 1 мл суспензии кала вносят во флакон с 1 мл реагента C, тщательно перемешивают и помещают флакон в постоянное магнитное поле. Частицы кала и реагент C оседают на дно флакона в течение 2-10 секунд. Надосадочную жидкость берут для приготовления двукратных разведений в полистироловом планшете. Из каждой ячейки полистиролового планшета берут 10 мкл соответствующего двукратного разведения и помещают на предметное стекло, затем к каждой капле добавляют по 10 мкл реагента A, осторожно перемешивают встряхиванием стекла и проводят учет РКОА по четырехкрестной системе. Последним двукратным разведением суспензии кала, которое учли как три креста, было 1/4. По формуле: Y=4•4•6=96 мкг/см3. Таким образом, в результате анализа кала предлагаемым способом была обнаружена скрытая кровопотеря в количестве 96 мкг/см3 гемоглобина, что позволило скорректировать лечение с учетом кровопотери, в то время как амидопириновая проба скрытого кровотечения не выявила.
Пример 2. Больная К. 60 лет, находилась на лечении в этом же отделении с диагнозом: Язвенная болезнь ДПК, обострение. Хронический эрозивный гастрит. Хронический гепатит. Амидопириновая проба была положительной. Анализ проводили аналогично примеру 1, ставили РКОА с реагентами A и B. Последним двукратным разведением суспензии кала, которое учли как три креста в реакции с реагентом A, было 1/4. Последним двукратным разведением суспензии кала, которое учли как три креста в реакции с реагентом В, было 1/4. По формуле YHb= 4•4•6= 96 мкг/см3 YEr=4•4•2,75=22,0•105 кл/мл. Таким образом, в результате анализа кала при помощи тест-набора для определения скрытой крови иммуносорбционным методом на основе РКОА была обнаружена скрытая кровопотеря в количестве 96 мкг/см3 гемоглобина и 22,0•105 кл/мл эритроцитов.
Различие между обнаружением только гемоглобина или/и гемоглобина и эритроцитов позволяет предположить источник кровотечения и судить о тяжести заболевания, а также корректировать проведение диагностических процедур и лечения.
Пример 3.
Больной М. - воспитанник дома ребенка, возраст 1 месяц. Страдал выраженной молочницей, целиакией, мальабсорбцией. В анамнезе - постоянное нарушение стула. Диагноз оставался неясным. При первом исследовании кала на скрытую кровь бензидиновая проба была положительной, а анализ предлагаемым способом, проведенный аналогично примерам 1 и 2, выявил 192 мкг/см3 гемоглобина, а также 136•105 эритроцитов в см3. Через неделю на фоне терапии бензидиновая проба оказалась отрицательной, в то время как предлагаемым способом было обнаружено 384 мкг/см3 гемоглобина. Еще через неделю и бензидиновая проба и предлагаемый способ стали отрицательными, что позволило судить о прекращении скрытой кровопотери. Одновременно у ребенка нормализовался стул и исчезли все проявления молочницы. Таким образом, использование тест-набора для определения скрытой крови иммуносорбционным методом на основе РКОА дало возможность проследить динамику кровопотери и провести адекватную терапию.
Предложенный способ определения кровопотерь из желудочно-кишечного тракта позволяет быстро (в течение 10-15 минут) обнаружить кровотечение, установить его тяжесть, а также провести комплекс лечебных мероприятий для устранения причины кровопотери, контролировать эффективность и продолжительность терапии, своевременно решать вопрос о хирургическом лечении.
Claims (1)
- Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта путем определения концентрации компонентов крови в кале, отличающийся тем, что в суспензию кала предварительно добавляют магнитный стафилококковый реагент и осаждают ее в магнитном поле, затем из нее готовят двукратные разведения, с которыми проводят реакцию коагглютинации (РКОА) со специфическими антигемоглобиновым и антиэритроцитарным реагентами, учет РКОА осуществляют по четырехкрестной системе, а расчет кровопотери - по формулам
YHb = X • 4 • 6 мкг/см3,
где YHb - искомое количество гемоглобина;
X - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста;
4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала;
6 мкг/см3 - показатель чувствительности специфического противогемоглобинового реагента,
YEr = X • 4 • 2,75 • 105 клеток/см3,
где YEr - искомое количество эритроцитов;
X - знаменатель последнего двукратного разведения пробы, которое учитывалось на три креста;
4 - коэффициент пересчета до исходного разведения кала;
2,75 • 105 клеток/см3 - показатель чувствительности специфического противоэритроцитарного реагента.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98115512A RU2147130C1 (ru) | 1998-08-17 | 1998-08-17 | Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98115512A RU2147130C1 (ru) | 1998-08-17 | 1998-08-17 | Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2147130C1 true RU2147130C1 (ru) | 2000-03-27 |
Family
ID=20209584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98115512A RU2147130C1 (ru) | 1998-08-17 | 1998-08-17 | Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2147130C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2566730C1 (ru) * | 2014-06-17 | 2015-10-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики ранений ободочной кишки |
-
1998
- 1998-08-17 RU RU98115512A patent/RU2147130C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2566730C1 (ru) * | 2014-06-17 | 2015-10-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики ранений ободочной кишки |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Knoflach et al. | Serum antibodies to cow's milk proteins in ulcerative colitis and Crohn's disease | |
| Savory et al. | A biuret method for determination of protein in normal urine | |
| US4210622A (en) | Kit for assay of immune complexes | |
| STEIN et al. | Evaluation of adjusted total thyroxine (free thyroxine index) as a measure of thyroid function | |
| Doetsch et al. | Determination of total urinary protein, combining Lowry sensitivity and biuret specificity | |
| CN106370860A (zh) | 血清免疫球蛋白e胶体金层析定量检测试剂盒及试纸条 | |
| Vatassery et al. | A sensitive assay of transthyretin (prealbumin) in human cerebrospinal fluid in nanogram amounts by ELISA | |
| Kordonouri et al. | Quantitative assessment of urinary protein and enzyme excretion—a diagnostic programme for the detection of renal involvement in type I diabetes mellitus | |
| Rothenberg et al. | Autoantibodies to intrinsic factor: their determination and clinical usefulness | |
| RU2147130C1 (ru) | Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта | |
| EP0770875B1 (en) | Marker and reagent for diabetes mellitus and diabetes mellitus complication | |
| EP0354954B1 (en) | Reagent and method for detecting rheumatoid factor | |
| Monchik et al. | Ionized calcium in the diagnosis of primary hyperparathyroidism | |
| Warner et al. | Interpreting laboratory tests | |
| JPS6022295B2 (ja) | 赤血球凝集試験用水性溶媒 | |
| Doetsch et al. | Determination of urinary total protein by use of gel filtration and a modified biuret method | |
| Burger, FJ, Elphinstone, CD, Fellingham, SA, Grey, PC & Hogewind | Mseleni joint disease: biochemical survey | |
| JPH0448265A (ja) | 免疫測定法 | |
| Koskiniemi et al. | Fibronectin concentration in cerebrospinal fluid reflects early central nervous system involvement in children with acute lymphoblastic leukemia | |
| JPS59136657A (ja) | 血液凝固第８因子測定用試薬 | |
| JP2002340890A (ja) | タンパク質の測定方法 | |
| Erickson et al. | Evaluation of methods for the detection and quantitation of serum fibrin-fibrinogen degradation products | |
| JPH10221338A (ja) | 糞便中ヘモグロビン、トランスフェリン同時分別測定用試薬、キットおよび出血性消化管疾患のスクリーニング方法 | |
| JPH08105889A (ja) | 尿中トランスフェリン測定試薬および糖尿病合併症の早期診断方法 | |
| JPH0469572A (ja) | 糖尿病性腎症診断のための尿中の蛋白量判定方法および感作ラテックス |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070818 |