RU2140287C1 - Method of albumin preparing - Google Patents
Method of albumin preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2140287C1 RU2140287C1 RU98116173A RU98116173A RU2140287C1 RU 2140287 C1 RU2140287 C1 RU 2140287C1 RU 98116173 A RU98116173 A RU 98116173A RU 98116173 A RU98116173 A RU 98116173A RU 2140287 C1 RU2140287 C1 RU 2140287C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- albumin
- concentration
- caprylate
- ethanol
- protein
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к производству медицинских биологических препаратов, и может быть использовано при получении альбуминов (A), из неиспользуемых, балластных альбуминсодержащих фракций. The invention relates to medicine, namely to the production of medical biological preparations, and can be used to obtain albumin (A) from unused, ballast albumin-containing fractions.
A относится к категории препаратов, назначаемых пациентам по жизненным или неотложным показаниям - при шоке, острых кровопотерях, ожогах, нефротическом синдроме, поражении печени. В структуре маркетинга препаратов крови (1) - на долю A приходится - 45,1%. A belongs to the category of drugs prescribed to patients according to vital or emergency indications - with shock, acute blood loss, burns, nephrotic syndrome, liver damage. In the structure of marketing of blood products (1), A accounts for 45.1%.
Возможности увеличения производства A в настоящее время ограничены сырьевой базой - плазма крови. Поэтому многие фирмы и исследователи заняты как изменениями основного технологического процесса фракционирования плазмы с целью увеличения выхода A, так и поиском дополнительных источников сырья и разработкой специальных технологий применительно к каждому выбранному источнику выделения. Possibilities for increasing A production are currently limited by the raw material base - blood plasma. Therefore, many firms and researchers are busy with both changes in the main technological process of plasma fractionation in order to increase the yield of A, and the search for additional sources of raw materials and the development of special technologies for each selected source of selection.
При фракционировании плазмы самым распространенным в мире методом Кона 6 многостадийный процесс осаждений приводит к значительной, до 20%, потере альбумина, который оказывается в балластных фракциях и практически не используется (2, 3). Это вынуждает вести работы по дополнительному выделению A из неутилизируемых в настоящее время альбуминсодержащих фракций плазмы - осадков IV-1, IV-4, IV-1,4 (по Кону, 1946), IV (по Кистлеру и Ничману, 1962), IV - "каприлатного осадка" (4). При этом качественные показатели выделяемого A по молекулярным параметрам, прозрачности, стабильности при хранении и другие должны соответствовать Национальным Фармакопеям, так как частота трансфузионных реакций прямо коррелирует как с увеличением содержания аггрегатов, так и с понижением электрофоретической чистоты (5). In plasma fractionation by the most common Cohn 6 method in the world, the multi-stage deposition process leads to a significant, up to 20%, loss of albumin, which appears in the ballast fractions and is practically not used (2, 3). This forces us to work on the additional isolation of A from currently unused albumin-containing fractions of plasma - precipitation IV-1, IV-4, IV-1,4 (according to Cohn, 1946), IV (according to Kistler and Nichman, 1962), IV - "caprylate precipitate" (4). At the same time, the qualitative indicators of secreted A in molecular parameters, transparency, storage stability, and others should correspond to the National Pharmacopoeias, since the frequency of transfusion reactions directly correlates with both an increase in aggregate content and a decrease in electrophoretic purity (5).
Существует множество методов выделения A, но все они помимо положительных качеств не лишены и недостатков. Этанольные методы дополнительного извлечения A, например, из осадка фракции IV-4 по Кону используют критические концентрации этанола и предусматривают многочисленные стадии осаждения (6), что приводит к "антигенному" эффекту (5). Каприлатно-тепловые методы селективной денатурации балластных белков при выделении A из осадков IV-1, IV по Кону, имеют риск высоких рабочих температур - от 45 до 75oC и предполагают длительное выдерживание в этих условиях - до 3 ч (7), либо осложнены многочисленными дополнительными стадиями (8) - обработкой риванолом, неорганическим сорбентом, катионообменником, что значительно удлиняет производственный процесс, снижает выход и несет возможность денатурации и полимеризации A. Хроматографические способы дополнительного извлечения A, например, из осадка IV по Кону предусматривают одновременное использование трех различных хроматографических сорбентов (9), что также значительно продлевает и усложняет технологический процесс, несет опасность пирогенизации конечного продукта и приводит к удорожанию препарата. Применение миндальной кислоты для очистки осадков (10) не разрешено фармакопеей и нуждается в токсикологической сертификации в России.There are many methods for isolating A, but all of them, in addition to their positive qualities, are not without drawbacks. Ethanol methods for additional extraction of A, for example, from Cohn fraction IV-4 sediment, use critical concentrations of ethanol and involve numerous precipitation steps (6), which leads to an “antigenic” effect (5). Caprilat-thermal methods for selective denaturation of ballast proteins during the isolation of A from Cohn IV-1, IV precipitation have a risk of high working temperatures - from 45 to 75 o C and suggest prolonged exposure under these conditions - up to 3 hours (7), or complicated by numerous additional stages (8) - treatment with rivanol, an inorganic sorbent, a cation exchanger, which significantly lengthens the production process, reduces the yield and carries the possibility of denaturation and polymerization of A. Chromatographic methods of additional extraction of A, for example, from Cohn sludge IV involves the simultaneous use of three different chromatographic sorbents (9), which also significantly prolongs and complicates the process, carries the danger of pyrogenation of the final product and leads to an increase in the cost of the drug. The use of mandelic acid for the purification of sediments (10) is not permitted by the Pharmacopoeia and needs toxicological certification in Russia.
Общепризнано, выделение A из плазмы является более легкой процедурой, чем его извлечение из балластных осадков, содержащих денатурированные белки и повышенные концентрации труднорастворимых липопротеинов и гликопротеинов. Поэтому использование в качестве фракционирующего агента одного этанола бывает недостаточным. It is generally recognized that the release of A from plasma is an easier procedure than its extraction from ballast sediments containing denatured proteins and increased concentrations of insoluble lipoproteins and glycoproteins. Therefore, the use of ethanol alone as a fractionating agent is insufficient.
С другой стороны дополнительное или совместное с этанолом использование иных фракционирующих агентов - трихлоруксусной кислоты (11) или хлороформа (12) при выделении препаратов A, по мнению некоторых исследователей, остается под вопросом. Поскольку трихлоуксусная кислота (13) и хлороформ (14), энергично связываются с осаждаемым или очищаемым ими A, а указанные вещества являются высокотоксичными соединениями. Следовательно, применение таких A в качестве препаратов проблематично. По мнению тех же авторов, A теряет при обработке хлороформом, трихлоруксусной кислотой свою функциональную активность. On the other hand, the additional or combined use of other fractionating agents with ethanol - trichloroacetic acid (11) or chloroform (12) in the isolation of A preparations, according to some researchers, remains open to question. Since trichloacetic acid (13) and chloroform (14) bind vigorously to the precipitated or purified A, and these substances are highly toxic compounds. Therefore, the use of such A as drugs is problematic. According to the same authors, A loses its functional activity when treated with chloroform, trichloroacetic acid.
Поэтому более предпочтительным для очистки A одновременное использование этанола и каприлат-иона. Тем более, что более чем 40 летний опыт использования каприлата натрия в качестве стабилизатора A при пастеризации и его присутствие в конечном препарате показало отсутствие побочных эффектов. Therefore, it is more preferable to clean A simultaneously using ethanol and caprylate ion. Moreover, over 40 years of experience using sodium caprylate as stabilizer A during pasteurization and its presence in the final preparation showed no side effects.
Наиболее близким техническим решением предлагаемому способу получения A является метод (15), включающий следующие технологические этапы: проводят экстракцию альбуминсодержащего - осадка при pH 2,0-7,5 водой или раствором натрия хлорида, разделяют смесь белков этиловым спиртом в концентрации 18-35% (по объему) в присутствии каприлат-иона 0,1-0,6% при 0-30oC и pH 2,0-5,0. Отделяют осадок центрифугированием с последующим извлечением альбумина из центрифугата осаждением. Концентрируют и отделяют спирт известными приемами. Препарат подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации.The closest technical solution to the proposed method for producing A is method (15), which includes the following technological steps: an albumin-containing precipitate is extracted at pH 2.0-7.5 with water or sodium chloride solution, the protein mixture is separated with ethyl alcohol at a concentration of 18-35% (by volume) in the presence of caprylate ion 0.1-0.6% at 0-30 o C and a pH of 2.0-5.0. The precipitate was separated by centrifugation followed by extraction of albumin from the centrifugate by precipitation. Concentrate and separate the alcohol by known methods. The drug is subjected to clarifying and sterilizing filtration.
Данный способ очистки A снижает pH до 2,0-5,0, при котором возможна максимальная очистка от гемпигментов, контаминантных протеаз. Используемая при этом температура - не более 30oC и не менее 0oC, и всего одна стадия осаждения A позволяет отнести указанный метод к наиболее экономичным. Кроме того, каприлатные способы выделения A гарантируют не только инактивацию (16) возможно присутствующих вирусов, но и их удаление (17) из препарата A.This purification method A reduces the pH to 2.0-5.0, at which the maximum purification from hempigments, contaminant proteases is possible. The temperature used in this case is not more than 30 o C and not less than 0 o C, and only one deposition stage A allows us to classify this method as the most economical. In addition, caprilatny methods of isolation of A guarantee not only the inactivation (16) of possibly present viruses, but also their removal (17) from the preparation A.
Однако данный "каприлатный" способ был разработан применительно к растворам белков, содержащим относительно высокие концентрации A: непосредственно к плазме или к центрифугатам II+III по Кону, после удаления фракции иммуноглобулинов. A, полученный этим способом из неиспользуемых осадков характеризовался наличием агрегатов, нестабильностью при хранении, более низкой электрофоретической чистотой. However, this caprylate method was developed for protein solutions containing relatively high concentrations of A: directly to the plasma or to Cohn centrifuges II + III, after removal of the immunoglobulin fraction. A obtained by this method from unused precipitation was characterized by the presence of aggregates, storage instability, lower electrophoretic purity.
В отличие от плазмы - стандартного источника сырья, существующей в виде раствора и готовой для фракционирования, осадки, содержащие A, необходимо перевести в максимально растворимое состояние на начальной стадии выделения препарата. Поэтому на стадии экстракции балластных осадков, обычно труднорастворимых в стандартных растворах со слабокислым или нейтральным pH - pH 4,8-7,5 (18,19), используют щелочной pH от 9,0 до 12,0 (20), что, помимо более полного растворения осадков, приводит к полимеризации, денатурации и утрате функциональной активности A. Unlike plasma, a standard source of raw materials that exists in the form of a solution and is ready for fractionation, precipitates containing A must be transferred to the most soluble state at the initial stage of drug isolation. Therefore, at the stage of extraction of ballast sediments, usually sparingly soluble in standard solutions with slightly acidic or neutral pH - pH 4.8-7.5 (18.19), an alkaline pH of 9.0 to 12.0 (20) is used, which, in addition to more complete dissolution of precipitation leads to polymerization, denaturation and loss of functional activity A.
Задачей, на решение которой направлено изобретение, является разработка способа дополнительного получения препарата A из отходов производства - альбуминсодержащих неиспользуемых осадков. The problem to which the invention is directed is the development of a method for the additional production of preparation A from production wastes - albumin-containing unused precipitation.
Технический результат заключается в получении препарата A не содержащего агрегатов, с электрофоретической чистотой более 98% и стабильного при хранении. Кроме того, заявляемый способ позволяет получить высокий выход конечного продукта при низкой стоимости препарата. The technical result consists in obtaining a preparation A containing no aggregates, with an electrophoretic purity of more than 98% and stable during storage. In addition, the inventive method allows to obtain a high yield of the final product at a low cost of the drug.
Сущность метода заключается в следующем. The essence of the method is as follows.
Альбумин получают из неиспользуемых альбуминсодержащих осадков, экстракцией осадков при pH 7,7-8,8 водой или раствором натрия хлорида в присутствии каприлат-иона в концентрации 0,7-2,0% с дальнейшим разделением смеси белков этиловым спиртом в конечной концентрации 8,0-17,0 об.%. Центрифугируют, концентрируют альбумин из центрифугата ультрафильтрацией, удаляют спирт диафильтрацией и полученный раствор подвергают осветляющей, стерилизующей фильтрации. Albumin is obtained from unused albumin-containing precipitates by extraction of the precipitates at pH 7.7-8.8 with water or sodium chloride solution in the presence of caprilate ion in a concentration of 0.7-2.0% with further separation of the protein mixture with ethyl alcohol at a final concentration of 8, 0-17.0 vol.%. It is centrifuged, albumin is concentrated from the centrifugate by ultrafiltration, the alcohol is removed by diafiltration and the resulting solution is subjected to clarifying, sterilizing filtration.
В отличие от прототипа, в заявляемом способе экстракцию альбумина из альбуминсодержащих неутилизируемых осадков ведут в присутствии каприлат-иона 0,7-2,0% при pH 7,7-8,8, осаждение примесных и денатурированных белков осуществляют при концентрации этанола 8,0-17,0%, минуя стадию осаждения альбумина концентрируют его ультрафильтрацией и проводят удаление спирта диафильтрацией. In contrast to the prototype, in the claimed method, the extraction of albumin from albumin-containing non-utilizable precipitates is carried out in the presence of caprilate ion 0.7-2.0% at a pH of 7.7-8.8, precipitation of impurity and denatured proteins is carried out at an ethanol concentration of 8.0 -17.0%, bypassing the precipitation stage of albumin, concentrate it with ultrafiltration and carry out the removal of alcohol by diafiltration.
Совокупность отличительных признаков заявляемого способа позволили получить следующие преимущества. Применение каприлат-иона в концентрации 0,7-2,0% на начальной стадии фракционирования в качестве экстрагирующего иона приводит к более полному избирательному растворению неденатурированного A. The combination of distinctive features of the proposed method allowed to obtain the following advantages. The use of caprylate ion in a concentration of 0.7-2.0% at the initial stage of fractionation as an extracting ion leads to a more complete selective dissolution of undenatured A.
Увеличение pH до 7,7-8,8 при экстракции создает оптимальные условия для максимального растворения осадков и увеличивает выход неагрегированного альбумина. The increase in pH to 7.7-8.8 during extraction creates optimal conditions for the maximum dissolution of precipitation and increases the yield of non-aggregated albumin.
Так как в осадках по сравнению с плазмой содержится повышенное содержание примесей, то сохранение указанной концентрации каприлатиона (0,7-2,0%) на стадии разделения белков этанолом - способствует увеличению электрофоретической чистоты A, а снижение концентрации этилового спирта до 8,0-17,0% - обеспечивает увеличение выхода A и предотвращает агрегацию и повышенную димеризацию. Since precipitation contains a higher content of impurities in comparison with plasma, the preservation of the indicated concentration of caprilation (0.7-2.0%) at the stage of protein separation by ethanol contributes to an increase in electrophoretic purity A, and a decrease in the concentration of ethyl alcohol to 8.0- 17.0% - provides an increase in the yield of A and prevents aggregation and increased dimerization.
Вместо проведения концентрирования и удаления спирта из A, подвергнутого осаждению этанолом, т. е. лишенного каприлат-иона с центрифугатом, в предлагаемом способе применяется ультрафильтрация в присутствии каприлат-иона (стабилизатора), что сохраняет мономерность, стабильность A в процессе ультрафильтрации и диафильтрации. Instead of concentrating and removing alcohol from A precipitated with ethanol, i.e., deprived of a caprilate ion with a centrifugate, the proposed method uses ultrafiltration in the presence of a caprilate ion (stabilizer), which preserves the monomerism, stability of A during ultrafiltration and diafiltration.
Как видно из представленных данных (табл. 1 в конце описания) использование предлагаемого способа в отличие от способа прототипа позволяет получать препарат A не содержащий агрегаты, с высокой электрофоретической чистотой более 98%, минимальным содержанием димеров - менее 3%, большим содержанием мономеров - более 97%. Сравнение с прототипом наглядно показывает значительное увеличение выхода альбумина с 1 кг различных типов осадков. As can be seen from the data presented (table. 1 at the end of the description), the use of the proposed method, in contrast to the prototype method, allows to obtain preparation A containing no aggregates, with high electrophoretic purity of more than 98%, a minimum dimer content of less than 3%, a high monomer content of more 97%. Comparison with the prototype clearly shows a significant increase in albumin yield from 1 kg of various types of precipitation.
Важным для препарата альбумина является не только нативность свежеприготовленного альбумина, но и стабильность его во время хранения. Тест на стабильность - измерение мутности (прозрачности) при прогревании в течение 50 ч при 57oC, рассматривался в качестве аналога условий хранения. Представленные данные по термостабильности в табл. 2 (см. в конце описания) указывают на отсутствие достоверных различий в прозрачности альбумина, полученного согласно заявляемого способа в отличие от способа прототипа.Important for the albumin preparation is not only the nativeness of freshly prepared albumin, but also its stability during storage. The stability test - the measurement of turbidity (transparency) when heated for 50 hours at 57 o C, was considered as an analog of storage conditions. The data on thermal stability in the table. 2 (see the end of the description) indicate the absence of significant differences in the transparency of albumin obtained according to the proposed method in contrast to the prototype method.
Достигнутые результаты объясняются применением каприлат-иона на всех стадиях процесса: - начальной - экстракции, разделения смеси белков этанолом, ультрафильтрации, диафильтрации, осветляющей и стерилизующей фильтрации, что обусловлено стабилизацией жирной кислотой или анионным детергентом (каприлатом натрия) открытых гидрофобных участков в молекуле A - гидрофилизацией и увеличением отрицательного заряда молекул альбумина - одноименное отталкивание белковых молекул. The achieved results are explained by the use of caprilate ion at all stages of the process: - initial - extraction, separation of the protein mixture with ethanol, ultrafiltration, diafiltration, clarifying and sterilizing filtration, which is due to the stabilization of open hydrophobic sites in the A molecule by the fatty acid or anionic detergent (sodium caprylate) - hydrophilization and an increase in the negative charge of albumin molecules - the repulsion of protein molecules of the same name.
Способ осуществляют следующим образом. The method is as follows.
В качестве сырья используются любые альбуминсодержащие неиспользуемые осадки, полученные различными методами. Источниками сырья могут выступать альбумин-содержащие фракции плазмы в виде осадков, например, - IV-1, IV-4, IV-1,4 (по Кону, 1946), IV (по Кистлеру и Ничману, 1962), IV - "каприлатный осадок" (денатурированный осадок белков, образуемый в присутствии каприлата натрия) и другие. As raw materials any albumin-containing unused precipitates obtained by various methods are used. Sources of raw materials can be albumin-containing plasma fractions in the form of precipitates, for example, IV-1, IV-4, IV-1,4 (according to Cohn, 1946), IV (according to Kistler and Nichman, 1962), IV - "caprilate precipitate "(denatured precipitate of proteins formed in the presence of sodium caprylate) and others.
Фракцию осадка разрушают на кусочки и гомогенизируют в пропорции от 4 до 10 л экстрагента на кг пасты в экстрагирующем растворе, с pH 7,7-8,8 и концентрацией хлорид-иона от 0 до 0,2 М, каприлат-иона 0, 7-2, 0%, поддерживая указанный pH во время растворения осадка. Экстракцию ведут при температуре от 0 до 15oC, в течение 12±6 ч. В полученный раствор белков вводят этанол с температурой от минус 40 до 0oC до концентрации 8,0-17,0% (объемных). В качестве источника этанола возможно использование отхода производства - центрифугата A1 или 1 (21), содержащего 24-26% этанола и используемого в технологии получения иммуноглобулинов для удаления остатков альбумина. Затем в смеси устанавливают температуру 0-30oC и pH 2-5. Отделяют осадок центрифугированием с последующим концентрированием альбумина из центрифугата ультрафильтрацией и удалением спирта диафильтрацией на плоскорамниках или полых волокнах или спиральных картриджах с пределом задержания 10-50 КДа при температуре 0-45oC и pH 5,2- 7,6. В полученный раствор альбумина добавляют каприлат натрия до концентрации 0,3% после его количественного определения (22) и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации.The sediment fraction is crushed into pieces and homogenized in a proportion of 4 to 10 l of extractant per kg of paste in an extraction solution, with a pH of 7.7-8.8 and a concentration of chloride ion from 0 to 0.2 M, caprylate ion 0.7 -2, 0%, maintaining the specified pH during the dissolution of the precipitate. Extraction is carried out at a temperature from 0 to 15 o C, for 12 ± 6 hours. Ethanol is introduced into the resulting protein solution with a temperature from minus 40 to 0 o C to a concentration of 8.0-17.0% (volume). As a source of ethanol, it is possible to use production waste - a centrifugate A1 or 1 (21), containing 24-26% ethanol and used in the technology for the production of immunoglobulins to remove albumin residues. Then the mixture is set to a temperature of 0-30 o C and pH 2-5. The precipitate is separated by centrifugation, followed by concentration of albumin from the centrifugate by ultrafiltration and alcohol removal by diafiltration on pliers or hollow fibers or spiral cartridges with a retention limit of 10-50 KDa at a temperature of 0-45 o C and a pH of 5.2-7.6. Sodium caprylate is added to the resulting albumin solution to a concentration of 0.3% after its quantitative determination (22) and is subjected to clarifying and sterilizing filtration.
Определение молекулярных параметров альбумина - содержания полимеров, димеров, мономеров, фрагментов осуществлялось согласно требований Европейской Фармакопеи (23) методом гель-фильтрации на Ультрагеле AсA34 (Serva, ФРГ). Электрофоретическая чистота A определялась на ацетат-целлюлозной пленке согласно Немецкой Фармакопее (24). Тест на стабильность - по измерению мутности при прогревании при 57oC в течение 50 ч (25).Determination of molecular parameters of albumin - the content of polymers, dimers, monomers, fragments was carried out according to the requirements of the European Pharmacopoeia (23) by gel filtration on Ultragel AcA34 (Serva, Germany). Electrophoretic purity A was determined on an acetate-cellulose film according to the German Pharmacopoeia (24). Stability test - by measuring the turbidity when heated at 57 o C for 50 h (25).
Пример 1. Сырье - 63 кг осадка IV (4), отход производства альбумина из гемолизированного сырья, суспендируют в 630 л дистиллированной воды с pH 8,8, содержащей 0,8% каприлат-иона, при температуре 1oC в течение 12 ч, поддерживая указанный pH 8,8 во время экстракции. В полученный раствор, объемом 680 л вводят этанол с температурой минус 30oC до концентрации 17% (146 л 96% этанола) со скоростью 30 л/ч. Белково-спиртовую смесь подогревают до температуры 16oC и смещают pH до 3,3, перемешивают 15 минут, повышают pH до 4,6 и центрифугируют. Увеличивают pH до 7,3 и концентрируют центрифугат до 7% белка ультрафильтрацией на полых волокнах ВПУ-15000 Да. Удаляют этанол диафильтрацией против 5 объемов дистиллированной воды при температуре 10oC и осуществляют окончательное концентрирование до 12% по содержанию белка. Доводят содержание каприлата натрия до 0,3% путем добавления 10%-ного раствора каприлата, белка до 10%, натрия хлорида до 0,6%, и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Получают 37,93 л 10%-ного раствора альбумина (выход 60,2 г альбумина с 1 кг осадка IV) со следующими характеристиками: молекулярные параметры - агрегаты 0, димеры - 2,29, мономеры - 97,71, фрагменты - 0%; электрофоретическая чистота - 99,5%; прозрачность (E 1 см, 10%) до прогрева при 57oC 50 ч - 0,036, после прогрева - 0,036.Example 1. Raw materials - 63 kg of sediment IV (4), the waste from the production of albumin from hemolyzed raw materials, suspended in 630 l of distilled water with a pH of 8.8, containing 0.8% caprylate ion, at a temperature of 1 o C for 12 h maintaining the specified pH of 8.8 during extraction. Ethanol is introduced into the resulting solution with a volume of 680 L at a temperature of minus 30 o C to a concentration of 17% (146 L of 96% ethanol) at a rate of 30 L / h. The protein-alcohol mixture is heated to a temperature of 16 ° C. and the pH is shifted to 3.3, stirred for 15 minutes, the pH is raised to 4.6 and centrifuged. The pH is increased to 7.3 and the centrifugate is concentrated to 7% protein by ultrafiltration on VPU-15000 Da hollow fibers. Ethanol is removed by diafiltration against 5 volumes of distilled water at a temperature of 10 ° C. and a final concentration of up to 12% is carried out in terms of protein content. The sodium caprylate content is adjusted to 0.3% by adding a 10% solution of caprylate, protein to 10%, sodium chloride to 0.6%, and subjected to clarifying and sterilizing filtration. Obtain 37.93 l of a 10% solution of albumin (yield 60.2 g of albumin with 1 kg of precipitate IV) with the following characteristics: molecular parameters — aggregates 0, dimers — 2.29, monomers — 97.71, fragments — 0% ; electrophoretic purity - 99.5%; transparency (E 1 cm, 10%) before heating at 57 o C for 50 hours - 0.036, after heating - 0.036.
Пример 2. Сырье - 60 кг осадка IV-1 по Кону, отход производства альбумина, суспендируют в 240 л дистиллированной воды с pH 7,7, содержащей 2,0% каприлат-иона, при температуре 10oC в течение 6 ч, поддерживая указанный pH во время экстракции. В полученный раствор, объемом 288 л приливают равный объем центрифугата A1 (21), содержащего 2,0% каприлата натрия, с температурой минус 20oC до концентрации этанола около 12%. Белково-спиртовую смесь подогревают до температуры 18oC и смещают pH до 4,6 и центрифугируют. Увеличивают pH до 5,3 и концентрируют центрифугат до 6% белка ультрафильтрацией на спиральном картридже S40Y30 (Amicon, США) при температуре 4oC. Удаляют этанол диафильтрацией против 4 объемов дистиллированной воды при температуре 8oC и осуществляют окончательное концентрирование до 7% по содержанию белка. Доводят содержание каприлата натрия до 0.3% путем добавления 10%-ного раствора каприлата, белка до 5%, натрия хлорида до 0,8%, pH до 7,0 и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Получают 36,60 л 5%-ного раствора альбумина (выход 30,5 г альбумина с 1 кг осадка IV-1) со следующими характеристиками: молекулярные параметры - агрегаты 0, димеры - 2,26, мономеры - 97,74, фрагменты - 0%; электрофоретическая чистота - 99,4%: прозрачность (E 1 см, 10%) до прогрева при 57oC 50 ч - 0,035, после прогрева - 0, 035.Example 2. Raw materials - 60 kg of Cohn precipitate IV-1, the waste product of albumin, suspended in 240 l of distilled water with a pH of 7.7, containing 2.0% caprylate ion, at a temperature of 10 o C for 6 h, maintaining indicated pH during extraction. An equal volume of centrifugate A1 (21) containing 2.0% sodium caprylate with a temperature of minus 20 o C to an ethanol concentration of about 12% is poured into the resulting solution, with a volume of 288 L. The protein-alcohol mixture is heated to a temperature of 18 o C and the pH is shifted to 4.6 and centrifuged. The pH is increased to 5.3 and the centrifugate is concentrated to 6% protein by ultrafiltration on a S40Y30 spiral cartridge (Amicon, USA) at a temperature of 4 o C. Ethanol is removed by diafiltration against 4 volumes of distilled water at a temperature of 8 o C and the final concentration is carried out to 7% by protein content. The sodium caprylate content is adjusted to 0.3% by adding a 10% solution of caprylate, protein to 5%, sodium chloride to 0.8%, pH to 7.0 and subjected to clarifying and sterilizing filtration. 36.60 L of a 5% albumin solution is obtained (yield 30.5 g of albumin with 1 kg of precipitate IV-1) with the following characteristics: molecular parameters — aggregates 0, dimers — 2.26, monomers — 97.74, fragments — 0% electrophoretic purity - 99.4%: transparency (E 1 cm, 10%) before heating at 57 o C for 50 hours - 0.035, after heating - 0, 035.
Пример 3. Сырье - 60 кг осадка IV-4 по Кону, отход производства альбумина, суспендируют в 300 л дистиллированной воды с pH 8,3, содержащей 1,4% каприлат-иона, при температуре 15oC в течение 7 ч, поддерживая указанный pH во время экстракции. В полученный раствор, объемом 348 л, приливают 174 л центрифугата A1 (21), содержащего 1,4% каприлата натрия, с температурой минус 15oC до концентрации этанола около 8%. Белково-спиртовую смесь отепляют до температуры 14oC и смещают pH до 4,4 и центрифугируют. Увеличивают pH до 6,6 и концентрируют центрифугат до 8% белка ультрафильтрацией на плоскорамниках с мембранами УПМ-50000 Да при температуре 4oC. Удаляют этанол диафильтрацией против 6 объемов дистиллированной воды при температуре 6oC и осуществляют окончательное концентрирование до 22% по содержанию белка при температуре 45oC. Доводят содержание каприлата натрия до 0,3% путем добавления 10%-ного раствора каприлата, белка до 20% и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Получают 7,65 л 20%-ного раствора альбумина (выход 25,5 г альбумина с 1 кг осадка IV- 4) со следующими характеристиками: молекулярные параметры - агрегаты 0, димеры - 2,30, мономеры - 97,70, фрагменты - 0%; электрофоретическая чистота - 99,2%; прозрачность (E 1 см, 10%) до прогрева при 57oC 50 ч - 0,034, после прогрева - 0,034.Example 3. Raw materials - 60 kg of Cohn precipitate IV-4, the waste product of albumin production, suspended in 300 l of distilled water with a pH of 8.3, containing 1.4% caprylate ion, at a temperature of 15 o C for 7 h, maintaining indicated pH during extraction. 174 L of centrifugate A1 (21) containing 1.4% sodium caprylate with a temperature of minus 15 o C to an ethanol concentration of about 8% is poured into the resulting solution, with a volume of 348 L. The protein-alcohol mixture is heated to a temperature of 14 o C and the pH is shifted to 4.4 and centrifuged. The pH is increased to 6.6 and the centrifugate is concentrated to 8% protein by ultrafiltration on flat-bottomed with UPM-50,000 Da membranes at a temperature of 4 o C. Ethanol is removed by diafiltration against 6 volumes of distilled water at a temperature of 6 o C and the final concentration is carried out up to 22% by content protein at a temperature of 45 o C. Bring the content of sodium caprylate to 0.3% by adding a 10% solution of caprylate, protein to 20% and subjected to clarifying and sterilizing filtration. Get 7.65 l of a 20% solution of albumin (yield 25.5 g of albumin with 1 kg of precipitate IV-4) with the following characteristics: molecular parameters - aggregates 0, dimers - 2.30, monomers - 97.70, fragments - 0% electrophoretic purity - 99.2%; transparency (E 1 cm, 10%) before heating at 57 o C for 50 hours - 0.034, after heating - 0.034.
Предложенная технология переработки неутилизируемых осадков для получения альбумина в присутствии стабилизатора на всех стадиях технологического процесса позволяет получать препарат, не содержащий агрегатов, с высокой электрофоретической чистотой - более 98% и стабильный при хранении. The proposed technology for processing non-utilizable precipitates to produce albumin in the presence of a stabilizer at all stages of the technological process allows to obtain a preparation that does not contain aggregates, with high electrophoretic purity - more than 98% and is stable during storage.
Источники информации
1) Faure A. Human blood Fractionation. 8th International Biotechnology Symposium, Paris, 1988, 669-678.Sources of information
1) Faure A. Human blood Fractionation. 8th International Biotechnology Symposium, Paris, 1988, 669-678.
2) More J.E., Harvey M.J. Purification Technologies for human plasma albumin. Cold ethanol fractionation. In: Blood separation and plasma fractionation, Ed. J.R. Harris, 1991, Wiley-Liss, Inc., 255-256. 2) More J.E., Harvey M.J. Purification Technologies for human plasma albumin. Cold ethanol fractionation. In: Blood separation and plasma fractionation, Ed. J.R. Harris, 1991, Wiley-Liss, Inc., 255-256.
3) Vogelaar E. F. , Brummelhuis H.G.J., Beentjes S.P. and Krunen H.W. Contributions to the optimal use of human blood. Vox sang, 1972, 23, 481-492. 3) Vogelaar E. F., Brummelhuis H.G.J., Beentjes S.P. and Krunen H.W. Contributions to the optimal use of human blood. Vox sang, 1972, 23, 481-492.
4) Опытно-промышленный регламент производства раствора альбумина 5%, 10%, 20% из гемолизированной плазмы и сыворотки. -М., 1978. 4) The pilot industrial regulations for the production of albumin solution of 5%, 10%, 20% from hemolyzed plasma and serum. -M., 1978.
5) Schneider W. , Wolter D., McCarty L.J. Heat-ethanol isolated serum albumin: discussion. Folia Haematol., Leipzig, 1977, 104, 1, 119-120. 5) Schneider W., Wolter D., McCarty L.J. Heat-ethanol isolated serum albumin: discussion. Folia Haematol., Leipzig, 1977, 104, 1, 119-120.
6) Типовой комплексный регламент производства белковых препаратов донорской крови. Приложение 17. Дополнительное извлечение альбумина из осадка фракции IV-4. М., 1979, 295. 6) Typical integrated regulation for the production of protein preparations of donated blood. Appendix 17. Additional extraction of albumin from the precipitate of fraction IV-4. M., 1979, 295.
7) Способ получения альбумина. Патент СССР N 743564, A 61 K 37/02. 25.06.80. 7) A method for producing albumin. USSR patent N 743564, A 61 K 37/02. 06/25/80.
8) Метод получения раствора протеинов, стабильных к температурной обработке. Патент США N 4017470, A 61 K 37/02. 12.04.1977. 8) The method of obtaining a solution of proteins that are stable to heat treatment. U.S. Patent No. 4,017,470, A 61 K 37/02. 04/12/1977.
9) Eriksson S., Berglof J.H., Hamalainen E., Suomela H. Recovery of human albumin from Cohn fraction IV paste. Separation of plasma proteins. Ed. by J.M. Curling. Plenary lectures and posters presented at the Joint Meeting of the 19th Congress of the International Society of Haematology and the 17th Congress of the International Society of Blood Transfusion, Budapest, August 1-7, 1982. Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sweden, 1983, 90-94. 9) Eriksson S., Berglof J.H., Hamalainen E., Suomela H. Recovery of human albumin from Cohn fraction IV paste. Separation of plasma proteins. Ed. by J.M. Curling. Plenary lectures and posters presented at the Joint Meeting of the 19th Congress of the International Society of Haematology and the 17th Congress of the International Society of Blood Transfusion, Budapest, August 1-7, 1982. Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sweden, 1983 , 90-94.
10) Способ выделения альбумина. АС РФ N 1127525 A, A 61 K 37/02. 10) A method for isolating albumin. AC RF N 1127525 A, A 61 K 37/02.
11) Способ получения альбумина. АС N 591126, F 61 R 37/02. 30.01.78. 11) A method for producing albumin. AC N 591126, F 61 R 37/02. 01/30/78.
12) Therniault D.G., Taylor J.F. Dimerization of serum albumin on extraction with an organic solvent. Blochem. and Biophys Res. Communs, 1960, 3, 5, 560-565. 12) Therniault D.G., Taylor J.F. Dimerization of serum albumin on extraction with an organic solvent. Blochem. and Biophys Res. Communs, 1960, 3, 5, 560-565.
13) Scatchard G., Black E.S. J.Phys. Colloid. Chem. 1949, 53, 1, 88-99. 13) Scatchard G., Black E.S. J.Phys. Colloid. Chem. 1949, 53, 1, 88-99.
14) Способ очистки сывороточного альбумина. Патент РФ N 2007423 C1, C 07 K 3/12. 15.02.94. 14) A method for purifying serum albumin. RF patent N 2007423 C1, C 07
15) Способ получения сывороточного альбумина. АС РФ N 467536, A 61 K 23/02. 15) A method for producing serum albumin. AC RF N 467536, A 61 K 23/02.
16) Lundblad J.L., Sing R.L. Inactivation of lipid-enveloped viruses in proteins by caprylate. Vox Sang, 1991, 60, 75-81. 16) Lundblad J.L., Sing R.L. Inactivation of lipid-enveloped viruses in proteins by caprylate. Vox Sang, 1991, 60, 75-81.
17) Патент ЧССР N 239715. Способ производства инфузионного раствора сывороточного альбумина. A 61 K 37/02. 13.06.85. 17) Patent of Czechoslovakia N 239715. Method for the production of serum albumin infusion solution. A 61 K 37/02. 06/13/85.
18) Schneider W., Lefevre H., Fiedler H. and McCarty L.J. An alternative method of large scale plasma fractionation for the isolation of serum albumin. Blut, 1975, 30, 121-134. 18) Schneider W., Lefevre H., Fiedler H. and McCarty L.J. An alternative method of large scale plasma fractionation for the isolation of serum albumin. Blut, 1975, 30, 121-134.
19) Harvey M. J., Brown R.A., Rott J., Lloyd D., Lane R.S. The purification of albumin by affinity chromatography. Separation of plasma proteins. Ed. by J.M. Curling. Plenary lectures and posters presented at the Joint Meeting of the 19th Congress of the International Society of Haematology and the 17th Congress of the international Society of Blood Transfusion, Budapest, August 1-7, 1982. Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sweden, 1983, 80-88. 19) Harvey M. J., Brown R.A., Rott J., Lloyd D., Lane R.S. The purification of albumin by affinity chromatography. Separation of plasma proteins. Ed. by J.M. Curling. Plenary lectures and posters presented at the Joint Meeting of the 19th Congress of the International Society of Haematology and the 17th Congress of the international Society of Blood Transfusion, Budapest, August 1-7, 1982. Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sweden, 1983 , 80-88.
20) Способ получения альбумина ветеринарного. Патент РФ N 2055523 C1, A 61 B 10/00. 10.03.96. 20) A method for producing veterinary albumin. RF patent N 2055523 C1, A 61 B 10/00. 03/10/96.
21) Типовой комплексный регламент производства белковых препаратов донорской крови. Получение иммуноглобулина. М., 1979, 169. 21) Typical integrated regulation for the production of protein preparations of donated blood. Immunoglobulin production. M., 1979, 169.
22) Yu M.W., Finlayson J.S. Quantitative determination of the stabilizers octanolc acid and N-acetyl-DL-tryptophan in human albumin products. J. Pharm. Sci., 1984, 73, 82-86. 22) Yu M.W., Finlayson J.S. Quantitative determination of the stabilizers octanolc acid and N-acetyl-DL-tryptophan in human albumin products. J. Pharm. Sci., 1984, 73, 82-86.
23) European Pharmacopoeia (EP), 1995, 255-255-5. 23) European Pharmacopoeia (EP), 1995, 255-255-5.
24) Deutsches Arzneibuch 10. Ausgabe 1991 mit 2. Nachtrag 1993 Monographien A-F, Grundlfg. (V. 6. 21). 24) Deutsches Arzneibuch 10. Ausgabe 1991
25) Hao Y.L. A simple method for the preparation of human serum albumin. Vox Sang, 1979, 36, 313-320. 25) Hao Y.L. A simple method for the preparation of human serum albumin. Vox Sang, 1979, 36, 313-320.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98116173A RU2140287C1 (en) | 1998-08-25 | 1998-08-25 | Method of albumin preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98116173A RU2140287C1 (en) | 1998-08-25 | 1998-08-25 | Method of albumin preparing |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2140287C1 true RU2140287C1 (en) | 1999-10-27 |
Family
ID=20209914
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98116173A RU2140287C1 (en) | 1998-08-25 | 1998-08-25 | Method of albumin preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2140287C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10370456B2 (en) | 2004-09-09 | 2019-08-06 | Genentech, Inc. | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
-
1998
- 1998-08-25 RU RU98116173A patent/RU2140287C1/en active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10370456B2 (en) | 2004-09-09 | 2019-08-06 | Genentech, Inc. | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
| US11767370B2 (en) | 2004-09-09 | 2023-09-26 | Genentech, Inc. | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0322786B1 (en) | Extraction of process chemicals from labile biological mixtures with halogenated hydrocarbons | |
| JP3297433B2 (en) | Method for inactivating viruses in pharmaceutical compositions contaminated with viruses | |
| AU621148B2 (en) | Removal of process chemicals from labile biological mixtures by hydrophobic interaction chromatography | |
| JP4211894B2 (en) | Fibrinogen concentrate obtained from plasma and process for producing the same | |
| FI60400B (en) | FOERFARANDE FOER UTVINNING AV ALBUMIN UR BLODPLASMA | |
| FI63673C (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV GAMMAGLOBULIN INNEHAOLLANDEINTRAVENOEST APPLICERBART PYROGENFRITT OCH HAOLLBART SERU MPOTEINPREPARAT UR EN PROTEINLOESNING AV MAENSKOBLOD | |
| JP2000513377A (en) | Chromatographic removal of prions | |
| JPH06321994A (en) | Antithrombin preparation and method of its preparation | |
| JP2008505065A (en) | Methods for the preparation of virus-safe biological fluids | |
| EP0011739B1 (en) | Process for obtaining blood coagulation factor xiii derived from human placenta | |
| JPS62181220A (en) | Manufacture of antihemophilic factor for improving dissolution of cold-sedimented and collected antihemophilic factor product | |
| RU2140287C1 (en) | Method of albumin preparing | |
| JP2002540912A (en) | Removal of biological contaminants | |
| RU2089204C1 (en) | Method of preparing peptides recovering the prostate gland function | |
| RU2158136C1 (en) | Method of igm-containing immunoglobulin concentrate preparing | |
| US6372510B1 (en) | Method for removing unconventional transmissible agents from a protein solution | |
| RU2125888C1 (en) | Method of preparing monomeric albumin | |
| US10266561B2 (en) | Method for separating proteins from animal or human plasma, or plants, using a pH gradient method | |
| RU2648468C1 (en) | Membrane method of obtaining the medicinal on the basis of calf thymus peptides | |
| RU2189833C2 (en) | Method of immunoglobulin preparation preparing | |
| RU2205020C2 (en) | Method for obtaining albumin solution | |
| JPS62195331A (en) | Production of blood coagulation factor viii pharmaceutical | |
| RU2352358C1 (en) | Method of preparation of virus-inactivated solutions of immunoglobulins | |
| RU2143267C1 (en) | Method of cleaning plasma proteins from lipoproteins (variants thereof) | |
| JPS6237009B2 (en) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20180716 |