RU2143267C1

RU2143267C1 - Method of cleaning plasma proteins from lipoproteins (variants thereof)

Info

Publication number: RU2143267C1
Application number: RU98101082A
Authority: RU
Inventors: А.Г. Исрафилов; А.Г. Лютов; Г.Б. Кудашева; М.М. Алсынбаев
Original assignee: Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат"
Priority date: 1998-01-05
Filing date: 1998-01-05
Publication date: 1999-12-27

Abstract

FIELD: medicine, more particularly, cleaning of plasma proteins from lipoproteins. SUBSTANCE: proteins are cleaned by treatment with chloroform in the presence of EDTA-Na or EDTA or buffers containing borate ions, succinate ions, nitrate ions and subsequent addition of calcium or magnesium salts to remove precipitate by centrifugation. In addition to 2- step removal of lipoproteins, also described is single- step variant of method which comprises treating plasma proteins with chloroform and subsequently adding soluble calcium or magnesium salts. The resulting precipitate is removed by centrifugation. EFFECT: higher degree of delipidization and higher yield. 7 cl, 4 ex, 1 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным препаратам из плазмы крови, которые содержат белковые вещества, и может быть использовано для очистки плазменных белков от липопротеинов. The invention relates to medicine, namely to drugs from blood plasma that contain protein substances, and can be used to clean plasma proteins from lipoproteins.

Липопротеины (ЛП) представляют собой естественный компонент плазмы крови, выполняющий в организме функции переноса биологически активных веществ, гормонов и поддержания энергетического баланса в организме человека. Lipoproteins (LPs) are a natural component of blood plasma that performs the functions of transferring biologically active substances, hormones and maintaining the energy balance in the human body.

Однако присутствие ЛП, особенно β-ЛП (липопротеины очень низкой плотности или ЛОНП) и пере-β-ЛП (липопротеины низкой плотности или ЛНП) в препаратах плазмы (альбумине, иммуноглобулинах и др.) является крайне нежелательным, так как липопротеины уменьшают растворимость белков и нарушают стабильность (1), при внутривенном применении липопротеины могут вызывать микротромбоз легочных, почечных, мозговых капилляров (2), являются причиной многих посттрансфузионных реакций (3), затрудняют оценку биологической активности и количественного содержания препаратов. However, the presence of drugs, especially β-drugs (very low density lipoproteins or VLDL) and p-β-drugs (low density lipoproteins or LDL) in plasma preparations (albumin, immunoglobulins, etc.) is extremely undesirable, since lipoproteins reduce the solubility of proteins and violate stability (1), with intravenous administration, lipoproteins can cause microthrombosis of pulmonary, renal, and brain capillaries (2), are the cause of many post-transfusion reactions (3), make it difficult to evaluate biological activity and quantitative content I drugs.

Наличие ЛП в исходном сырье мешает нормальному процессу фракционирования белков из-за дополнительного вовлечения в процесс гидрофобных и заряженных гидрофильных участков. ЛП могут сорбировать хроматографические сорбенты, ультрафильтрационные и микрофильтрационные мембраны, затруднять центрифугирование вязких растворов, снижая производительность операций и ингибировать вируцидность стандартных методов (4). The presence of drugs in the feedstock interferes with the normal process of protein fractionation due to the additional involvement of hydrophobic and charged hydrophilic sites in the process. LPs can adsorb chromatographic sorbents, ultrafiltration and microfiltration membranes, hinder the centrifugation of viscous solutions, reducing the productivity of operations and inhibit the virucidity of standard methods (4).

В настоящее время содержание липопротеинов является неконтролируемым показателем для белковых препаратов, хотя согласно всех Фармакопей все компоненты препаратов должны быть охарактеризованы не только качественно - внесены не только в "состав" препарата, но и охарактеризованы количественно. Currently, the content of lipoproteins is an uncontrolled indicator for protein preparations, although according to all Pharmacopoeias, all components of the drugs should be characterized not only qualitatively - not only included in the "composition" of the drug, but also quantified.

Считается общепризнанным, что снижение содержания липопротеинов является показателем улучшения фармакологических свойств и клинической эффективности препаратов. Поэтому уменьшение примесей ЛП в препаратах плазмы крови является весьма актуальной задачей и ее решению посвящено огромное количество исследований. It is generally recognized that a decrease in lipoprotein levels is an indicator of improved pharmacological properties and clinical efficacy of drugs. Therefore, the reduction of drug impurities in blood plasma preparations is a very urgent task and a huge amount of research has been devoted to its solution.

К сожалению, большинство исследований касаются улучшения качества наиболее стабильного белка плазмы - альбумина, выдерживающего кислотную обработку при pH 2 с последующей обработкой активированным углем (5). Unfortunately, most studies relate to improving the quality of the most stable plasma protein - albumin, which can withstand acid treatment at pH 2 followed by treatment with activated carbon (5).

Известно много методов делипидизации биологических материалов, однако, они часто недостаточно эффективны, приводят к значительной потере выхода целевого продукта, снижают его биологическую активность или не могут быть воспроизведены в условиях производства. Many methods of delipidization of biological materials are known, however, they are often not effective enough, they lead to a significant loss in the yield of the target product, reduce its biological activity, or cannot be reproduced under production conditions.

Так, использование сульфата декстрана обеспечивает оптимальную делипидизацию, но характеризуется низким выходом по продукту (6). Использование гепарина показало соосаждение с липидами значительного количества белков плазмы и поэтому он не нашел промышленного применения (7). Thus, the use of dextran sulfate provides optimal delipidization, but is characterized by a low yield of the product (6). The use of heparin showed coprecipitation with lipids of a significant amount of plasma proteins and therefore it did not find industrial application (7).

Двуокись кремния (8), активированный уголь, лиофилизация, термообработка, микрофильтрация низкоэффективны, способ обработки при низкой ионной силе в изоэлектрической области ЛП нетехнологичен (9). Детергенты могут повредить биологические функции белка. Silicon dioxide (8), activated carbon, lyophilization, heat treatment, microfiltration are low efficient, the method of processing at low ionic strength in the isoelectric region of the PL is not technologically advanced (9). Detergents can damage the biological function of the protein.

Ультрафильтрация применима только в отношении соединений с небольшим молекулярным весом (10). Ultrafiltration is applicable only to compounds with low molecular weight (10).

Фильтрация через асбестовые фильтры запрещена из-за их канцерогенности. Filtering through asbestos filters is prohibited due to their carcinogenicity.

Комбинации различных методов делипидизации или модификации стандартных способов также не дали стандартного широкораспространенного эффективного метода. Combinations of different delipidization methods or modifications to standard methods also did not produce a standard widespread effective method.

Все эти методы используют только один из принципов удаления - просто удаление свободных или слабосвязанных ЛП, без отсоединения связанных с белком липидов, что и приводит к неполному удалению липидов и низкому выходу продукта, так как заодно с ЛП удаляется и интересуемый препарат или продукт. Или после экстракции липидов с белков не интенсифицируют процесс сорбции, например после подкисления, подщелачивания, обработки детергентами не удается в полученном растворе полностью сорбировать или осадить липиды, без создания для этого специальных условий: ионное окружение, pH, ионная сила и другие ранее не учитываемые параметры. Не учитывается и гетерогенность ЛП, наличие гидрофобных (за счет собственно липидной части), гидрофильных (за счет углеводной части), ионных связей между ЛП и белками. All these methods use only one of the removal principles - simply removing free or loosely coupled drugs, without detaching the lipids associated with the protein, which leads to incomplete removal of lipids and a low yield of the product, since the drug or product of interest is also removed from the drug. Or, after lipid extraction from proteins, the sorption process is not intensified, for example, after acidification, alkalization, and processing with detergents, lipids cannot be completely sorbed or precipitated in the resulting solution without creating special conditions for this: ionic environment, pH, ionic strength, and other previously neglected parameters . The heterogeneity of the drug, the presence of hydrophobic (due to the lipid part itself), hydrophilic (due to the carbohydrate part), and ionic bonds between the drug and proteins are not taken into account.

Наиболее близким к заявленному способу является способ (11), включающий обработку хлороформом раствора белка из расчета 1,5 мл на 1 г белка, в течение 30 - 60 минут при температуре 10 - 20^oC, pH 5,2 - 5,6, в дистиллированной воде или физиологическом растворе.Closest to the claimed method is the method (11), comprising treating chloroform with a protein solution at a rate of 1.5 ml per 1 g of protein, for 30-60 minutes at a temperature of 10-20 ^° C, pH 5.2-5.6, in distilled water or saline.

Этот метод обладает следующими преимуществами: низкая себестоимость органического растворителя, легкость удаления его любыми известными способами (ультрафильтрацией, гель-фильтрацией, вакуумной дистилляцией, диализом, нагреванием выше 60^oC, лиофилизацией). Кроме того хлороформ обеспечивает гарантию вирусологической безопасности (12) и одновременно депирогенизацию (13).This method has the following advantages: low cost of organic solvent, ease of removal by any known methods (ultrafiltration, gel filtration, vacuum distillation, dialysis, heating above 60 ^o C, lyophilization). In addition, chloroform provides a guarantee of virological safety (12) and at the same time depyrogenation (13).

Однако данный метод не обладает полной делипидизацией и характеризуется невысоким выходом по белку. However, this method does not have complete delipidization and is characterized by a low protein yield.

Задача, на решение которой направлено изобретение является разработка метода, условия проведения которого обеспечивают повышение степени делипидизации и выхода целевого продукта. The problem to which the invention is directed is the development of a method, the conditions of which provide an increase in the degree of delipidization and yield of the target product.

Достигаемый технический результат заключается в снижении содержания липопротеинов, что является показателем улучшения фармакологических свойств и клинической эффективности препарата. Кроме того, в отличии от известных способов достигается также повышение выхода целевого продукта. Achievable technical result is to reduce the content of lipoproteins, which is an indicator of the improvement of pharmacological properties and clinical efficacy of the drug. In addition, in contrast to known methods, an increase in the yield of the target product is also achieved.

Сущность метода заключается в следующем. В первом варианте в раствор белка, подлежащего делипидизации, вводят комплексообразователи или лиотропные буферы или буфер, обладающий избирательной растворимостью белков. Затем вводится хлороформ с последующим добавлением растворимых солей кальция или магния. Во втором варианте в раствор белка, подлежащего делипидизации, вводят хлороформ с последующим добавлением растворимых солей кальция и магния. The essence of the method is as follows. In the first embodiment, complexing agents or lyotropic buffers or a buffer with selective protein solubility are introduced into the solution of the protein to be delipidized. Then chloroform is introduced followed by the addition of soluble salts of calcium or magnesium. In the second embodiment, chloroform is added to a solution of the protein to be delipidized, followed by the addition of soluble salts of calcium and magnesium.

В отличии от прототипа в заявленном способе перед добавлением хлороформа вводят комплексообразователи или лиотропные буферы или буфер, обладающий избирательной растворимостью белков. После добавления хлороформа вносят растворимые соли кальция или магния. Unlike the prototype, in the inventive method, complexing agents or lyotropic buffers or a buffer having selective protein solubility are added before chloroform is added. After the addition of chloroform, soluble salts of calcium or magnesium are added.

Совокупность отличительных признаков заявляемого способа позволили получить следующие преимущества. The combination of distinctive features of the proposed method allowed to obtain the following advantages.

Введение в раствор белка комплексообразователей или лиотропных агентов или буферов, обладающих избирательной растворимостью белков, обеспечивает полную экстракцию ЛП с белков и более высокую экстракцию белка за счет ослабления гидрофобного взаимодействия между белком и ЛП. А добавление растворимых солей кальция или магния подавляет электростатическое взаимодействие между молекулами белка и ЛП и вызывают агрегацию ЛП, что вызывает более полный перевод ЛП в хлороформ. The introduction of complexing agents or lyotropic agents or buffers with selective solubility of proteins into the protein solution ensures complete extraction of the drug from proteins and higher protein extraction by reducing the hydrophobic interaction between the protein and the drug. And the addition of soluble salts of calcium or magnesium suppresses the electrostatic interaction between the protein molecules and the drug and causes the aggregation of the drug, which causes a more complete translation of the drug into chloroform.

Все это позволяет увеличить степень очистки белков плазмы от липопротеинов, повысить выход белка и сохранить белки в нативном состоянии, так как соли кальция или магния выступают в качестве стабилизаторов. All this allows you to increase the degree of purification of plasma proteins from lipoproteins, increase protein yield and keep proteins in their native state, since calcium or magnesium salts act as stabilizers.

Данные по эффективности делипидизации и выходу в сравнении с прототипом приведены в таблице. Data on the effectiveness of delipidization and yield in comparison with the prototype are shown in the table.

Содержание липопротеинов определялось согласно общепринятому сульфофосфованилиновому способу (14). The content of lipoproteins was determined according to the generally accepted sulfophosphovaniline method (14).

Как видно из таблицы, использование предлагаемого способа позволяет максимально делипидировать протеины и повысить выход белка. As can be seen from the table, the use of the proposed method allows the maximum delipidation of proteins and increase protein yield.

Способ осуществляется следующим образом. В первом варианте раствор белка с температурой от 5 до 20^oC вводят комплексообразователи (ЭДУКТ или ЭДТА) от 1 до 50 мМ, или буферы, обладающие лиотропным эффектом, например цитратный, сукцинатный или буфер, обладающий избирательной растворимостью белков, например боратный, молярностью от 0,02 до 0,1 М при pH от 2 до 6. Затем вводится хлороформ в концентрации от 5 до 15% и осуществляют перемешивание. Далее добавляют растворимые соли магния или кальция в концентрации от 0,05 М до 2 М. Потом раствор подвергают центрифугированию. Полученный раствор доводится до необходимых значений pH, ионной силы, ионного состава.The method is as follows. In the first embodiment, a protein solution with a temperature of from 5 to 20 ^o C is injected with complexing agents (EDECT or EDTA) from 1 to 50 mm, or buffers with a lyotropic effect, for example, citrate, succinate or a buffer having selective protein solubility, for example, borate, molarity from 0.02 to 0.1 M at a pH of 2 to 6. Then chloroform is introduced in a concentration of 5 to 15% and mixing is carried out. Then add soluble salts of magnesium or calcium in a concentration of from 0.05 M to 2 M. Then the solution is subjected to centrifugation. The resulting solution is adjusted to the required pH, ionic strength, and ionic composition.

Во втором варианте в раствор белка с температурой от 5 до 20^oC и pH 2,0 - 6,0 добавляют хлороформ в концентрации от 5 до 15% и перемешивают. Затем добавляют растворимые соли кальция или магния в концентрации от 0,05 до 2 М. Раствор центрифугируют.In the second embodiment, chloroform in a concentration of 5 to 15% is added to a protein solution with a temperature of 5 to 20 ^° C and a pH of 2.0 - 6.0 and mixed. Then add soluble salts of calcium or magnesium in a concentration of from 0.05 to 2 M. The solution is centrifuged.

Примеры. Examples.

Пример 1. Исходный материал - плазма с первоначальным содержанием липопротеинов 2200 мг/100 мл и белка 5,9% в объеме 2 л (372,9 мг ЛП/1 г белка). В плазму вносят до 10 мМ ЭДТА, охлаждают до температуры 10^oC и подкисляют 0,5 N раствором соляной кислоты до pH 5,0. Затем добавляют хлороформ до 10% (объем/объем) и перемешивают, потом добавляют кальция хлорид до 0,1 М и перемешивают, отстаивают и центрифугируют при 5000 об./мин в течение 40 мин. Выход по белку составил 96,2%, остаточное содержание липопротеинов 4 мг% (0,7 мг ЛП/1 г белка). Следовательно, % делипидизации составил 99,81%.Example 1. The starting material is a plasma with an initial lipoprotein content of 2200 mg / 100 ml and 5.9% protein in a volume of 2 l (372.9 mg of PL / 1 g of protein). Up to 10 mM EDTA is added to the plasma, cooled to a temperature of 10 ^° C. and acidified with a 0.5 N hydrochloric acid solution to pH 5.0. Then chloroform up to 10% (v / v) is added and mixed, then calcium chloride is added up to 0.1 M and mixed, settled and centrifuged at 5000 rpm for 40 minutes. The protein yield was 96.2%, the residual lipoprotein content was 4 mg% (0.7 mg of PL / 1 g of protein). Therefore, the% delipidization was 99.81%.

Очищенная по известному способу плазма имела % делипидизации 89,85% и выход по белку 91,0%. The plasma purified by a known method had a delipidization% of 89.85% and a protein yield of 91.0%.

Пример 2. Example 2

Сырье: 1 кг осадка Б, полученного согласно метода Кона 6, (содержащий 500 мг ЛП/1 г белка), растворяют на гомогенизаторе в 15 л дистиллированной воды температуры 10^oC. Затем добавляют хлороформ до 10% (объем/объем) и перемешивают. После этого вводят кальция хлорид до 0,1 М и продолжают перемешивание. Отстаивают и центрифугируют. Содержание белка в центрифугате составило 1,45%. Выход по белку составил 96,7%, остаточное содержание липопротеинов 6 мг% (4,1 мг ЛП/1 г белка). Следовательно, % делипидизации составил 99,2%. Очищенный по известному способу препарат имел % делипидизации 91,7% и выход по белку 89,9%.Raw materials: 1 kg of precipitate B obtained according to the Con 6 method (containing 500 mg of PL / 1 g of protein) is dissolved on a homogenizer in 15 l of distilled water at a temperature of 10 ^o C. Then chloroform up to 10% (vol / vol) is added and stirred . After this, calcium chloride is added to 0.1 M and stirring is continued. Settled and centrifuged. The protein content in the centrifuge was 1.45%. The protein yield was 96.7%, the residual lipoprotein content was 6 mg% (4.1 mg of PL / 1 g of protein). Therefore, the% delipidization was 99.2%. Purified by a known method, the drug had a% delipidization of 91.7% and a protein yield of 89.9%.

Примечание: За 100% выход по белку взят % белка, равный 1,5%, полученный при экстракции осадка Б физиологическим раствором при тех же условиях, но в отсутствии хлороформа. Note: A 100% protein yield is taken as a% protein equal to 1.5% obtained by extraction of sediment B with physiological saline under the same conditions, but in the absence of chloroform.

Пример 3. Сырье: 100 мл 10% препарата иммуноглобулина, полученного согласно метода Кона 6 с содержанием липопротеинов 462 мг% (46,2 мг ЛП/1 г белка) переводят в боратный буфер 0,075 М pH 4,5 с помощью подходящей техники (диафильтрация на ВПУ 15 000 Да), охлаждают до температуры 5^oC. Затем добавляют хлороформ до 10% (объем/объем), перемешивают и добавляют кальций хлорид до 0,1 М и перемешивают 15 минут. Центрифугирование проводят при 3000 об. /мин в течение 30 минут. Полученный центрифугат переводят до необходимых значений pH и осмотичности. Получают готовый раствор 9,9% раствора иммуноглобулина в объеме 990 мл. Выход по белку составил 98,0%, остаточное содержание липопротеинов - 0,6 мг% (0,06 мг ЛП/1 г белка). Следовательно, % делипидизации составил 99,87%.Example 3. Raw materials: 100 ml of a 10% immunoglobulin preparation prepared according to the Con 6 method with a lipoprotein content of 462 mg% (46.2 mg of PL / 1 g of protein) was transferred to a borate buffer of 0.075 M pH 4.5 using a suitable technique (diafiltration on VPU 15 000 Yes), cooled to a temperature of 5 ^o C. Then add chloroform to 10% (vol / vol), mix and add calcium chloride to 0.1 M and mix for 15 minutes. Centrifugation is carried out at 3000 rpm. / min for 30 minutes. The resulting centrifuge is transferred to the required pH and osmoticity. Get the finished solution of a 9.9% immunoglobulin solution in a volume of 990 ml. The protein yield was 98.0%, the residual lipoprotein content was 0.6 mg% (0.06 mg of PL / 1 g of protein). Therefore, the% delipidization was 99.87%.

Очищенный по известному способу препарат имел % делипидизации 97,9% и выход по белку 92,1%. Purified by a known method, the preparation had a delipidization% of 97.9% and a protein yield of 92.1%.

Пример 4. Источник - альбумин, полученный дополнительным извлечением из осадка IV-4 (15). 1 л 10% альбумина, содержащий 1300 мг% ЛП (130 мг ЛП/1 г белка) обработан согласно примера 1, за исключением того, что вместо ЭДТА внесен цитратный буфер до 0,05 М. Выход конечного альбумина по белку составил 99,5%, остаточное содержание липопротеинов 0,5 мг% (0,05 мг ЛП/1 г белка). Следовательно, % делипидизации составил 99,96%. Очищенный по известному способу препарат имел % делипидизации 93,15% и выход 94,8%. Example 4. The source is albumin obtained by additional extraction from sediment IV-4 (15). 1 l of 10% albumin containing 1300 mg% of PL (130 mg of PL / 1 g of protein) was processed according to Example 1, except that instead of EDTA citrate buffer was added up to 0.05 M. The yield of final albumin for the protein was 99.5 %, residual lipoprotein content of 0.5 mg% (0.05 mg of PL / 1 g of protein). Therefore, the% delipidization was 99.96%. Purified by a known method, the preparation had a delipidization% of 93.15% and a yield of 94.8%.

Использованная литература
1. Патент Франции N 2608751. Способ делипидизации плазмы. A 61 К 35/16, 1987.References
1. French patent N 2608751. The method of plasma delipidization. A 61 K 35/16, 1987.

2. Патент США N 4481189Процесс получения стерилизованной плазмы и плазмодериватов. A 61 K 35/16, 1984. 2. US patent N 4481189 the process of obtaining sterilized plasma and plasmoderivatives. A 61 K 35/16, 1984.

3. Шабалин В. Н., Серова Л.Д. Клиническая иммуногематология. Л.: Медицина, 1988, с. 236. 3. Shabalin V. N., Serova L. D. Clinical immunohematology. L .: Medicine, 1988, p. 236.

4. Патент США N 5186945. Процесс инактивации вирусов в плазме. A 61 K 35/16, 1993. 4. US patent N 5186945. The process of inactivation of viruses in plasma. A 61 K 35/16, 1993.

5. Chen R.F. Removal of fatty acids from serum albumin by charcoal treatment. J. Biological Chemistry, 1967, 242, 2, 173 - 181. 5. Chen R.F. Removal of fatty acids from serum albumin by charcoal treatment. J. Biological Chemistry, 1967, 242, 2, 173-181.

6. Патент США N 3955925. Метод удаления липидов сульфат декстраном. A 61 K 35/16, 1975. 6. US patent N 3955925. Method for the removal of lipids sulfate dextran. A 61 K 35/16, 1975.

7. Патент США N 3993585. Способ удаления липидов из плазмы. A 61 K 35/16, 1975. 7. US patent N 3993585. A method of removing lipids from plasma. A 61 K 35/16, 1975.

8. Патент ФРГ N 2837168. Метод получения иммуноглобулина, подходящего для внутривенного введения. C 07 G 7/00, 1980. 8. The Federal Republic of Germany patent N 2837168. A method for producing an immunoglobulin suitable for intravenous administration. C 07 G 7/00, 1980.

9. Патент США N 4639513. Способ получения внутривенного иммуноглобулина. A 61 K 37/04, 1987. 9. US patent N 4639513. A method of obtaining an intravenous immunoglobulin. A 61 K 37/04, 1987.

10. Титов В.Н. Использование ультрафильтрации для получения сыворотки, лишенной липопротеидов. Вопросы медицинской химии, 1981, 27, 1, с. 83 - 87. 10. Titov V.N. The use of ultrafiltration to obtain serum devoid of lipoproteins. Questions of medical chemistry, 1981, 27, 1, p. 83 - 87.

11. Крашенюк А. И. , Доманская Л.В. Сравнение двух способов обработки альбумина с целью удаления липопротеидов и влияние обработки на качество препарата. Иммуноглобулины и другие препараты крови. Л., 1976, с. 78 - 87. 11. Krashenyuk A.I., Domanskaya L.V. Comparison of two methods of processing albumin to remove lipoproteins and the effect of processing on the quality of the drug. Immunoglobulins and other blood products. L., 1976, p. 78 - 87.

12. Патент США N 4581231. Инактивация вирусов, содержащих эссенциальные липиды. A 61 K 35/14, 1987. 12. US patent N 4581231. Inactivation of viruses containing essential lipids. A 61 K 35/14, 1987.

13. Патент ЧССР N 147339. Способ депирогенизации альбумина. A 61 K 17/00, 1973. 13. Patent of Czechoslovakia N 147339. The method of depyrogenation of albumin. A 61 K 17/00, 1973.

14. Определение общих липидов в сыворотке крови по цветовой реакции с сульфофосфованилиновым реактивом. Лабораторное дело 1976, N 6, с. 374 - 375. 14. Determination of total lipids in blood serum by color reaction with sulfophosphovaniline reagent. Laboratory Science 1976, N 6, p. 374 - 375.

15. Патент СССР N 743564 Способ получения альбумина. A 61 K 37/02, 1976. 15. USSR patent N 743564 A method for producing albumin. A 61 K 37/02, 1976.

Claims

1. A method of purifying plasma proteins from lipoproteins, including processing the protein solution with chloroform followed by removal of lipoproteins, characterized in that complexing agents or lyotropic buffers are introduced into the protein solution with a pH of 2.0 - 6.0 and a temperature of 5 - 20 ^o C or a buffer having selective protein solubility, and after adding chloroform, soluble salts of calcium or magnesium are added.

2. A method of purifying plasma proteins from lipoproteins, comprising treating the protein solution with chloroform and then removing the lipoproteins, characterized in that soluble calcium salts are added to the protein solution with a pH of 2.0 - 6.0 and a temperature of 5 - 20 ^o C after treatment with chloroform magnesium.

3. The method according to claim 1, characterized in that sodium ethylene diamine tetraacetate or ethylene diamine tetraacetic acid is used as a complexing agent.

4. The method according to claim 1, characterized in that the citrate or succinate buffer is used as a lyotropic buffer.

5. The method according to claim 1, characterized in that a borate buffer is used as a buffer having selective protein solubility.

6. The method according to claim 1 or 2, characterized in that as the soluble salts of calcium or magnesium, calcium chloride or magnesium chloride is used.