RU2093169C1

RU2093169C1 - Method of treatment of diarrhea in young agriculture animals

Info

Publication number: RU2093169C1
Application number: RU94040874A
Authority: RU
Inventors: В.Н. Ласкавый; Т.Г. Кателина; С.А. Богатова
Original assignee: Саратовская научно-исследовательская ветеринарная станция
Priority date: 1994-11-16
Filing date: 1994-11-16
Publication date: 1997-10-20
Also published as: RU94040874A

Abstract

FIELD: biotechnology, veterinary science. SUBSTANCE: method involves the use of anatoxin isolated from enterotoxigenic strains of E. coli. Preparation is administrated parenterally 1-3 days before disease onset at the dose 0.5-2 ml. EFFECT: enhanced effectiveness of treatment. 3 tbl

Description

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных, а именно диареи. The invention relates to veterinary medicine, in particular to methods for the prevention and treatment of gastrointestinal diseases of farm animals, namely diarrhea.

Известен способ профилактики и лечения желудочно-кишечных инфекций (а. с. ЧССР N 264572, кл. A 61 K 31/66, опубл. 15.11.87), заключающийся в пероральном введении вакцины, содержащей живые клетки непатогенного штамма Escherichia coli 0,83 CNCTC 325/71, которые подвергались лиофилизации. A known method for the prevention and treatment of gastrointestinal infections (a.s. Czechoslovakia N 264572, class A 61 K 31/66, publ. 15.11.87), which consists in the oral administration of a vaccine containing live cells of a non-pathogenic strain Escherichia coli 0.83 CNCTC 325/71, which were lyophilized.

Однако эффективность лечения данного способа низка, поскольку вакцина содержит клетки непатогенного штамма, вызывающего антагонистическое взаимоотношение бактерий. Способ предусматривает проведение профилактических мероприятий, однако их эффективность низка из-за необходимости проведения систематической ревакцинации. Кроме этого, способ вообще не предусматривает профилактику заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки. However, the effectiveness of the treatment of this method is low, since the vaccine contains cells of a non-pathogenic strain that causes an antagonistic relationship between bacteria. The method provides for preventive measures, however, their effectiveness is low due to the need for systematic revaccination. In addition, the method generally does not provide for the prevention of diseases caused by enterotoxin of Escherichia coli.

Известен также способ профилактики кишечных инфекций (см. а. с. СССР N 1494907, кл. A 61 K 35/74, опубл. 23.07.89), заключающийся во введении убитой культуры штамма энтерококка Streptococcus faecium УДС₈₆ (ВКПМ и В-4054) или S. faecalis H₂₂ (ВКПМ и В-4053). Препарат вводят перорально 1 раз в сутки в течение 5 7 дней в дозе 2•10¹¹ 5•10¹¹ микр.тел/кг массы.There is also known a method for the prevention of intestinal infections (see A. S. the USSR N 1494907, class A 61 K 35/74, publ. 07.23.89), which consists in the introduction of the killed culture of the strain of enterococcus Streptococcus faecium UDS ₈₆ (VKPM and B-4054 ) or S. faecalis H ₂₂ (VKPM and B-4053). The drug is administered orally 1 time per day for 5 to 7 days at a dose of 2 • 10 ¹¹ 5 • 10 ¹¹ micro-bodies / kg of body weight.

Однако процесс профилактики кишечных инфекций длителен и технически чрезвычайно сложно выполним, т.к. предусматривает 5 7 введений препарата. При этом расчет дозы введения препарата сложен. Кроме того, способ не предусматривает проведение лечебных мероприятий и не обеспечивает профилактику заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки. However, the process of preventing intestinal infections is long and technically extremely difficult to do, because provides for 5 7 injections of the drug. In this case, the calculation of the dose of the drug is complicated. In addition, the method does not provide for therapeutic measures and does not provide for the prevention of diseases caused by enterotoxin of Escherichia coli.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний (см. а.с. СССР N 1563699, кл. A 61 K 35/74, опубл. 15.05.90), заключающийся во введении интраперитонеально живой культуры Bacillus subtilis штамм N 44 телятам в дозе 2•10⁹ 3•-10⁹ клеток два раза в сутки, а поросятам в дозе 2•10⁸ 5•10⁸ клеток один раз в сутки.The closest technical solution to the claimed is a method for the prevention and treatment of gastrointestinal diseases (see AS USSR N 1563699, class A 61 K 35/74, publ. 15.05.90), which consists in the introduction of intraperitoneally living culture of Bacillus subtilis strain N 44 calves at a dose of 2 • 10 ⁹ 3 • -10 ⁹ cells twice a day, and piglets at a dose of 2 • 10 ⁸ 5 • 10 ⁸ cells once a day.

Однако реализация данного способа сложна, поскольку технология предусматривает интраперитонеальное введение препарата, что вызывает риск возникновения перитонита, повреждений кишечника и, как следствие, требует высокой квалификации ветеринарных врачей, что не всегда реализуемо на практике. Способ длителен, поскольку предполагает многократное введение культуры (4 6 раз). При этом эффективность способа низка из-за использования живой сапрофитной культуры микроорганизмов, которая стареет со временем и не дает ожидаемого положительного результата. Таким образом, использование данного способа требует дополнительных затрат по обеспечению жестких условий хранения культуры. Способ трудно реализуем на практике особенно для профилактики заболеваний, поскольку предполагает введение культуры в первые 1 3 ч после рождения, что происходит, как правило, в ночное время. Кроме этого, способ вообще не предусматривает проведение профилактических мероприятий в случаях заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки. However, the implementation of this method is difficult, because the technology provides for the intraperitoneal administration of the drug, which causes a risk of peritonitis, damage to the intestines and, as a result, requires highly qualified veterinarians, which is not always practicable. The method is long, because it involves the repeated introduction of culture (4 to 6 times). Moreover, the effectiveness of the method is low due to the use of a live saprophytic culture of microorganisms, which ages with time and does not give the expected positive result. Thus, the use of this method requires additional costs to ensure harsh storage conditions of the culture. The method is difficult to implement in practice, especially for the prevention of diseases, since it involves the introduction of culture in the first 1 to 3 hours after birth, which occurs, as a rule, at night. In addition, the method generally does not provide for preventive measures in cases of diseases caused by enterotoxin of Escherichia coli.

Технический результат повышение эффективности профилактики и лечения заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки при удобстве реализации способа. The technical result is an increase in the effectiveness of the prevention and treatment of diseases caused by enterotoxin of Escherichia coli with ease of implementation of the method.

Технический результат достигается тем, что в способе профилактики и лечения диареи молодняка сельскохозяйственных животных на основе биологического лекарственного препарата в качестве последнего используют анатоксин, выделенный из энтеротоксигенных штаммов E.coli, продуцирующих экзотоксины и эндотоксины, который вводят молодняку до отъемного возраста парентерально один раз на 1 3 сут. после начала заболевания в дозе 0,5 2,0 мл с лечебной целью и взрослому животному за 1 12 дней до родов в дозе 6 8 мл с профилактической целью. The technical result is achieved by the fact that in the method for the prevention and treatment of diarrhea of young farm animals based on a biological medicinal product, the toxoid isolated from enterotoxigenic E. coli strains producing exotoxins and endotoxins is used as the latter, parenterally administered to youngsters until weaned once per 1 3 days after the onset of the disease in a dose of 0.5 to 2.0 ml for therapeutic purposes and an adult animal 1 12 days before birth at a dose of 6 to 8 ml for prophylactic purposes.

В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа лечения и профилактики диареи молодняка сельскохозяйственных животных, позволяющего повысить эффективность лечения и профилактики заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки за счет использования анатоксина, выделенного из энтеротоксигенного штамма E. coli. The sources of patent and scientific and technical information known to the authors do not describe a method for the treatment and prevention of diarrhea in young farm animals, which makes it possible to increase the effectiveness of the treatment and prevention of diseases caused by enterotoxin of Escherichia coli due to the use of toxoid isolated from the enterotoxigenic E. coli strain.

Неизвестно введение анатоксинов кишечной палочки с лечебной целью на ранних стадиях заболевания. При этом введение анатоксина приводит к активизации клеточного и системного иммунитетов. The introduction of toxoid Escherichia coli for therapeutic purposes in the early stages of the disease is unknown. In this case, the introduction of toxoid leads to the activation of cellular and systemic immunities.

Известен способ лечения диареи у детей путем введения в малых дозах эндотоксина E.coli в период реконвалесценции для повышения устойчивости организма к действию эндотоксинов. Процесс лечения предусматривает введение антибиотиков и лишь на стадии восстановления введение эндотоксина. There is a method of treating diarrhea in children by administering E. coli endotoxin in small doses during the convalescence period to increase the body's resistance to the action of endotoxins. The treatment process involves the introduction of antibiotics and only at the stage of recovery is the introduction of endotoxin.

Заявляемая технология лечения предусматривает введение на ранних стадиях заболевания только одного препарата, не используемого ранее в лечебных целях
анатоксина, выделенного из энтеротоксигенного штамма E.coli, что, практически, исключает возможность повторного заражения инфекцией, вызываемой энтеротоксином кишечной палочки, и, как следствие, приводит к повышению эффективности лечения.The inventive treatment technology provides for the introduction in the early stages of the disease only one drug, not previously used for medicinal purposes
toxoid isolated from the enterotoxigenic strain of E. coli, which virtually eliminates the possibility of re-infection with the infection caused by enterotoxin of Escherichia coli, and, as a result, increases the effectiveness of treatment.

Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом техническом решении "изобретательского уровня". The foregoing allows us to conclude that there is a "inventive step" in the claimed technical solution.

Идентификацию штаммов E.coli проводили по стандартным тестам. Токсигенные свойства проверяли путем посева культур на бульоне Мартена и термостатирования при 37^oC в течение двух недель. Бактериальную взвесь центрифугировали и надосадочную жидкость использовали в качестве заражающего материала. Материал вводили белым мышам по 0,5 мл внутрибрюшинно, наблюдали за животными в течение первых двух суток (контрольным животным аналогичным образом вводили стерильный бульон Мартена). При гибели животных считали полученный зараженный материал токсином.The identification of E. coli strains was carried out according to standard tests. Toxigenic properties were checked by sowing cultures on Marten broth and incubation at 37 ^o C for two weeks. The bacterial suspension was centrifuged and the supernatant was used as an infectious material. The material was injected intraperitoneally with 0.5 ml of white mice, the animals were monitored for the first two days (the control animals were similarly injected with Marten broth). When animals died, the resulting infected material was considered toxin.

Были изучены свойства токсина. Изучали динамику накопления летальной дозы токсина путем заражения белых мышей центрифугатом из бульонных культур разного возраста. Гибель животных наступала от токсина, полученного на 2 5 день выращивания бульонной культуры, что свидетельствовало о преобладании белковой фракции, т.е. экзотоксинов. The properties of the toxin were studied. We studied the dynamics of accumulation of a lethal dose of toxin by infection of white mice with a centrifugate from broth cultures of different ages. The death of animals occurred from the toxin obtained on the 2nd 5th day of growing the broth culture, which indicated the predominance of the protein fraction, i.e. exotoxins.

Полученный из бульонной культуры двухнедельного возраста токсин изучали на термоустойчивость: нагревали до 100^oC и выдерживали при этой температуре в течение 30 мин. Процент летальности лабораторных животных снижался на 50% что свидетельствовало о преобладании липополисахаридных компонентов в полученном токсине, т.е. о преобладании эндотоксинов. Таким образом, полученный токсин представляет собой смесь белков и липополисахаридов.The toxin obtained from a two-week-old broth culture was studied for thermal stability: it was heated to 100 ^° C and kept at this temperature for 30 minutes. The mortality rate of laboratory animals decreased by 50%, which indicated the predominance of lipopolysaccharide components in the resulting toxin, i.e. the predominance of endotoxins. Thus, the resulting toxin is a mixture of proteins and lipopolysaccharides.

Процесс получения анатоксина, выделенного из энтеротоксигенного штамма, следующий. Выращивают штаммы E.coli на бульоне Мартена в течение 7 дней в термостате при 37^oC. Затем к бульонной культуре добавляют формалин в объеме 0,4% к объему бульонной культуры и выдерживают суспензию в течение двух недель в термостате при 37^oC. Через две недели смесь вынимают из термостата, проверяют на стерильность и оставляют до осаждения осадка. Бактериальные клетки могут быть отделены путем центрифугирования в течение 30 мин со скоростью 3 тыс. оборотов в минуту. Недостаточную жидкость используют в качестве анатоксина.The process of obtaining toxoid isolated from the enterotoxigenic strain is as follows. E. coli strains were grown on Marten broth for 7 days in an incubator at 37 ^° C. Then formalin was added to the broth culture in a volume of 0.4% by volume of the broth culture and the suspension was kept for two weeks in an incubator at 37 ^° C. For two weeks, the mixture is removed from the thermostat, checked for sterility and left to sediment. Bacterial cells can be separated by centrifugation for 30 minutes at a speed of 3 thousand revolutions per minute. Insufficient fluid is used as an toxoid.

Анатоксин, выделенный из энтеротоксигенного штамма, представляет собой прозрачную жидкость соломенного цвета. Anatoxin isolated from enterotoxigenic strain is a clear straw-colored liquid.

Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.

В качестве лекарственного препарата используют анатоксин, выделенный из энтеротоксигенного штамма E.coli. Препарат вводят парентерально на 1 3 сут. с начала заболевания в дозе 0,5 2 мл молодняку с лечебной целью и взрослому животному за 1 12 дней до родов в дозе 6 8 мл с профилактической целью. As a drug, an toxoid isolated from an enterotoxigenic strain of E. coli is used. The drug is administered parenterally for 1 to 3 days. from the onset of the disease in a dose of 0.5 2 ml to young animals for therapeutic purposes and to an adult animal 1 12 days before birth at a dose of 6 8 ml for prophylactic purposes.

Пример 1. Обоснование доз введения препарата молодняку с лечебной целью. Анатоксин в дозах 0,1 2,0 мл вводили группам поросят 3 9-дневного возраста однократно на 1 3 сутки со дня заболевания. Количество поросят в группах - от 12 до 30. Результаты исследования представлены в табл. 1, из которой следует, что наиболее эффективной дозой является введение 1,0 мл на поросенка. Увеличение дозы свыше 2,0 мл нецелесообразно, поскольку не оказывает резкого влияния на эффективность лечения. Example 1. The rationale for the doses of the drug to young animals for therapeutic purposes. Anatoxin in doses of 0.1 to 2.0 ml was administered to groups of piglets of 3 9-day age once for 1 3 days from the day of illness. The number of piglets in groups is from 12 to 30. The results of the study are presented in table. 1, from which it follows that the most effective dose is the introduction of 1.0 ml per piglet. A dose increase of over 2.0 ml is impractical because it does not have a sharp effect on the effectiveness of treatment.

Пример 2. Обоснование доз введения препарата супоросным свиноматкам с целью профилактики диареи новорожденных телят. Example 2. The rationale for the doses of the drug to pregnant sows in order to prevent diarrhea of newborn calves.

Супоросных свиноматок распределили по 4-м группам, в которых выделили опытных и контрольных животных. Pregnant sows were divided into 4 groups, in which experimental and control animals were isolated.

Препарат вводили однократно за 2 3 дня до опороса в дозах 4 8 мл опытным животным. Результаты исследований представлены в табл. 2, из которой следует, что наиболее эффективной дозой является введение 7,0 мл на свиноматку. Увеличение дозы свыше 8,0 мл нецелесообразно, поскольку не оказывает влияния на эффективность профилактики диареи. The drug was administered once 2 3 days before farrowing in doses of 4 to 8 ml in experimental animals. The research results are presented in table. 2, from which it follows that the most effective dose is the introduction of 7.0 ml per sow. Increasing the dose over 8.0 ml is impractical because it does not affect the effectiveness of the prevention of diarrhea.

Пример 3. Обоснование эффективности сроков введения препарата супоросным свиноматкам при профилактике диареи молодняка. Example 3. Justification of the effectiveness of the timing of the introduction of the drug to pregnant sows in the prevention of diarrhea of young animals.

Свиноматок распределили по 5 группам в зависимости от сроков опороса: с 1 по 1 день. Вели учет народившихся поросят и количество поросят, оставшихся к 7 10-дневному возрасту. Результат исследований представлен в табл. 3, из которой следует, что наибольший процент сохранности молодняка достигается при обработке свиноматок за 3 4 дня до опороса. Обработка свиноматок более чем за 12 дней до опроса оказывает меньшее влияние на эффективность профилактики. Sows were divided into 5 groups depending on the timing of farrowing: from 1 to 1 day. A record was kept of the born piglets and the number of piglets left by 7 10 days of age. The research result is presented in table. 3, from which it follows that the greatest percentage of safety of young animals is achieved when processing sows 3 4 days before farrowing. Processing sows more than 12 days before the survey has less impact on the effectiveness of prevention.

Таким образом, полученные результаты испытаний свидетельствуют о высоком терапевтическом и профилактическом эффектах заявляемого способа. Thus, the obtained test results indicate a high therapeutic and prophylactic effects of the proposed method.

Claims

A method for treating diarrhea of young farm animals based on a biological drug, characterized in that the supernatant obtained from the broth culture of enterotoxigenic E. coli strains and treated with formalin is used as a biological drug, and the drug is administered to young animals parenterally until weaned once 1 3 days after the onset of the disease in a dose of 0.5 to 2.0 ml.