RU2086982C1 - Method of determination of pathological disorders in organism - Google Patents

Method of determination of pathological disorders in organism Download PDF

Info

Publication number
RU2086982C1
RU2086982C1 RU95105368A RU95105368A RU2086982C1 RU 2086982 C1 RU2086982 C1 RU 2086982C1 RU 95105368 A RU95105368 A RU 95105368A RU 95105368 A RU95105368 A RU 95105368A RU 2086982 C1 RU2086982 C1 RU 2086982C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
migration
leukocytes
cells
doses
toxin
Prior art date
Application number
RU95105368A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU95105368A (en
Inventor
Юлия Александровна Белая
Ольга Федоровна Белая
Людмила Юрьевна Кудрявцева
Юрий Федорович Белый
Original Assignee
Юлия Александровна Белая
Ольга Федоровна Белая
Людмила Юрьевна Кудрявцева
Юрий Федорович Белый
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Юлия Александровна Белая, Ольга Федоровна Белая, Людмила Юрьевна Кудрявцева, Юрий Федорович Белый filed Critical Юлия Александровна Белая
Priority to RU95105368A priority Critical patent/RU2086982C1/en
Publication of RU95105368A publication Critical patent/RU95105368A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2086982C1 publication Critical patent/RU2086982C1/en

Links

Images

Abstract

FIELD: medicine, pathology. SUBSTANCE: leukocytes were isolated from blood sample and cell migration is determined in the presence of Shiga-toxin. The presence of pathological changes in organism is diagnosed if level of leukocyte migration is above 20% as compared with normal value. Method can be used for determination of immune disorders, at infections, intoxications. EFFECT: improved method of assay. 3 cl

Description

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к медицине и предназначается для определения патологических нарушений гомеостаза, в том числе иммунного, при инфекционных заболеваниях и интоксикациях. Для выявления патологических нарушений в организме используются различные показатели: повышение температуры, определение СОЭ, количественные и качественные характеристики клеток и плазмы крови, мочи и других биологических жидкостей, результаты гистологических исследований биоптатов, определение функциональной активности ферментов и др. Однако эти показатели не всегда информативны и недостаточно чувствительны. The invention relates to biotechnology, in particular to medicine, and is intended to determine pathological disorders of homeostasis, including immune, in infectious diseases and intoxications. Various indicators are used to identify pathological disorders in the body: temperature increase, ESR determination, quantitative and qualitative characteristics of cells and blood plasma, urine and other biological fluids, histological studies of biopsy samples, determination of the functional activity of enzymes, etc. However, these indicators are not always informative and not sensitive enough.

Изменения миграционной активности лейкоцитов являются чувствительной реакцией на различные внешние и внутренние патологические воздействия на организм. Changes in the migration activity of leukocytes are a sensitive reaction to various external and internal pathological effects on the body.

Миграционная активность моноцитов, макрофагов, лейкоцитов исследуется давно. Однако наибольшее внимание уделяется реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). Согласно общепринятому мнению, она отражает повышение активности клеточного иммунитета. Что же касается альтернативного феномена - стимуляции миграционной активности лейкоцитов (МАЛ), то литература по этому вопросу малочисленна. Предполагают, что стимуляция МАЛ ассоциирует с угнетением клеточного иммунитета, повышением активности супрессорных механизмов. Известно, что многие инфекционные заболевания и стрессорные состояния сопровождаются увеличением клеток-супрессоров и, как следствие, развитием вторичных иммунодефицитов. Migration activity of monocytes, macrophages, leukocytes has been studied for a long time. However, the greatest attention is paid to the inhibition of leukocyte migration (RTML). According to the generally accepted opinion, it reflects an increase in the activity of cellular immunity. As for the alternative phenomenon - stimulation of the migratory activity of leukocytes (MAL), the literature on this issue is scarce. It is believed that stimulation of MAL is associated with inhibition of cellular immunity, an increase in the activity of suppressor mechanisms. It is known that many infectious diseases and stress conditions are accompanied by an increase in suppressor cells and, as a consequence, the development of secondary immunodeficiencies.

Имеются различные варианты определения клеточной миграции in vitro с использованием стеклянных или пластиковых капилляров, монослоя клеток в соскобе, агарозы, агарозных капель или коллагеновых матриксов. There are various options for determining in vitro cell migration using glass or plastic capillaries, a monolayer of cells in scraping, agarose, agarose drops or collagen matrices.

В качестве разрешающих антигенов, как правило, используют ЛПС и другие бактериальные антигены, которые к тому же применяют в относительно больших дозах (мг-мкг), или антигены соматических клеток в зависимости от целей исследований. As resolving antigens, as a rule, LPS and other bacterial antigens are used, which are also used in relatively large doses (mg-μg), or somatic cell antigens, depending on the purpose of the study.

При этом определяется антигензависимая гиперчувствительность клеток, тестируемая по их миграционной активности в присутствии этих антигенов. In this case, the antigen-dependent hypersensitivity of the cells is determined, tested by their migration activity in the presence of these antigens.

Шига токсин относится к широко распространенным среди бактерий экзотоксинам, обладающим одновременно многими биологическими активностями - энтеро-, цито- и нейротоксичностью, благодаря своей способности ингибировать синтез белка и процессы дыхания в клетках. Shiga toxin belongs to exotoxins widely distributed among bacteria, which have many biological activities at the same time - entero, cyto - and neurotoxicity, due to their ability to inhibit protein synthesis and respiratory processes in cells.

Высказано предположение о каком-то важном общебиологическом значении Шига токсина. Some important general biological significance of the Shiga toxin has been suggested.

Целью настоящего изобретения являлось определение антигеннеспецифической гиперчувствительности лейкоцитов, тестированной по определению миграционной активности клеток в присутствии Шига токсина. The aim of the present invention was to determine the antigen-specific hypersensitivity of leukocytes, tested to determine the migration activity of cells in the presence of Shiga toxin.

Известен скрининговый тест клеточной миграции (СТКМ) in vitro, разработанный и предусматривающий получение клеток перитонеального экссудата мышей, стимулированных внутрибрюшинным введением вазелинового масла, отмывание их и суспендирование в концентрации 10-20•106 клеток в мл, помещение в лунки плоскодонного планшета со средой культивирования, содержащей различные концентрации регулирующих миграцию клеток антигенов (супернатанты клеток селезенки, реагирующих на антигены эритроцитов барана, сыворотки интактных мышей и здоровых доноров и др.), с помощью наконечников и специально сконструированного штатива для направленной фиксации наконечников, оседание клеток в течение 1 ч и формирование стандартных клеточных микрокультур, инкубацию планшетов с микрокультурами в CO2 инкубаторе при 37 oC в течение 18-20 ч и учет реакции торможения или стимуляции миграции клеток путем измерения площади образовавшейся микрокультуры по сравнению с контрольной.A well-known in vitro cell migration screening test (CTKM) is developed and involves the production of peritoneal exudate cells from mice stimulated with intraperitoneal injection of paraffin oil, washing them and suspending them at a concentration of 10-20 x 10 6 cells per ml, placing a flat-bottomed plate with culture medium in the wells containing various concentrations of antigens regulating the migration of cells (supernatants of spleen cells that respond to sheep erythrocyte antigens, serum from intact mice and healthy donors, and etc.), using tips and a specially designed tripod for directional fixation of tips, cell sedimentation for 1 h and the formation of standard cell microcultures, incubation of microculture plates in a CO 2 incubator at 37 ° C for 18-20 h and taking into account the inhibition reaction or stimulation of cell migration by measuring the area of the formed microculture compared with the control.

Этот способ определения миграционной активности лейкоцитов выбран в качестве ближайшего аналога. This method of determining the migration activity of leukocytes is selected as the closest analogue.

Однако известный способ предусматривает получение клеток из перитонеального экссудата, предварительное стимулирование их за 3-5 дней до постановки опыта, использование больших количеств клеток, использование в качестве разрешающего агента продуктов соматических клеток (лимфокинов), регулирующих миграцию клеток. However, the known method involves the production of cells from peritoneal exudate, their preliminary stimulation 3-5 days before the experiment, the use of large quantities of cells, the use of somatic cell products (lymphokines) that regulate cell migration as a resolving agent.

Известный способ является близким к описываемому по технической сущности и по достигаемому результату, на основании чего выбран нами в качестве аналога. The known method is close to that described by technical nature and by the achieved result, on the basis of which we have chosen as an analogue.

Однако он принципиально отличается от предложенного способа тем, что позволяет выявлять в присутствии Шига токсина in vitro антигеннеспецифическую гиперчувствительность лейкоцитов крови, тестируемую по стимуляции их миграционной активности, коррелирующей с патологическими изменениями гомеостаза при инфекционных заболеваниях и интоксикациях. However, it differs fundamentally from the proposed method in that it allows to detect in vitro the presence of Shiga toxin antigen-specific hypersensitivity of blood leukocytes, tested by stimulating their migratory activity, correlating with pathological changes in homeostasis in infectious diseases and intoxications.

Это достигается путем использования модифицированного нами СТКМ и добавления в качестве разрешающего агента in vitro Шига токсина в специально подобранных концентрациях. Метод отличается тем, что для реакции берут клетки периферической крови (из орбитальной вены глаза мышей), кровь помещают в специальный раствор для более быстрого осаждения эритроцитов, отмытые лейкоциты разводят культуральной средой до концентрации 2-4•106 клеток в 1 мл и добавляют в лунки с культуральной средой, содержащей Шига токсин в разведениях 1•10-4 1•10-10 мг/мл, подобранных в предварительных исследованиях. При оценке реакции повышение индекса миграции лейкоцитов на 20 к контролю (без Шига токсина) считается неблагоприятным показателем нарушений гомеостаза.This is achieved by using the modified STKM and adding Shiga toxin in specially selected concentrations as an in vitro resolving agent. The method is characterized in that peripheral blood cells are taken for the reaction (from the orbital vein of the mouse’s eyes), the blood is placed in a special solution for faster erythrocyte sedimentation, the washed white blood cells are diluted with culture medium to a concentration of 2-4 • 10 6 cells in 1 ml and added to wells with a culture medium containing Shiga toxin in dilutions of 1 • 10 -4 1 • 10 -10 mg / ml, selected in preliminary studies. When evaluating the reaction, an increase in the leukocyte migration index by 20 to the control (without Shiga toxin) is considered an unfavorable indicator of homeostasis disorders.

1. Постановка реакции и определение оптимальных разрешающих доз Шига токсина. 1. Formulation of the reaction and determination of optimal resolving doses of Shiga toxin.

Кровь мыши из орбитальной вены глаза брали в количестве 0,1-0,2 мл, смешивали от 2-4 мышей в пробирке с гепарином (5 ед/мл), разводили средой 199 (1:1), наслаивали на среду LSM (Lymphocyte Separation Medium (Flow Laboratories) или 10 желатину в соотношении 1:2, оставляли при 37 oC в течение 1 ч под углом 45o. Слой плазмы с лейкоцитами отмывали дважды средой 199 с добавлением 2 мМ L-глютамина, 5-10-ной эмбриональной телячьей сыворотки, 40 мкг/мл гентамицина и 10 мМ буферного раствора Hepes, разводили ею до концентрации 2,0-3,0•106 клеток в мл. Для постановки СТКМ использовали наконечники для микрообъемов (желтые фирмы "Brand" или "Blastomed"), специально сконструированные штативы для направленной фиксации наконечников. Каждую пробу отмытых, как указано выше, лейкоцитов помещали с помощью наконечников в 4 ряда лунок плоскодонных планшетов, заполненных различными разведениями Шига токсина, оставляли при комнатной температуре в течение 1 ч на ровной горизонтальной поверхности, после чего штатив с наконечниками осторожно снимали и планшеты с микрокультурами клеток помещали в CO2 инкубатор при 37 oC на 16-20 ч. Учет результатов оценивали в световом микроскопе МБИ-3 при увеличении окуляра 7x и объектива 1,6x.Mouse blood was taken from the orbital vein in an amount of 0.1-0.2 ml, mixed from 2-4 mice in a test tube with heparin (5 u / ml), diluted with 199 (1: 1) medium, layered on LSM medium (Lymphocyte Separation Medium (Flow Laboratories) or 10 gelatin in a 1: 2 ratio was left at 37 ° C for 1 h at a 45 ° angle. The plasma layer with leukocytes was washed twice with 199 medium with 2 mM L-glutamine, 5-10 fetal calf serum, 40 ug / ml gentamicin and 10 mM Hepes buffer solution, it was diluted to a concentration of 2,0-3,0 • 10 6 cells per ml. for the production STKM using ferrules MicroHoo holders (yellow brand or Blastomed), specially designed tripods for directional fixation of tips. temperature for 1 hour on a flat horizontal surface, whereupon the tripod tipped cautiously removed and microculture plates with cells were placed in a CO 2 incubator at 37 o C for 16-20 hours. Analysis of results was assessed in the light ikroskope IBI-3 with increasing x and the eyepiece 7 1.6 x lens.

Индекс миграции (ИМ) определяли по формуле:

Figure 00000002

где Дo и Дк -средний диаметр для 4 опытных и 4 контрольных микрокультур соответственно.The migration index (MI) was determined by the formula:
Figure 00000002

where D o and D to - the average diameter for 4 experimental and 4 control microcultures, respectively.

У интактных мышей показатели ИМ лейкоцитов крови в присутствии Шига токсина, взятого в концентрации 10-2 10-16 мг/мл, в основном колебались в пределах контрольных цифр (±20 и лишь на самые малые и самые большие дозы токсина наблюдалось торможение миграции до -40
У инфицированных сальмонеллами S.dublin животных на 5 сут после заражения в дозе 2700 микр. клеток (25-50 LD50) кривая миграционной активности носила зависимый от концентрации Шига токсина in vitro характер: при больших концентрациях токсина (10-2 10-6 мг/мл) наблюдалось наибольшее ускорение миграции, при дозах (10-10 10-16 мг/мл) токсина - постепенное уменьшение показателей стимуляции до незначительных колебаний МАЛ по сравнению с контролем.
In intact mice, the blood leukocyte MI in the presence of Shiga toxin, taken at a concentration of 10 -2 10 -16 mg / ml, mainly varied within the control figures (± 20 and only the smallest and largest doses of the toxin showed migration inhibition up to - 40
In Salmonella-infected S.dublin animals, 5 days after infection, at a dose of 2700 microns. cells (25-50 LD 50 ), the migration activity curve was in vitro dependent on Shiga toxin concentration: at high concentrations of toxin (10 -2 10 -6 mg / ml), the greatest migration acceleration was observed, at doses (10 -10 10 -16 mg / ml) toxin - a gradual decrease in stimulation indices to slight fluctuations in MAL compared to the control.

Через 11 сут после заражения мышей S.dublin в дозе 250 микр. кл. и дальнейшем размножении сальмонелл в организме мышей показатели стимуляции миграционной активности лейкоцитов крови были еще более высокими и оставались достоверно выше контроля на все испытанные концентрации Шига токсина in vitro (фиг.1). 11 days after infection with S.dublin mice at a dose of 250 microns. class and further reproduction of salmonella in the body of mice, the indicators of stimulation of the migration activity of blood leukocytes were even higher and remained significantly higher than the control for all tested Shiga toxin concentrations in vitro (Fig. 1).

На основании многих опытов с инфицированием интактных, зараженных, иммунизированных мышей были выбраны три дозы Шига токсина in vitro, которые целесообразно использовать в СТКМ: 10-4, 10-6 и 10-10 мг/мл. Для упрощения методики берут дозу 10-6 мг/мл. Выявление достоверного (более 20 к контролю) ускорения миграционной активности лейкоцитов хотя бы на одну из этих концентраций Шига токсина in vitro свидетельствует о неблагоприятных изменениях гомеостаза. Учитывали также величину ИМ, свидетельствующую о степени выраженности патологических нарушений в организме.Based on many experiments with infection of intact, infected, immunized mice, three doses of Shiga toxin in vitro were selected, which are advisable to use in STKM: 10 -4 , 10 -6 and 10 -10 mg / ml. To simplify the technique, take a dose of 10 -6 mg / ml. Identification of a reliable (more than 20 to the control) acceleration of the migration activity of leukocytes to at least one of these concentrations of Shiga toxin in vitro indicates adverse changes in homeostasis. The MI value was also taken into account, indicating the severity of pathological disorders in the body.

2. Миграционная активность лейкоцитов крови при различной тяжести и исходах сальмонеллезной инфекции. 2. Migration activity of blood leukocytes with different severity and outcomes of salmonella infection.

Поставлено несколько серий опытов, в которых мыши СВА, интактные и вакцинированные химическими и корпускулярными сальмонеллезными вакцинами, заражались внутрибрюшинно различными дозами (от 170 до 5000 микр. клеток) S.dublin и затем в различные сроки после заражения определяли миграционную активность клеток крови. Наблюдения за животными проводили в течение 15 сут, в течение которых отмечали уровни гибели животных в группе. В зависимости от инфицирования разными дозами сальмонелл животных неиммунных и предварительно иммунизированных различными препаратами и их сочетаниями мы имели возможность исследовать миграционную активность лейкоцитов в группах мышей с различной гибелью животных в каждой. Several series of experiments were carried out in which CBA mice, intact and vaccinated with chemical and corpuscular salmonella vaccines, were infected intraperitoneally with various doses (from 170 to 5000 micro cells) of S.dublin and then the migration activity of blood cells was determined at different times after infection. Observations of animals were carried out for 15 days, during which the levels of death of animals in the group were noted. Depending on the infection of different doses of Salmonella animals non-immune and pre-immunized with various drugs and their combinations, we had the opportunity to study the migratory activity of leukocytes in groups of mice with different animal deaths in each.

На фиг.2 представлены суммарные данные нескольких опытов. Гибель животных (% ) в группах представлена по возрастающим показателям. Соответственно каждой группе представлены данные показателей ИМ лейкоцитов в пуле лейкоцитов крови этой группы. Figure 2 presents the summary data of several experiments. The death of animals (%) in groups is presented by increasing indicators. Accordingly, each group presents data on the indicators of MI of leukocytes in the pool of blood leukocytes of this group.

Как видно на фиг. отмечается прямая корреляционная зависимость летальности животных в группах и величин стимуляции миграции: наибольшая гибель соответствовала самым высоким показателям усиления МАЛ У погибающих животных ИМ составляла +83 и более. При этом совсем не наблюдалось показателей торможения МАЛ. As seen in FIG. there is a direct correlation between the lethality of animals in groups and the values of migration stimulation: the greatest deaths corresponded to the highest rates of MAL amplification. In dying animals, MI was +83 or more. At the same time, there were no indicators of inhibition of MAL at all.

Таким образом, в экспериментальных условиях на мышах была установлена тесная прямая корреляция величины ускорения МАЛ с тяжестью инфекционного процесса, тестируемой по гибели животных в группе. Очевидно, стимуляция МАЛ является показателем опасных не только для здоровья, но и самой жизни нарушений гомеостаза, происходящих в организме инфицированных животных. Thus, under experimental conditions in mice, a close direct correlation was found between the acceleration of MAL and the severity of the infection process, which was tested for the death of animals in the group. Obviously, the stimulation of MAL is an indicator of not only health but also life-threatening homeostasis disorders that occur in the body of infected animals.

3. Миграционная активность лейкоцитов крови при интоксикациях. 3. Migration activity of blood leukocytes during intoxication.

Группы мышей линии СВА получили внутрибрюшинно Шига токсин в дозах, соответствующих 10, 5, 2, 0,2, 0,02, 0,002 LD50. Через 3 ч и 3 сут после введения токсина у мышей из орбитальной вены глаза брали кровь, с лейкоцитами которой ставили СТКМ. В качестве разрешающих антигенов in vitro брали Шига токсин и ЛПС шигелл Флекснера 2а.Groups of CBA mice received intraperitoneal Shiga toxin in doses corresponding to 10, 5, 2, 0.2, 0.02, and 0.002 LD 50 . 3 hours and 3 days after the administration of the toxin in the mice from the orbital vein, blood was drawn from the eyes, with the leukocytes of which CTKM was placed. Shiga toxin and LPS of Shigella Flexner 2a were used as resolving antigens in vitro.

Установлена дозовая зависимость величины ИМ (фиг.3А). Наибольшие показатели стимуляции МАЛ отмечались при введении смертельных доз токсина (10,0 и 5,0 LD50). Все животные погибли в течение 4-5 сут при явлениях параличей задних конечностей. Достоверное увеличение МАЛ отмечалось также при дозах 2,0 и 0,2 LD50, меньшие дозы Шига токсина ускорения МАЛ не вызывали.Established dose dependence of the magnitude of the MI (figa). The highest levels of MAL stimulation were observed with the introduction of lethal doses of toxin (10.0 and 5.0 LD 50 ). All animals died within 4-5 days with symptoms of hind limb paralysis. A significant increase in MAL was also observed at doses of 2.0 and 0.2 LD 50 ; smaller doses of Shiga toxin did not cause acceleration of MAL.

К ЛПС шигелл Флекснера, использованного в качестве разрешающего антигена, достоверного ускорения МАЛ практически не наблюдалось даже при введении летальных доз Шига токсина: на все дозы Шига токсина, введенного мышам, отмечалось торможение МАЛ к ЛПС шигелл Флекснера in vitro (фиг.3А). For Ligans of Shigella Flexner, used as a resolving antigen, significant acceleration of MAL was practically not observed even with lethal doses of Shiga toxin: all doses of Shiga toxin administered to mice showed inhibition of MAL to Shigella Flexner LPS in vitro (Fig. 3A).

Реакция СТКМ в нашей модификации, таким образом, была высоко чувствительным тестом определения интоксикации Шига токсином, позволяя выявить ускорение миграции даже при введении мышам 0,2 LD50 Шига токсина, в отличие от летальной мышиной модели. Опыт показал, что при введении Шига токсина изменения гомеостаза начинаются уже через 3 ч после введения токсина (более ранние сроки не исследовались), отмечаются в течение 7-10 сут, через 14 сут эти изменения не обнаруживаются.The STKM reaction in our modification, therefore, was a highly sensitive test for determining Shiga intoxication with toxin, revealing an accelerated migration even when 0.2 LD 50 Shiga toxin was injected into mice, in contrast to the lethal mouse model. Experience has shown that with the introduction of Shiga toxin, changes in homeostasis begin already 3 hours after the administration of the toxin (earlier dates have not been studied), are noted within 7-10 days, after 14 days these changes are not detected.

4. Использование способа при интоксикации эндотоксином (ЛПС) шигелл. 4. The use of the method for intoxication with endotoxin (LPS) Shigella.

Группам мышей СВА вводили внутрибрюшинно ЛПС в дозах 4,0, 2,0, 1,0, 0,1, 0,01, 0,001 мг. Через 3 ч и 2-3 сут брали кровь из орбитальной вены глаза и с лейкоцитами ставили СТКМ в присутствии in vitro ЛПС шигелл Флекснера 2а и Шига токсина в качестве разрешающих антигенов в концентрациях 10-6 - 10-16 мг/мл.Groups of CBA mice were injected intraperitoneally with LPS at doses of 4.0, 2.0, 1.0, 0.1, 0.01, 0.001 mg. After 3 hours and 2–3 days, blood was taken from the orbital vein of the eye and CTKM was placed with leukocytes in the presence of in vitro LPS Shigella Flexner 2a and Shiga toxin as resolving antigens at concentrations of 10 -6 - 10 -16 mg / ml.

Было установлено (фиг. 3Б), что дозы ЛПС 4,0 и 2,0 мг вызывали у мышей достоверное ускорение МАЛ в присутствии in vitro ЛПС. Меньшие дозы ЛПС не вызывали стимуляции МАЛ, отмечалось лишь достоверное торможение миграции. It was found (Fig. 3B) that the 4.0 and 2.0 mg LPS doses caused a significant acceleration of MAL in mice in the presence of in vitro LPS in mice. Smaller doses of LPS did not cause MAL stimulation; only significant inhibition of migration was noted.

Наш расчет показал, что дозы 4,0 и 2,0 мг/мышь соответствовали примерно 400 и 200 дозам дизентерийной вакцины для человека, дозы 1,0, 0,1 и 0,01 соответственно 100, 10 и 1-ой человеческим дозам. Одна человеческая доза 500 млн микробных клеток корпускулярной вакцины или 0,01 мг в пересчете на ЛПС - подобрана эмпирически путем подбора толерантных доз на добровольцах. Отсутствие стимуляции МАЛ в присутствии гомологичного ЛПС на дозы 1,0 и 0,1 мг (соответствующих 100 и 10 человеческим дозам) свидетельствует о довольно низкой чувствительности теста при использовании ЛПС. Our calculation showed that doses of 4.0 and 2.0 mg / mouse corresponded to approximately 400 and 200 doses of dysenteric vaccine for humans, doses of 1.0, 0.1 and 0.01, respectively, to 100, 10 and 1st human doses. One human dose of 500 million microbial cells of the corpuscular vaccine, or 0.01 mg in terms of LPS, was selected empirically by selecting tolerant doses in volunteers. The absence of MAL stimulation in the presence of homologous LPS at doses of 1.0 and 0.1 mg (corresponding to 100 and 10 human doses) indicates a rather low sensitivity of the test when using LPS.

Предложенный нами способ постановки СТКМ с Шига токсином в качестве разрешающего антигена показал, что он выявляет все дозы ЛПС от 4,0 до 0,1 мг/мышь и не стимулирует миграцию лейкоцитов при введении мышам ЛПС в дозе 0,01 (соответствующей 1-ой человеческой дозе вакцины). Таким образом, предлагаемый нами способ является более чувствительным и информативным, чем СТКМ в присутствии гомологичного антигена. Our proposed method for setting STKM with Shiga toxin as a resolving antigen showed that it reveals all doses of LPS from 4.0 to 0.1 mg / mouse and does not stimulate leukocyte migration when LPS is administered to mice at a dose of 0.01 (corresponding to the 1st human dose of vaccine). Thus, our proposed method is more sensitive and informative than STKM in the presence of a homologous antigen.

Следует заметить, что дозы 0,1-0,001 мг/мышь вызывают достоверное торможение миграции лейкоцитов, особенно к гомологичному антигену. It should be noted that doses of 0.1-0.001 mg / mouse cause significant inhibition of leukocyte migration, especially to a homologous antigen.

Claims (3)

1. Способ определения патологических нарушений в организме, включающий выделение клеток, постановку теста клеточной миграции in vitro в присутствии регулятора миграции клеток и учет полученных результатов, отличающийся тем, что выделяют лейкоциты из периферической крови, тест миграции лейкоцитов ставят в присутствии Шига-токсина, взятого в концентрации 10-4 - 10-10 мг/мл суспензионной среды, и при уровне стимуляции миграции лейкоцитов выше 20% относительно нормы определяют патологические нарушения в организме.1. A method for determining pathological abnormalities in the body, including the selection of cells, the in vitro cell migration test in the presence of a cell migration regulator and taking into account the results obtained, characterized in that the leukocytes are isolated from peripheral blood, the leukocyte migration test is put in the presence of Shiga toxin taken at a concentration of 10 - 4 - 10 - 1 0 mg / ml of suspension medium and at the level of stimulation of migration of leukocytes greater than 20% relative to the norm defined pathological disorders in an organism. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для постановки теста клеточной миграции берут лейкоциты в концентрации (2 4)•106 клеток/мл суспензионной среды.2. The method according to claim 1, characterized in that for the test of cell migration take leukocytes in a concentration of (2 4) • 10 6 cells / ml of suspension medium. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что Шига-токсин берут в концентрации 10-6 мг/мл суспензионной среды.3. A method according to claim 1, characterized in that the Shiga-toxin taken at 10 - 6 mg / ml suspension medium.
RU95105368A 1995-04-10 1995-04-10 Method of determination of pathological disorders in organism RU2086982C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU95105368A RU2086982C1 (en) 1995-04-10 1995-04-10 Method of determination of pathological disorders in organism

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU95105368A RU2086982C1 (en) 1995-04-10 1995-04-10 Method of determination of pathological disorders in organism

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU95105368A RU95105368A (en) 1997-06-10
RU2086982C1 true RU2086982C1 (en) 1997-08-10

Family

ID=20166572

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU95105368A RU2086982C1 (en) 1995-04-10 1995-04-10 Method of determination of pathological disorders in organism

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2086982C1 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Суслов А.П., Головин В.П., Скворцов В.Т. Скрининговый текст клеточной миграции из микрокультуры in vitro. Иммунология, 1989, N 2, с. 73 - 76. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU95105368A (en) 1997-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Rustenhoven et al. Functional characterization of the dural sinuses as a neuroimmune interface
Sakai Opsonization by fish antibody and complement in the immune phagocytosis by peritoneal exudate cells isolated from salmonid fishes
US4603106A (en) Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
Ebringer The cross-tolerance hypothesis, HLA-B27 and ankylosing spondylitis
Schellekens et al. Lymphocyte transformation in vitro. I. Tissue culture conditions and quantitative measurements
US4822776A (en) Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
JPH09291042A (en) Medicinal composition
Kenny et al. Correlation of circulating capsular polysaccharide with bacteremia in pneumococcal pneumonia
US20130053266A1 (en) Ilcs based pattern recognition of sepsis
RU2086982C1 (en) Method of determination of pathological disorders in organism
RU2128840C1 (en) Method for diagnosing the cases of multiple sclerosis
US4609630A (en) Method for improving the specificity of immunoassays
RU2703282C1 (en) Method for producing a diagnosticum for detecting a toxin of a cholera vibrio recovered from environmental objects
Kunori et al. Spontaneous antibody-secreting human blood lymphocytes detected with a protein A plaque assay.
RU2362997C2 (en) Way of revealing disturbance of function of phagocytes at development of relapsing infectious processes
RU2341288C1 (en) MEDICINE FORMING CELLULAR IMMUNITY FOR MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS H37 Rv, METHOD OF PRODUCTION THEREOF (VERSIONS), RECOMBINANT STRAIN AND TUBERCULOSIS DIAGNOSTIC AGENT
US4937201A (en) Latex reagent for detection of the toxin of clostridium difficile
JP2002542156A (en) Immunomodulatory glycopeptide
EA027858B1 (en) Agent for diagnostics of bovine leukaemia and method of its application
RU2599035C1 (en) Method of obtaining erythrocyte antigen of anthrax antigen, method of obtaining control positive serum for kit of detection of antibodies in the blood serum of animals vaccinated against anthrax, in the reaction of indirect hemagglutination and kit for detection of antibodies
RU2089899C1 (en) Method of evaluation of human blood monocyte phagocytic activity
RU2116651C1 (en) Method of assay of activity of pathological process in patients with cerebrospinal sclerosis
Dunsmore Neutrophils promote T cell activation in HIV infection through the regulated release of CD44 bound, cell surface Galectin-9
SE467498B (en) PROCEDURES IN VITRO ANALYSIS OF MERCURY SILVER ALLERGIES
RU2195666C2 (en) Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology