RU2086259C1

RU2086259C1 - Mixed inactivated vaccine for control of chlamydiosis, campylobacteriosis, salmonellosis and leptospirosis in sheep and goats

Info

Publication number: RU2086259C1
Application number: RU94030862A
Authority: RU
Inventors: В.И. Белоусов; Ю.Д. Караваев; Ю.А. Малахов; М.А. Лучко; И.П. Иренков; А.К. Елисеев; В.М. Усольцев; Г.Л. Соболева
Original assignee: Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности
Priority date: 1994-08-03
Filing date: 1994-08-03
Publication date: 1997-08-10
Also published as: RU94030862A

Abstract

FIELD: biotechnology, veterinary science. SUBSTANCE: vaccine has leptospira cell suspension of serum group Grippotyphosa, Pomona, Tarassovi, Serjoe, salmonella cell suspension of species Salmonella abortus ovis, Salmonella dublin, Salmonella typhimurium, campylobacterium cell of the strain Campylobacter fetus sub. intestinalis N 30, chlamydium antigen from the strain Chlamydia psittaci N 8, formalin and adjuvant at the definite ratio of components. Vaccine provides the simultaneous 100% protection from leptospirosis, salmonellosis, chlamydiosis and campylobacteriosis in sheep and goats. EFFECT: enhanced effectiveness of vaccine. 2 cl

Description

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии и может быть использовано в животноводстве для профилактики у мелкого рогатого скота абортов инфекционной этиологии, вызываемых хламидиями, кампилобактериями, сальмонеллами, лептоспирами. The invention relates to biotechnology and veterinary medicine and can be used in animal husbandry for the prevention in small cattle of abortions of an infectious etiology caused by chlamydia, campylobacter, salmonella, leptospira.

Известна инактивированная вакцина против кампилобактериоза и хламидиоза овец [1]
Известна также бивалентная вакцина с масляным адъювантом против хламидиоза и сальмонеллеза овец (Патент ЧССР N 254937, А 61 К 39/116, 12.02.87 г. ).Known inactivated vaccine against campylobacteriosis and chlamydia of sheep [1]
A bivalent vaccine with an oil adjuvant against chlamydia and salmonellosis of sheep is also known (Patent of Czechoslovakia N 254937, A 61 K 39/116, 12.02.87).

Известные вакцины не обеспечивают 100%-ной иммунологической защиты животных от абортов лептоспирозной, хламидиозной, сальмонеллезной и кампилобактериозной этиологии. Кроме того, эти вакцины приходится применять отдельно друг от друга, что является очень трудоемким и приводит к большим экономическим потерям. Known vaccines do not provide 100% immunological protection of animals from abortions of leptospirosis, chlamydia, salmonella and campylobacter etiology. In addition, these vaccines have to be used separately from each other, which is very time-consuming and leads to large economic losses.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание высокоиммуногенной ассоциированной инактивированной вакцины, обеспечивающей одновременно 100%-ную защиту от хламидиоза, сальмонеллеза, кампилобактериоза и лептоспироза овец и коз. The technical result of the claimed invention is the creation of a highly immunogenic associated inactivated vaccine that simultaneously provides 100% protection against chlamydia, salmonellosis, campylobacteriosis and leptospirosis of sheep and goats.

Технический результат достигнут подбором и введением в состав вакцины неконкурирующих между собой антигенов производственным штаммов и оптимальным количественным соотношением этих антигенов, инактивирующего агента (формальдегида) и адъюванта (масляный адъювант или гель гидроокиси алюминия). The technical result was achieved by the selection and introduction of non-competing antigens to production strains in the vaccine and the optimal quantitative ratio of these antigens, inactivating agent (formaldehyde) and adjuvant (oil adjuvant or aluminum hydroxide gel).

Изобретение иллюстрируется следующими примерам. The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Технологический процесс получения ассоциированной вакцины включает отдельные стадии изготовления антигенов лептоспир, сальмонелл, кампилобактерий, хламидий и адъюванта и объединение всех компонентов в отдельных соотношениях. Example 1. The technological process for the preparation of an associated vaccine includes separate stages for the production of leptospira, salmonella, campylobacter, chlamydia and adjuvant antigens and the combination of all components in separate ratios.

А. Для изготовления антигенов лептоспиры выращивают на питательной среде, обычно используемой для культивирования лептоспир, например на среде, содержащий 5-7% сыворотки овец, или твин-альбуминовой среде. A. For the production of antigens, leptospira is grown on a culture medium commonly used for culturing leptospira, for example, medium containing 5-7% sheep serum, or tween-albumin medium.

Примечание: питательная среда должна содержать не менее 0,22% белка. Note: the growth medium should contain at least 0.22% protein.

Производственные штаммы и матровые расплодки лептоспир культивируют только в сывороточной среде, приготовленной на фосфатном буфере и проверенной на стерильность. Твин-альбуминовая питательная среда используется только для однократного получения производственной расплодки. Leptospira production strains and seed broods are cultured only in serum medium prepared on phosphate buffer and tested for sterility. Twin-albumin nutrient medium is used only for a single production production of seed.

Приготовление матровых расплодок производят из отобранных и проверенных лептоспир (чистые и содержащие не менее 60 подвижных лептоспир в поле зрения микроскопа при увеличении 40х7-10), которые засевают каждый отдельно и культивируют в течение 4-7 сут при температуре 27-28^oC.The preparation of mother seedlings is made from selected and tested leptospira (clean and containing at least 60 motile leptospira in the field of view of the microscope at a magnification of 40x7-10), which are each seeded separately and cultured for 4-7 days at a temperature of 27-28 ^o C.

Выросшие и проверенные на чистоту культуры засевают в бутыли, содержащие 1-1,5 л стерильной питательной среды, и культивируют при температуре 27-28^oC в течение 5-10 дней до накопления не менее 60 лептоспир в поле зрения микроскопа.Cultures grown and tested for purity are seeded in bottles containing 1-1.5 L of sterile culture medium and cultured at a temperature of 27-28 ^o C for 5-10 days until at least 60 leptospira accumulate in the microscope field of view.

Для приготовления производственных расплодок лептоспир матровую расплодку засевают в бутыли вместимостью 16 л, содержащие 10-12 л питательной среды из расчета 10% к среде (1-1,2 л культуры на 10-12 л питательной среды). Культивирование лептоспир проводят в течение 5-10 сут при температуре 27-28^oC без доступа света. Контроль за ростом лептоспир осуществляют путем просмотра бутылей в проходящем свете и проб культуры из бутылей в темном поле микроскопа при увеличении 40х7-10.For the preparation of production broods, leptospira seed brood is seeded in 16 liter bottles containing 10-12 liters of culture medium at the rate of 10% of the medium (1-1.2 liters of culture per 10-12 liters of culture medium). Cultivation of leptospira is carried out for 5-10 days at a temperature of 27-28 ^o C without access to light. Leptospira growth is controlled by viewing the bottles in transmitted light and culture samples from the bottles in the dark field of the microscope at a magnification of 40x7-10.

Все бутыли с чистой культурой и накоплением в поле зрения микроскопа не менее 60 лептоспир (75 млн/см³) используют для включения в состав ассоциированной вакцины.All bottles with a pure culture and accumulation in the field of view of the microscope of at least 60 leptospira (75 million / cm ³ ) are used for inclusion in the composition of the associated vaccine.

Отобранные (в бутылях) культуры лептоспир заключают в реактор в следующих соотношениях: Гриппотифоза (шт. "Бувим"), Тарассови (шт. ВГНКИ-4), Помона (шт. "Белус") по 25% каждого штамма; Сейро (штаммы 2709, "Мих", Харджио) по 8,3% каждого штамма. Например: в 100л содержится по 25 л культур лептоспир штаммов "Бувим", ВГНКИ-4 и "Белус" и по 8,3 л 2709, "Мих" и Харджио. Смесь культур лептоспир консервируют формалином в соотношении 0,2% (с содержанием формальдегида не ниже 36%). После внесения формалина перемешивание культуры ведут в течение 1ч. Инактивацию лептоспир проводят в течение 12 ч при комнатной температуре, после чего проводят контроль полноты инактивации. Лептоспиры должны быть неподвижны и стерильны. The selected (in bottles) cultures of leptospira are enclosed in the reactor in the following proportions: Flu-typhoid (pcs. Buvim), Tarassovi (pcs. VGNKI-4), Pomona (pcs. "Belus") 25% of each strain; Seiro (strains 2709, "Mih", Harjio) 8.3% of each strain. For example: 100 l each contains 25 l of cultures of Leptospira cultures of the Buvim strains, VGNKI-4 and Belus, and 8.3 l of 2709, Mih and Harjio. A mixture of cultures of leptospira canned formalin in a ratio of 0.2% (with a formaldehyde content of not less than 36%). After formalin is added, the culture is mixed for 1 h. Leptospira is inactivated for 12 hours at room temperature, after which the completeness of inactivation is monitored. Leptospira must be motionless and sterile.

Смесь инактивированных культур лептоспир подвергают концентрированию, которое осуществляют с помощью установки УПВ-6,0. Суспензию лептоспир концентрируют в 20-30 раз по объему. Концентрация лептоспир должна составлять (0,5 3)•10⁷ клеток в 1см³. О степени концентрирования лептоспир судят по накоплению фильтрата в емкости и по концентрации лептоспир. Концентрат хранят в отдельной емкости до исследования (но не более 15 дней).A mixture of inactivated cultures of leptospira is subjected to concentration, which is carried out using the installation UPV-6.0. The leptospira suspension is concentrated 20-30 times by volume. The concentration of leptospira should be (0.5 3) • 10 ⁷ cells in 1 cm ³ . The degree of concentration of leptospira is judged by the accumulation of the filtrate in the tank and by the concentration of leptospira. The concentrate is stored in a separate container until the study (but not more than 15 days).

Б. Для приготовления инактивированного антигена хламидий готовят матровую расплодку хламидий из штамма Chl. Psittaci N8. Суспензией хламидий в разведении 10^-2 10^-3 в дозе 0,2 мл заражают в желточный мешок необходимое количество 6-7-суточных развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ). Разведения хламидий готовят на фосфатно-буферном растворе или растворе Хенкса (pH 7,2-7,4) с добавлением гентамицина из расчета 50 мг на 1 л раствора.B. To prepare an inactivated chlamydia antigen, a mother chlamydia brood from Chl strain is prepared. Psittaci N8. A suspension of chlamydia at a dilution of 10 ^-2 10 ^-3 at a dose of 0.2 ml infect the required amount of 6-7-day-old developing chicken embryos (RCE) in the yolk sac. Chlamydia dilutions are prepared in phosphate-buffered saline or Hanks's solution (pH 7.2-7.4) with the addition of gentamicin at the rate of 50 mg per 1 liter of solution.

Перед заражением 6-7-суточные эмбрионы овоскопируют, отбирают хорошо развитые, активно подвижные и размещают их вертикально воздушной камерой вверх. Зараженные эмбрионы инкубируют при 36-37^oC и относительной влажности 60-65% в течение 9 сут с овоскопированием не менее двух раз в сутки.Before infection, 6-7-day-old embryos are ovoscopic, well-developed, actively motile, are selected and placed vertically with the air chamber up. Infected embryos are incubated at 36-37 ^o C and relative humidity 60-65% for 9 days with ovoscopy at least twice a day.

Куриные эмбрионы павшие и слабоподвижные с седьмых по девятые сутки вскрывают с соблюдением правил асептики. Из каждой оболочки желточного мешка делают мазок-отпечаток, который исследуют на наличие хламидий и чистоту материала путем высева на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, среду Сабуро. Неконтаминированный материал с наличием хламидий используют для дальнейшей работы. From the seventh to the ninth day, chicken embryos that are dead and inactive, are opened in compliance with aseptic rules. A smear imprint is made from each shell of the yolk sac, which is examined for the presence of chlamydia and the purity of the material by plating on MPA, MPB, MPPB under paraffin oil, Saburo medium. Non-contaminated material with the presence of chlamydia is used for further work.

Отобранные неконтаминированные желточные мешки с хламидиями гомогенизируют и центрифугируют при 3-5 тыс. оборотов в минуту в течение 3-5 мин. Из общей массы отбирают пробу для определения инфекционного титра и стерильности. Оставшуюся массу помещают в стерильные колбы, закрывают их стерильными резиновыми пробками, а затем фольгой, и хранят в парах жидкого азота не более трех месяцев. В последующем по мере необходимости матровую расплодку можно готовить из лиофилизированного или нативного материала, полученного из ВГНКИ ветпрепаратов, или же использовать в качестве матры хламидиосодержащие оболочки желточных мешков, взятых из очередных производственных партий хламидий с инфекционным титром не ниже 10^6,0-10^9,0 ЭЛД ₅₀/0,2 мл.The selected non-contaminated yolk sacs with chlamydia are homogenized and centrifuged at 3-5 thousand rpm for 3-5 minutes. A sample is taken from the total mass to determine the infectious titer and sterility. The remaining mass is placed in sterile flasks, closed with sterile rubber stoppers, and then foil, and stored in liquid nitrogen vapor for no more than three months. Subsequently, if necessary, the mother brood can be prepared from lyophilized or native material obtained from VGNKI of veterinary preparations, or chlamydia-containing membranes of yolk sacs taken from regular production batches of chlamydia with an infectious titer of at least 10 ^6.0 -10 ⁹ can be used as a matra ^{. 0} ELD ₅₀ / 0.2 ml.

Полученную матровую расплодку используют для заражения куриных эмбрионов при изготовлении производственных серий вакцины. The resulting mother seed is used to infect chicken embryos in the manufacture of production batches of the vaccine.

Матровую расплодку хламидий, используемую для заражения, размораживают при температуре 37^oC и добавляют забуференный физраствор или раствор Хенкса pH 7,2-7,4 до разведения 10^-1.The chlamydial maters used for infection are thawed at a temperature of 37 ^° C. and buffered saline or Hanks solution pH 7.2-7.4 is added to a dilution of 10 ^-1 .

Из этой суспензии делают разведение хламидий 10^-2 10^-8. Указанными разведениями заражают РКЭ и инкубируют.From this suspension make a dilution of chlamydia 10 ^-2 10 ^-8 . The indicated dilutions infect RKE and incubate.

Павшие эмбрионы на 5-9 сутки вскрывают, желточные оболочки помещают в стерильные банки. 10-15 желточных оболочек отбирают для контроля путем микроскопии. При наличии хламидий в 70% мазках материал используют для приготовления вакцины. Fallen embryos on the 5th-9th day are opened, vitelline membranes are placed in sterile jars. 10-15 vitelline membranes are selected for control by microscopy. In the presence of chlamydia in 70% smears, the material is used to prepare the vaccine.

Для концентрации хламидий оболочки желточных мешков измельчают, сливают в бутыль и готовят 10%-ную суспензию на фосфатно-буферном физрастворе или растворе Хенкса с pH 7,2-7,4 из расчета 4,5 мл раствора на одну желточную оболочку. Затем суспензию охлаждают до 4-5^oC, осаждают на центрифуге марки К-70 при 3000 об/мин в течение 30 мин, и надосадочную жидкость без жира разводят фосфатно-буферным физраствором pH 7,2-7,4 в 5 раз и концентрируют путем осаждения на центрифуге марки ОТР-101К при 15000 об/мин. Осадок хламидий снимают со стенок ротора центрифугируют и ресуспендируют в физиологическом растворе из расчета 1:2 (масса/объем). Концентрация хламидий должна составлять 80-120 мкг/мл.For the concentration of chlamydia, the shells of the yolk sacs are crushed, poured into a bottle and a 10% suspension is prepared in phosphate-buffered saline or Hanks solution with a pH of 7.2-7.4 at the rate of 4.5 ml of solution per one vitelline membrane. Then the suspension is cooled to 4-5 ^o C, precipitated on a K-70 centrifuge at 3000 rpm for 30 minutes, and the supernatant without fat is diluted with phosphate-buffered saline pH 7.2-7.4 5 times and concentrated by deposition on a centrifuge brand OTR-101K at 15,000 rpm The chlamydia precipitate is removed from the walls of the rotor by centrifugation and resuspended in physiological saline at a rate of 1: 2 (mass / volume). The concentration of chlamydia should be 80-120 μg / ml.

В приготовленную суспензию хламидий добавляют формалин до концентрации формальдегида 0,16% и выдерживают в течение 4 сут при 37^oC, периодически встряхивая (2-3 раза в сутки). Инактивацию хламидий контролируют путем инокуляции материала в разведении 1:100 в желточный мешок десяти РКЭ. Если в мазках обнаружены хламидии, суспензию снова инактивируют при 37^oC в течение 6 сут.Formalin is added to the prepared suspension of chlamydia to a concentration of formaldehyde of 0.16% and kept for 4 days at 37 ^o C, periodically shaking (2-3 times a day). Inactivation of chlamydia is controlled by inoculation of the material at a dilution of 1: 100 in the yolk sac of ten RCA. If chlamydia is found in the smears, the suspension is again inactivated at 37 ^° C for 6 days.

Суспензия в период контроля инактивации и стерильности, а также до составления серии вакцины хранится при (3-5)+1^oC (не более 15-20 дней).The suspension during the control of inactivation and sterility, as well as until the preparation of a series of vaccines is stored at (3-5) +1 ^o C (no more than 15-20 days).

В. Для приготовления инактивированного антигена кампилобактерий используют культуру штамма Camp. fetus sub. intestinalis N 30. Содержание ампулы (лиофилизированная культура) растворяют 1 мл МПБ, содержащего 10% стерильной дефибринированной крови барана, и рассевают в 3-4 пробирки в ПЖА с 5% аминопептида. Культивирование осуществляют в течение 48-72 ч при температуре 37^oC в эксикаторе, в котором замещают 15-20% воздуха углекислым газом. Культуру, выросшую в ПЖА с 5% ферментативного гидролизина в пробирках, пересевают во флаконы, а затем в бутыли с ПЖА, содержащим 0,025% железа сернокислого закисного или 0,5% натрия янтарнокислого и 5% ферментативного гидролизина, из расчета 1 пробирка на 1-2 флакона. Культивирование осуществляют при 37^oC в течение 48-72 ч.B. A Camp strain culture is used to prepare the inactivated campylobacter antigen. fetus sub. intestinalis N 30. The contents of the ampoule (lyophilized culture) are dissolved in 1 ml of MPB containing 10% sterile defibrinated sheep blood, and sown in 3-4 tubes in the pancreas with 5% aminopeptide. The cultivation is carried out for 48-72 hours at a temperature of 37 ^o C in a desiccator in which 15-20% of the air is replaced with carbon dioxide. The culture grown in the pancreas with 5% enzymatic hydrolysin in test tubes is transferred to vials, and then in the bottles with the pancreas containing 0.025% ferric acid sulfate or 0.5% succinic sodium and 5% enzymatic hydrolysin, at the rate of 1 tube per 1- 2 bottles. The cultivation is carried out at 37 ^o C for 48-72 hours

Культуру кампилобактерий с накоплением не менее 2,5 млрд/мл используют для посева в аналогичную среду в ферментеры. A campylobacter culture with an accumulation of at least 2.5 billion / ml is used for inoculation into a similar medium in fermenters.

Для выращивания кампилобактерий используют ферментеры емкостью от 0,1 до 1 м³, оборудованные приборами для контроля и регулирования основных технологических параметров: растворенного кислорода (pO₂), pH, температуры, окислительно-восстановительного потенциала (eH), давления (p), оборотов мешалки (n).For the cultivation of campylobacter, fermenters with a capacity of 0.1 to 1 m ^{3 are used} , equipped with devices for monitoring and regulating the main technological parameters: dissolved oxygen (pO ₂ ), pH, temperature, redox potential (eH), pressure (p), revolutions mixers (n).

При периодическом культивировании в среде поддерживают в пределах 20% уровень растворенного кислорода (pO₂) до начала интенсивного роста культуры, а затем уровень pO₂ доводят до 40% и поддерживают его до конца культивирования путем изменения расхода воздуха на аэрацию (при уменьшении pO₂ необходимо увеличить подачу воздуха, а при увеличении pO₂ уменьшить). Обороты мешалки постоянные: 50-60 в минуту у крупных ферментеров и 200-240 в минуту у малогабаритных.During periodic cultivation in the medium, the level of dissolved oxygen (pO ₂ ) is maintained within 20% before the intensive growth of the culture begins, and then the pO ₂ level is adjusted to 40% and maintained until the end of cultivation by changing the air flow for aeration (with a decrease in pO ₂ , increase air supply, and decrease pO ₂ ). The revolutions of the mixer are constant: 50-60 per minute for large fermenters and 200-240 per minute for small ones.

Продолжительность культивирования кампилобактерий составляет 10±2 ч (использование посевного материала, полученного на питательной среде в баллонах) и 26±4 ч (использование культуры, выращенной в ПЖА в матрасах). The duration of cultivation of campylobacter is 10 ± 2 hours (use of inoculum obtained on a nutrient medium in cylinders) and 26 ± 4 hours (use of culture grown in pancreas in mattresses).

Полученную культуру кампилобактерий с соблюдением стерильности перекачивают в реактор-инактиватор, добавляют формалин до концентрации формальдегида 0,2% и выдерживают в течение 3 сут при температуре 37±0,5^oC, перемешивая 3-4 раза в сутки.The resulting culture of campylobacter is sterilized and pumped to an inactivator, formalin is added to a formaldehyde concentration of 0.2% and kept for 3 days at a temperature of 37 ± 0.5 ^o C, stirring 3-4 times a day.

Инактивированную баксуспензию концентрируют методом центрифугирования или сепарирования на центрифуге марки ОТР-101К или на сепараторе марки АСГ-3М. Затем бакмассу выгружают в емкость, гомогенизируют в течение 1-2 мин при 4000 об/мин, суспендируют в стерильном физиологическом растворе, содержащем 0,5% формалина, до концентрации 1•10¹⁰- 3•10¹⁰ кл/мл и помещают в бутыль.Inactivated bacuspension is concentrated by centrifugation or separation on an OTR-101K centrifuge or on an ASG-3M separator. Then the bakmass is unloaded into a container, homogenized for 1-2 min at 4000 rpm, suspended in a sterile physiological solution containing 0.5% formalin, to a concentration of 1 • 10 ¹⁰ - 3 • 10 ¹⁰ cells / ml and placed in a bottle .

Г. Для приготовления инактивированных антигенов сальмонелл используют производственные штаммы Salm. abortus ovis, Salm. dublin, Salm, typhimurium, которые выращивают на бульоне Хоттингера с добавлением необходимых ингредиентов. D. For the preparation of inactivated Salmonella antigens, Salm production strains are used. abortus ovis, Salm. dublin, Salm, typhimurium, which are grown on the Hottinger broth with the addition of the necessary ingredients.

Для получения матричной расплодки культур сальмонелл каждый штамм отдельно засевают по 0,5 мл во флакон вместимостью 200 мл, содержащий 80-100 мл бульона Хоттингера (pH 769-8,0). To obtain a matrix seed culture of Salmonella cultures, each strain is separately inoculated with 0.5 ml in a 200 ml bottle containing 80-100 ml of Hottinger broth (pH 769-8.0).

Культуры 8-10-часового роста проверяют на чистоту путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, серологические свойства с монорецепторными сыворотками и биохимические свойства высевом на короткий цветной ряд. Cultures of 8-10 hour growth are checked for cleanliness by microscopy of Gram stained smears, serological properties with monoreceptor serums and biochemical properties plated on a short color row.

Проверенные культуры из флакона засевают каждую отдельно в бутыли с бульоном Хоттингера и выращивают в течение 8-10 ч при 37-38^oC, периодически встряхивая.The tested cultures from the vial are each seeded separately in a bottle with Hottinger broth and grown for 8-10 hours at 37-38 ^o C, periodically shaking.

Полученную матричную расплодку перед засевом в реактор проверяют микроскопией мазков, окрашенных по Граму, и высевом на среду Эндо или Плоскирева. The obtained matrix seedling before inoculation into the reactor is checked by microscopy of smears stained by Gram and plated on Endo or Ploskirev medium.

Все матричные расплодки сальмонелл одного серотипа засевают в отдельные реакторы в количестве 8-10% от объема среды и выращивают в течение 10-14 ч при 37-38^oC, при непрерывной аэрации и перемешивании. Для улучшения условий роста микробов и снижения pH при повышении его до 7,6-7,8 добавляют стерильный 40% -ный раствор глюкозы до концентрации 0,1-0,2% (200-500 мл раствора глюкозы на 100 л культуры).All matrix Salmonella seedlings of the same serotype are seeded in separate reactors in an amount of 8-10% of the medium volume and grown for 10-14 hours at 37-38 ^o C, with continuous aeration and stirring. To improve the conditions for the growth of microbes and lower the pH when increasing it to 7.6-7.8, a sterile 40% glucose solution is added to a concentration of 0.1-0.2% (200-500 ml glucose solution per 100 l of culture).

По окончании культивирования определяют концентрацию микробных тел, pH и чистоту выращенной культуры микроскопией мазков, окрашенных по Граму, высевами на дифференциальную среду и типированием выращенной культуры из реактора, включают мешалку для получения равномерной взвеси. At the end of the cultivation, the concentration of microbial bodies, the pH and the purity of the grown culture are determined by microscopy of Gram stained smears, plating on a differential medium and typing of the grown culture from the reactor, the stirrer is turned on to obtain uniform suspension.

При необходимости выращенные культуры сальмонелл концентрируют на центрифуге ОТР-101К и доводят до концентрации 40-60 млрд кл/мл. If necessary, the grown salmonella cultures are concentrated in an OTP-101K centrifuge and adjusted to a concentration of 40-60 billion cells / ml.

К выращенным культура сальмонелл при включенной мешалке добавляют формалин, разведенный физраствором 1:1 с таким расчетом, чтобы его концентрация в культуре составляла 0,2%
Инактивацию культуры сальмонелл формалином проводят в течение 20 сут при 37-38^oC.Formalin diluted with saline 1: 1 is added to the grown salmonella culture with the stirrer switched on so that its concentration in the culture is 0.2%
The inactivation of the culture of salmonella formalin is carried out for 20 days at 37-38 ^o C.

Д. Приготовление адъюванта. Для изготовления вакцины можно использовать как масляный адъювант, так и гель гидроокиси алюминия (ГОА). D. Preparation of adjuvant. For the manufacture of the vaccine, you can use both an oil adjuvant and an aluminum hydroxide gel (GOA).

Для изготовления масляного адъюванта масло для эмульгированных вакцин (ПС-3) и ланолин безводный смешивают в соотношении 83:17 об.ч. помещают в емкость и автоклавируют в течение 1 ч при 115-120^oC. После автоклавирования адъювант проверяют на стерильность. Стерильный адъювант используют для составления серии вакцины. Адъювант можно хранить при 4-10^oC в течение года.For the manufacture of an oil adjuvant, emulsified vaccine oil (PS-3) and anhydrous lanolin are mixed in a ratio of 83:17 vol.h. placed in a container and autoclaved for 1 h at 115-120 ^o C. After autoclaving, the adjuvant is checked for sterility. A sterile adjuvant is used to formulate a series of vaccines. Adjuvant can be stored at 4-10 ^o C for a year.

Для приготовления адъюванта на основе ГОА готовят 1/15 М (молярные) растворы NaH₂PO₄ и KH₂PO₄.To prepare an adjuvant based on GOA, 1/15 M (molar) solutions of NaH ₂ PO ₄ and KH ₂ PO ₄ are prepared.

На этом буфере готовят 2%-ный раствор гидроокисьалюминиевых квасцов, которые стерилизуют в автоклаве при 115-120^oC в течение 30-40 мин. Стерильный фосфатно-буферный 2% -ный раствор гидроокиси алюминия используют в качестве адъюванта. После того, как все компоненты вакцины готовы, непосредственно приступают к получению вакцины.A 2% solution of aluminum hydroxide alum is prepared on this buffer, which is sterilized in an autoclave at 115-120 ^o C for 30-40 minutes. A sterile phosphate-buffered 2% aluminum hydroxide solution is used as an adjuvant. After all components of the vaccine are ready, they immediately begin to receive the vaccine.

Пример 2 (из расчета на 100 л готовой вакцины). В стерильный реактор с адъювантом вносят при включенной мешалки инактивированные клетки лептоспир серогрупп Grippotyphosa (штамм "Бувим"), Pomona (штамм "Белус"), Tarassovi (штамм ВГНКИ-4), Serjoe (штаммы "Мих" 2709, hardjo), суспензии клеток сальмонелл видов Salmonella abortus ovis штамма 2703/93, Salmonella dublin штамма 3004/93, Salmonella typhimurium 2305/93, суспензии клеток кампилобактерий штамма Camp. fetus sub. intestinalis N 30, антиген хламидий из штамма Chlamydia psittaci N 30, формалин и адъювант при следующем соотношении компонентов,об. Example 2 (based on 100 l of the finished vaccine). When the stirrer is turned on, inactivated leptospira cells of serogroups Grippotyphosa (strain Buvim), Pomona (strain Belus), Tarassovi (strain VGNKI-4), Serjoe (strains Mih 2709, hardjo), and cell suspensions are introduced into the sterile reactor with adjuvant. Salmonella species Salmonella abortus ovis strain 2703/93, Salmonella dublin strain 3004/93, Salmonella typhimurium 2305/93, cell suspension Campylobacter strain Camp. fetus sub. intestinalis N 30, the chlamydia antigen from the strain Chlamydia psittaci N 30, formalin and adjuvant in the following ratio of components, vol.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 3,8
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 3,8
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 3,8
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток: -
Штамм "Мих" 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,3
Штамм 2709 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,3
Штамм hardjo 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,3
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1•10⁹-3•10¹⁰ в 1 мл 7,3
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 1,0
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 1,0
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1•10¹⁰-3•10¹⁰ в 1 мл 0,88
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД₅₀/0,2 см³ 11,0
Формалин 0,2
Адъювант Остальное
Соединенную смесь эмульгируют в реакторе-эмульгаторе в течение 15-20 мин при 28-32^oC или перемешивают с ГОА. После этого проводят расфасовку вакцины в стерильные флаконы по 100 или 200 мл, укупоривают стерильными резиновыми пробками, закрывают металлическими колпачками и обкатывают.Suspension of Leptospira serogroup Grippotyphosa cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml 3.8
Pomona serogroup leptospira cell suspension in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml 3.8
Suspension of Leptospira serogroup Tarassovi cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml 3.8
Suspension of Leptospira serogroup Seiro group cells in culture medium with cell concentration: -
Strain "Mih" 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.3
Strain 2709 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.3
Strain hardjo 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.3
Suspension of Salmonella abortus ovis cells in a culture medium with a cell concentration of 1 • 10 ⁹ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml of 7.3
Suspension of Salmonella typhimurium cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml 1.0
Suspension of Salmonella dublin cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml 1.0
Cell suspension of campylobacter C. C. fetus sub.intestinalis in physiological saline with a cell concentration of 1 • 10 ¹⁰ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml of 0.88
Chl.psittaci chlamydia antigen with activity 10 ⁶ 10 ⁹ ELD ₅₀ / 0.2 cm ³ 11.0
Formalin 0.2
Adjuvant Else
The combined mixture is emulsified in an emulsifier reactor for 15-20 minutes at 28-32 ^o C or mixed with GOA. After this, the vaccine is packaged in sterile bottles of 100 or 200 ml, sealed with sterile rubber stoppers, closed with metal caps and run in.

Пример 3. По технологии и указанному порядку введения составных частей вакцину получают аналогично примеру 1 при следующем соотношении компонентов, об. Example 3. According to the technology and the indicated order of introduction of the components, the vaccine is obtained analogously to example 1 in the following ratio of components, vol.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,035
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,035
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,035
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток:
Штамм "Мих" 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,37
Штамм 2709 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,37
Штамм hardjo 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,37
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1•10⁹-3•10¹⁰ в 1 мл 8,3
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 1,75
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 1,75
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1•10¹⁰-3•10¹⁰ в 1 мл 1,14
Антиген хламидий Chl. psittaci с активностью 10⁶ 1010⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 12,0
Формалин 0,3
Адъювант Остальное
Пример 4. По технологии и указанному порядку введения компонентов вакцину готовят аналогично примеру 1 при следующем соотношении компонентов,об.Suspension of Leptospira serogroup Grippotyphosa cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml 4.035
Pomona serogroup leptospira cell suspension in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml 4.035
Suspension of Leptospira serogroup Tarassovi cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml 4.035
Suspension of Leptospira serogroup Seiro group cells in culture medium with cell concentration:
Strain "Mih" 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.37
Strain 2709 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.37
Strain hardjo 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.37
Suspension of Salmonella abortus ovis cells in a culture medium with a cell concentration of 1 • 10 ⁹ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml of 8.3
Suspension of Salmonella typhimurium cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml of 1.75
Suspension of Salmonella dublin cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml of 1.75
Suspension of Campylobacter C. C. fetus sub.intestinalis cells in physiological saline with a cell concentration of 1 • 10 ¹⁰ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml 1.14
Chlamydia antigen Chl. psittaci with activity 10 ⁶ 1010 ⁹ ELD ₅₀ / 0.2 cm ² 12.0
Formalin 0.3
Adjuvant Else
Example 4. According to the technology and the indicated order of administration of the components, the vaccine is prepared analogously to example 1 in the following ratio of components, vol.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,27
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток:
Штамм "Мих" 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,43
Штамм 2709 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,43
Штамм hardjo 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,43
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1•10⁹-3•10¹⁰ в 1 мл 9,3
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 2,5
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 2,5
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1•10¹⁰-3•10¹⁰ в 1 мл 1,4
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 13,0
Формалин 0,4
Адъювант Остальное
Пример 5. Вакцину готовят аналогично примеру 1 при следующем соотношении компонентов,об.Suspension of Leptospira serogroup Grippotyphosa cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 4.27
Pomona serogroup leptospira cell suspension in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml 4.27
Suspension of leptospira serogroup Tarassovi cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 4.27
Suspension of Leptospira serogroup Seiro group cells in culture medium with cell concentration:
Strain "Mih" 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.43
Strain 2709 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.43
Strain hardjo 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.43
Suspension of Salmonella abortus ovis cells in a culture medium with a cell concentration of 1 • 10 ⁹ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml 9.3
Suspension of Salmonella typhimurium cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml 2.5
Suspension of Salmonella dublin cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml 2.5
Suspension of Campylobacter C. C. fetus sub.intestinalis cells in physiological saline with a cell concentration of 1 • 10 ¹⁰ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml 1.4
Chlamydia Chl.psittaci antigen with activity 10 ⁶ 10 ⁹ ELD ₅₀ / 0.2 cm ² 13.0
Formalin 0.4
Adjuvant Else
Example 5. The vaccine is prepared analogously to example 1 in the following ratio of components, vol.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 3,7
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 3,7
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 3,7
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток: -
Штамм "Мих" 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,2
Штамм 2709 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,2
Штамм hardjo 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,2
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1•10⁹-3•10¹⁰ в 1 мл 7,2
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 0,9
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 0,9
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1•10¹⁰-3•10¹⁰ в 1 мл 0,78
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 10,0
Формалин 0,1
Адъювант Остальное
Пример 6. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но при следующем соотношении компонентов,об.Suspension of Leptospira serogroup Grippotyphosa cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 3.7
Pomona serogroup leptospira cell suspension in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 3.7
Suspension of leptospira serogroup Tarassovi cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 3.7
Suspension of Leptospira serogroup Seiro group cells in culture medium with cell concentration: -
Strain "Mih" 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.2
Strain 2709 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.2
Strain hardjo 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.2
Suspension of Salmonella abortus ovis cells in a culture medium with a cell concentration of 1 • 10 ⁹ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml of 7.2
Suspension of Salmonella typhimurium cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml of 0.9
Suspension of Salmonella dublin cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml of 0.9
Suspension of Campylobacter C. C. fetus sub.intestinalis cells in physiological saline with a cell concentration of 1 • 10 ¹⁰ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml 0.78
Chlamydia Chl.psittaci antigen with activity 10 ⁶ 10 ⁹ ELD ₅₀ / 0.2 cm ² 10.0
Formalin 0.1
Adjuvant Else
Example 6. The vaccine is prepared analogously to example 1, but in the following ratio of components, about.

Суспензия клеток лептоспир серогруппы Grippotyphosa в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,37
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Pomona в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,37
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Tarassovi в культуральной среде с концентрацией клеток 5•10⁶-3•10⁷ в 1 мл 4,37
Суспензия клеток лептоспир серогруппы Сейро в культуральной среде с концентрацией клеток: -
Штамм "Мих" 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,53
Штамм 2709 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,53
Штамм hardjo 5•10⁶-3•10⁷ кл/мл 1,53
Суспензия клеток Salmonella abortus ovis в культуральной среде с концентрацией клеток 1•10⁹-3•10¹⁰ в 1 мл 9,4
Суспензия клеток Salmonella typhimurium в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 2,6
Суспензия клеток Salmonella dublin в культуральной среде с концентрацией клеток 6•10⁸-15•10⁹ в 1 мл 2,6
Суспензия клеток кампилобактерий C.fetus sub.intestinalis в физиологическом растворе с концентрацией клеток 1•10¹⁰-3•10¹⁰ в 1 мл 1,5
Антиген хламидий Chl.psittaci с активностью 10⁶ 10⁹ ЭЛД ₅₀/0,2 см² 14,0
Формалин 0,5
Адъювант Остальное
Вакцина, приготовленная по примерам 1-3, обладает 100%-ной иммуногенной активностью. Уровень антител в сыворотке крови кроликов и овец, вакцинированных ассоциированной вакциной (по примерам 1-3) не ниже уровня антител, при применении моновакцин и соответствует требованиям технических условий. Тогда как вакцина, приготовленная по примерам 4 и 5, не обладает достаточной антигенной и иммуногенной активностью.Suspension of Leptospira serogroup Grippotyphosa cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 4.37
Pomona serogroup leptospira cell suspension in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 4.37
Suspension of Leptospira serogroup Tarassovi cells in a culture medium with a cell concentration of 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ in 1 ml of 4.37
Suspension of Leptospira serogroup Seiro group cells in culture medium with cell concentration: -
Strain "Mih" 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.53
Strain 2709 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.53
Strain hardjo 5 • 10 ⁶ -3 • 10 ⁷ cells / ml 1.53
Suspension of Salmonella abortus ovis cells in a culture medium with a cell concentration of 1 • 10 ⁹ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml of 9.4
Suspension of Salmonella typhimurium cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml of 2.6
Suspension of Salmonella dublin cells in a culture medium with a cell concentration of 6 • 10 ⁸ -15 • 10 ⁹ in 1 ml of 2.6
Cell suspension of campylobacter C. C. fetus sub.intestinalis in physiological saline with a cell concentration of 1 • 10 ¹⁰ -3 • 10 ¹⁰ in 1 ml 1.5
Chl.psittaci chlamydia antigen with activity 10 ⁶ 10 ⁹ ELD ₅₀ / 0.2 cm ² 14.0
Formalin 0.5
Adjuvant Else
The vaccine prepared according to examples 1-3, has 100% immunogenic activity. The level of antibodies in the blood serum of rabbits and sheep vaccinated with the associated vaccine (according to examples 1-3) is not lower than the level of antibodies when using monovaccines and meets the requirements of technical conditions. While the vaccine prepared according to examples 4 and 5 does not have sufficient antigenic and immunogenic activity.

Высокая иммуногенная активность заявляемой вакцины подтверждена также в остром опыте на восприимчивых животных суягных овцематках. В опыт были отобраны 60 суягных овцематок из хозяйства благополучного по сальмонеллезу, хламидиозу, кампилобактериозу и лептоспирозу. The high immunogenic activity of the claimed vaccine is also confirmed in an acute experiment on susceptible animals of ewes. Sixty ewes from the economy safe for salmonellosis, chlamydia, campylobacteriosis and leptospirosis were selected for the experiment.

Ассоциированная вакцина против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза предохраняла от абортов 100% овцематок, после их заражения лептоспирами Помона в дозе 2•10⁵ клеток и сальмонеллами в дозе 10 млрд микробных клеток. В невакцинированных группах от лептоспироза абортировало 3 головы из 7, у двух голов получен нежизнеспособный приплод, от сальмонеллеза абортировало 2 головы из 5 (при заражении 10 млрд клеток) и 3 из 5 при дозе заражения 30 млрд клеток.The associated vaccine against chlamydia, campylobacteriosis, salmonellosis and leptospirosis protected 100% of ewes from abortion after infection with Pomona leptospira in a dose of 2 • 10 ⁵ cells and salmonella in a dose of 10 billion microbial cells. In unvaccinated groups, 3 out of 7 heads were aborted from leptospirosis, a non-viable offspring was obtained from two heads, 2 out of 5 heads were aborted from salmonellosis (10 billion cells were infected) and 3 out of 5 were infected with 30 billion cells.

Таким образом, вакцинация овцематок ассоциированной вакциной против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза обеспечивает 100%-ную иммунологическую защиту от этих заболеваний. Thus, vaccination of ewes with an associated vaccine against chlamydia, campylobacteriosis, salmonellosis and leptospirosis provides 100% immunological protection against these diseases.

Claims

1. Associated inactivated vaccine against chlamydia, campylobacteriosis, salmonellosis and leptospirosis of small cattle, characterized in that it contains suspensions of leptospira cells of the serogroups Grippotyphosa, Pomona, Tarassovi, Serjoe, Salmonella cells of the Salmonella campinum cells, Salmonella dummy cells, Salmonella cellonum campinlinummonlin dublin, Salmonella dulmonella cells Campylobacter fetus sub strain. intestinalis N 30, chlamydia antigen from strain Chlamydia psittaci N 8, formalin and adjuvant in the following ratio of components, vol.

Cell suspension of the leptospira serogroup Grippotyphosa in a culture medium with a concentration of 5 • 10 ⁶ 3 • 10 ⁷ cells / ml 3.8 4.27
Pomona serogroup leptospira cell suspension in a culture medium with a concentration of 5 • 10 ⁶ 3 • 10 ⁷ cells / ml 3.8 4.27
Suspensions of Leptospira serogroup Tarassovi cells in a culture medium with a concentration of 5 • 10 ⁶ 3 • 10 ⁷ cells / ml 3.8 4.27
Serjoe serogroup leptospira cell suspension in a culture medium with a concentration of 5 • 10 ⁶ 3 • 10 ⁷ cells / ml 3.9 4.29
Suspension of Salmonella cells of the species Salmonella abortusovis in a culture medium with a concentration of 1 • 10 ⁹ 3 • 10 ¹⁰ cells / ml 7.3 9.3
Suspension of Salmonella cells of the species Salmonella typhimurium in a culture medium with a concentration of 6 • 10 ⁸ 15 • 10 ⁹ cells / ml 1.0 2.5
Suspension of Salmonella cells of the species Salmonella dublin in a culture medium with a concentration of 6 • 10 ⁸ 15 • 10 ⁹ cells / ml 1.0 2.5
Campylobacter strain Campylobacter fetus Sub.intestinalis N 30 cell suspension in physiological saline with a concentration of 1 • 10 ¹⁰ 3 • 10 ¹⁰ cells / ml 0.88 1.4
Chlamydia antigen from Chlamydia psittaci strain N 8 with activity 10 ⁶ 10 ⁹ ELD ₅ ₀ / 0.2 cm ³ 11.0 13.0
Formalin 0.2 0.4
Adjuvant Else
2. The vaccine according to claim 1, characterized in that of the adjuvants it contains an oil adjuvant based on mineral oil and lanolin or an aluminum hydroxide gel.