RU2080380C1

RU2080380C1 - Strain of bacterium listeria monocytogenes vgnki-19 used for listerellosis vaccine preparing

Info

Publication number: RU2080380C1
Application number: RU94018277A
Authority: RU
Inventors: Дмитрий Аркадьевич Васильев; Александр Андреевич Маничев; Ирина Васильевна Ельникова; Борис Игоревич Шморгун; Михаил Яковлевич Ярцев; Владимир Петрович Шишлов
Original assignee: Дмитрий Аркадьевич Васильев; Александр Андреевич Маничев; Ирина Васильевна Ельникова; Борис Игоревич Шморгун; Михаил Яковлевич Ярцев; Владимир Петрович Шишлов
Priority date: 1994-05-17
Filing date: 1994-05-17
Publication date: 1997-05-27
Also published as: RU94018277A

Abstract

FIELD: microbiology, biotechnology. SUBSTANCE: invention proposes new strain of bacterium Listeria monocytogenes VGNKI-19-DEP. Strain is avirulent, selected by cultural-morphological, biological and serological characters. Strain is used for preparing vaccine against listerellosis in agriculture animals. EFFECT: enhanced effectiveness of vaccine, new strain indicated above. 2 tbl

Description

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии. Преимущественная область использования создание листериозной вакцины. The invention relates to the field of veterinary microbiology. The primary area of use is the creation of a listeriotic vaccine.

Аналогом изобретения является монография академика РАСХН И.А. Бакулова [1] где указано, что ".задача вакцинации может быть решена с помощью живых вакцин из аттенуированных штаммов. при создании средств специфической профилактики нужно учитывать антигенное различие штаммов листерий. Вакцина должна быть коливалентной или состоять хотя бы из 2-х штаммов, являющихся представителями 2-х серогрупп". An analogue of the invention is a monograph by academician of RAAS I.A. Bakulova [1] where it is indicated that “the vaccination task can be solved with the help of live vaccines from attenuated strains. When creating specific prophylaxis means, the antigenic difference of Listeria strains must be taken into account. The vaccine must be covalent or consist of at least 2 strains that are representatives of 2 serogroups. "

Прототипом изобретения является штамм листерий АУФ I серогруппа, полученный в результате облучения вирулентного штамма А ультрафиолетовыми лучами, используемый в настоящее время для производства листериозной вакцины [2]
Основной недостаток прототипа заключается в том, что указанный штамм является реверсибельным. За последние несколько лет участились случаи заболевания сельскохозяйственных животных после их вакцинации вакциной из штамма АУФ. Данная закономерность привела к тому, что по решению Главного ветеринарного управления вакцина из штамма АУФ используется только в хозяйствах, неблагополучных по листериозу. В районах, где листериоз не регистрируется, вакцину не применяют, т.к. стремятся предотвратить появление стационарного очага листериоза, возникающего за счет рассеивания бактериальной культуры посредством вакцинации животных.The prototype of the invention is a listeria strain AUF I serogroup, obtained by irradiation of virulent strain A with ultraviolet rays, currently used for the production of listeriosis vaccine [2]
The main disadvantage of the prototype is that the strain is reversible. Over the past few years, cases of disease in farm animals after vaccination with a vaccine from the AUF strain have become more frequent. This pattern has led to the fact that, according to the decision of the Main Veterinary Administration, the vaccine from the AUF strain is used only in farms that are dysfunctional for listeriosis. In areas where listeriosis is not registered, the vaccine is not used, because seek to prevent the appearance of a stationary focus of listeriosis, arising from the dispersion of the bacterial culture through vaccination of animals.

Целью изобретения является штамм L. monocytogenes УСХИ-19 относящийся к I серогруппе, отвечающий всем требованиям, необходимым для создания вакцинного препарата, в т.ч. обладающий максимальным набором антигенных детерминант, свойственных штаммам I серогруппы. The aim of the invention is a strain of L. monocytogenes USHI-19 related to serogroup I, which meets all the requirements necessary for the creation of a vaccine preparation, including possessing the maximum set of antigenic determinants characteristic of serogroup I strains.

Сущность изобретения. Полученный штамм бактерий имеет следующую характеристику. SUMMARY OF THE INVENTION The resulting bacterial strain has the following characteristics.

Культуральные свойства. Бактериальная культура указанного штамма хорошо растет в мясо-пептонном бульоне при 30^oC. МПБ в первые сутки слегка мутнеет, помутнение равномерно, при встряхивании пробирки наблюдаются так называемые муаровые волны. Через 2-4 сут бульон в пробирке светлее, а на дне ее образуется слизистый осадок, которым при встряхивании поднимается косичкой. На мясо-пептонном желатине (МПЖ) при посеве уколом культуры листерий дают через двое суток рост в виде штыка только по ходу укола, разжижение желатины не наблюдается. В бульоне Китт-Тароцци рост листерий характеризуется очень слабым помутнением среды.Cultural properties. The bacterial culture of this strain grows well in meat-peptone broth at 30 ^o C. In the first day the MPB becomes slightly cloudy, turbidity evenly, so-called moire waves are observed when the tube is shaken. After 2-4 days, the broth in the test tube is lighter, and at the bottom of it the mucous precipitate forms, which, when shaken, rises with a pigtail. On meat-peptone gelatin (MJ) when sowing with an injection of Listeria culture, after two days they grow in the form of a bayonet only along the injection, gelatin liquefaction is not observed. In Kitt-Tarozzi broth, the growth of listeria is characterized by a very slight turbidity of the medium.

На мясо-пептонном агаре (МПА) в первые сутки роста обнаруживаются мелкие (0,205 мм в диаметре) прозрачные в проходящем свете слегка выпуклые колонии. Через 2-3 сут колонии увеличиваются в размере (до 1-3 мм в диаметре), становятся более плоскими и приобретают сероватый оттенок при дающем свете. On the meat-peptone agar (MPA) on the first day of growth, small (0.205 mm in diameter), slightly convex colonies transparent in transmitted light are found. After 2-3 days, the colonies increase in size (up to 1-3 mm in diameter), become flatter and acquire a grayish tint in giving light.

Морфология. В мазках культур листериозного штамма, приготовленных с МПА и МПБ, окрашенных по Граму, наблюдали грамположительные палочки, расположенные одиночно и парами, подвижные. Morphology. Gram-positive bacilli, located singly and in pairs, mobile, were observed in smears of cultures of the listeriosis strain prepared with MPA and MPB stained by Gram.

Биохимические свойства. Бактериальная культура данного штамма ферментирует образованием кислоты без газа: глюкозу, мальтозу, рамнозу, салицин, фруктозу. Не ферментирует: дульцит, инсулин, маннит обеспечивает лакмусовое молоко, индол не образует. На кровяном агаре не вызывает гемолиз. Biochemical properties. The bacterial culture of this strain is fermented by the formation of an acid without gas: glucose, maltose, ramnose, salicin, fructose. Not fermented: dulcite, insulin, mannitol provides litmus milk, indole does not form. Blood agar does not cause hemolysis.

По результатам постановки пробы роста штамм УСХИ-19 отнесен к I серогруппе. According to the results of staging a growth sample, strain USHI-19 is assigned to serogroup I.

Пример. Основными критериями вакционного штамма являются показатели реверсибельности, вирулентности, длительности персистирования, локализации, иммуногенности. Example. The main criteria for a vaccine strain are indicators of reversibility, virulence, duration of persistence, localization, immunogenicity.

Реверсибельность штамма. В результате десятикратного нассирования через организм белых мышей величина дозы LD₅₀ штамма УСХИ-19 до опыта и после опыта была в пределах 0,79±0,02 млрд.м.т./мл, т.е. реверсибельность у данного штамма отсутствует.The reversibility of the strain. As a result of ten-fold screening through the organism of white mice, the dose value LD _{50 of the} strain USHI-19 before and after the experiment was in the range of 0.79 ± 0.02 billion mt / ml, i.e. reversibility in this strain is absent.

Вирулентные свойства. Культура штамма УСХИ-19 не вызывает гибель кроликов при внутрибрюшинном введении в дозах, соответственно 5 и 10 млрд. микробных клеток. Проба Антона отрицательна. Virulent properties. The culture of strain USHI-19 does not cause death of rabbits when administered intraperitoneally at doses of 5 and 10 billion microbial cells, respectively. The test of Anton is negative.

Персистирование и локализация. В табл. 1 приведена характеристика штамма УСХИ-19 по персистированию и локализации на морских свинках путем внутрибрюшинного введения бактериальной суспензии в дозе 10 млрд.м.т. Persistence and localization. In the table. Figure 1 shows the characteristic of strain USHI-19 for persistence and localization in guinea pigs by intraperitoneal injection of a bacterial suspension at a dose of 10 billion m.t.

Таким образом, процесс вакцинной генерализации достигает максимального развития в первые 3 сут, что свидетельствует о быстроте вовлечения организма животного в иммунную перестройку. Бактериальная культура была локализована во всех исследуемых объектах за исключением головного мозга. Thus, the process of vaccine generalization reaches its maximum development in the first 3 days, which indicates the speed of involvement of the animal organism in immune restructuring. Bacterial culture was localized in all studied objects with the exception of the brain.

Иммуногенные свойства. Характеристика штамма по иммуногенным свойствам приведена в табл. 2. Immunogenic properties. The characteristics of the strain by immunogenic properties are given in table. 2.

Эти данные свидетельствуют, что штамм УСХИ-19 обладает иммуногенными свойствами. These data indicate that the strain USHI-19 has immunogenic properties.

Перечисленные выше данные указывают на возможность использованного штамма в качестве вакцинного. The above data indicate the possibility of the used strain as a vaccine.

Claims

The bacterial strain Listeria monocytogenes VGNKI N USHI-19-DEPT used for the manufacture of a vaccine against listeriosis.