RU2824493C1 - Strain of bacteria actinobacillus pleuropneumoniae serotype 8, intended for production of mono- and polyvalent immunogenic compositions aimed at specific prevention of porcine actinobacillus pleuropneumoniae - Google Patents
Strain of bacteria actinobacillus pleuropneumoniae serotype 8, intended for production of mono- and polyvalent immunogenic compositions aimed at specific prevention of porcine actinobacillus pleuropneumoniae Download PDFInfo
- Publication number
- RU2824493C1 RU2824493C1 RU2023133573A RU2023133573A RU2824493C1 RU 2824493 C1 RU2824493 C1 RU 2824493C1 RU 2023133573 A RU2023133573 A RU 2023133573A RU 2023133573 A RU2023133573 A RU 2023133573A RU 2824493 C1 RU2824493 C1 RU 2824493C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- actinobacillus pleuropneumoniae
- pigs
- pleuropneumonia
- mono
- Prior art date
Links
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 title claims abstract description 63
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 12
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 32
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 31
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 21
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims description 17
- 201000006509 pleuropneumonia Diseases 0.000 claims description 17
- 201000006465 actinobacillosis Diseases 0.000 claims description 14
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 14
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 13
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- JVTIXNMXDLQEJE-UHFFFAOYSA-N 2-decanoyloxypropyl decanoate 2-octanoyloxypropyl octanoate Chemical compound C(CCCCCCC)(=O)OCC(C)OC(CCCCCCC)=O.C(=O)(CCCCCCCCC)OCC(C)OC(=O)CCCCCCCCC JVTIXNMXDLQEJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 claims description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 9
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 6
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- ACTOXUHEUCPTEW-BWHGAVFKSA-N 2-[(4r,5s,6s,7r,9r,10r,11e,13e,16r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-5-[(2s,4r,5s,6s)-4,5-dihydroxy-4,6-dimethyloxan-2-yl]oxy-4-(dimethylamino)-3-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-10-[(2s,5s,6r)-5-(dimethylamino)-6-methyloxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-5-methoxy-9,16-dimethyl-2-o Chemical compound O([C@H]1/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)C[C@@H](O)[C@@H]([C@H]([C@@H](CC=O)C[C@H]1C)O[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C2)[C@@H](C)O1)N(C)C)O)OC)[C@@H]1CC[C@H](N(C)C)[C@@H](C)O1 ACTOXUHEUCPTEW-BWHGAVFKSA-N 0.000 description 3
- 241000606750 Actinobacillus Species 0.000 description 3
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 3
- SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N Baytril Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(C(=C1)F)=CC2=C1C(=O)C(C(O)=O)=CN2C1CC1 SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004099 Chlortetracycline Substances 0.000 description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 3
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004104 Oleandomycin Substances 0.000 description 3
- RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N Oleandomycin Natural products O1C(C)C(O)C(OC)CC1OC1C(C)C(=O)OC(C)C(C)C(O)C(C)C(=O)C2(OC2)CC(C)C(OC2C(C(CC(C)O2)N(C)C)O)C1C RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004187 Spiramycin Substances 0.000 description 3
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfisoxazole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 3
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 3
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 229960001139 cefazolin Drugs 0.000 description 3
- MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N cefazolin Chemical compound S1C(C)=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CN3N=NN=C3)[C@H]2SC1 MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N 0.000 description 3
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 3
- GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N cefotaxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)/C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N 0.000 description 3
- 229960000466 cefpirome Drugs 0.000 description 3
- DKOQGJHPHLTOJR-WHRDSVKCSA-N cefpirome Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C[N+]=3C=4CCCC=4C=CC=3)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 DKOQGJHPHLTOJR-WHRDSVKCSA-N 0.000 description 3
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 3
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 3
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 description 3
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 3
- CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N chlorotetracycline Natural products C1=CC(Cl)=C2C(O)(C)C3CC4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004475 chlortetracycline Drugs 0.000 description 3
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 3
- CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N chlortetracycline Chemical compound C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N 0.000 description 3
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 3
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 3
- 229960000740 enrofloxacin Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960000308 fosfomycin Drugs 0.000 description 3
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 3
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 3
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 3
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- OGJPXUAPXNRGGI-UHFFFAOYSA-N norfloxacin Chemical compound C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCNCC1 OGJPXUAPXNRGGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001180 norfloxacin Drugs 0.000 description 3
- 235000019367 oleandomycin Nutrition 0.000 description 3
- RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N oleandomycin Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@H](C)[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@]2(OC2)C[C@H](C)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N 0.000 description 3
- 229960002351 oleandomycin Drugs 0.000 description 3
- 230000010494 opalescence Effects 0.000 description 3
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 description 3
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 3
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 3
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 3
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 235000019372 spiramycin Nutrition 0.000 description 3
- 229960001294 spiramycin Drugs 0.000 description 3
- 229930191512 spiramycin Natural products 0.000 description 3
- SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N sulfadiazine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NC=CC=N1 SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004306 sulfadiazine Drugs 0.000 description 3
- 229960000654 sulfafurazole Drugs 0.000 description 3
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001478285 Actinobacillus pleuropneumoniae serovar 2 Species 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N O4-alpha-D-Mannopyranosyl-D-mannose Natural products O=CC(O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 description 2
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 2
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000007330 chocolate agar Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 2
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229960002160 maltose Drugs 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000011324 primary prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 101000657454 Actinobacillus pleuropneumoniae RTX-I toxin determinant A from serotypes 1/9 Proteins 0.000 description 1
- 241000122975 Actinobacillus pleuropneumoniae serovar 1 Species 0.000 description 1
- 241000178944 Actinobacillus pleuropneumoniae serovar 5 Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010004053 Bacterial toxaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101150031639 IV gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000606752 Pasteurellaceae Species 0.000 description 1
- 208000013222 Toxemia Diseases 0.000 description 1
- 108010031127 Transferrin-Binding Protein B Proteins 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003948 anatoxin Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 101150099390 apxIIA gene Proteins 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 244000144987 brood Species 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 235000020680 filtered tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005571 horizontal transmission Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- -1 hydrogen ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000004466 pelleted feed Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001523 saccharolytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037921 secondary disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Abstract
Description
Область техникиField of technology
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, иммунологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве и контроле инактивированных иммунобиологических средств в виде моно- и поливалентных препаратов, предназначенных для профилактики инфекции свиней, вызванной Actinobacillus pleuropneumoniae.The invention relates to the field of veterinary microbiology, immunology and biotechnology and can be used in the production and control of inactivated immunobiological agents in the form of mono- and polyvalent preparations intended for the prevention of pig infection caused by Actinobacillus pleuropneumoniae.
Уровень техникиState of the art
Актинобациллезная плевропневмония (АПП) - тяжелое, контагиозное респираторное заболевание свиней, преимущественно поросят в возрасте до 6 месяцев, а также среди ремонтного и родительского поголовья. По мнению отдельных исследователей развитие и распространение патологии зависит от наличия предрасполагающих триггеров. Есть и другое мнение, согласно которому АПП является самостоятельным заболеванием, на которое наслаиваются вторичные патогены. По мнению авторов настоящего изобретения, оба предположения верны, ввиду существования низко и высокопатогенных серотипов актинобацилл.Actinobacillus pleuropneumonia (APP) is a severe, contagious respiratory disease of pigs, mainly piglets under 6 months of age, as well as among replacement and parent stock. According to some researchers, the development and spread of the pathology depends on the presence of predisposing triggers. There is another opinion, according to which APP is an independent disease, on which secondary pathogens are superimposed. According to the authors of the present invention, both assumptions are correct, due to the existence of low and highly pathogenic serotypes of actinobacilli.
АПП характеризуется внезапной вспышкой, острым течением, высокой заболеваемостью и смертностью. При данном заболевании отмечается токсемия, гнойное/геморрагическое воспаление легких, воспаление наружной оболочки сердца и плевры, артриты [Получение анатоксинов Actinobacillus pleuropneumoniae и изучение их свойств. Лебедев Никита Викторович, автореферат, 2013].APP is characterized by a sudden outbreak, acute course, high morbidity and mortality. This disease is characterized by toxemia, purulent/hemorrhagic pneumonia, inflammation of the outer membrane of the heart and pleura, arthritis [Obtaining Actinobacillus pleuropneumoniae anatoxins and studying their properties. Lebedev Nikita Viktorovich, author's abstract, 2013].
В настоящее время возбудитель АПП (Actinobacillus pleuropneumoniae) классифицируют следующим образом: семейство Pasteurellaceae, род Actinobacillus, который в свою очередь включает 18 видов: anseriformium, arthritidis, capsulatus, delphinicola, equuli, hominis, indolicus, lignieresii, minor, pleuropneumoniae, porcinus, rossii, scotiae, seminist, succinogenes, suis, ureae, vicugnae.Currently, the causative agent of APP (Actinobacillus pleuropneumoniae) is classified as follows: family Pasteurellaceae, genus Actinobacillus, which in turn includes 18 species: anseriformium, arthritidis, capsulatus, delphinicola, equuli, hominis, indolicus, lignieresii, minor, pleuropneumoniae, porcinus, rossii, scotiae, seminist, succinogenes, suis, ureae, vicugnae.
В настоящее время выделяют 19 серотипов A. pleuropneumoniae. По данным F. Haesebrouck и других авторов, вирулентность может зависеть от биотипа и/или серотипа возбудителя [Actinobacillus pleuropneumoniae infections in pigs: the role of virulence factors in pathogenesis and protection F. Haesebrouck, K. Chiers, I. Van Overbeke, R. Ducatelle/ Veterinary Microbiology.V. 58, Is. 2-4, 1997, P. 239-249].Currently, 19 serotypes of A. pleuropneumoniae are distinguished. According to F. Haesebrouck and other authors, virulence may depend on the biotype and/or serotype of the pathogen [Actinobacillus pleuropneumoniae infections in pigs: the role of virulence factors in pathogenesis and protection F. Haesebrouck, K. Chiers, I. Van Overbeke, R. Ducatelle/ Veterinary Microbiology. V. 58, Is. 2-4, 1997, P. 239-249].
Источником возбудителя являются больные животные, а также бактерионосители. Пути передачи: контактно, аэрогенно. Возбудитель АПП обладает выраженной тропностью к тканям воздухоносных путей, может передаваться как от зараженных животных здоровым, так и от свиноматки поросятам [Actinobacillus pleuropneumoniae surface polysaccharides: their role in diagnosis and immunogenicity / J.D. Dubreuil, M. Jacques, K.R. Mittal, M. Gottschalk // Anim. Health Res. - 2000. - Vol.2. - P.73-93].The source of the pathogen is sick animals, as well as carriers of bacteria. Transmission routes: contact, airborne. The causative agent of APP has a pronounced tropism for the tissues of the airways, and can be transmitted both from infected animals to healthy ones and from a sow to piglets [Actinobacillus pleuropneumoniae surface polysaccharides: their role in diagnosis and immunogenicity / J.D. Dubreuil, M. Jacques, K.R. Mittal, M. Gottschalk // Anim. Health Res. - 2000. - Vol.2. - P.73-93].
К возбудителю восприимчивы свиньи всех возрастов и разных пород. На фермах могут одновременно циркулировать несколько серотипов. При внутрибрюшинном и интраназальном заражении чувствительны белые мыши и морские свинки.Pigs of all ages and different breeds are susceptible to the pathogen. Several serotypes may circulate simultaneously on farms. White mice and guinea pigs are susceptible to intraperitoneal and intranasal infection.
Эффективная профилактика и борьба с актинобациллезной плевропневмонией включает: соблюдение ветеринарных мероприятий (иммунизация, применение антибактериальных средств, витаминов), зоотехнических и технологических мер. Effective prevention and control of actinobacillosis pleuropneumonia includes: compliance with veterinary measures (immunization, use of antibacterial agents, vitamins), zootechnical and technological measures.
Вакцины против АПП разделяют на субъединичные (токсоидные) и цельноклеточные (корпускулярные). Токсоидные препараты уменьшают заболеваемость и проявление симптомов болезни, бактерин-токсоидные, и на основе бактерина защищают от гомологичного серовара. Некоторые субъединичные вакцины содержат токсины Apx в сочетании с капсульным антигеном или белком наружной мембраны. Компания Novartis разработала бесклеточную пятивалентную субъединичную вакцину «Pleurostar», которая показала ограниченную защиту от тяжелого заражения АПП серотипа 9. Вакцина была получена с использованием рекомбинантных антигенов АПП и содержала в своем составе трансферринсвязывающий белок В. Что касается живых аттенуированных вакцин, то важно чтобы штамм обладал высокоиммуногенным свойством и был авирулентным либо слабовирулентным, вызывал переболевание в легкой степени, потеряв способность к горизонтальной передаче.Vaccines against APP are divided into subunit (toxoid) and whole-cell (corpuscular). Toxoid preparations reduce the incidence and manifestation of symptoms of the disease, bacterin-toxoid and bacterin-based protect against the homologous serovar. Some subunit vaccines contain Apx toxins in combination with a capsular antigen or outer membrane protein. Novartis has developed an acellular pentavalent subunit vaccine "Pleurostar", which has shown limited protection against severe infection with APP serotype 9. The vaccine was obtained using recombinant APP antigens and contained transferrin-binding protein B. As for live attenuated vaccines, it is important that the strain has a highly immunogenic property and is avirulent or weakly virulent, causing a mild degree of disease, having lost the ability to horizontal transmission.
Из уровня техники известен иммуногенный и негемолитический штамм Actinobacillus pleuropneumoniae, депонированный в Испанской коллекции типовых культур под регистрационным номером СЕСТ 5994, для приготовления живой аттенуированной вакцины против свиной плевропневмонии [RU2351360]. Штамм характеризуется тем, что он имеет делецию последовательности нуклеотидов 886-945 гена apxI, которая кодирует вторую трансмембрану экзотоксина Apxl и, кроме того, делецию последовательности нуклеотидов 886-945 гена apxIIA, которая кодирует вторую трансмембрану экзотоксина ApxII.An immunogenic and non-hemolytic strain of Actinobacillus pleuropneumoniae, deposited in the Spanish Collection of Type Cultures under registration number CECT 5994, is known from the state of the art for the preparation of a live attenuated vaccine against porcine pleuropneumonia [RU2351360]. The strain is characterized in that it has a deletion of the nucleotide sequence 886-945 of the apxI gene, which encodes the second transmembrane of the exotoxin ApxI, and, in addition, a deletion of the nucleotide sequence 886-945 of the apxIIA gene, which encodes the second transmembrane of the exotoxin ApxII.
Из уровня техники известен штамм Actinobacillus pleuropneumoniae серотипа 2 KVCC-BA1200398 (KACC 91766P), депонированный в Корейской коллекции сельскохозяйственных культур Института сельскохозяйственной биотехнологии, который может быть использован для получения вакцинной композиции для профилактики плевропневмонии свиней [KR101491803B1]. Также известен другой штамм Actinobacillus pleuropneumoniae серотипа 2 CCTCC NO:M2011410, предназначенный для создания вакцинного препарата против плевропневмонии свиней [CN102391975B].The strain Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2 KVCC-BA1200398 (KACC 91766P) is known from the prior art and is deposited in the Korean Collection of Agricultural Crops of the Institute of Agricultural Biotechnology, which can be used to obtain a vaccine composition for the prevention of porcine pleuropneumonia [KR101491803B1]. Another strain Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2 CCTCC NO:M2011410 is also known, intended for the creation of a vaccine preparation against porcine pleuropneumonia [CN102391975B].
Из уровня техники известен штамм Actinobacillus pleuropneumoniae серотипа 1 KVCC-BA1200396 (KACC 91772P), депонированный в Корейской коллекции сельскохозяйственных культур Института сельскохозяйственной биотехнологии, пригодного для диагностики и вакцинации плевральной пневмонии, вызванной домашними свиньями [KR101491795B1].The state of the art discloses a strain of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 KVCC-BA1200396 (KACC 91772P), deposited in the Korean Collection of Agricultural Crops of the Institute of Agricultural Biotechnology, suitable for the diagnosis and vaccination of pleural pneumonia caused by domestic pigs [KR101491795B1].
Из уровня техники известен штамм Actinobacillus pleuropneumoniae серотипа 12 KVCC-BA1200404 (KACC 91770P), депонированный в Корейской коллекции сельскохозяйственных культур Института сельскохозяйственной биотехнологии, пригодного для диагностики и вакцинации плевральной пневмонии, вызванной домашними свиньями [KR101491793B1]. Также известен другой штамм Actinobacillus pleuropneumoniae серотипа 12 SDHG-1 CCTCC NO: M2021204, депонированный в Китайском центре коллекции типовых культур в Уханьском университете, город Ухань, Хубэй, Китай [CN113186120A].The prior art discloses a strain of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 12 KVCC-BA1200404 (KACC 91770P) deposited in the Korean Collection of Agricultural Crops, Institute of Agricultural Biotechnology, suitable for diagnosis and vaccination of pleural pneumonia caused by domestic pigs [KR101491793B1]. Another strain of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 12 SDHG-1 CCTCC NO: M2021204 deposited in the China Center for Type Culture Collection, Wuhan University, Wuhan City, Hubei, China [CN113186120A] is also known.
Из уровня техники известен штамм Actinobacillus pleuropneumoniae серотипа 5 KVCC-BA1200401 (KACC 91768P), депонированный в Корейской коллекции сельскохозяйственных культур Института сельскохозяйственной биотехнологии, пригодного для диагностики и вакцинации плевральной пневмонии, вызванной домашними свиньями [KR101491792B1].The state of the art discloses a strain of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 5 KVCC-BA1200401 (KACC 91768P), deposited in the Korean Agricultural Crops Collection of the Institute of Agricultural Biotechnology, suitable for diagnosis and vaccination of pleural pneumonia caused by domestic pigs [KR101491792B1].
АПП является одним из наиболее важных бактериальных заболеваний респираторного тракта свиней. Поскольку микроорганизм и болезнь, которую указанный микроорганизм вызывает, были изучены широко и подробно, то имеющиеся знания были использованы для разработки новых вакцин и диагностических методов и для предложения относительно высокоэффективных программ ликвидации заболевания. Тем не менее, лучшие и наиболее экономичные методы борьбы с этим заболеванием все еще остаются предметом обсуждения. Таким образом, сохраняется необходимость в разработке и создании новых средств и подходов, направленных на профилактику АПП у свиней.APP is one of the most important bacterial respiratory diseases of pigs. Since the microorganism and the disease it causes have been studied extensively and in detail, the available knowledge has been used to develop new vaccines and diagnostic methods and to propose relatively effective eradication programs. However, the best and most cost-effective methods to control this disease are still under debate. Therefore, there is a continuing need to develop and develop new tools and approaches aimed at preventing APP in pigs.
Раскрытие сущности изобретения Disclosure of the essence of the invention
Задачей, на решение которой направлено данное изобретение, является получение нового штамма бактерии Actinobacillus pleuropneumoniae, отвечающего требованиям, предъявляемым к производственным штаммам (по культуральным, ростовым, морфологическим, тинкториальным, биологическим, антигенным, иммуногенным и т. д. свойствам) и пригодного для конструирования и производства высокоэффективных иммунобиологических средств, в частности моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней.The task that this invention is aimed at solving is to obtain a new strain of the bacterium Actinobacillus pleuropneumoniae that meets the requirements imposed on production strains (in terms of cultural, growth, morphological, tinctorial, biological, antigenic, immunogenic, etc. properties) and is suitable for the design and production of highly effective immunobiological agents, in particular mono- and polyvalent immunogenic compositions aimed at the specific prevention of actinobacillosis pleuropneumonia in pigs.
Поставленная задача решается путем получения штамма Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423, депонированного во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных (Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук - ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) под номером B-1423 и предназначенного для получения моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней. The set task is solved by obtaining the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423, deposited in the All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms Causing Infectious Diseases of Animals (Federal Scientific Center - All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after K.I. Skryabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences - FSBSI FSC VIEV RAS) under number B-1423 and intended for obtaining a mono- or polyvalent immunogenic composition for the prevention of actinobacillus pleuropneumonia in pigs.
Кроме того, настоящее изобретение включает применение Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423, депонированного во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных (Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук - ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) под номером B-1423, для получения иммунобиологического средства, в частности моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней.In addition, the present invention includes the use of Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423, deposited in the All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms Causing Infectious Diseases of Animals (Federal Scientific Center - All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after K.I. Skryabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences - FSBSI FSC VIEV RAS) under number B-1423, for obtaining an immunobiological agent, in particular a mono- or polyvalent immunogenic composition for the prevention of actinobacillus pleuropneumonia in pigs.
Предметом настоящего изобретения также является иммуногенная композиция для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней, включающая профилактически эффективное количество инактивированного протективного штамма по изобретению, адъювант и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.The subject of the present invention is also an immunogenic composition for the prevention of actinobacillosis pleuropneumonia in pigs, comprising a prophylactically effective amount of an inactivated protective strain according to the invention, an adjuvant and at least one pharmaceutically acceptable auxiliary substance.
В частных вариантах воплощения изобретения вспомогательное вещество представляет собой растворитель, наполнитель. В некоторых вариантах воплощения изобретения растворитель выбирается независимо и представляет собой стерильный физиологический раствор, стерильную воду для инъекций, стерильный фосфатно-буферный раствор и т.д. В некоторых частных вариантах воплощения изобретения вспомогательное вещество представляет собой щелочь, мертиолят натрия.In particular embodiments of the invention, the auxiliary substance is a solvent, filler. In some embodiments of the invention, the solvent is selected independently and is a sterile physiological solution, sterile water for injection, sterile phosphate buffer solution, etc. In some particular embodiments of the invention, the auxiliary substance is an alkali, sodium thimerosalate.
В частных вариантах воплощения изобретения адъювант выбирается независимо и представляет собой гидроксид алюминия, ПЭГ-6000, карбапол, масляный адъювант. Более конкретно масляный адъювант представляет собой адъювант марки MONTANIDE ISA 206. В некоторых частных вариантах карбапол представляет собой карбапол марки Carbopol 971Р.In particular embodiments of the invention, the adjuvant is selected independently and is aluminum hydroxide, PEG-6000, carbapol, an oil adjuvant. More specifically, the oil adjuvant is an adjuvant of the MONTANIDE ISA 206 brand. In some particular embodiments, carbapol is carbapol of the Carbopol 971P brand.
Кроме того, предметом настоящего изобретения также является способ профилактики актинобациллезной плевропневмонии у субъекта, включающий введение композиции по изобретению субъекту.In addition, the subject of the present invention is also a method for preventing actinobacillus pleuropneumonia in a subject, comprising administering a composition according to the invention to the subject.
В частных вариантах воплощения изобретения субъект представляет собой свиней. In particular embodiments of the invention, the subject is a pig.
Настоящее изобретение также включает способ получения иммунобиологических средств, в частности моно- или поливалентных иммуногенных композиций для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней, который осуществляют посредством штамма по изобретению.The present invention also includes a method for producing immunobiological agents, in particular mono- or polyvalent immunogenic compositions for the prevention of actinobacillosis pleuropneumonia in pigs, which is carried out using the strain according to the invention.
Настоящее изобретение также включает применение штамма по изобретению для оценки эффективности иммуногенных композиций для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней.The present invention also includes the use of the strain of the invention for evaluating the effectiveness of immunogenic compositions for the prevention of actinobacillus pleuropneumonia in pigs.
В результате осуществления изобретения достигаются следующие технические результаты:As a result of implementing the invention, the following technical results are achieved:
- получен новый штамм Actinobacillus pleuropneumoniae, депонированный во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН под номером B-1423 и предназначенный для получения моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней;- a new strain of Actinobacillus pleuropneumoniae was obtained, deposited in the All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms Causing Infectious Diseases of Animals of the Federal Scientific Center of Experimental Veterinary Medicine of the Russian Academy of Sciences under number B-1423 and intended for obtaining a mono- or polyvalent immunogenic composition for the prevention of actinobacillus pleuropneumonia in pigs;
- штамм по изобретению отвечает требованиям, предъявляемым к производственным штаммам (по культуральным, ростовым, морфологическим, тинкториальным, биологическим, антигенным, иммуногенным и т. д. свойствам) и пригоден для конструирования и производства высокоэффективных иммунобиологических средств, в частности моно- или поливалентных иммуногенных композиций для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней;- the strain according to the invention meets the requirements imposed on production strains (in terms of cultural, growth, morphological, tinctorial, biological, antigenic, immunogenic, etc. properties) and is suitable for the design and production of highly effective immunobiological agents, in particular mono- or polyvalent immunogenic compositions for the prevention of actinobacillosis pleuropneumonia in pigs;
- использование штамма по изобретению при производстве иммунобиологических средств позволит повысить уровень эпизоотического благополучия по актинобациллезной плевропневмонии свиней;- the use of the strain according to the invention in the production of immunobiological agents will increase the level of epizootic welfare for actinobacillosis pleuropneumonia in pigs;
- получена эффективная иммуногенная композиция на основе штамма по изобретению, которая предназначена для профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней;- an effective immunogenic composition based on the strain according to the invention has been obtained, which is intended for the prevention of actinobacillosis pleuropneumonia in pigs;
- разработан эффективный способ профилактики актинобациллезной плевропневмонии у субъекта, включающий введение композиции по изобретению субъекту.- an effective method for preventing actinobacillosis pleuropneumonia in a subject has been developed, which includes administering a composition according to the invention to the subject.
Изобретение также служит средством расширения арсенала моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней, обладает стабильностью, а также высокой антигенной, иммуногенной и протективной активностью.The invention also serves as a means of expanding the arsenal of mono- or polyvalent immunogenic compositions aimed at specific prevention of actinobacillosis pleuropneumonia in pigs, has stability, as well as high antigenic, immunogenic and protective activity.
Подробное раскрытие изобретенияDetailed disclosure of the invention
Определение и терминыDefinition and terms
Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приведены некоторые термины, использованные в настоящем описании изобретения. Следующие определения применяются в данном документе, если иное не указано явно.For a better understanding of the present invention, some terms used in the present description of the invention are provided below. The following definitions apply herein unless otherwise explicitly stated.
В настоящем описании и в последующей формуле изобретения, если контекстом не предусмотрено иное, слова «иметь», «включать» и «содержать» или их вариации, например такие как «имеет», «имеющий», «включает», «включающий», «содержит» или «содержащий», следует понимать, как включение указанного целого или группы целых, но не исключение любого другого целого или группы целых. Указанные термины не предназначены для того, чтобы их истолковывали как «состоит только из».In the present description and in the following claims, unless the context otherwise requires, the words "have," "include," and "comprise," or variations thereof, such as "has," "having," "includes," "including," "contains," or "comprising," are to be understood as including the stated whole or group of wholes, but not excluding any other whole or group of wholes. These terms are not intended to be construed as "consists only of."
Термин «и/или» означает один, несколько или все перечисленные элементы.The term "and/or" means one, more, or all of the listed elements.
Также здесь перечисление числовых диапазонов по конечным точкам включает все числа, входящие в этот диапазон.Also here, listing numeric ranges by endpoints includes all numbers within that range.
Термин «антиген» обозначает любое вещество, которое организм субъекта рассматривает как чужеродное или потенциально опасное и против которого организм может индуцировать (запускать) иммунный ответ. Это могут быть компоненты инфекционного агента, такие как, например, фрагменты белков бактерии, а также инфекционные агенты, сохранившие, хотя бы частично, присущую им структуру.The term "antigen" refers to any substance that the subject's body regards as foreign or potentially dangerous and against which the body can induce (launch) an immune response. These may be components of an infectious agent, such as fragments of bacterial proteins, as well as infectious agents that have retained, at least partially, their inherent structure.
Под штаммом Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 понимается как штамм Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423, который депонирован во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных (Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук - ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) под номером B-1423, так и полученный с использованием депонированного штамма в качестве исходного материала (например, мутант, вариант), и сохраняющий все свойства исходного штамма, т.е. обладающий всеми определяющими штамм Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 (идентифицирующими) характеристиками. В том, числе, по меньшей мере, пригодный для получения моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней. The strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 is understood to mean both the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423, which is deposited in the All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms Causing Infectious Diseases of Animals (Federal Scientific Center - All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after K.I. Skryabin and Ya.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences - FSBSI FSC VIEV RAS) under the number B-1423, and the one obtained using the deposited strain as the source material (e.g. mutant, variant), and retaining all the properties of the original strain, i.e. possessing all the defining (identifying) characteristics of the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423. Including, at least, suitable for obtaining mono- or polyvalent immunogenic compositions aimed at the specific prevention of actinobacillosis pleuropneumonia in pigs.
Используемый здесь термин «мутант» или «вариант» по отношению к штамму Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 означает модификацию родительского штамма, в котором целевая биологическая активность является подобной активности, выражаемой родительским штаммом. Мутанты или варианты могут возникать в природе без вмешательства человека. Они могут быть получены также путем обработки одним или множеством способов и химических веществ (составов), известных специалистам в данной отрасли или же гамма-, рентгеновским либо ультрафиолетовым излучением, или любыми другими средствами, хорошо известными специалистам в данной отрасли.The term "mutant" or "variant" as used herein with respect to the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 means a modification of the parent strain in which the target biological activity is similar to the activity expressed by the parent strain. Mutants or variants may arise in nature without human intervention. They may also be produced by treatment with one or more methods and chemicals (compositions) known to those skilled in the art, or by gamma, X-ray or ultraviolet radiation, or any other means well known to those skilled in the art.
Термин «профилактика», «предотвращение», «превентивная терапия» охватывает устранение факторов риска, а также профилактическое лечение субклинических стадий заболевания у субъекта, направленное на уменьшение вероятности возникновения клинических стадий заболевания. Субъекты для профилактической терапии отбираются на основе факторов, которые, на основании известных данных, влекут увеличение риска возникновения клинических стадий заболевания. К профилактической терапии относится а) первичная профилактика и б) вторичная профилактика. Первичная профилактика определяется как профилактическое лечение у субъектов, клиническая стадия заболевания у которых ещё не наступила. Вторичная профилактика - это предотвращение повторного наступления того же или близкого клинического состояния заболевания.The term "prophylaxis", "prevention", "preventive therapy" covers the elimination of risk factors as well as prophylactic treatment of subclinical stages of the disease in a subject, aimed at reducing the likelihood of occurrence of clinical stages of the disease. Subjects for prophylactic therapy are selected on the basis of factors that, based on known data, entail an increased risk of occurrence of clinical stages of the disease. Preventive therapy includes a) primary prophylaxis and b) secondary prophylaxis. Primary prophylaxis is defined as prophylactic treatment in subjects who have not yet reached the clinical stage of the disease. Secondary prophylaxis is the prevention of recurrence of the same or a similar clinical state of the disease.
Термин «уменьшение риска» охватывает терапию, которая снижает частоту возникновения клинической стадии заболевания. Примерами уменьшения риска заболевания является первичная и вторичная профилактика заболевания.The term risk reduction refers to therapy that reduces the incidence of clinical disease. Examples of risk reduction include primary and secondary disease prevention.
Под «профилактически эффективным количеством» подразумевается такое количество антигена штамма, вводимого или доставляемого субъекту, при котором у субъекта с наибольшей вероятностью проявится желаемая реакция на профилактику. Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от вида субъекта, способа введения препарата и т.п.By "prophylactically effective amount" is meant that amount of strain antigen administered or delivered to a subject that will most likely result in the desired response to the prophylaxis. The exact amount required may vary from subject to subject, depending on the type of subject, route of administration, etc.
Термин «инактивированный протективный антиген штамма» в данном документе означает «нежизнеспособные» антигены микроорганизма, при введении которых лабораторным или целевым видам животных, способствуют образованию напряженного иммунного ответа, достаточного для обеспечения профилактического эффекта.The term "inactivated protective antigen of a strain" in this document means "non-viable" antigens of a microorganism, which, when administered to laboratory or target animal species, promote the formation of a strong immune response sufficient to ensure a prophylactic effect.
Термин «субъект» охватывает свиней, которые используют штамм и композицию по изобретению путем введения субъекту другим лицом для профилактики заболевания или медицинского состояния.The term "subject" includes pigs that use the strain and composition of the invention by administration to the subject by another person for the prevention of a disease or medical condition.
Термин «вспомогательное вещество» при использовании в настоящем описании относится к веществам, которые не нарушают биологической активности и свойств бактерий и являются приемлемыми для использования в ветеринарии (безопасность для применения в ветеринарии). Частные варианты вспомогательных веществ включают носители или разбавители (растворители), например, воду. The term "excipient" as used herein refers to substances that do not interfere with the biological activity and properties of bacteria and are acceptable for veterinary use (safe for veterinary use). Particular examples of excipients include carriers or diluents (solvents), such as water.
Термин «LD50» - средняя доза вещества, вызывающая гибель половины членов испытуемой группы.The term "LD 50 " is the average dose of a substance that causes death in half of the members of the test group.
Если не определено отдельно, технические и научные термины в данной заявке имеют стандартные значения, общепринятые в научной и технической литературе.Unless otherwise defined, technical and scientific terms in this application have the standard meanings generally accepted in the scientific and technical literature.
Осуществление изобретенияImplementation of the invention
Приведенные ниже примеры являются иллюстративными и тем самым не ограничивают рамки настоящего изобретения.The following examples are illustrative and therefore do not limit the scope of the present invention.
Пример № 1. Штамм микроорганизма Actinobacillus pleuropneumoniae - B-1423.Example No. 1. Strain of the microorganism Actinobacillus pleuropneumoniae - B-1423.
1. Номер штамма в «Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных»: B-14231. Strain number in the “All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms Causing Infectious Diseases of Animals”: B-1423
2. Дата депонирования: 13.06.20232. Deposit date: 06/13/2023
3. Вид микроорганизма: Actinobacillus pleuropneumoniae3. Type of microorganism: Actinobacillus pleuropneumoniae
4. Основание для депонирования: для производства и контроля иммунологических лекарственных, а также диагностических средств против актинобациллезной плевропневмонии свиней.4. Reason for deposit: for the production and control of immunological medicinal and diagnostic agents against actinobacillus pleuropneumonia in pigs.
5. Патогенность: в соответствии с классификацией микроорганизмов-возбудителей инфекционных заболеваний человека, простейших, гельминтов и ядов биологического происхождения по группам патогенности СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней" бактерия вида Actinobacillus pleuropneumoniae не относится ни к одной из четырёх групп патогенности.5. Pathogenicity: in accordance with the classification of microorganisms that cause infectious diseases in humans, protozoa, helminths and poisons of biological origin by pathogenicity groups of SanPiN 3.3686-21 "Sanitary and Epidemiological Requirements for the Prevention of Infectious Diseases", the bacterium of the species Actinobacillus pleuropneumoniae does not belong to any of the four pathogenicity groups.
6. Дата, источник и место выделения: Выделен из легких свиноматки, Белгородская область 2020 год.6. Date, source and place of isolation: Isolated from the lungs of a sow, Belgorod region, 2020.
7. Где идентифицирована культура: лаборатория диагностики и контроля антибиотикорезистентности возбудителей наиболее клинически значимых инфекционных болезней животных ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН.7. Where the culture was identified: laboratory for diagnostics and control of antibiotic resistance of pathogens of the most clinically significant infectious diseases of animals, Federal Scientific Center of All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine, Russian Academy of Sciences.
8. Методы идентификации: штамм был идентифицирован на основании изучения культуральных, морфологических, ферментативных, токсигенных свойств, а также с помощью масспектрального анализа; молекулярно-генетических свойств на наличие гена Apx IV (общего маркера).8. Identification methods: the strain was identified based on the study of cultural, morphological, enzymatic, and toxigenic properties, as well as using mass spectral analysis; molecular genetic properties for the presence of the Apx IV gene (common marker).
9. Морфологические признаки: мелкие грамотрицательные короткие не спорообразующие палочки, расположенные одиночно, реже парами, неподвижные. Образует капсулу.9. Morphological features: small gram-negative short non-spore-forming rods, located singly, less often in pairs, non-motile. Forms a capsule.
10. Культуральные особенности: колонии штамма серовато-белые, с гладкой поверхностью на шоколадном агаре. На 28 час культивирования колонии достигают 1-2 мм. На кровяном агаре проявляется зона бета-гемолиза. На бульонных средах (триптон-соевый бульон, сердечно-мозговой бульон и т.д.) рост очень скудный с едва заметным помутнением и опалесценцией при наличии факторов роста.10. Cultural characteristics: colonies of the strain are grayish-white, with a smooth surface on chocolate agar. On the 28th hour of cultivation, the colonies reach 1-2 mm. On blood agar, a beta-hemolysis zone appears. On broth media (tryptone soy broth, brain heart broth, etc.), growth is very sparse with barely noticeable turbidity and opalescence in the presence of growth factors.
11. Биохимические свойства: типичные для микроорганизма Actinobacillus pleuropneumoniae. При идентификации штамма в биохимическом наборе Api NH для идентификации бактерий родов Neisseria и Haemophilus (BioMerieux SA), штамм ферментирует D-глюкозу, D-фруктозу, D-мальтозу, D-сахарозу, уреазу, щелочную фосфатазу, β-галактозидазу. Не продуцирует пенициллиназу, орнитиндекарбоксилазу, липазу, пролин ариламидазу, гамма-глутамилтрансфераза и индол.11. Biochemical properties: typical for the microorganism Actinobacillus pleuropneumoniae. When identifying the strain in the Api NH biochemical kit for identifying bacteria of the genera Neisseria and Haemophilus (BioMerieux SA), the strain ferments D-glucose, D-fructose, D-maltose, D-sucrose, urease, alkaline phosphatase, β-galactosidase. It does not produce penicillinase, ornithine decarboxylase, lipase, proline arylamidase, gamma-glutamyltransferase and indole.
12. Серологические свойства: относится к 8 серотипу.12. Serological properties: belongs to serotype 8.
13. Продукция антигенов, ферментов, токсинов: штамм продуцирует токсин Apx III.13. Production of antigens, enzymes, toxins: the strain produces the toxin Apx III.
14. Вирулентность для лабораторных животных: при внутрибрюшинном введении 4 млрд м.к. 7-недельным морским свинкам, гибель животных наступает в течение 2-5 дней.14. Virulence for laboratory animals: with intraperitoneal administration of 4 billion m.c. to 7-week-old guinea pigs, death of the animals occurs within 2-5 days.
15. Устойчивость к антибактериальным препаратам: штамм чувствителен к амоксиклаву, ампициллину, бензилпенициллину, кларитромицину, рифампицину, сульфадиазину, сульфафуразолу, фосфомицину, хлортетрациклину, цефазолину, цефалексину, цефотаксиму, цефпирому, цефтриаксону, энрофлоксацину. Штамм резистентен к бацитрацину, гентамицину, левофлоксацину, линкомицину, норфлоксацину, олеандомицину, спирамицину.15. Resistance to antibacterial drugs: the strain is sensitive to amoxiclav, ampicillin, benzylpenicillin, clarithromycin, rifampicin, sulfadiazine, sulfafurazole, fosfomycin, chlortetracycline, cefazolin, cephalexin, cefotaxime, cefpirome, ceftriaxone, enrofloxacin. The strain is resistant to bacitracin, gentamicin, levofloxacin, lincomycin, norfloxacin, oleandomycin, spiramycin.
16. Отношение к гомо- и гетерологичным фагам (профаги): не определялось.16. Relationship to homo- and heterologous phages (prophages): not determined.
17. Генетические характеристики: штамм имеет ген токсина (общий маркер) Apx IV. 17. Genetic characteristics: the strain has the toxin gene (common marker) Apx IV.
Нуклеотидная последовательность гена 16S rRNA SEQ ID NO:1:Nucleotide sequence of the 16S rRNA gene SEQ ID NO:1:
agactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatggggggaaccctgatgcagccatgccgcgtgaatgaagaaggccttcgggttgtaaagttctttcggtagcgaggaaggtatcaaatttaatagatttggtaattgacgttaactacagaagaagcaccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggtgcgagcgttaatcggaataactgggcgtaaagggcacgcaggcggttgattaagtgagatgtgaaagccccgggcttaacctgggaattgcatttcatactggtcaactagagtactttagggaggggtagaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaataccgaaggcgaaggcacccccttgggaatgtactgacgctcatgtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgctgtaaacgctgtcgatttggggattgggctttaagtctggtgcccgaagctaacgtgataaatcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttgaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagcaccttacctactcttgacatccatggaatcttatagagatacgagagtaccttcgggaaccatgagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgttgtgaaatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctttgttgccagcgattaggtcgggaactcaaaggagactgcgggtgataaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatggcagactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatggggggaaccctgatgcagccatgccgcgtgaatgaagaaggccttcgggttgtaaagttctttcggtagcgaggaaggtatcaaatttaatagatttggtaattgacgttaactacagaagaagcaccggctaactccgtgccagca gccgcggtaata cggagggtgcgagcgttaatcggaataactgggcgtaaagggcacgcaggcggttgattaagtgagatgtgaaagccccgggcttaacctgggaattgcatttcatactggtcaactagagtactttagggaggggtagaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaataccgaaggcgaaggcacccccttgggaat gtactgacgctca tgtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgctgtaaacgctgtcgatttggggattgggctttaagtctggtgcccgaagctaacgtgataaatcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttgaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcga tgcaacgcgaagcaccttac ctactcttgacatccatggaatcttatagagatacgagagtaccttcgggaaccatgagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgttgtgaaatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctttgttgccagcgattaggtcgggaactcaaaggagactgcgggtgataaaccggaggaa ggtggggatgacgtcaagtcatcatggc
1. Условия культивирования: штамм требователен к питательным средам. Растет при pH-7,8 и температуре 37°С в течение 24-48 ч в сердечно-мозговом бульоне, триптон-соевом бульоне, бульоне и агаре Хоттингера с добавлением V и X факторов роста. Образует мелкие до 1 мм прозрачные колонии. В МПБ рост слабый с едва заметным помутнением и опалесценцией при наличии факторов роста.1. Cultivation conditions: the strain is demanding to nutrient media. It grows at pH 7.8 and a temperature of 37°C for 24-48 hours in brain heart broth, tryptone soy broth, Hottinger broth and agar with the addition of V and X growth factors. It forms small transparent colonies up to 1 mm. In MPB, growth is weak with barely noticeable turbidity and opalescence in the presence of growth factors.
2. Условия хранения: в лиофилизированном виде в ампулах при температуре от 2 до 8°С. Объем лиофилизата составляет 1 см3.Среда высушивания (для лиофилизированных): декстрановый стабилизатор. Периодичность обновления расплодки: один раз в пять лет.2. Storage conditions: lyophilized in ampoules at a temperature of 2 to 8°C. The volume of the lyophilisate is 1 cm3 . Drying medium (for lyophilized): dextran stabilizer. Frequency of brood renewal: once every five years.
Пример №2. Определение культуральных и морфологических свойств, а также типичности роста штамма Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 на питательных средах.Example No. 2. Determination of cultural and morphological properties, as well as typical growth of the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 on nutrient media.
При подтверждении культуральных и морфологических свойств штамма установлено, что колонии культуры серовато-белые, с гладкой поверхностью на шоколадном агаре. На 28 час культивирования колонии достигают 1-2 мм. На кровяном агаре проявляется зона бета-гемолиза. На бульонных средах (триптон-соевый бульон, сердечно-мозговой бульон и т.д.) рост очень скудный с едва заметным помутнением и опалесценцией при наличии факторов роста. При микроскопировании установлено, что клетки культуры представляют собой мелкие грамотрицательные короткие не спорообразующие палочки, расположенные одиночно, реже парами, неподвижные. Образует капсулу.When confirming the cultural and morphological properties of the strain, it was found that the colonies of the culture are grayish-white, with a smooth surface on chocolate agar. By the 28th hour of cultivation, the colonies reach 1-2 mm. A beta-hemolysis zone appears on blood agar. On broth media (tryptone soy broth, heart-brain broth, etc.), growth is very poor with barely noticeable turbidity and opalescence in the presence of growth factors. Microscopy showed that the cells of the culture are small gram-negative short non-spore-forming rods, located singly, less often in pairs, immobile. Forms a capsule.
Пример №3. Определение биохимических свойств штамма Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423.Example No. 3. Determination of biochemical properties of the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423.
Для изучения биохимических свойств культуры Actinobacillus pleuropneumoniae используются коммерческие тест системы с сопутствующими расходными материалами и электронной базой для интерпретации полученного результата. Помимо коммерческих биохимических тест-систем могут быть использованы углеводы в дисках для определения сахаролитических свойств. Испытание проводится согласно инструкции производителя диагностикума.To study the biochemical properties of the Actinobacillus pleuropneumoniae culture, commercial test systems with accompanying consumables and an electronic database for interpreting the results are used. In addition to commercial biochemical test systems, carbohydrates in disks can be used to determine saccharolytic properties. The test is carried out according to the instructions of the diagnosticum manufacturer.
В частности, при использовании коммерческого набора API® NH (System for the identification of Neisseria and Haemophilus) (BioMérieux SA, Франция) были получены следующие результаты идентификации:In particular, when using the commercial API® suite NH (System for the identification of Neisseria and Haemophilus) (BioMérieux SA, France) obtained the following identification results:
Штамм ферментирует D-глюкозу, D-фруктозу, D-мальтозу, D-сахарозу, уреазу, щелочную фосфатазу, β-галактозидазу. Не продуцирует пенициллиназу, орнитиндекарбоксилазу, липазу, пролин ариламидазу, гамма-глутамилтрансфераза и индол.The strain ferments D-glucose, D-fructose, D-maltose, D-sucrose, urease, alkaline phosphatase, β-galactosidase. It does not produce penicillinase, ornithine decarboxylase, lipase, proline arylamidase, gamma-glutamyltransferase and indole.
Пример №4. Определение серотипа штамма Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423.Example No. 4. Determination of the serotype of the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423.
Определение серотиповой принадлежности предлагаемого штамма проводили методом Real-Time PCR с использованием набора Kylt® Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) (SAN Group Biotech Germany GmbH, Германия) согласно инструкции производителя (https://www.kylt.eu/templates/images/products/395_1_pdf/Kylt_APP_Direction%20For%20Use_Kit_Rev004.pdf?v=1697542885; https://www.kylt.eu/templates/images/products/504_1_pdf/Kylt_APP%20Serotpye%2012,13,18_Direction%20For%20Use_Rev001_.pdf?v=1697542885; https://www.kylt.eu/templates/images/products/498_1_pdf/Kylt_APP%20Serotpye%202%205%209-11_Direction%20For%20Use_Rev001.pdf?v=1697542885; https://www.kylt.eu/templates/images/products/518_1_pdf/Kylt_APP%20Serotype%206,%207,%208_Direction%20For%20Use_Rev001.pdf?v=1697542885).The serotype of the proposed strain was determined by the Real-Time PCR method using the Kylt® Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) kit (SAN Group Biotech Germany GmbH, Germany) according to the manufacturer's instructions (https://www.kylt.eu/templates/images/products/395_1_pdf/Kylt_APP_Direction%20For%20Use_Kit_Rev004.pdf?v=1697542885; https://www.kylt.eu/templates/images/products/504_1_pdf/Kylt_APP%20Serotpye%2012,13,18_Direction%20For%20Use_Rev001_.pdf?v=1697542885; https://www.kylt.eu/templates/images/products/498_1_pdf/Kylt_APP%20Serotpye%202%205%209-11_Direction%20For%20Use_Rev001.pdf?v=1697542885; https://www.kylt.eu/templates/images/products/518_1_pdf/Kylt_APP%20Serotype%206,%207,%208_Direction%20For%20Use_Rev001.pdf?v=1697542885).
В ходе проведенного исследования было установлено, что штамм относится к 8 серотипу Actinobacillus pleuropneumoniae.During the study, it was established that the strain belongs to serotype 8 of Actinobacillus pleuropneumoniae.
Пример №5. Определение патогенности штамма Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423.Example No. 5. Determination of the pathogenicity of the strain Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423.
Определение патогенности штамма проводили с использованием морских свинок в возрасте 6-7 недель жизни. При проведении исследования лабораторные животные подбирались по принципу аналогов (стандартные параметры массы тела, возраст, состояние здоровья). Животных содержали в помещениях вивария. Параметры микроклимата соответствовали требованиям [СП 2.2.1.3218-14 "Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)"]. Кормление осуществлялось специальными концентрированными комбикормами. Животные индивидуально маркировались. На карточке клетки указывались номер исследования, руководитель исследования, номер протокола биоэтической комиссии, номер клетки, номера животных и номер группы.The pathogenicity of the strain was determined using guinea pigs aged 6-7 weeks. During the study, laboratory animals were selected based on the principle of analogues (standard parameters of body weight, age, health status). The animals were kept in vivarium premises. The microclimate parameters met the requirements of [SP 2.2.1.3218-14 "Sanitary and Epidemiological Requirements for the Arrangement, Equipment, and Maintenance of Experimental Biological Clinics (Vivariums)"]. Feeding was carried out with special concentrated compound feed. Animals were individually marked. The cage card indicated the study number, the study director, the protocol number of the bioethics commission, the cage number, the animal numbers, and the group number.
Лабораторные животные содержались в комнате содержания животных барьерного типа с автоматической сменой дневного и ночного периода (08:00-20:00 - «день», 20:00-08:00 - «ночь») и как минимум 12-кратной сменой воздушного объема комнаты в час.Laboratory animals were kept in a barrier-type animal holding room with automatic change of day and night periods (08:00-20:00 - “day”, 20:00-08:00 - “night”) and at least 12-fold change of air volume in the room per hour.
За стандарты содержания животных приняты стандарты, определенные Директивой 2010/63/EU по защите животных, используемых в научных целях. В качестве приемлемых границ параметров микроклимата в комнатах содержания животных приняты границы, определенные руководством The Guide for Care and Use of Laboratory Animals (National Academy Press, Washington D.C., 2011).The standards for keeping animals are those defined by Directive 2010/63/EU on the protection of animals used for scientific purposes. The acceptable limits for the microclimate parameters in animal rooms are those defined by The Guide for Care and Use of Laboratory Animals (National Academy Press, Washington D.C., 2011).
Морские свинки, используемые в опыте, содержались в специализированных клетках М6 - Т4/1 (ООО «Профлаб», Россия). В качестве подстила для содержания морских свинок был использован коммерческий подстил, представляющий собой древесную стружку мягких нехвойных пород древесины (ООО «Лабораторкорм», Россия).Guinea pigs used in the experiment were kept in specialized M6 - T4/1 cages (OOO Proflab, Russia). Commercial bedding consisting of soft non-coniferous wood shavings (OOO Laboratorkorm, Russia) was used as bedding for keeping guinea pigs.
Пищевой рацион морских свинок состоял из гранулированного корма, сена, а также свежих овощей (обусловлено видовой потребностью).The guinea pigs' diet consisted of pelleted feed, hay, and fresh vegetables (depending on the species' needs).
Животные получали профильтрованную водопроводную воду в стандартных автоклавированных поилках (ООО «Профлаб», Россия).Animals received filtered tap water in standard autoclaved drinking bowls (OOO Proflab, Russia).
Для проведения исследования животных (n=5) заражали внутрибрюшинным способом в дозе 1 мл3/гол. с концентрацией 4 млрд м.кл. В результате чего было установлено, что штамм вызывает гибель всех животных в течение 2-5 суток с момента инфицирования.To conduct the study, animals (n=5) were infected intraperitoneally at a dose of 1 ml3 /head with a concentration of 4 billion microcells. As a result, it was found that the strain causes the death of all animals within 2-5 days from the moment of infection.
Пример №6. Определение антибиотикочувствительности штамма Actinobacillus pleuropneumoniaeExample No. 6. Determination of antibiotic susceptibility of the strain Actinobacillus pleuropneumoniae
Определение антибиотикочувствительности штамма проводили диско-диффузным методом (ДДМ) в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».The antibiotic sensitivity of the strain was determined using the disk diffusion method (DDM) in accordance with MUK 4.2.1890-04 “Determination of the sensitivity of microorganisms to antibacterial drugs”.
В работе были использованы диски со следующими антибиотиками: амоксиклав (30 мкг), ампициллин (10 мкг), бацитрацин (10 U), бензилпенициллин (10 U), гентамицин (10 мкг), кларитромицин мм (15 мкг), левофлоксацин (5 мкг), линкомицин (10 мкг), норфлоксацин (10 мкг), олеандомицин (15 мкг), рифампицин (15 мкг), спирамицин (30 мкг), сульфадиазин (100 мкг), сульфафуразол (300 мкг), фосфомицин (50 мкг), хлортетрациклин (30 мкг), цефазолин (30 мкг), цефалексин (30 мкг), цефотаксим (30 мкг), цефпиром (30 мкг), цефтриаксон (30 мкг), энрофлоксацин (10 мкг), («Himedia», Индия). Учёт результатов проводился спустя 24 и 48 часа термостатирования по диаметру зон задержки роста бактерий.The following antibiotics were used in the study: amoxiclav (30 mcg), ampicillin (10 mcg), bacitracin (10 U), benzylpenicillin (10 U), gentamicin (10 mcg), clarithromycin mm (15 mcg), levofloxacin (5 mcg), lincomycin (10 mcg), norfloxacin (10 mcg), oleandomycin (15 mcg), rifampicin (15 mcg), spiramycin (30 mcg), sulfadiazine (100 mcg), sulfafurazole (300 mcg), fosfomycin (50 mcg), chlortetracycline (30 mcg), cefazolin (30 mcg), cephalexin (30 mcg), cefotaxime (30 mcg), cefpirome (30 mcg), ceftriaxone (30 mcg), enrofloxacin (10 mcg), (Himedia, India). The results were recorded after 24 and 48 hours of thermostatting based on the diameter of the bacterial growth inhibition zones.
В ходе проведения данной работы установлено, что: штамм чувствителен к амоксиклаву, ампициллину, бензилпенициллину, кларитромицину, рифампицину, сульфадиазину, сульфафуразолу, фосфомицину, хлортетрациклину, цефазолину, цефалексину, цефотаксиму, цефпирому, цефтриаксону, энрофлоксацину. Штамм резистентен к бацитрацину, гентамицину, левофлоксацину, линкомицину, норфлоксацину, олеандомицину, спирамицину.In the course of this work it was established that: the strain is sensitive to amoxiclav, ampicillin, benzylpenicillin, clarithromycin, rifampicin, sulfadiazine, sulfafurazole, fosfomycin, chlortetracycline, cefazolin, cephalexin, cefotaxime, cefpirome, ceftriaxone, enrofloxacin. The strain is resistant to bacitracin, gentamicin, levofloxacin, lincomycin, norfloxacin, oleandomycin, spiramycin.
Пример №7. Определение генов токсинов штамма Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423.Example No. 7. Determination of toxin genes of the Actinobacillus pleuropneumoniae B-1423 strain.
Определение генов токсинов штамма проводили с использованием набора Actinobacillus pleuropneumoniae Multiplex DNA test kit, Biochek (Biochek UK Ltd, Великобритания) согласно инструкции производителя (https://www.biochek.com/swine-pcr/actinobacillus-pleuropneumoniae-multiplex-dna-test-kit/).The toxin genes of the strain were determined using the Actinobacillus pleuropneumoniae Multiplex DNA test kit, Biochek (Biochek UK Ltd, UK) according to the manufacturer's instructions (https://www.biochek.com/swine-pcr/actinobacillus-pleuropneumoniae-multiplex-dna-test-kit/).
В ходе проведенного исследования было установлено, что штамм имеет ген токсина Apx IV, что является общим маркером для данного возбудителя. Кроме того, данным способом обнаружен токсин Apx III, который типичен для 2, 3, 4, 6, 8 и 15 серотипов.The study found that the strain has the Apx IV toxin gene, which is a common marker for this pathogen. In addition, this method detected the Apx III toxin, which is typical for serotypes 2, 3, 4, 6, 8 and 15.
Пример №8. Секвенирование гена 16S rRNA штамма Actinobacillus pleuropneumoniae - B-1423.Example No. 8. Sequencing of the 16S rRNA gene of the Actinobacillus pleuropneumoniae strain - B-1423.
Для определения видовой идентификации дополнительно проводили секвенирование фрагмента генома штамма с использованием дополнительной пары праймеров, комплементарных фрагменту гена 16S rRNA Actinobacillus pleuropneumoniae. Секвенирование ПЦР-фрагментов осуществляли с использованием набора Big Dye® Terminator v1.1. Cycle Sequencing Kit на амплификаторе GeneAmp PCR System 2720 (Applied Biosystem, США) и автоматическом секвенаторе ABI PRISM 3130 Genetic Analyzer (Thermo Fisher, Франция).To determine the species identification, sequencing of the strain genome fragment was additionally performed using an additional pair of primers complementary to the fragment of the 16S rRNA gene of Actinobacillus pleuropneumoniae. Sequencing of PCR fragments was performed using the Big Dye® Terminator v1.1. Cycle Sequencing Kit on a GeneAmp PCR System 2720 amplifier (Applied Biosystem, USA) and an ABI PRISM 3130 Genetic Analyzer automatic sequencer (Thermo Fisher, France).
В результате проведенной работы была установлена нуклеотидная последовательность участка гена 16S rRNA SEQ ID NO:1:As a result of the work carried out, the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene region SEQ ID NO:1 was established:
Agactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatggggggaaccctgatgcagccatgccgcgtgaatgaagaaggccttcgggttgtaaagttctttcggtagcgaggaaggtatcaaatttaatagatttggtaattgacgttaactacagaagaagcaccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggtgcgagcgttaatcggaataactgggcgtaaagggcacgcaggcggttgattaagtgagatgtgaaagccccgggcttaacctgggaattgcatttcatactggtcaactagagtactttagggaggggtagaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaataccgaaggcgaaggcacccccttgggaatgtactgacgctcatgtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgctgtaaacgctgtcgatttggggattgggctttaagtctggtgcccgaagctaacgtgataaatcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttgaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagcaccttacctactcttgacatccatggaatcttatagagatacgagagtaccttcgggaaccatgagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgttgtgaaatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctttgttgccagcgattaggtcgggaactcaaaggagactgcgggtgataaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatggc.Agactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatggggggaaccctgatgcagccatgccgcgtgaatgaagaaggccttcgggttgtaaagttctttcggtagcgaggaaggtatcaaatttaatagatttggtaattgacgttaactacagaagaagcaccggctaactccgtgccagcag ccgcggtaata cggagggtgcgagcgttaatcggaataactgggcgtaaagggcacgcaggcggttgattaagtgagatgtgaaagccccgggcttaacctgggaattgcatttcatactggtcaactagagtactttagggaggggtagaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaataccgaaggcgaaggcacccccttgggaat gtactgacgctca tgtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgctgtaaacgctgtcgatttggggattgggctttaagtctggtgcccgaagctaacgtgataaatcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttgaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcga tgcaacgcgaagcaccttacc tactctttgacatccatggaatcttatagagatacgagagtaccttcgggaaccatgagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgttgtgaaatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctttgttgccagcgattaggtcgggaactcaaaggagactgcgggtgataaaccggaggaaggt ggggatgacgtcaagtcatcatggc.
Пример №9. Изготовление экспериментальной серии инактивированной вакцины против актинобациллезной плевропневмонии свинейExample No. 9. Production of an experimental series of inactivated vaccine against actinobacillus pleuropneumonia in pigs
Экспериментальная серия инактивированной вакцины против актинобациллезной плевропневмонии свиней изготовлена на базе ФКП «Армавирская биофабрика», при условиях глубинного культивирования. Для культивирования штамма по изобретению использовали сердечно-мозговой бульон («HiMedia Laboratories Pvt Ltd», Индия) с добавлением Никотинамид-β-аденин динуклеотида (NAD) (Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Китай) и/или дрожжевого экстракта («HiMedia Laboratories Pvt Ltd», Индия).An experimental series of inactivated vaccine against actinobacillus pleuropneumonia of pigs was manufactured at the Armavir Biofactory, under deep cultivation conditions. For culturing the strain according to the invention, brain heart broth (HiMedia Laboratories Pvt Ltd, India) with the addition of Nicotinamide-β-adenine dinucleotide (NAD) (Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., China) and/or yeast extract (HiMedia Laboratories Pvt Ltd, India) was used.
Культивирование проводилось в течение 12 часов при температуре 37°С. Полученную культуру проверяли по показателям: типичности культуральных, морфологических и тинкториальных свойств штамма, отсутствие посторонней микрофлоры, концентрация микробных клеток. Концентрация бактериальных клеток возбудителя 1,6 млрд. м.к./см3. Инактивировали культуру путём добавления 0,3 % формалина к общему объёму бактериальной суспензии. Продолжительность инактивации бактериальных антигенов составляла 3 суток при температуре 21±1°С.The cultivation was carried out for 12 hours at a temperature of 37°C. The resulting culture was checked for the following parameters: typicality of the cultural, morphological and tinctorial properties of the strain, absence of foreign microflora, concentration of microbial cells. The concentration of bacterial cells of the pathogen was 1.6 billion m.c./cm3 . The culture was inactivated by adding 0.3% formalin to the total volume of the bacterial suspension. The duration of inactivation of bacterial antigens was 3 days at a temperature of 21±1°C.
Для оценки иммуногенных свойств предложенного штамма была скомпонована серия вакцины с использованием гидроксида алюминия (далее - ГОА) (ФКП «Щелковская биофабрика», Россия). Поскольку данный адъювант является хорошим осадителем, то предварительно полученная бактериальная культура не концентрировалась с использованием лабораторно/промышленного оборудования (центрифуги и/или сепаратора). Осаждение бактериальной массы проводили путем добавления к бактериальной культуре, полученной в ферментере, 3%-ного раствора ГОА в объеме 10%. После осаждения бактериальной массы и ГОА проводили декантирование надосадочной жидкости. Таким образом удается проводить 10-кратное концентрирование. Для доведения концентрации бактериальных клеток в 1 см3, могут быть использованы любые разбавители (стерильный физиологический раствор, стерильная вода для инъекций, стерильный фосфатно-буферный раствор и т.д.). Концентрацию протективного антигена в вакцине доводили до 3 млрд. м.к. см3. Концентрацию водородных ионов полученных препаратов регулировали с использованием раствора щелочи до значения 7,2-7,6 ед. В качестве консерванта использовался мертиолят натрия (из расчета 1:10000 v/v).To evaluate the immunogenic properties of the proposed strain, a series of vaccines were prepared using aluminum hydroxide (hereinafter referred to as AOH) (Federal State Enterprise "Shchelkovskaya Biofactory", Russia). Since this adjuvant is a good precipitant, the previously obtained bacterial culture was not concentrated using laboratory/industrial equipment (centrifuge and/or separator). The bacterial mass was precipitated by adding a 3% AOH solution in a volume of 10% to the bacterial culture obtained in the fermenter. After sedimentation of the bacterial mass and AOH, the supernatant was decanted. This makes it possible to perform 10-fold concentration. To bring the concentration of bacterial cells to 1 cm 3 , any diluents (sterile saline, sterile water for injection, sterile phosphate-buffered solution, etc.) can be used. The concentration of the protective antigen in the vaccine was brought to 3 billion m.k. cm 3 . The concentration of hydrogen ions of the obtained preparations was adjusted using an alkali solution to a value of 7.2-7.6 units. Sodium thimerosal was used as a preservative (at a rate of 1:10000 v/v).
Пример № 10. Контроль иммуногенной активности экспериментальных серий вакцины против актинобациллезной плевропневмонии свинейExample No. 10. Control of immunogenic activity of experimental series of vaccine against actinobacillus pleuropneumonia in pigs
Исследование иммуногенной активности экспериментальных вакцин (полученных согласно примеру №9) проводили в условиях вивария ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН с использованием морских свинок. Было сформировано 2 группы животных: опытная группа (n=10), и контрольная группа (n=10). Морских свинок опытной группы иммунизировали внутримышечно двукратно в объеме 0,5 мл с интервалом 14 дней. Животным контрольных групп внутримышечно вводился стерильный физиологический раствор в объеме 0,5 мл. Спустя 14 дней после второй вакцинации, животные опытной и контрольной групп были подвергнуты инфицированию штаммом B-1423 в дозе 4 млрд м.к. внутрибрюшинно. Срок наблюдения за животными составлял 10 дней. В результате эксперимента была установлено 100 % гибель животных в контрольной группе и 90% сохранность животных в опытной группе.The immunogenic activity of the experimental vaccines (obtained according to Example No. 9) was studied in the vivarium of the Federal Scientific Center of All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Sciences of the Russian Academy of Sciences using guinea pigs. Two groups of animals were formed: the experimental group (n=10) and the control group (n=10). The guinea pigs of the experimental group were immunized intramuscularly twice in a volume of 0.5 ml with an interval of 14 days. The animals of the control groups were injected intramuscularly with sterile saline in a volume of 0.5 ml. Fourteen days after the second vaccination, the animals of the experimental and control groups were infected with the B-1423 strain at a dose of 4 billion m.c. intraperitoneally. The observation period for the animals was 10 days. As a result of the experiment, 100% mortality of animals in the control group and 90% survival of animals in the experimental group were established.
Данный результат был достигнут за счет использования адъюванта, в частности, при использовании ГОА в качестве адъюванта, токсоидный компонент выпал в осадок с бактериальной массой, что и позволило получить эффективный вариант бактерин-токсодного иммунобиологического препарата. Здесь же отмечается, что вместо ГОА возможно использование любых других эффективных адъювантов, с данным штаммов. Ввиду чего, целесообразно использование методов тангенциальной фильтрации и концентрирования токсинов, продуцируемых предлагаемым штаммом.This result was achieved by using an adjuvant, in particular, when using GOA as an adjuvant, the toxoid component precipitated with the bacterial mass, which made it possible to obtain an effective version of a bacterin-toxoid immunobiological preparation. It is also noted here that instead of GOA, it is possible to use any other effective adjuvants with this strain. In view of this, it is advisable to use the methods of tangential filtration and concentration of toxins produced by the proposed strain.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.Although the invention has been described with reference to the disclosed embodiments, it will be apparent to those skilled in the art that the specific experiments described in detail are provided merely for the purpose of illustrating the present invention and should not be considered as limiting the scope of the invention in any way. It will be understood that various modifications can be made without departing from the spirit of the present invention.
--->--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="4104060_перечень <ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="4104060_list
последовательностей.xml" softwareName="WIPO Sequence" sequences.xml" softwareName="WIPO Sequence"
softwareVersion="2.3.0" productionDate="2023-12-13">softwareVersion="2.3.0" productionDate="2023-12-13">
<ApplicationIdentification><ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText></ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText></ApplicationNumberText>
<FilingDate></FilingDate><FilingDate></FilingDate>
</ApplicationIdentification></ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference> 4104060</ApplicantFileReference> <ApplicantFileReference> 4104060</ApplicantFileReference>
<ApplicantName languageCode="ru">Общество с ограниченной <ApplicantName languageCode="en">Limited liability company
ответственностью «Центр биотехнологической обработки продуктов responsibility of the "Center for Biotechnological Processing of Products"
питания при институте микроэкологии» </ApplicantName>nutrition at the Institute of Microecology" </ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>Obschestvo s ogranichennoi otvetstvennostiu <ApplicantNameLatin>Obschestvo s ogranichennoi otvetstvennostiu
"Centr biotekhnologicheskoi obrabotki produktov pitaniya pri "Center for biotechnological processing of food products
institute mikroehkologii"</ApplicantNameLatin>institute mikroehkologii"</ApplicantNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Штаммы бактерий Actinobacillus <InventionTitle languageCode="en">Actinobacillus bacterial strains
pleuropneumoniae 8 серотипа, предназначенный для получения моно- и pleuropneumoniae 8 serotype, intended for obtaining mono- and
поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую polyvalent immunogenic compositions aimed at specific
профилактику актинобациллезной плевропневмонии prevention of actinobacillus pleuropneumonia
свиней</InventionTitle>pigs</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity> <SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1"> <SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq><INSDSeq>
<INSDSeq_length>894</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>894</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table><INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..894</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..894</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier><INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2"><INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>Actinobacillus <INSDQualifier_value>Actinobacillus
pleuropneumoniae</INSDQualifier_value>pleuropneumoniae</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table></INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>agactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggg <INSDSeq_sequence>agactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggg
gaatattgcacaatggggggaaccctgatgcagccatgccgcgtgaatgaagaaggccttcgggttgtaagaatattgcacaatggggggaaccctgatgcagccatgccgcgtgaatgaagaaggccttcgggttgtaa
agttctttcggtagcgaggaaggtatcaaatttaatagatttggtaattgacgttaactacagaagaagcagttctttcggtagcgaggaaggtatcaaatttaatagatttggtaattgacgttaactacagaagaagc
accggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggtgcgagcgttaatcggaataactgggcgtaccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggtgcgagcgttaatcggaataactgggcgt
aaagggcacgcaggcggttgattaagtgagatgtgaaagccccgggcttaacctgggaattgcatttcataaagggcacgcaggcggttgattaagtgagatgtgaaagccccgggcttaacctgggaattgcatttcat
actggtcaactagagtactttagggaggggtagaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggactggtcaactagagtactttagggaggggtagaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtgg
aggaataccgaaggcgaaggcacccccttgggaatgtactgacgctcatgtgcgaaagcgtggggagcaaaggaataccgaaggcgaaggcacccccttgggaatgtactgacgctcatgtgcgaaagcgtggggagcaa
acaggattagataccctggtagtccacgctgtaaacgctgtcgatttggggattgggctttaagtctggtacaggattagataccctggtagtccacgctgtaaacgctgtcgatttggggattgggctttaagtctggt
gcccgaagctaacgtgataaatcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttgaaactcaaatgaattgagcccgaagctaacgtgataaatcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttgaaactcaaatgaattga
cgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagcaccttacctactcttgcggggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagcaccttacctactcttg
acatccatggaatcttatagagatacgagagtaccttcgggaaccatgagacaggtgctgcatggctgtcacatccatggaatcttatagagatacgagagtaccttcgggaaccatgagacaggtgctgcatggctgtc
gtcagctcgtgttgtgaaatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctttgttgccagcggtcagctcgtgttgtgaaatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctttgttgccagcg
attaggtcgggaactcaaaggagactgcgggtgataaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcattaggtcgggaactcaaaggagactgcgggtgataaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatc
atggc</INSDSeq_sequence>atggc</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq></INSDSeq>
</SequenceData></SequenceData>
</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>
<---<---
Claims (8)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2824493C1 true RU2824493C1 (en) | 2024-08-08 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2234941C2 (en) * | 1996-06-27 | 2004-08-27 | Виржиниа Тек Интеллекчуал Пропертис, Инк. | Vaccine against pleuropneumonia in animal, method for its preparing |
| RU2351360C2 (en) * | 2002-11-20 | 2009-04-10 | Лабораториос Ипра, С.А. | METHOD OF OBTAINING IMMUNOGENIC NON-HEMOLYTHIC BACTERIUM OF SPECIES Actinobacillus pleuropneumoniae, BACTERIUM OF SPECIES Actinobacillus pleuropneumoniae, VACCINE AGAINST PIG PLEUROPNEUMONIA (VERSIONS), IMMUNOGENIC AND NON-HAEMOLYTIC STRAIN OF Actinobacillus pleuropneumoniae (VERSIONS) |
| RU2514667C2 (en) * | 2008-11-27 | 2014-04-27 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Method of obtaining toxin actinobacillus pleuropneumoniae apxi, applying culture medium, containing calcium-borogluconate complex |
| RU2750894C1 (en) * | 2017-12-20 | 2021-07-05 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Vaccine to protect pigs from actinobacillus pleuropneumoniae |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2234941C2 (en) * | 1996-06-27 | 2004-08-27 | Виржиниа Тек Интеллекчуал Пропертис, Инк. | Vaccine against pleuropneumonia in animal, method for its preparing |
| RU2351360C2 (en) * | 2002-11-20 | 2009-04-10 | Лабораториос Ипра, С.А. | METHOD OF OBTAINING IMMUNOGENIC NON-HEMOLYTHIC BACTERIUM OF SPECIES Actinobacillus pleuropneumoniae, BACTERIUM OF SPECIES Actinobacillus pleuropneumoniae, VACCINE AGAINST PIG PLEUROPNEUMONIA (VERSIONS), IMMUNOGENIC AND NON-HAEMOLYTIC STRAIN OF Actinobacillus pleuropneumoniae (VERSIONS) |
| RU2514667C2 (en) * | 2008-11-27 | 2014-04-27 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Method of obtaining toxin actinobacillus pleuropneumoniae apxi, applying culture medium, containing calcium-borogluconate complex |
| RU2750894C1 (en) * | 2017-12-20 | 2021-07-05 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Vaccine to protect pigs from actinobacillus pleuropneumoniae |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Инструкция по ветеринарному применению лекарственного препарат КОГЛАПИКС. 09.04.2021. Найдено в Интернет [16.04.2024] https://www.ceva-russia.ru/Produkciya-kompanii/Spisok-preparatov/KOGLAPIKS. База данных GenBank. NCBI Reference Sequence: NR_115546.2, 12.03.2019, Actinobacillus pleuropneumoniae strain Shope 4074 16S ribosomal RNA, partial sequence. Инструкция по ветеринарному применению вакцины против актинобациллезной плевропневмонии свиней инактивированной эмульсионной. 05.10.2021.Найдено в Интернет [16.04.2024] https://shop.arriah.ru/upload/iblock/592/592b64f35d1ebb7e5e28e9d0b56db8e9.pdf. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aragon et al. | Glässer's disease | |
| AU2016222520A1 (en) | Attenuated Streptococcus suis vaccines and methods of making and use thereof | |
| US10058601B2 (en) | Attenuated Mannheimia haemolytica vaccines and methods of making and use | |
| CN102140430B (en) | Mouse-typhus salmonella gene-deletion mutant strain without containing resistance marks, vaccine and application thereof | |
| Mahmood et al. | Seroprevalence and Immunopathological Studies of Salmonella pullorum in Broiler Birds in District Faisalabad Pakistan. | |
| Odugbo et al. | The comparative pathogenicity of strains of eight serovars and untypable strains of Mannheimia haemolytica in experimental pneumonia of sheep | |
| Mansour et al. | Molecular characterization and immunoprotective activity of capsular polysaccharide of Klebsiella Pneumoniae isolated from farm animals at Taif Governorate | |
| RU2824493C1 (en) | Strain of bacteria actinobacillus pleuropneumoniae serotype 8, intended for production of mono- and polyvalent immunogenic compositions aimed at specific prevention of porcine actinobacillus pleuropneumoniae | |
| RU2827226C1 (en) | Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2 bacterial strain, intended for production of mono- and polyvalent immunogenic compositions aimed at specific prevention of porcine actinobacillus pleuropneumoniae | |
| JPH07502174A (en) | Novel bacteria that cause poultry diseases and vaccines derived from them | |
| US8637049B2 (en) | Attenuated live vaccines for aquatic animals | |
| RU2824492C1 (en) | Control and production strain of actinobacillus rossii, intended for production and control of immunobiological drugs for veterinary use | |
| CN110862938B (en) | Porcine pathogenic escherichia coli strain and inactivated vaccine thereof | |
| KR102066545B1 (en) | Novel Salmonella Typhimurium strain and vaccine composition comprising the same | |
| CN109106946B (en) | Inactivated staphylococcus aureus vaccine for dairy cow mastitis and preparation method thereof | |
| KR101031376B1 (en) | Killed vaccine for preventing salmonella enteritidis | |
| RU2761379C1 (en) | Polyvalent inactivated vaccine against swine streptococcosis, method for its production and use | |
| RU2521651C1 (en) | STRAINS OF BACTERIA Moraxella bovoculi "SH-CH6 N-DEP" USED TO MANUFACTURE DIAGNOSTIC PREPARATIONS AND VACCINES AGAINST INFECTIOUS KERATOCONJUNCTIVITIS OF CATTLE | |
| DeLong | Bacterial diseases | |
| CN112638409B (en) | Combination vaccine | |
| Fenwick et al. | Pasteurellaceae: Actinobacillus | |
| WO2024171316A1 (en) | Inactivated vaccine preparation and infection prevention method | |
| Abhishek et al. | Therapeutic efficacy of lytic bacteriophage PSAE-1 against Salmonella Abortusequi in Guinea pig model | |
| RU2553553C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Pseudomonas aeruginosa FOR PRODUCTION OF VACCINE AGAINST PSEUDOMONOSIS OF PIGS | |
| RU2553555C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Pseudomonas aeruginosa FOR PRODUCTION OF VACCINE AGAINST PSEUDOMONOSIS OF PIGS |