RU2079137C1

RU2079137C1 - Method of diagnosis of fast type allergy

Info

Publication number: RU2079137C1
Application number: RU93030645A
Authority: RU
Inventors: Татьяна Николаевна Лебедева; Алексей Владимирович Соболев; Наталья Юрьевна Котова
Original assignee: Татьяна Николаевна Лебедева; Алексей Владимирович Соболев; Наталья Юрьевна Котова
Priority date: 1993-06-15
Filing date: 1993-06-15
Publication date: 1997-05-10

Abstract

FIELD: medicine, allergology. SUBSTANCE: method involves examination of concentration of large and small immune complexes by their precipitation with 3% and 6% polyethylene glycol (molecular mass is 6000 Da). Allergy is diagnosed at value ratio of small immune complex to large immune complex above 3. EFFECT: enhanced safety, simplified diagnosis, decreased cost.

Description

Изобретение относится к области аллергологии и может быть использовано в диагностике аллергии немедленного типа и в целях профотбора для работы с аллергенами. The invention relates to the field of allergology and can be used in the diagnosis of allergies of the immediate type and for the purpose of professional selection for working with allergens.

Известен способ диагностики немедленного типа путем определения концентрации общего иммуноглобулина E(JgE) в сыворотке крови радиоиммунологическим методом. A known method for diagnosing an immediate type by determining the concentration of total immunoglobulin E (JgE) in serum by the radioimmunological method.

Недостатком способа является его низкая надежность, трудоемкость (на исследование требуется более 4 ч), необходимость наличия дорогостоящих реактивов и специального оборудования. The disadvantage of this method is its low reliability, complexity (the study requires more than 4 hours), the need for expensive reagents and special equipment.

Известен также способ определения иммунных комплексов путем их преципитации полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000 кД (ПЭГ₆₀₀₀), используемый для определения активности процесса и контроля за эффективностью терапии при иммунокомплексных болезнях.There is also a method of determining immune complexes by precipitation with polyethylene glycol with a molecular weight of 6000 kD (PEG ₆₀₀₀ ), used to determine the activity of the process and monitor the effectiveness of therapy in immunocomplex diseases.

Цель патентуемого способа повышение надежности, сокращение затрат и упрощение способа диагностики аллергии немедленного типа. The purpose of the patented method is to increase reliability, reduce costs and simplify the method of diagnosing an allergy of an immediate type.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики аллергии определяют концентрацию крупных и мелких иммунных комплексов добавлением к сыворотке крови соответственно 3% и 6% ПЭГ₆₀₀₀ с последующей инкубацией и фотометрией полученных смесей, и при значении соотношения мелких иммунных комплексов к крупным более 3 диагностируют аллергию.This goal is achieved by the fact that according to the method for diagnosing allergies, the concentration of large and small immune complexes is determined by adding 3% and 6% PEG ₆₀₀₀ to the blood serum, followed by incubation and photometry of the resulting mixtures, and when the ratio of small immune complexes to large ones is greater than 3, allergy is diagnosed .

Способ осуществляют следующим образом. Сыворотку получают из венозной крови больного. В первую опытную пробирку вносят 0,1 мл исходной сыворотки крови 2 мл 3% ПЭГ₆₀₀₀, растворенного в забуференном физиологическом растворе с pH 7,2 (ЗФР) (для определения крупных иммунных комплексов), во вторую опытную пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови, разведенной 1:4 в ЗФР, и 2 мл 6% ПЭГ₆₀₀₀, растворимого в ЗФР (для определения суммарного количества крупных и мелких иммунных комплексов). В две контрольные пробирки вносят по 0,1 мл сыворотки крови в тех же концентрациях, что и в опытных пробах, и по 2 мл ЗФР. Пробирки инкубируют 1 ч при комнатной температуре, затем пробы переносят в кюветы прямоугольные кварцевые для слоя жидкости толщиной 10 мм (К 10) и определяют оптическую плотность первой (ОП₁) и второй (ОП₂) опытных проб против соответствующих контрольных при длине волны 450 нм. Результаты учитывают в ОП. При этом ОП, полученную при исследовании второй опытной пробы, содержащей 6% ПЭГ₆₀₀₀, умножают на 4 (для учета разведения сыворотки крови). Количество мелких иммунных комплексов оценивают как разность между суммарным количеством ИК (4•(ОП₂) и количеством крупных иммунных комплексов (ОП₁).The method is as follows. Serum is obtained from the patient’s venous blood. In the first test tube, 0.1 ml of the initial blood serum is added 2 ml of 3% PEG ₆₀₀₀ dissolved in buffered saline with a pH of 7.2 (PBS) (for the determination of large immune complexes), in the second test tube, 0.1 ml of serum is added blood diluted 1: 4 in PBS and 2 ml of 6% PEG ₆₀₀₀ soluble in PBS (to determine the total number of large and small immune complexes). In two control tubes make 0.1 ml of blood serum in the same concentrations as in the experimental samples, and 2 ml of PBS. The tubes are incubated for 1 h at room temperature, then the samples are transferred into rectangular quartz cuvettes for a liquid layer 10 mm thick (K 10) and the optical density of the first (OD ₁ ) and second (OD ₂ ) experimental samples is determined against the corresponding control samples at a wavelength of 450 nm . The results are taken into account in the OP. In this case, the OD obtained in the study of the second experimental sample containing 6% PEG ₆₀₀₀ is multiplied by 4 (to take into account the dilution of blood serum). The number of small immune complexes is estimated as the difference between the total number of IR (4 • (OP ₂ ) and the number of large immune complexes (OP ₁ ).

Расчет конечного результата проводят путем определения соотношения мелких иммунных комплексов к крупным:

где ОП₁ оптическая плотность первой опытной пробы,
ОП₂ оптическая плотность второй опытной пробы.The calculation of the final result is carried out by determining the ratio of small immune complexes to large ones:

where OD _{1 is the} optical density of the first test sample,
OD ₂ optical density of the second test sample.

В случае увеличения соотношения мелких ИК к крупным ИК более 3 диагностируют немедленную аллергию. In the case of an increase in the ratio of small IR to large IR more than 3, immediate allergy is diagnosed.

Заявляемое техническое решение отличается от прототипа тем, что в сыворотке крови исследуют соотношение мелких иммунных комплексов к крупным и при возрастании этого показателя более 3 диагностируют аллергию, что, видимо, обусловлено снижением количества Т-супрессоров у больных аллергией, вследствие чего увеличивается синтез низкоавидных антител, образующих с антигенами преимущественно мелкие иммунные комплексы. The claimed technical solution differs from the prototype in that in the blood serum the ratio of small immune complexes to large ones is examined and with an increase of more than 3, allergy is diagnosed, which is apparently due to a decrease in the number of T-suppressors in patients with allergies, resulting in increased synthesis of low-form antibodies, which form predominantly small immune complexes with antigens.

Пример 1. Больной Ч. 16 лет, поступил во Всесоюзный микологический цент по глубоким микозам с жалобами на периодически возникающий отек век, слезотечение, водянистые выделения из носа, не связанные с простудными заболеваниями. Впервые вышеописанные явления появились год назад. Для выявления у больного аллергии исследовали соотношение мелких иммунных комплексов (ИК) к крупным ИК в сыворотке крови путем добавления к ней ПЭК₆₀₀₀. При добавлении к сыворотке крови 3% ПЭГ₆₀₀₀ оптическая плотность с учетом разведения сыворотки крови составила 0,11 ед. ОП, при добавлении 6% ПЭГ₆₀₀₀ 0,168 ед. ОП. Соотношение мелких иммунных комплексов к крупным составило

что свидетельствовало о наличии у больного аллергии, (т.е. показатель превышал 3,0). Действительно, при аллергообследовании у больного была выявлена аллергия к домашней и библиотечной пыли. Клинико-лабораторное обследование больного подтвердило диагноз аллергического рино-конъюктивита.Example 1. Patient Ch. 16 years old, was admitted to the All-Union Mycological Center for deep mycoses with complaints of recurrent edema of the eyelids, lacrimation, watery discharge from the nose, not associated with colds. The phenomena described above first appeared a year ago. To identify allergies in a patient, the ratio of small immune complexes (ICs) to large ICs in blood serum was studied by adding PEC ₆₀₀₀ to it. When 3% PEG _{6000 was} added to blood serum, the optical density taking into account the dilution of blood serum was 0.11 units. OD, with the addition of 6% PEG ₆₀₀₀ 0.168 units. OP. The ratio of small to large immune complexes amounted to

which indicated the presence of an allergy in the patient (i.e., the indicator exceeded 3.0). Indeed, during an allergy examination, the patient was allergic to house and library dust. Clinical and laboratory examination of the patient confirmed the diagnosis of allergic rhinoconjunctivitis.

Пример 2. Больная Д. 31 год, поступила в клинику Всесоюзного микологического центра С-Пб ГИДУВа с жалобами на периодические мелкоточечные зудящие высыпания на коже. Результаты объективного исследования свидетельствовали о наличии у больной холецистита. Внутрикожные пробы были положительными на бытовые аллергены (библиотечная и домашняя пыль, дерматофагоидный клещ, перо подушки), пищевые аллергены (рыба, молоко, яйцо, свинина, кура, говядина) и пыльцевые аллергены (полынь, овсяница, одуванчик, тимофеевка, ежа сборная). Для выявления аллергии исследовали соотношение мелких циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) к крупным. Для этого определяли оптическую плотность сыворотки крови при добавлении 3% и 6% ПЭГ₆₀₀₀. В первом случае оптическая плотность с учетом разведения сыворотки крови составила 0,148 ед. ОП, во втором 0,096 ед. ОП. Соотношение мелких иммунных комплексов к крупным составило

что свидетельствовало об отсутствии аллергии. Действительно, на основании объективного обследования и лабораторных тестов, включая пробу по определению кинетики общего билирубина до и после 3-х дневного голодания (Пыцкий В.И. 1988 г.), больной был поставлен диагноз лямблиозного холецистита, псевдоаллергической крапивницы. Действительно, нормализация функции печени в результате комплексной терапии привела к улучшению общего состояния и отсутствию рецидивов заболевания (срок наблюдения 9 месяцев).Example 2. Patient D., 31 years old, was admitted to the clinic of the All-Union Mycological Center S-Pb GIDUV with complaints of periodic small-point itchy rashes on the skin. The results of an objective study indicated the presence of cholecystitis in the patient. Intradermal tests were positive for household allergens (library and house dust, a dermatophageoid tick, feather pillow), food allergens (fish, milk, egg, pork, chicken, beef) and pollen allergens (wormwood, fescue, dandelion, timothy, hedgehog) . To identify allergies, the ratio of small circulating immune complexes (CEC) to large was studied. For this, the optical density of blood serum was determined with the addition of 3% and 6% PEG ₆₀₀₀ . In the first case, the optical density taking into account the dilution of blood serum was 0.148 units. OP, in the second 0,096 units. OP. The ratio of small to large immune complexes amounted to

which indicated the absence of allergies. Indeed, on the basis of an objective examination and laboratory tests, including a test to determine the kinetics of total bilirubin before and after 3 days of fasting (Pytsky V.I. 1988), the patient was diagnosed with giardiasis cholecystitis, pseudo-allergic urticaria. Indeed, the normalization of liver function as a result of complex therapy led to an improvement in the general condition and the absence of relapse of the disease (observation period 9 months).

Предлагаемый способ апробирован на 20 здоровых лицах, 30 больных различной соматической патологией без признаков аллергии и 40 больных аллергическими заболеваниями, протекающими преимущественно по типу немедленной аллергии, вне обострения (бронхиальная астма, рецидивирующий отек Квинке, аллергический ринит и риноконъюктивит, крапивница). Была проведена сравнительная оценка надежности диагностики предлагаемого способа (определением соотношения концентрации мелких иммунных комплексов к крупным) в сравнении с прототипом (определение концентрации общего JgE) (табл. 1). При этом оценку надежности способа проводили по количеству реакций, совпадающих с диагнозом, выраженную в процентах от числа обследованных каждой группы. The proposed method has been tested on 20 healthy individuals, 30 patients with various somatic pathologies without signs of allergy, and 40 patients with allergic diseases proceeding predominantly as an immediate allergy, without exacerbation (bronchial asthma, recurring Quincke's edema, allergic rhinitis and rhinoconjunctivitis, urticaria). A comparative assessment of the reliability of the diagnosis of the proposed method (by determining the ratio of the concentration of small immune complexes to large ones) was carried out in comparison with the prototype (determination of the concentration of total JgE) (Table 1). At the same time, the reliability of the method was assessed by the number of reactions coinciding with the diagnosis, expressed as a percentage of the number of examined in each group.

Как показали исследования, эффективность диагностики аллергии предлагаемым способом оказалась выше у всех групп обследованных по сравнению с прототипом. As studies have shown, the effectiveness of the diagnosis of allergies by the proposed method was higher in all groups examined compared with the prototype.

При диагностике аллергии предлагаемым способом не требуется дорогостоящего оборудования, затраты времени на постановку реакции оставляют не более 2 часов (при использовании способа, принятого за прототип, необходимо дорогостоящее оборудование, а время определения Jg E более 4 ч). When diagnosing allergies with the proposed method, expensive equipment is not required, the time required to set up the reaction is no more than 2 hours (when using the method adopted as a prototype, expensive equipment is needed, and the determination time Jg E is more than 4 hours).

Таким образом, предлагаемый способ повышает надежность, сокращает затраты и упрощает диагностику аллергии немедленного типа. Thus, the proposed method improves reliability, reduces costs and simplifies the diagnosis of immediate allergies.

Claims

A method for diagnosing an allergy of an immediate type, by laboratory analysis of blood serum, characterized in that in the blood serum large CECs of 3% PEG ₆₀₀₀ and small CECs of 6% PEG ₆₀₀₀ are precipitated with a ratio of blood serum diluted in volume 1: 4 with buffered saline solution pH 7 , 2 to PEG ₆₀₀₀ 0.1: 2.0, and when the ratio of small immune complexes to large ones is greater than 3, an immediate type of allergy is diagnosed.