RU2008687C1

RU2008687C1 - Method for diagnosing delayed allergic reaction

Info

Publication number: RU2008687C1
Authority: RU
Inventors: Елена Семеновна Нишева; Игорь Михайлович Воронцов; Михаил Александрович Кириллов; Николай Никитович Каплин
Original assignee: Елена Семеновна Нишева; Игорь Михайлович Воронцов; Михаил Александрович Кириллов; Николай Никитович Каплин
Priority date: 1991-12-24
Filing date: 1991-12-24
Publication date: 1994-02-28

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves dividing heparinized patient's blood into two parts in vitro, introducing solvent into reference sample and adding solution of interleukin-3 in final concentration of 300 ng/ml to test sample. Both samples are incubated in thermostat, treated with dyestuff and content of basophils in each sample is determined. If basophil content in test sample drops by 10% and more as compared with reference sample, the diagnosis is delayed allergic reaction. Method permits discovering in vitro the immunoglobulin E specific to interleukin-3 in the blood of patients with delayed allergic reactions. EFFECT: early diagnostics of delayed allergic reaction. 4 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для выявления больных, предраспосположенных к так называемым отсроченным реакциям на аллергены. The invention relates to medicine, namely to allergology, and can be used to identify patients predisposed to so-called delayed reactions to allergens.

При анализе патентной и научно-медицинской литературы не обнаружено сведений о способах прогнозирования отсроченных аллергических реакций. In the analysis of patent and medical literature, no information was found on methods for predicting delayed allergic reactions.

Целью изобретения является создание способа прогнозирования отсроченных аллергических реакций, обеспечивающего возможность выявления in vitro специфичных к интерлейкину-3 (ИЛ-3) иммуноглобулинов Е (IqЕ-антител) в крови больных, дающих отсроченные аллергические реакции. The aim of the invention is to provide a method for predicting delayed allergic reactions, providing the possibility of identifying in vitro specific for interleukin-3 (IL-3) immunoglobulins E (IqE antibodies) in the blood of patients giving delayed allergic reactions.

Цель достигается тем, что исследуемую in vitro гепаринизированную кровь больного делят на две равные части. При этом в контрольную пробу вносят растворитель, не повреждающий базофилы, а в опытную пробу вносят раствор интерлейкина-3 (ИЛ-3) в конечной концентрации 300 нг/мл, инкубируют обе пробы в термостате, затем обрабатывают их красителем, избирательно окрашивающим базофилы, и определяют содержание базофилов в каждой пробе. При снижении их количества в опытной пробе на 10% и более по сравнению с контрольной прогнозируют отсроченную аллергическую реакцию. The goal is achieved by the fact that the in vitro studied heparinized blood of the patient is divided into two equal parts. In this case, a solvent that does not damage the basophils is added to the control sample, and a solution of interleukin-3 (IL-3) at a final concentration of 300 ng / ml is added to the test sample, both samples are incubated in a thermostat, then they are treated with a dye that selectively stains the basophils, and determine the content of basophils in each sample. With a decrease in their number in the experimental sample by 10% or more compared with the control, a delayed allergic reaction is predicted.

Выбор оптимальной концентрации ИЛ-3, добавляемого к опытной пробе крови при использовании заявляемого способа, проводили путем исследования влияния различных концентраций ИЛ-3 на точность прогноза. Были исследованы три группы детей:
I группа - больные аллергическими заболеваниями с подтвержденными отсроченными реакциями на аллерген (34 человека).The choice of the optimal concentration of IL-3 added to the experimental blood sample using the proposed method was carried out by studying the effect of different concentrations of IL-3 on the accuracy of the forecast. Three groups of children were investigated:
Group I - patients with allergic diseases with confirmed delayed reactions to the allergen (34 people).

II группа - больные аллергическими заболеваниями с отсутствием отсроченных реакций на аллерген (71 человек). Group II - patients with allergic diseases with the absence of delayed reactions to the allergen (71 people).

III группа - здоровые дети без аллергических заболеваний (28 человек). Group III - healthy children without allergic diseases (28 people).

Наличие или отсутствие отсроченных аллергических реакций подтверждали на основе результатов контрольного диагностического обследования с использованием ингаляционно-провокационного теста по известной методике [1] . Результаты представлены в табл. 1. The presence or absence of delayed allergic reactions was confirmed on the basis of the results of the control diagnostic examination using an inhalation-provocative test by a known method [1]. The results are presented in table. 1.

Из данных табл. 1 видно, что именно концентрация ИЛ-3, равная 300 нг/мл, обеспечила наибольшую точность прогноза в группе больных с подтвержденными отсроченными аллергическими реакциями (I группа) при отсутствии ложноположительных результатов в контрольных группах (II и III группа). From the data table. Figure 1 shows that it was the concentration of IL-3, equal to 300 ng / ml, that ensured the greatest accuracy of the prognosis in the group of patients with confirmed delayed allergic reactions (group I) in the absence of false positive results in the control groups (group II and III).

Для выявления интервала прогностически значимых различий количества базофилов в опытной и контрольной пробах, обеспечивающих наибольшую точность прогнозирования, с использованием заявленного способа были обследованы три группы лиц:
I - больные аллергическими заболеваниями с подтвержденными отсроченными реакциями на аллерген (34 человека);
II - больные аллергическими заболеваниями с отсутствием отсроченных реакций на аллерген (71 человек);
III - здоровые дети без аллергических заболеваний (28 человек).To identify the interval of prognostically significant differences in the number of basophils in the experimental and control samples that provide the most accurate forecasting, three groups of individuals were examined using the claimed method:
I - patients with allergic diseases with confirmed delayed reactions to the allergen (34 people);
II - patients with allergic diseases with the absence of delayed reactions to the allergen (71 people);
III - healthy children without allergic diseases (28 people).

Наличие или отсутствие отсроченных аллергических реакций подтверждали на основании результатов контрольного диагностического обследования с использованием ингаляционно-провокационного теста по методике [1] . Результаты представлены в табл. 2. The presence or absence of delayed allergic reactions was confirmed on the basis of the results of the control diagnostic examination using an inhalation-provocation test according to the method [1]. The results are presented in table. 2.

Из данных табл. 2 следует, что прогностически значимым является различие количества базофилов в опытной и контрольной пробах, равное 10% и более, т. к. при этих значениях достигается максимальное количество подтвержденных контролем положительных результатов при отсутствии ложноположительных результатов в контрольных группах. From the data table. 2 it follows that the difference in the number of basophils in the experimental and control samples equal to 10% or more is prognostically significant, since at these values the maximum number of positive results confirmed by the control is achieved in the absence of false positive results in the control groups.

Для доказательства специфичности заявленного способа были обследованы три группы лиц:
I группа - больные аллергическими заболеваниями с подтвержденными отсроченными аллергическими реакциями (34 человека);
II группа - больные аллергическими заболеваниями с отсутствием отcроченных аллергических реакций (71 человек);
III группа - дети без аллергических заболеваний (28 человек).To prove the specificity of the claimed method, three groups of individuals were examined:
Group I - patients with allergic diseases with confirmed delayed allergic reactions (34 people);
Group II - patients with allergic diseases with the absence of delayed allergic reactions (71 people);
Group III - children without allergic diseases (28 people).

В исследуемых группах выявляли истинные, ложноположительные и ложноотрицательные из числа прогнозируемых отсроченных аллергических реакций. При этом под истинной реакцией понимали прогнозируемую при использовании заявленного способа отсроченную аллергическую реакцию, подтвержденную результатом контрольного диагностического обследования с использованием ингаляционно-провокационного теста [1] . In the studied groups revealed true, false positive and false negative from the number of predicted delayed allergic reactions. At the same time, the true reaction was understood to mean the delayed allergic reaction predicted by using the claimed method, confirmed by the result of the control diagnostic examination using the inhalation-provocation test [1].

Под ложноположительной понимали прогнозируемую заявленным способом отсроченную аллергическую реакцию, не подтвержденную результатом ингаляционно-провокационного теста. Под ложноотрицательной понимали реакцию, установленную при использовании ингаляционно-провокационного теста, но не подтвержденную результатом заявленного способа. Результаты представлены в табл. 3. Under false positive was understood the delayed allergic reaction predicted by the claimed method, not confirmed by the result of an inhalation-provocation test. By false-negative was understood the reaction established using an inhalation-provocative test, but not confirmed by the result of the claimed method. The results are presented in table. 3.

Из приведенных данных табл. 3 видно, что заявляемый способ является специфичным, т. к. не дает ни ложноположительных, ни ложноотрицательных результатов как в группе больных с подтвержденными отсроченными аллергическими реакциями, так и в контрольных группах. From the data table. 3 shows that the claimed method is specific, because it does not give either false positive or false negative results both in the group of patients with confirmed delayed allergic reactions and in the control groups.

Возможность достижения указанного технического результата при осуществлении изобретения обусловлена следующим. Известно, что при воздействии аллергена на клетки-мишени аллергических реакций, в частности на базофилы, содержащие на своей поверхности IqE, из них выделяются медиаторы анафилаксии, вызывающие немедленные аллергические реакции, и хемотаксические факторы, привлекающие в место реакции различные клетки, в том числе лимфоциты, которые выделяют вещества, способные вызывать отсроченные аллергические реакции, т. к. для их выделения необходимо 5-8 ч [1] . Известно также, что отсроченные реакции развиваются только у части (47-73% ) больных с немедленными реакциями на аллерген [2] . The ability to achieve the specified technical result in the implementation of the invention is due to the following. It is known that when an allergen acts on target cells of allergic reactions, in particular, on basophils containing IqE on their surface, anaphylaxis mediators that cause immediate allergic reactions and chemotactic factors that attract various cells to the reaction site, including lymphocytes, are released that secrete substances that can cause delayed allergic reactions, because 5-8 hours are necessary for their isolation [1]. It is also known that delayed reactions develop only in a part (47-73%) of patients with immediate reactions to an allergen [2].

В настоящее время патогенез отсроченных аллергических реакций неясен, их объясняют воспалительными реакциями, развивающимися в стенке бронхов при воздействии простагландинов, лейкотриенов, интерлейкинов [1,2,4] . Описаны многочисленные физиологические эффекты этих факторов [3,5] , но при анализе патентной и научно-медицинской литературы не обнаружено работ по исследованию влияния ИЛ-3 на дегрануляцию базофилов крови и связи этого явления с отсроченными реакциями при аллергии. Currently, the pathogenesis of delayed allergic reactions is unclear, they are explained by inflammatory reactions that develop in the bronchial wall when exposed to prostaglandins, leukotrienes, interleukins [1,2,4]. Numerous physiological effects of these factors have been described [3,5], but in the analysis of patent and medical literature, no studies have been found to study the effect of IL-3 on degranulation of blood basophils and the connection of this phenomenon with delayed reactions in allergies.

По мнению авторов заявленного решения, у некоторых больных аллергическими заболеваниями имеются сенсибилизация к ИЛ-3, т. е. присутствуют специфичные к ИЛ-3 IqE-антитела в крови, которые обладают способностью избирательно присоединяться к клеткам-мишеням аллергических реакций, в частности к базофилам. Именно у таких больных развиваются отсроченные реакции вследствие взаимодействия высвобождающегося из скапливающихся в месте немедленной реакции клеток интерлейкина-3 с IqE на поверхности базофилов, что приводит к их дегрануляции и высвобождению вследствие этого гистамина и других медиаторов анафилаксии, вызывающих клинику отсроченной аллергической реакции. According to the authors of the claimed solution, some patients with allergic diseases have a sensitization to IL-3, i.e., there are IL-3 specific IqE antibodies in the blood that have the ability to selectively attach to target cells of allergic reactions, in particular to basophils . It is in such patients that delayed reactions develop due to the interaction of interleukin-3 cells released from the immediate reaction site accumulating with IqE on the surface of basophils, which leads to their degranulation and the release of histamine and other anaphylaxis mediators, which cause the clinic to delay the allergic reaction.

Экспериментальными исследованиями авторов заявленного способа установлено, что сенсибилизация базофилов здоровых лиц сывороткой крови больных с отсроченными реакциями вызывает дегрануляцию базофилов здоровых лиц в ответ на ИЛ-3. Установлено также, что инактивация сыворотки больных отсроченными реакциями при температуре 56^оС в течение 4 ч (режим инактивации IqE) приводит к исчезновению сенсибилизирующих свойств сыворотки.Experimental studies of the authors of the claimed method found that the sensitization of basophils in healthy individuals with the blood serum of patients with delayed reactions causes degranulation of basophils in healthy individuals in response to IL-3. It was also found that inactivation of the serum of patients with delayed reactions at 56 ^{° C} for 4 hours (IqE inactivation mode) leads to the disappearance of sensitizing properties of serum.

Таким образом, выявленная авторами заявленного решения взаимосвязь между явлением дегрануляции базофилов в ответ на ИЛ-3 и отсроченными реакциями на аллергены у больных с аллергическими заболеваниями позволяет выявить in vitro специфичные к ИЛ-3 IqE-антитела, присутствующие только у больных с отсроченными аллергическими реакциями. Thus, the relationship between the phenomenon of basophil degranulation in response to IL-3 and delayed reactions to allergens in patients with allergic diseases, revealed by the authors of the claimed solution, allows the in vitro detection of IL-3-specific IqE antibodies present only in patients with delayed allergic reactions.

Способ осуществляют следующим образом. У больного утром натощак берут 0,2 мл крови из пальца в пробирку, содержащую 0,01 мл гепарина в концентрации 200 ед/мл (конечная концентрация гепарина в крови 10 ед/мл). Пробирку встряхивают для смешивания крови с гепарином и отбирают 0,06 мл крови в контрольную пробирку и 0,06 в опытную. В контрольную пробирку добавляют растворитель, не повреждающий базофилы, например 0,02 мл забуференного физраствора, в опытную - 0,02 мл раствора ИЛ-3 в концентрации 900 нг/мл (конечная концентрация ИЛ-3 равна 300 нг/мл). Обе пробирки помещают в термостат при 37^оС на 15 мин. По окончании срока инкубации пробирки вынимают из термостата и добавляют в обе пробирки краситель, избирательно окрашивающий базофилы, например по 0,54 мл раствора толуидинового синего (для приготовления краски 0,025 г сухой краски толуидиновый синий смешивают с 100 мл 30% этилового спирта и доводят рН краски до 3,4-3,6 с помощью ледяной уксусной кислоты). При использовании указанного красителя целые базофилы окрашиваются в красный цвет, а дегранулировавшие базофилы не окрашиваются. С помощью камеры подсчитывают под микроскопом число базофилов в 1 мм³ в контрольной и опытной пробах и определяют, на сколько процентов количество базофилов в опытной пробе меньше, чем в контрольной по формуле:

100% , где Б_контр. - количество базофилов в 1 мм³ в контрольной пробе;
Б_опыт. - количество базофилов в 1 мм³ в опытной пробе. При снижении числа базофилов в опытной пробе по сравнению с контрольной на 10% и более прогнозируют отсроченные реакции у больных с аллергией.The method is as follows. A patient in the morning on an empty stomach take 0.2 ml of blood from a finger into a test tube containing 0.01 ml of heparin at a concentration of 200 units / ml (final concentration of heparin in the blood is 10 units / ml). The tube is shaken to mix the blood with heparin and 0.06 ml of blood is taken into the control tube and 0.06 into the experimental one. A solvent that does not damage the basophils, for example, 0.02 ml of buffered saline, is added to the control tube; 0.02 ml of an IL-3 solution at a concentration of 900 ng / ml (final concentration of IL-3 is 300 ng / ml) in an experimental one. Both tubes were placed in an incubator at ³⁷ ° C for 15 min. At the end of the incubation period, the tubes are removed from the thermostat and dye is added to both tubes, selectively staining basophils, for example, 0.54 ml of a solution of toluidine blue (to prepare paint 0.025 g of dry paint, toluidine blue is mixed with 100 ml of 30% ethanol and the paint is adjusted to pH up to 3.4-3.6 with glacial acetic acid). When using the specified dye, whole basophils are colored red, and degranulated basophils are not colored. Using a camera, the number of basophils in 1 mm ³ in the control and experimental samples is counted under a microscope and it is determined how many percent the number of basophils in the experimental sample is less than in the control according to the formula:

100%, where B _counter. - the number of basophils in 1 mm ³ in the control sample;
Used _experience. - the number of basophils in 1 mm ³ in the experimental sample. With a decrease in the number of basophils in the experimental sample compared with the control by 10% or more, delayed reactions in patients with allergies are predicted.

П р и м е р 1. Больная Аня К. , 13 лет, история болезни N 5140, поступила для обследования в аллергологическое отделение ДГБ N 1 Ленинграда с диагнозом: бронхиальная астма, атопическая, гормонозависимая, тяжелое течение, внеприступный период. Из анамнеза болезни известно, что впервые приступ затрудненного дыхания возник в возрасте 1 г. 10 мес. на фоне нормальной температуры, приступ был купирован в больнице преднизолоном. Затем частые приступы удушья, требующие реанимационных мероприятий и использования кортикостероидов. Провоцируют приступы физическая нагрузка, охлаждение. Приступы также возникают "беспричинно" ночью в домашних условиях. С целью прогнозирования отсроченных аллергических реакций больная обследована с использованием заявленного способа. На второй день после поступления в стационар у больной утром натощак взяли из пальца 0,2 мл крови в пробирку с гепарином (конечная концентрация гепарина 10 ед/мл). Пробирку встряхнули для смешивания крови с гепарином и отобрали 0,06 мл крови в контрольную пробирку и 0,06 мл в опытную. В контрольную пробирку добавили 0,02 мл забуференного физраствора, а в опытную 0,02 мл раствора ИЛ-3 в концентрации 900 нг/мл (конечная концентрация ИЛ-3 в растворе 300 нг/мл). PRI me R 1. Patient Anya K., 13 years old, medical history N 5140, was admitted for examination to the allergological department of Children's hospital No 1 in Leningrad with a diagnosis of bronchial asthma, atopic, hormone-dependent, severe course, out of contact period. From the anamnesis of the disease it is known that the first attack of labored breathing arose at the age of 1 year 10 months. against the background of normal temperature, the attack was stopped in the hospital by prednisone. Then frequent attacks of suffocation, requiring resuscitation and the use of corticosteroids. Provoke physical activity attacks, cooling. Attacks also occur "at no reason" at night at home. In order to predict delayed allergic reactions, the patient was examined using the claimed method. On the second day after admission to the hospital, a patient on an empty stomach in the morning took 0.2 ml of blood from a finger into a test tube with heparin (final concentration of heparin 10 units / ml). The tube was shaken to mix the blood with heparin and 0.06 ml of blood was taken into the control tube and 0.06 ml into the experimental one. 0.02 ml of buffered saline was added to the control tube, and 0.02 ml of an IL-3 solution at a concentration of 900 ng / ml (final concentration of IL-3 in a solution of 300 ng / ml) was added to an experimental 0.02 ml solution.

Обе пробирки поместили в термостат при 37^оС на 15 мин. По окончании срока инкубации пробирки вынули из термостата и добавили в обе пробирки 0,54 мл 0,025% краски толуидиновый синий, приготовленной на 30% этиловом спирте, рН краски 3,4. С помощью камеры подсчитали число базофилов в контрольной и опытной пробах, которое составило соответственно 50 и 45 базофилов в 1 мм³. По формуле определили на сколько процентов количество базофилов в опытной пробирке меньше, чем в контрольной:

100 % = 10 % . Поскольку число базофилов в опытной пробе снизилось на 10% по сравнению с контрольной, у больной спрогнозирована отсроченная аллергическая реакция, которая была подтверждена на 4 день пребывания больной в стационаре при проведении ингаляционного провокационного теста с аллергеном домашней пыли (серия 246). С помощью пневмотахометра у больной определяли максимальную скорость выдоха до, сразу после и через 5 мин после ингаляции физраствора, которые различались между собой менее чем на 5% , т. е. гиперреактивность на физраствор отсутствовала. Затем больной проводили ингаляции аллергена домашней пыли (серия 246) в разведении 10⁶. Измеряли пиковую скорость выдоха сразу после, через 5 мин и через 20 мин после ингаляции домашней пыли. Через 20 мин после ингаляции пиковая скорость выдоха снизилась на 25% по сравнению с пиковой скоростью выдоха после ингаляции физраствора, т. е. получена немедленная аллергическая реакция на домашнюю пыль. Затем пиковую скорость выдоха измеряли каждый час. К концу 2 ч пиковая скорость выдоха восстановилась и не отличалась от таковой после ингаляции физраствора, но через 6 ч после ингаляции аллергена пиковая скорость выдоха снизилась на 35% по сравнению с пиковой скоростью выдоха после ингаляции физраствора, т. е. развилась отсроченная аллергическая реакция. Это сопровождалось также развитием приступа бронхиальной астмы у данной больной, который удалось купировать только после внутривенного введения преднизолона, т. к. ни адреномиметики, ни эуфиллин не снимали бронхоспазма. Таким образом, предсказанная с помощью заявленного способа отсроченная аллергическая реакция подтвердилась при проведении ингаляционно-провокационного теста.Both tubes were placed in an incubator at ³⁷ ° C for 15 min. At the end of the incubation period, the tubes were removed from the thermostat and 0.54 ml of 0.025% toluidine blue paint prepared with 30% ethanol was added to both tubes, the pH of the paint was 3.4. Using the camera, the number of basophils in the control and experimental samples was calculated, which amounted to 50 and 45 basophils in 1 mm ^3, respectively. Using the formula, we determined how many percent the number of basophils in the experimental test tube is less than in the control:

100% = 10%. Since the number of basophils in the experimental sample decreased by 10% compared with the control, the patient was predicted to have a delayed allergic reaction, which was confirmed on the 4th day of the patient’s stay in the hospital during an inhalation provocation test with house dust allergen (series 246). Using a pneumotachometer, the patient exhaled the maximum exhalation rate before, immediately after and 5 minutes after inhalation of saline, which differed by less than 5%, i.e. there was no hyperreactivity to saline. Then the patient was inhaled allergens house dust (series 246) at a dilution of 10 ⁶ . The peak expiratory flow was measured immediately after, after 5 minutes, and 20 minutes after inhalation of house dust. 20 minutes after inhalation, the peak expiratory flow rate decreased by 25% compared to the peak expiratory flow rate after inhalation of saline solution, i.e., an immediate allergic reaction to house dust was obtained. Then, peak expiratory flow rate was measured every hour. By the end of 2 hours, the peak expiratory flow rate recovered and did not differ from that after inhalation of saline solution, but 6 hours after inhalation of the allergen, the peak expiratory flow rate decreased by 35% compared to the peak expiratory flow rate after inhalation of saline solution, i.e., a delayed allergic reaction developed. This was also accompanied by the development of an attack of bronchial asthma in this patient, who managed to stop only after intravenous administration of prednisolone, since neither adrenergic agonists nor aminophylline removed bronchospasm. Thus, the delayed allergic reaction predicted by the inventive method was confirmed during an inhalation-provocation test.

П р и м е р 2. Больной Саша К. , история болезни N 7430, поступил на аллергологическое отделение с диагнозом: бронхиальная астма, атопическая, паторецепторная, среднетяжелая, внеприступный период. Из анамнеза болезни известно, что приступы удушья беспокоят с 3 лет (в момент госпитализации больному 9 лет), возникают при проведении уборки дома, при пребывании в пыльных помещениях, при физической нагрузке и при воздействии резких запахов, купируются введением эуфиллина или ингаляциями адреномиметиков. На второй день после поступления в стационар больной обследован с помощью заявленного способа. Количество базофилов в контрольной пробе составило 48 клеток в 1 мм³, а в опытной (добавлен ИЛ-3) - 35 клеток в 1 мм³, т. е. количество базофилов в опытной пробе снизилось по сравнению с контрольной на 27% , т. е. у больного спрогнозирована отсроченная аллергическая реакция, которая подтвердилась при проведении ингаляционной провокационной пробы с аллергеном домашней пыли серии 66 - падение пиковой скорости выдоха через 7 ч после ингаляции домашней пыли на 25% по сравнению с пиковой скоростью выдоха после ингаляции физраствора, что сопровождалось также развитием нетяжелого приступа бронхоспазма, купировавшегося после ингаляции беротека. Таким образом, ингаляционно-провокационная проба подтвердила спрогнозированную с помощью заявленного способа отсроченную аллергическую реакцию.PRI me R 2. Patient Sasha K., medical history N 7430, was admitted to the allergology department with a diagnosis of bronchial asthma, atopic, pathoreceptor, moderate, extra-period. From the anamnesis of the disease, it is known that asthma attacks have been disturbing since 3 years (at the time of hospitalization, the patient is 9 years old), occur when cleaning the house, when staying in dusty rooms, during physical exertion and when exposed to pungent odors, are stopped by the introduction of eufillin or inhalation of adrenergic agonists. On the second day after admission to the hospital, the patient was examined using the claimed method. The number of basophils in the control sample was 48 cells in 1 mm ³ , and in the experimental (added IL-3) - 35 cells in 1 mm ³ , i.e. the number of basophils in the experimental sample decreased by 27% compared to the control one, i.e. e. a delayed allergic reaction is predicted for the patient, which was confirmed by an inhalation provocation test with a house dust allergen of series 66 - a peak exhalation rate 7 hours after inhalation of house dust by 25% compared to the peak exhalation rate after inhalation of saline solution, which was accompanied by the development of non-severe attack of bronchospasm after inhalation beroteka docked. Thus, the inhalation-provocative test confirmed the delayed allergic reaction predicted by the claimed method.

П р и м е р 3. Больная Юля С. , 4 года, история болезни N 6608, поступила на аллергологическое отделение с диагнозом: астматический бронхит, средней тяжести, внеприступный период. Приступы затрудненного дыхания с 1 года, провоцируются запахом и приемом рыбы, резкими запахами. При проведении кожных скарификационных проб причинно-значимый аллерген не выявлен, т. к. пробы с пищевыми, пылевыми, пыльцевыми, эпидермальными аллергенами были отрицательными. С помощью заявленного способа у больной спрогнозированы отсроченные аллергические реакции, т. к. в опытной пробе с ИЛ-3 количество базофилов было на 16% меньше, чем в контрольной с физраствором. Проведение ингаляционно-провокационных проб было невозможным, т. к. из-за малого возраста больная была неспособна выполнять указания врача. Во время пребывания в отделении больная по недосмотру съела кусок рыбы. PRI me R 3. Patient Julia S., 4 years old, medical history N 6608, was admitted to the allergology department with a diagnosis of asthmatic bronchitis, moderate severity, out of contact period. Attacks of shortness of breath from 1 year, are provoked by the smell and ingestion of fish, sharp odors. When carrying out skin scarification tests, a causative allergen was not detected, since samples with food, dust, pollen, and epidermal allergens were negative. Using the inventive method, the patient is predicted to have delayed allergic reactions, because in the experimental sample with IL-3 the number of basophils was 16% less than in the control with saline. Carrying out inhalation-provocative tests was impossible, because due to the small age the patient was unable to follow the doctor’s instructions. During a stay in the ward, the patient oversaw a piece of fish.

Сразу после употребления рыбы каких-либо изменений в состоянии больной не отмечено, но через 6,5 ч после употребления рыбы больная дала тяжелую аллергическую реакцию в виде бронхоспазма, отека век, губ, падения артериального давления, которую удалось купировать только после повторного введения адреналина, кортикостероидов, внутривенного введения больших количеств жидкости с целью восполнения объема циркулирующей крови. Таким образом, спрогнозированная при использовании заявленного способа отсроченная аллергическая реакция подтверждена клинически (развитие симптомов аллергического заболевания через 6,5 ч после контакта с аллергеном). Immediately after eating fish, no changes in the patient’s condition were noted, but 6.5 hours after eating fish, the patient gave a severe allergic reaction in the form of bronchospasm, edema of the eyelids, lips, and a drop in blood pressure, which was stopped only after repeated administration of adrenaline, corticosteroids, intravenous administration of large quantities of fluid in order to replenish the volume of circulating blood. Thus, the delayed allergic reaction predicted using the inventive method is clinically confirmed (the development of symptoms of an allergic disease 6.5 hours after contact with the allergen).

С использованием заявленного способа было обследовано 198 детей с аллергическими заболеваниями, из них 139 детей с бронхиальной астмой, 39 детей с аллергическим бронхитом, 20 детей с аллергическим трахеобронхитом. Все дети на второй день после поступления в аллергологическое отделение были обследованы с помощью заявленного способа. Для подтверждения прогноза, полученного при использовании заявленного способа, 154 ребенка старше 5 лет были обследованы с использованием диагностического ингаляционно-провокационного теста [1] , принятого в качестве контроля, у 44 детей младше 5 лет проведение контрольного диагностического обследования не представлялось возможным, т. к. его методика предполагает сознательное выполнение больным требований врача. Кроме того, производили хронометрирование прогностической процедуры при использовании заявленного способа, а также диагностической процедуры контрольного обследования. Результаты представлены в табл. 4. Using the claimed method, 198 children with allergic diseases were examined, of which 139 children with bronchial asthma, 39 children with allergic bronchitis, 20 children with allergic tracheobronchitis. All children on the second day after admission to the allergy department were examined using the claimed method. To confirm the forecast obtained using the claimed method, 154 children over 5 years old were examined using a diagnostic inhalation-provocative test [1], taken as a control, in 44 children under 5 years of age a control diagnostic examination was not possible, because . his technique involves the conscious implementation of the patient's requirements of the doctor. In addition, the timing of the prognostic procedure was performed using the claimed method, as well as the diagnostic control examination procedure. The results are presented in table. 4.

Из данных табл. 4 видно, что прогнозируемые с помощью заявленного способа отсроченные аллергические реакции в 96% случаев подтверждались при проведении диагностического ингаляционно-провокационного теста. From the data table. 4 it is seen that the delayed allergic reactions predicted by the claimed method in 96% of cases were confirmed during the diagnostic inhalation-provocation test.

Отсутствие подтверждения прогноза у двух больных по мнению авторов заявленного решения может быть обусловлено тем, что лекарства, принимаемые больными, а именно преднизолон и задитен, отмененные за 2 дня до проведения ингаляционно-провокационной пробы с аллергеном, в силу их пролонгированного действия могут влиять на результаты ингаляционного провокационного теста (вызывать ложно-отрицательные результаты), подавляя отсроченную реакцию на аллерген. Из табл. 4 видно также, что заявленный способ характеризуется относительно небольшим временем, затрачиваемым на проведение анализа, при полном отсутствии каких-либо побочных отрицательных эффектов ( частности, отсутствовало развитие бронхоспазма, которое наблюдалось клинически в виде приступа удушья у 33% больных при проведении ингаляционно-провокационного теста). The lack of confirmation of the prognosis in two patients, according to the authors of the claimed decision, may be due to the fact that the drugs taken by the patients, namely prednisone and zadit, canceled 2 days before the inhalation-provocative test with the allergen, due to their prolonged action, can affect the results inhalation provocation test (cause false-negative results), suppressing a delayed reaction to an allergen. From the table. 4 also shows that the claimed method is characterized by a relatively short time spent on the analysis, in the complete absence of any adverse side effects (in particular, there was no development of bronchospasm, which was observed clinically in the form of an asthma attack in 33% of patients during an inhalation-provocation test )

Таким образом, заявляемый способ, позволяющий in vitro выявлять специфичный к интерлейкину-3 иммуноглобулин Е в крови больных, дающих отсроченные аллергические реакции, обеспечивает безопасность больного, т. к. исключен контакт больного с веществами, способными вызвать обострение аллергического заболевания, и возможность применения для лиц различного возраста (включая детей младше 5 лет), а также у лиц с обострением аллергического заболевания. (56) 1. Либерман Ф. и Кроуфорд Л. Лечение больных аллергией. Пер. с англ. , М. : Медицина, 1986, с. 26-27, 73-77. Thus, the claimed method, allowing in vitro to detect specific for interleukin-3 immunoglobulin E in the blood of patients giving delayed allergic reactions, ensures the safety of the patient, since contact of the patient with substances that can cause an exacerbation of an allergic disease is excluded, and the possibility of use for persons of various ages (including children under 5 years old), as well as in persons with an exacerbation of an allergic disease. (56) 1. Lieberman F. and Crawford L. Treatment of patients with allergies. Per. from English , M.: Medicine, 1986, p. 26-27, 73-77.

2. A. Tenabene, J. C. Kepferschmidt-Kubler, J. C. Bessof, J. Pauli. La reaction bronchique retardee eu non immediate. Rev. Fr. Allergol. , 1990, 30, N 2, 103-110. 2. A. Tenabene, J. C. Kepferschmidt-Kubler, J. C. Bessof, J. Pauli. La reaction bronchique retardee eu non immediate. Rev. Fr Allergol. 1990, 30, N 2, 103-110.

3. F. R. Balkwill, F. Burke. The cytokine network. Immunol. today, 1989, 10, N 9, 299-304. 3. F. R. Balkwill, F. Burke. The cytokine network. Immunol. today, 1989, 10, N 9, 299-304.

4. Holgate S. T. , Finnerty J. P. Recent advances in understanding the pathogenesis of asthma and its clincal implications. Quart J. Med. , 1988, 66, N 249, 5-19. 4. Holgate S. T., Finnerty J. P. Recent advances in understanding the pathogenesis of asthma and its clincal implications. Quart J. Med. 1988, 66, N 249, 5-19.

5. Henderson W. R. Lipid-derived and other chemical mediators of inflammation in the lung. J. Allergy Clin. Immunology, 1987, 79, 543-553. 5. Henderson W. R. Lipid-derived and other chemical mediators of inflammation in the lung. J. Allergy Clin. Immunology, 1987, 79, 543-553.

6. Ji. Pepys, H. Hutcheroft. Bronchial provocation tests in asthma. Am. Rev. Respir. Dis. , 1975, 112, 841-859. 6. Ji. Pepys, H. Hutcheroft. Bronchial provocation tests in asthma. Am. Rev. Respir. Dis. 1975, 112, 841-859.

Claims

DIAGNOSIS METHOD FOR DELAYED ALLERGIC REACTION by immunological examination of the patient’s body, characterized in that the patient’s heparinized blood is examined, while one of the samples is supplemented with interleukin-3 solution at a final concentration of 300 ng / ml, and the other solvent, then both samples are incubated in an incubator , they are treated with dye and the content of basophils in each sample is determined and, when their number is reduced in a sample containing interleukin-3 by 10% or more, delayed al is diagnosed in comparison with another sample allergic reaction.