RU2074196C1 - Method of hyaluronic acid preparing - Google Patents
Method of hyaluronic acid preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2074196C1 RU2074196C1 RU93041849A RU93041849A RU2074196C1 RU 2074196 C1 RU2074196 C1 RU 2074196C1 RU 93041849 A RU93041849 A RU 93041849A RU 93041849 A RU93041849 A RU 93041849A RU 2074196 C1 RU2074196 C1 RU 2074196C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- extract
- raw materials
- extraction
- hyaluronic acid
- deproteinization
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к химии природных соединений, конкретно к способу получения гиалуроновой кислоты (ГК) высокомолекулярного природного мукополисахарида, используемого в медицине и косметике в качестве стимулятора обменных процессов, пролонгатора действия различных лекарственных средств, а также в качестве субстрата при количественном определении фрагмента гиалуронидазного действия (1). The invention relates to the chemistry of natural compounds, specifically to a method for producing hyaluronic acid (HA) of a high molecular weight natural mucopolysaccharide used in medicine and cosmetics as a stimulator of metabolic processes, a prolonger of the action of various drugs, and also as a substrate for the quantitative determination of a fragment of hyaluronidase action (1 )
Известны способы получения ГК из животного сырья, основанные на экстракции, ферментативном гидролизе, фракционировании различными растворителями, очистке на сорбентах и т. п. (2 6). Known methods for producing HA from animal raw materials based on extraction, enzymatic hydrolysis, fractionation with various solvents, purification on sorbents, etc. (2 6).
Недостатками известных способов являются низкий выход ГК и присутствие в ней белков и других примесей, которые могут вызывать аллергические реакции у больных при парентеральном введении, а также при использовании в офтальмологии. Поэтому такие препараты ГК не находят применения в медицине и используются лишь как химические реактивы. The disadvantages of the known methods are the low yield of HA and the presence of proteins and other impurities in it, which can cause allergic reactions in patients with parenteral administration, as well as when used in ophthalmology. Therefore, such HA preparations are not used in medicine and are used only as chemical reagents.
Наиболее близким к заявленному является способ получения ГК (7), принятый за прототип, согласно которому сырье гребни петухов и кур обескровливают, измельчают многократно отмывают этанолом, содержащим хлороформом, дважды экстрагируют водой, экстракты подвергают депротеинизации путем многократной обработки хлороформом, ГК осаждают этанолом, переосаждают из этанола и ацетона и сушат (фиг. 1). Получаемый препарат под названием "Нyalon" используется в медицине, преимущественно в офтальмологии в качестве вископротектора. Closest to the claimed is the method of obtaining HA (7), adopted as a prototype, according to which the raw materials of roosters and chickens are bled, crushed repeatedly washed with ethanol containing chloroform, extracted twice with water, the extracts are subjected to deproteinization by repeated treatment with chloroform, HA precipitated with ethanol, reprecipitated from ethanol and acetone and dried (Fig. 1). The resulting preparation, called "Hyalon", is used in medicine, primarily in ophthalmology, as a viscoprotector.
Недостатки известного способа заключаются в том, что этот препарат ГК (выход около 0,08% к массе сырья) не является ультрачистым и содержит до 0,5% белковых веществ, в том числе до 0,2% овальбумина, обладающего антигенными свойствами и представляющего реальную угрозу сенсибилизации больных, поскольку этот белок может проникать через кожу и слизистые оболочки, минуя иммунный надзор (8). The disadvantages of this method are that this HA preparation (yield about 0.08% by weight of raw materials) is not ultra pure and contains up to 0.5% protein substances, including up to 0.2% ovalbumin, which has antigenic properties and represents a real threat to the sensitization of patients, since this protein can penetrate the skin and mucous membranes, bypassing immune surveillance (8).
Изобретение решает задачу получения ультрачистой ГК, практически не содержащей примесей белка, в том числе, овальбумина. The invention solves the problem of obtaining ultrapure HA, practically free of protein impurities, including ovalbumin.
Указанный результат достигается тем, что в способе получения ультрачистой гиалуроновой кислоты, включающем обескровливание и измельчение сырья гребней петухов и кур, многократную промывку измельченного сырья 96%-ным спиртом, содержащим 1 мас. хлороформа, экстракцию промытого и измельченного сырья водой, депротеинизацию профильтрованного экстракта, фильтрацию и сушку целевого продукта, экстракцию промытого и измельченного сырья проводят 3 3,5 объемами воды, подкисленной до рН 3 4 при 90 100oC в течение 40 60 мин, депротеинизацию отфильтрованного экстракта осуществляют обработкой при 60 80oC в течение 1 2 ч, сначала активированным углем, а затем диэтиламиноэтилцеллюлозой, используемыми в количестве 1,0 1,5% от объема экстракта, а фильтрацию осуществляют последовательно пропусканием депротеинизированного экстракта при 30 40oС через бумажные фильтры, фильтры из боросиликатного стекла, стерильные ацетилцеллюлозные и поливинилхлоридные мембраны (фиг. 2).The specified result is achieved by the fact that in the method for producing ultrapure hyaluronic acid, which includes bleeding and grinding of raw materials of cocks and chickens, repeated washing of the crushed raw materials with 96% alcohol containing 1 wt. chloroform, extraction of washed and ground raw materials with water, deproteinization of the filtered extract, filtration and drying of the target product, extraction of washed and ground raw materials is carried out with 3.5 volumes of water, acidified to pH 3 4 at 90-100 ° C for 40-60 minutes, filtered deproteinization the extract is carried out by treatment at 60 80 o C for 1 2 hours, first with activated carbon, and then diethylaminoethyl cellulose, used in an amount of 1.0 to 1.5% of the volume of the extract, and the filtration is carried out sequentially by passing deprot unified extract at 30 40 o With paper filters, borosilicate glass filters, sterile cellulose acetate and polyvinyl chloride membranes (Fig. 2).
При этом содержание белков в ГК (выход 0,09 0,12%) составляют менее 0,1% в том числе, овальбумина менее 0,001% (содержание общего белка в препарате ГК определяли классическим методом Кьельдаля, а содержание овальбумина с помощью твердофазной иммуноферментной тест-системы, имеющей чувствительность 0,5 нг/мл(9)), а величина относительной вязкости 0,1%-ного водного раствора ГК при 20oC составляет 12 14, что свидетельствует о ее высокой молекулярной массе.In this case, the protein content in the HA (yield 0.09 0.12%) is less than 0.1%, including ovalbumin less than 0.001% (the total protein content in the HA preparation was determined by the classical Kjeldahl method, and the ovalbumin content using the enzyme-linked immunosorbent assay -system having a sensitivity of 0.5 ng / ml (9)), and the relative viscosity of a 0.1% aqueous solution of HA at 20 o C is 12 14, which indicates its high molecular weight.
Предлагаемые стадии и параметры технологического процесса получения ГК являются логически обоснованными. The proposed stages and parameters of the technological process for obtaining HA are logically justified.
Сохранив используемые в прототипе условия обескровливания и измельчения гребней птиц, а также многократную промывку сырья этанолом, содержащим в качестве консерванта 1% хлороформа, поскольку это приводит к максимально высокому удалению остатков крови и ферментов, расщепляющих молекулу ГК, нами были изменены условия экстракции и последующей очистки ГК. Использование 3 - 3,5 объемов воды, подкисленной до рН 3 4 и проведение процесса экстракции при 90 100oC в течение 40 60 мин позволяет добиваться максимального извлечения ГК из сырья. Уменьшение количества экстрагента (менее 3 объемов), изменение рН среды (ниже 3,0 или выше 4,0), снижение температуры (ниже 90oC) или длительности экстракции (менее 40 мин) приводит к снижению содержания ГК в экстракте, а увеличение количества экстрагента (более 3,5 объемов) и длительности экстракции (более 60 мин) не приводит к дополнительному извлечению ГК и потому является технологически не обоснованным.Preserving the conditions for bleeding and grinding the crests of birds used in the prototype, as well as multiple washing of the raw materials with ethanol containing 1% chloroform as a preservative, since this leads to the highest possible removal of blood residues and enzymes that break down the HA molecule, we changed the conditions of extraction and subsequent cleaning GK. Using 3 - 3.5 volumes of water acidified to pH 3 4 and carrying out the extraction process at 90 100 o C for 40 60 minutes allows you to achieve maximum extraction of HA from raw materials. A decrease in the amount of extractant (less than 3 volumes), a change in the pH of the medium (below 3.0 or above 4.0), a decrease in temperature (below 90 o C) or the duration of the extraction (less than 40 min) leads to a decrease in the HA content in the extract, and an increase the amount of extractant (more than 3.5 volumes) and the duration of extraction (more than 60 min) does not lead to additional extraction of HA and therefore is not technologically justified.
На фиг. 1 изображена схема технологического процесса получения гиалуроновой кислоты по известному способу; на фиг. 2 схема технологического процесса получения ГК по предлагаемому способу. In FIG. 1 shows a flow diagram of a process for producing hyaluronic acid by a known method; in FIG. 2 scheme of the technological process for obtaining HA by the proposed method.
Процесс депротеинизации ГК в известном способе осуществляется многократным промыванием водного экстракта хлороформом. Однако этот процесс является длительным, экологически опасным и не приводит к полному удалению боковых веществ. В заявляемом способе с этой целью предусматривается обработка экстракта двумя сорбентами сначала активированным углем (препарат СССР), а затем ДОАЭ-Ц (фирма "Сигма", США с емкостью 0,9 мэкв/г), оптимальные количества которых составляют 1 1,5% от объема экстракта, время сорбции составляет 1 2 ч. При этом максимальное количество белков сорбируется при условии нагревания экстракта на 60 80oC.The process of deproteinization of HA in the known method is carried out by repeatedly washing the aqueous extract with chloroform. However, this process is long, environmentally hazardous and does not lead to the complete removal of side substances. In this method, for this purpose, the extract is treated with two sorbents, first with activated carbon (a preparation of the USSR), and then DOAE-C (Sigma company, USA with a capacity of 0.9 meq / g), the optimal amounts of which are 1.5% of the volume of the extract, the sorption time is 1 2 hours. In this case, the maximum amount of proteins is adsorbed provided that the extract is heated to 60 80 o C.
Можно отметить, что сорбция носит избирательный характер и касается только белковых веществ, а ГК остается в экстракте, что было подтверждено ранее проводимыми исследованиями (10). It can be noted that sorption is selective and concerns only protein substances, and HA remains in the extract, which was confirmed by previous studies (10).
Вместе с тем, после депротеинизации экстракта, в нем сохраняется еще достаточно высокое содержание белков (0,8 1,4%). Поэтому в заявленном способе предусматривается дополнительная очистка ГК путем последовательной фильтрации экстракта сначала через бумагу, а затем через фильтры из боросиликатного стекла, ацетилцеллюлозные и поливинилхлоридные мембраны под давлением 0,5 0,7 атм, которое создается при помощи перистальтического насоса "Мастерфлекс". При этом процесс экстракции осуществляют при температуре экстракта 30 40oC, поскольку при более низких температурах растворы быстро загустевают и не проходят через мембраны, а более высокие температуры приводят к необоснованному увеличению затрат на электроэнергию.However, after deproteinization of the extract, it still retains a fairly high protein content (0.8 1.4%). Therefore, the claimed method provides for additional purification of HA by sequential filtration of the extract, first through paper, and then through borosilicate glass filters, cellulose acetate and polyvinyl chloride membranes under a pressure of 0.5 to 0.7 atm, which is created using a Masterflex peristaltic pump. The extraction process is carried out at a temperature of the extract of 30 40 o C, because at lower temperatures the solutions quickly thicken and do not pass through the membranes, and higher temperatures lead to an unreasonable increase in energy costs.
Выбор указанных мембран основан на результатах проведенного экспериментального изучения и жесткого скрининга, при котором были исключены как малоэффективные отечественные полисульфонамидные мембраны, импортные мембраны на основе полисульфида, фильтрокартон и др. The choice of these membranes is based on the results of an experimental study and rigorous screening, in which ineffective domestic polysulfonamide membranes, imported polysulfide-based membranes, filter cardboard, etc. were excluded.
Для достижения стерильности выбранных мембран их обрабатывали 5%-ным раствором формальдегида в течение 24 48 ч и затем отмывали стерильной дистиллированной водой до отрицательной пробы на формальдегид по реакции с фуксин сернистой кислотой. To achieve the sterility of the selected membranes, they were treated with 5% formaldehyde solution for 24 to 48 hours and then washed with sterile distilled water until a formaldehyde test was negative by reaction with fuchsin sulphurous acid.
Полученные растворы ультрачистой ГК, представляющие собой прозрачную бесцветную жидкость со слабым специфическим запахом сушили лиофилизацией в асептических условиях. Выход порошка составлял 0,09 0,12% к массе сырья. The resulting ultrapure HA solutions, which are a clear, colorless liquid with a faint specific odor, were dried by lyophilization under aseptic conditions. The yield of powder was 0.09 0.12% by weight of the feed.
Изобретение поясняется следующими примерами его осуществления
Пример 1.The invention is illustrated by the following examples of its implementation
Example 1
Петухов и кур в возрасте от 6 месяцев до 1 года с крупными мясистыми гребнями полностью обескровливают путем вскрытия сонной артерии, гребни срезают у основания черепа, промывают холодной, а затем горячей водой, концы гребней, пропитанные кровью, срезают и отбрасывают. 1 кг отпрепарированных гребней измельчают дважды на мясорубке, фарш промывают 3 4 раза 2 объемами 96% -ного этанола, содержащего 1% хлороформа, до получения бесцветного спиртового раствора, затем фарш экстрагируют 3 л (3 объема) воды, подкисленной 1 М уксусной кислотой до рН 3,0. при 90oC в течение 40 мин, экстракт отделяют от сырья фильтрацией через вату, в 2,5 л фильтрата добавляют 25 г активированного угля (1% от объема экстракта), смесь нагревают при 60oC 1 ч, затем фильтруют через бумажные фильтры, к фильтрату добавляют 25 г ДЭАЭ-Ц (1% от объема экстракта), нагревают при 60oC 1 ч, фильтруют через бумажные фильтры, раствор последовательно пропускают при 30oC через фильтр из боросиликатного стекла фирмы "Millipore" (США), стерильные ацетилцеллюлозные мембраны фирмы "Сарториус" (ФРГ) с диаметром 1,2 мкм и поливинилхлоридные мембраны (ТУ 6-06-И-142-86) с рабочей площадью 0,2 м2 под давлением на выходе мембран 0,5 0,7 атм. Полученный раствор сушат сублимацией в асептических условиях и получают 0,9 г (выход 0,09%) порошка гиалуроновой кислоты, легко растворимого в воде, имеющего относительную вязкость 0,1%-ного раствора при 20oC 12,0 и содержание белка менее 0,05% в том числе, овальбумина менее 0,001%
Пример 2.Roosters and chickens from 6 months to 1 year of age with large fleshy crests are completely bled by opening the carotid artery, the ridges are cut off at the base of the skull, washed with cold and then hot water, the ends of the ridges soaked in blood are cut off and discarded. 1 kg of prepared ridges is crushed twice in a meat grinder, minced meat is washed 3 4 times with 2 volumes of 96% ethanol containing 1% chloroform to obtain a colorless alcohol solution, then minced meat is extracted with 3 L (3 volumes) of water acidified with 1 M acetic acid to pH 3.0. at 90 o C for 40 min, the extract is separated from the feed by filtration through cotton, 25 g of activated carbon (1% of the extract volume) is added to 2.5 l of the filtrate, the mixture is heated at 60 o C for 1 h, then filtered through paper filters 25 g of DEAE-C (1% of the extract volume) are added to the filtrate, heated at 60 ° C for 1 hour, filtered through paper filters, the solution is passed successively at 30 ° C through a Millipore borosilicate glass filter (USA), sterile cellulose acetate membranes from Sartorius (Germany) with a diameter of 1.2 microns and polyvinyl chloride membranes (TU 6 -06-I-142-86) with a working area of 0.2 m 2 under pressure at the outlet of the membranes 0.5 0.7 atm. The resulting solution was freeze-dried under aseptic conditions and 0.9 g (yield 0.09%) of hyaluronic acid powder, readily soluble in water, having a relative viscosity of 0.1% solution at 20 ° C. 12.0 and a protein content of less than 0.05% including ovalbumin less than 0.001%
Example 2
1 кг отпрепарированных, измельченных и промытых этанолом, как указано в примере 1, гребней петухов и кур экстрагируют 3,25 л воды (3,25 объема), подкисленной 1 М уксусной кислотой до рН 3,5, при температуре 95oC в течение 50 мин, экстракт отделяют от сырья фильтрацией через вату, к 3 л раствора добавляют 37,5 г (1,25%) активированного угля, смесь нагревают при 70oC 1,5 ч, затем фильтруют через бумажные фильтры, к фильтрату добавляют 37,5 г ДЭАЭ-Ц (1,25% ), нагревают при 70oC 1,5 ч, фильтруют через бумажные фильтры, экстракт последовательно пропускают при 35oC через фильтр из боросиликатного стекла, стерильные ацетилцеллюлозные и поливинилхлоридные мембраны под давлением 0,5 0,7 атм. Полученный раствор сушат сублимацией в асептических условиях и получают 1,0 г порошка ГК (выход 0,1%), легко растворимого в воде, имеющего относительную вязкость 0,1%-ного раствора при 20oC 13,0 и содержание белка менее 0,05% в том числе, овальбумина менее 0,001%
Пример 3.1 kg of prepared, crushed and washed with ethanol, as described in example 1, the crests of cocks and chickens are extracted with 3.25 l of water (3.25 volume), acidified with 1 M acetic acid to pH 3.5, at a temperature of 95 o C for 50 minutes, the extract is separated from the feed by filtration through cotton, 37.5 g (1.25%) of activated carbon is added to a 3 L solution, the mixture is heated at 70 ° C for 1.5 hours, then filtered through paper filters, 37 is added to the filtrate 5 g of DEAE-C (1.25%), heated at 70 ° C for 1.5 hours, filtered through paper filters, the extract was sequentially passed at 35 ° C through a filter from borosilicate glass, sterile cellulose acetate and polyvinyl chloride membranes under a pressure of 0.5 to 0.7 atm. The resulting solution was freeze-dried under aseptic conditions to obtain 1.0 g of HA powder (0.1% yield), readily soluble in water, having a relative viscosity of 0.1% solution at 20 ° C. and 13.0 and a protein content of less than 0 , 05% including ovalbumin less than 0.001%
Example 3
1 кг отпрепаринрованных, измельченных и промытых этанолом, как указано в примере 1, гребней петухов и кур экстрагируют 3,5 л воды (3,5 объема), подкисленной 1 М уксусной кислотой до pH 4, при 100oC в течение 1 ч, экстракт отфильтровывают через вату, к 3,2 л фильтрата добавляют 49,7 г (1,5%) активированного угля, смесь нагревают при 80oC 2 ч, затем фильтруют через бумажные фильтры, к фильтрату добавляют 49,7 г ДЭАЭ-Ц (1,5%), нагревают при 80oC 2 ч фильтруют через бумажные фильтры, фильтрат последовательно пропускают при 35oC через фильтр из боросиликатного стекла, стерильные ацетилцеллюлозные и поливинилхлоридные мембраны под давлением 0,5-0,7 атм. Полученный раствор сушат сублимацией в асептических условиях и получают 1,2 г порошка ГК (выход 0,12%), легко растворимого в воде, имеющего относительную вязкость 0,1%-ного раствора при 20oC 14 и содержание белка менее 0,05% в том числе, овальбумина менее 0,001%
Сопоставительный анализ технико-экономических показателей заявляемого объекта и известного способа приведен в таблице.1 kg of prepared, crushed and washed with ethanol, as described in example 1, the crests of cocks and chickens are extracted with 3.5 l of water (3.5 volumes), acidified with 1 M acetic acid to pH 4, at 100 o C for 1 h, the extract is filtered through cotton, 49.7 g (1.5%) of activated carbon is added to 3.2 l of the filtrate, the mixture is heated at 80 ° C for 2 hours, then filtered through paper filters, 49.7 g of DEAE-C is added to the filtrate (1.5%), heated at 80 ° C for 2 hours, filtered through paper filters, the filtrate was passed successively at 35 ° C through a borosilicate glass filter, ster linen cellulose and polyvinyl chloride membranes under a pressure of 0.5-0.7 atm. The resulting solution was freeze-dried under aseptic conditions and 1.2 g of HA powder was obtained (yield 0.12%), readily soluble in water, having a relative viscosity of 0.1% solution at 20 ° C. and a protein content of less than 0.05 % including ovalbumin less than 0.001%
Comparative analysis of technical and economic indicators of the proposed facility and the known method are shown in the table.
Т. е. заявляемый способ позволят получать ультрачистую ГК, практически свободную от белковых веществ. That is, the claimed method will allow to obtain ultrapure HA, almost free of protein substances.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93041849A RU2074196C1 (en) | 1993-08-23 | 1993-08-23 | Method of hyaluronic acid preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93041849A RU2074196C1 (en) | 1993-08-23 | 1993-08-23 | Method of hyaluronic acid preparing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU93041849A RU93041849A (en) | 1996-10-10 |
| RU2074196C1 true RU2074196C1 (en) | 1997-02-27 |
Family
ID=20146775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93041849A RU2074196C1 (en) | 1993-08-23 | 1993-08-23 | Method of hyaluronic acid preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2074196C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2192960A1 (en) * | 2001-11-16 | 2003-10-16 | Consejo Superior Investigacion | Preparation of hyaluronic acid used in cosmetics and clinical work comprises proteic electrodeposition based on fish vitreous humor |
| MD3099G2 (en) * | 2005-11-29 | 2007-02-28 | Технический университет Молдовы | Process for obtaining the sodium hyaluronate, the hyaluronic acid and the protein-hyaluronic acid complex |
-
1993
- 1993-08-23 RU RU93041849A patent/RU2074196C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Стейси М., Юарьяр С. Углеводы живых тканей.- М.: Мир, 1965, с. 76 - 80. 2. Патент США N 4302577, кл. C 08 B 37/00, 1981. 3. Патент США N 4487865, кл. C 08 B 37/00, 1984. 4. Авторское свидетельство СССР N 1616926, кл. C 08 B 37/00, 1990. 5. Патент Японии N 111207, кл. C 08 B 37/08, 1977. 6. Патент США N 4141973, кл. A 61 K 31/70, 1979. 7. Layton G.T., Stanwerth D.R. J. Immunol. Methods, 1984, 42, p. 329. 8. Хафизова Л.Г., Кузнецов В.П. и др. Медицинская промышленность и биотехнология. - М., 1992, вып. 8 - 9, с. 32. 9. Madinavetta J., Qnibell T., Bioehem J. 1940, 34, p. 625. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2192960A1 (en) * | 2001-11-16 | 2003-10-16 | Consejo Superior Investigacion | Preparation of hyaluronic acid used in cosmetics and clinical work comprises proteic electrodeposition based on fish vitreous humor |
| MD3099G2 (en) * | 2005-11-29 | 2007-02-28 | Технический университет Молдовы | Process for obtaining the sodium hyaluronate, the hyaluronic acid and the protein-hyaluronic acid complex |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4108849A (en) | Process for extracting and processing glycoproteins, mucopolysaccharides and accompanying substances | |
| KR102611970B1 (en) | Hyaluronic acid purification process | |
| JPH07501216A (en) | grain extract | |
| Roboz et al. | A Mucilage from Aloe Vera1 | |
| US2301787A (en) | Recovery of saponin | |
| RU2074196C1 (en) | Method of hyaluronic acid preparing | |
| US2959583A (en) | Method of purifying sulfated polysaccharides | |
| EP0395757B1 (en) | Process for extracting physiologically active substance from pine seed shells and antiinfectant prepared mainly from the extract | |
| CN112707852A (en) | Combined preparation method of garlic extract | |
| CN1075517C (en) | Method for extracting solomonscal polyose from Chinese drug solomonseal rhizome | |
| US4870053A (en) | Novel compositions and processes | |
| CN113201569B (en) | Purification method of bovine type I collagen | |
| KR20020071256A (en) | A manufacturing method of hyaluronic acid | |
| RU2671537C2 (en) | Hyaluronidase preparation and method of its preparation | |
| US5064758A (en) | Method of preparing a mixture of ribonucleotides | |
| RU2157381C1 (en) | Method of preparing hyaluronic acid | |
| Bailey et al. | The tissue specificity of brain and medullated nerves as shown by passive anaphylaxis in guinea pigs | |
| KR100381363B1 (en) | A new method of extracting and refining a porphyran from laver for treating hyperlipemia | |
| CN116731220B (en) | Preparation method of black currant phyllosphere polysaccharide | |
| RU2055079C1 (en) | Method for production of preparation of hyaluronic acid | |
| RU2130070C1 (en) | Method of peroxidase preparing | |
| RU2745443C1 (en) | Method for obtaining agent with antihypoxic, regenerative activity | |
| RU2091073C1 (en) | Method of immunostimulating agent preparing | |
| RU2082416C1 (en) | Method of preparing the complex preparation containing mucopolysaccharides and collagen from animal raw | |
| RU2648462C1 (en) | Membrane method for preparation of a drug based on prostatic peptides |