RU2073426C1 - Способ регенерации растений люцерны in vitro - Google Patents
Способ регенерации растений люцерны in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2073426C1 RU2073426C1 RU93047464A RU93047464A RU2073426C1 RU 2073426 C1 RU2073426 C1 RU 2073426C1 RU 93047464 A RU93047464 A RU 93047464A RU 93047464 A RU93047464 A RU 93047464A RU 2073426 C1 RU2073426 C1 RU 2073426C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cut
- explant
- regeneration
- hypocotyl
- vitro
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Использование: сельское хозяйство и биотехнология. Сущность изобретения: регенерацию растений люцерны в культуре ткани осуществляют путем вычленения экспланта, в качестве которого используют верхнюю часть проростка, разрезанного в середине гипокотиля, обработки его суспензий Agrobacterium tumefaciens и высадки на питательную среду срезом вверх. Кокультивируют с агробактерией в течение недели, после чего вычленяют со стороны среза вторичный эксплант в виде отрезка гипокотиля размером 2 - 3 мм, высаживают его на питательную среду, содержащую бактериостатический компонент без регуляторов роста. 1 табл.
Description
Изобретение относится к сельскому хозяйству и биологии и может быть использовано в физиологии, генетике и селекции растений, в частности для генетической трансформации растений.
Известен способ регенерации растений in vitro, включающий индукцию каллусной ткани из экспланта на питательной среде, содержащей регуляторы роста с последующей регенерацией из каллуса растений.
Недостатком данного способа являются трудоемкость и длительность процесса регенерации растений, а также необходимость добавления в среду определяемых регуляторов роста, концентрации которых подбираются в основном эмпирически. Кроме того, использование синтетических регуляторов роста в ряде случаев может искажать результаты эксперимента.
Цель изобретения упрощение, ускорение процесса регенерации растений и исключение из состава питательных сред регуляторов роста.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу в качестве эксплантов используется верхняя часть проростка, разрезанного в середине гипокотиля, и активно синтезирующая эндогенные регуляторы роста, которые перераспределяются в проростке в результате нарушения нормального транспорта и могут накапливаться в месте среза. Экспланты кокультивируют с суспензией нопалинового штамма Argobacterium tumefaciens на агаризованной безгормональной среде В5 Гамборга в течение 5 7 дней таким образом, чтобы срез проростка был направлен вверх. После кокультивирования от проростка отделяли отрезок гипокотиля размером 2 3 мм вместе со срезом и помещали на безгормональнуую среду, содержащую бактериостатический компонент, для подавления развития агробактерий. На данной среде происходит регенерация из гипокотиля побегов. Побеги доращивают и укореняют на безгормональной среде, содержащей бактериостатический компонент.
Пример. Регенерация растений путем прямого органогенеза in vitro у дикого вида люцерны (Medicago meyeri).
Семена люцерны стерилизовали 30 минут в растворе пантоцида и проращивали на агаризованной питательной среде В5 Гамборга без регуляторов роста. Девятидневные проростки разрезали в середине гипокотиля, окунали верхнюю часть проростка в разбавленную в 1000 раз ночную культуру штамма C58 Agrobacterium tumefaciens, и помещали на безгормональную среду В5 Гамборга таким образом, чтобы верхушки проростка были помещены в среду, а срез гипокотиля был направлен вверх. После семидневного кокультивирования от проростка отделяли отрезок гипокотиля размером 2 3 мм со срезом и помещали этот отрезок на питательную среду, содержащую 500 мг/л цефотаксима. Через 15 22 дней до 60% эксплантатов образовывали множественные побеги. Побеги разделяли и помещали на безгормональную среду, содержащую 150 200 мг/л цефотаксима, для доращивания и укоренения.
Предложенный способ значительно удешевляет процесс получения регенерантов, так как не требует использования экзогенных регуляторов роста, составляющих до 60% стоимости среды для культивирования. Кроме того, способ значительно ускоряет получение регенерантов, так как отсутствует целая стадия каллусогенеза (таблица). Количество дней, необходимых для регенерации растений люцерны по двум различным способам, приведено в таблице.
Claims (1)
- Способ регенерации растений люцерны in vitro, включающий вычленение экспланта, посадку его на питательную среду и культивирование до получения регенерантов, отличающийся тем, что выделяют первичный эксплант, в качестве которого используют верхнюю часть проростка, разрезанного в середине гипокотиля, обрабатывают его суспензией Agrobacteriim tumefaciens и высаживают на питательную среду срезом вверх, кокультивируют с агробактерией в течение недели, после чего вычленяют со стороны среза вторичный эксплант в виде отрезка гипокотиля размером 2 3 мм, высаживают его на питательную среду, не содержащую регуляторов роста и содержащую бактериостатический компонент.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93047464A RU2073426C1 (ru) | 1993-10-13 | 1993-10-13 | Способ регенерации растений люцерны in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93047464A RU2073426C1 (ru) | 1993-10-13 | 1993-10-13 | Способ регенерации растений люцерны in vitro |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU93047464A RU93047464A (ru) | 1996-04-20 |
RU2073426C1 true RU2073426C1 (ru) | 1997-02-20 |
Family
ID=20148139
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93047464A RU2073426C1 (ru) | 1993-10-13 | 1993-10-13 | Способ регенерации растений люцерны in vitro |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2073426C1 (ru) |
-
1993
- 1993-10-13 RU RU93047464A patent/RU2073426C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 721036, кл. А 01 Н 4/00, 1980. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Chandra et al. | Acclimatization of tissue cultured plantlets: from laboratory to land | |
Litz et al. | In vitro somatic embryogenesis and plant regeneration from Carica papaya L. ovular callus | |
CA1316475C (en) | Transformation somatic embryogenesis and whole plant regeneration method for glycine species | |
EP0107141B2 (en) | Method of vegetally propagating plants and analog to natural botanic seed for implementing said method | |
EP0952224B1 (en) | Method for producing transgenic cucumber that produces high levels of superoxide dismutase | |
WO2008137985A2 (en) | Methods for inducing cotton embryogenic callus | |
KR970010757B1 (ko) | 면화의 재생 방법 | |
CN111454983B (zh) | 一种番木瓜愈伤组织农杆菌转化受体的制备及转化方法 | |
CN103966258A (zh) | 一种农杆菌介导的甘蓝型油菜遗传转化方法 | |
Posada-Pérez et al. | Complete germination of papaya (Carica papaya L. cv.Maradol Roja) somatic embryos using temporary immersion system type RITA® and phloroglucinol in semi-solid culture medium | |
JP2000510325A (ja) | 植物性材料の繁殖および/または選択方法 | |
JP2007528197A (ja) | 綿植物を生産するための組織培養法 | |
CN111500620B (zh) | 一种番木瓜下胚轴农杆菌转化受体的制备及转化方法 | |
El-Bakry | Effect of genotype, growth regulators, carbon source, and pH on shoot induction and plant regeneration in tomoto | |
Armstead et al. | Effect of age and type of tissue on genetic transformation of Lotus corniculatus by Agrobacterium tumefaciens | |
RU2073426C1 (ru) | Способ регенерации растений люцерны in vitro | |
JP2008259497A (ja) | アグロバクテリウムを介したダイズ国内品種の形質転換体作出方法並びに形質転換体当代及び後代の種子を短期間で獲得する方法 | |
Masanga et al. | An optimized protocol for high frequency regeneration of selected groundnut (Arachis hypogaea L) varieties from East Africa using cotyledons | |
CN117089570B (zh) | BnaC2.WRKY22基因在提高植物耐水淹性中的应用 | |
Dhir et al. | Micropropagation of Salix babylonica through in vitro shoot proliferation | |
CN104531723A (zh) | 一种植物维管束发育基因sm-Nvas及其应用 | |
CN104152424A (zh) | ZmHINT基因在促进植物免疫反应中的应用 | |
CN117187294B (zh) | BnaC5.ACBP4基因在提高植物耐水淹性中的应用 | |
KR100375674B1 (ko) | 배추의 배축을 이용한 재생방법 및 유용한 외래유전자로형질전환된 배추의 생산방법 | |
KR100496028B1 (ko) | 제초제 저항성 고추 식물체의 제조방법 |