RU2061753C1 - Штамм культивируемых клеток гонад capra hircus l-продуцент вирусов животных - Google Patents
Штамм культивируемых клеток гонад capra hircus l-продуцент вирусов животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2061753C1 RU2061753C1 RU94028942/13A RU94028942A RU2061753C1 RU 2061753 C1 RU2061753 C1 RU 2061753C1 RU 94028942/13 A RU94028942/13 A RU 94028942/13A RU 94028942 A RU94028942 A RU 94028942A RU 2061753 C1 RU2061753 C1 RU 2061753C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- strain
- virus
- monolayer
- culture
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Использование: вирусология, ветеринария, биотехнология. Сущность изобретения: штамм монослойных клеток CG-91 (авторское наименование) получен из первично-трипсинизированной ткани гонад 3-дневной козы путем последовательного пассирования на полусинтетических питательных средах, обладает стабильными морфофизиологическими характеристиками и чувствительностью к заражению вирусами ящура А22-663, О1-194, С1-154, Азия-1-48, БГ, БА и АЧЛ, репродуцирует их при культивировании в монослое в титрах 5,0-8,25 lg ТЦД50/мл, хранится в музее клеток ВНИИЗЖ и депонирован на 234 пассаже в монослое в ВСКК (СХЖ) РАСХН под N 45. 5 табл.
Description
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, биотехнологии и касается получения нового штамма культивируемых в монослое клеток гонад козы, который может быть использован для репродукции вирусов животных при проведении вирусологических исследований и изготовлении антигенов для диагностики и профилактики заболеваний животных указанной этиологии.
Перевиваемые монолинейные культуры клеток млекопитающих широко используются для проведения научных исследований (Новохатский А.С. Тканевые и клеточные культуры в вирусологии и молекулярной биологии. М. 1979, 156с.). Их получают из различных органов и тканей животных с помощью разнообразных методических приемов и подбора питательных сред для их культивирования (Дьяконов Л. П. Глухов В.Д. и др. Культивирование клеток и тканей животных. Учебно-метод.пособие. Ставрополь, 1986, I-II, 96с.).
Известно использование монолойных культур клеток ВНК-21, IB-RS-2, щитовидной железы телят, СП, СПЭВ, тестикулов поросят, ПСГК-30 и т.д. для культивирования вируса ящура, чумы свиней и т.д. (пат.Великобритании N 1436323, CM6FA 5 B, 19.05.76, пат.Франции N 2088038, С 12 К 5/00, 07.01.72г, пат. Франции N 1526357, прототип С12 К, 16.04.68; Дегтяренко Н.Л. Савельева Л.Г. и др. Определение видовой принадлежности постоянной линии клеток ПСГК-30. Матер. межд. конф. "К новой стратегии борьбы с ящуром." Тез.докл. Владимир, 1991,с. 121-122.
Несмотря на их общее свойство способность к неограниченному росту все они значительно различаются по ряду других признаков: пролиферации, адгезионности, чувствительности к вирусам, способности размножаться в определенной питательной среде, антигенности, кариотипу, морфологии и др. Даже клоны одной перевиваемой линии клеток значительно отличаются друг от друга. Castro M.R. Pysany R.S. получили различные по чувствительности к вирусу ящура клоны клеточной линии IB-RS-2 (Castro M.R. Pysany R.S. Variation of cell clones derived from the IB-RS-2 suhue
cell line to the foot-and mouth disease virys. Arg. Inst. Biol. 1967,34,4 295-299).
cell line to the foot-and mouth disease virys. Arg. Inst. Biol. 1967,34,4 295-299).
Большая часть монослойных перевиваемых клеточных линий состоит из неоднородных в морфологическом и физиологическом отношении клеток, что обусловливает необходимость получения новых клеточных клонов с определенными свойствами.
Сущность изобретения.
В задачу создания настоящего изобретения входило расширение ассортимента новых штаммов культивируемых в монослое клеток животных, отличающихся от известных фено- и генетическими свойствами, стабильностью и пригодных для культивирования вирусов, используемых в НИР и для приготовления антигенов для диагностики и профилактики вирусных заболеваний животных.
Поставленная задача решена тем, что получен новы, ранее неизвестный штамм культивируемых клеток гонад козы (Caprahircus L.) СС-91 продуцент вирусов животных. Культура депонирована на 234 234 пассаже в монослое в ВСКК (СХЖ) РАСХН под N 45.
Характеристика полученного штамма
1. Родословная штамма
Штамм получен из первично-трипсинизированной ткани гонад 3-дневной козы путем последовательного пассирования на среде Игла с 10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина. На промежуточных пассажах культура замораживалась до -196oС с 5% этиленгликоля.
1. Родословная штамма
Штамм получен из первично-трипсинизированной ткани гонад 3-дневной козы путем последовательного пассирования на среде Игла с 10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина. На промежуточных пассажах культура замораживалась до -196oС с 5% этиленгликоля.
2. Число пассажей к моменту паспортизации
Штамм клеток на 234 пассаже в монослое.
Штамм клеток на 234 пассаже в монослое.
3. Стандартные условия выращивания
Штамм клеток выращивается при температуре 36-38oС в пристеночных условиях в сосудах различной емкости. Основной ростовой средой является среда Игла на солевом растворе Эрла или Хенкса с 10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина. Возможно культивирование на среде с гидролизатом животных белков.
Штамм клеток выращивается при температуре 36-38oС в пристеночных условиях в сосудах различной емкости. Основной ростовой средой является среда Игла на солевом растворе Эрла или Хенкса с 10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина. Возможно культивирование на среде с гидролизатом животных белков.
4. Культуральные свойства
Клетки формируют полный монослой с упорядоченной ориентацией на стекле культурального сосуда различного объема. Дезагрегацию клеток осуществляют с помощью смеси трипсин-версена (1:3) с добавлением 0,5% декстрозы. В зависимости от кратности рассева (1:2 1:4) и от посевной дозы (5-10)•105 кл/мл время субкультивирования составляет 2-4 суток.
Клетки формируют полный монослой с упорядоченной ориентацией на стекле культурального сосуда различного объема. Дезагрегацию клеток осуществляют с помощью смеси трипсин-версена (1:3) с добавлением 0,5% декстрозы. В зависимости от кратности рассева (1:2 1:4) и от посевной дозы (5-10)•105 кл/мл время субкультивирования составляет 2-4 суток.
Ростовые характеристики клеток в монослое
Штамм выращивают в пристеночных условиях. При посевной концентрации (5-10)•105 кл/мл монослой образуется на 2-3 сутки.
Штамм выращивают в пристеночных условиях. При посевной концентрации (5-10)•105 кл/мл монослой образуется на 2-3 сутки.
6. Цитоморфологическая характеристика
Монослой ровный, рост ориентированный. Клетки полигонального и фибробластоподобного типов с длинными цитоплазматическими выростами, преимущественно одноядерные; ядра округлой или овальной формы различной величины; число ядрышек 1-3, реже 4-7.
Монослой ровный, рост ориентированный. Клетки полигонального и фибробластоподобного типов с длинными цитоплазматическими выростами, преимущественно одноядерные; ядра округлой или овальной формы различной величины; число ядрышек 1-3, реже 4-7.
7. Кариологическая характеристика
Кариологический анализ штамма проведен на уровне 79 пассажа. Установлено, что кариотип соответствует видовому признаку козы. Модальный класс с 59 хромосомами составляет 42% диплоидные клетки составляют 8% гипоплоидные - 88% и гиперплоидные 4%
8. Видовая принадлежность
В процессе получения перевиваемого штамма видовую принадлежность контролировали методами кариологического анализа на 16, 37, 47, 76, 79, 186 и 253 пассажах и изоферментного (ЛДГ и Г6ФД) анализа на 47, 76, 186 и 253 пассажах. Во всех случаях штамм соответствовал виду коз.
Кариологический анализ штамма проведен на уровне 79 пассажа. Установлено, что кариотип соответствует видовому признаку козы. Модальный класс с 59 хромосомами составляет 42% диплоидные клетки составляют 8% гипоплоидные - 88% и гиперплоидные 4%
8. Видовая принадлежность
В процессе получения перевиваемого штамма видовую принадлежность контролировали методами кариологического анализа на 16, 37, 47, 76, 79, 186 и 253 пассажах и изоферментного (ЛДГ и Г6ФД) анализа на 47, 76, 186 и 253 пассажах. Во всех случаях штамм соответствовал виду коз.
9. Маркерные признаки и методы их оценки
Маркерные признаки не выявлены. Штамм по цитокариологии и спектру изоферментов относится к виду коз.
Маркерные признаки не выявлены. Штамм по цитокариологии и спектру изоферментов относится к виду коз.
10. Характеристики контаминированности
При обследовании клеток штамма с 6 по 253 пассаж на стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм) контаминанты не выявлены (высевы на МПБ, МПА, ТГС и 0,3% PPLO агар, окрашивание акридиновым оранжевым и оливомицином, электронная микроскопия).
При обследовании клеток штамма с 6 по 253 пассаж на стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм) контаминанты не выявлены (высевы на МПБ, МПА, ТГС и 0,3% PPLO агар, окрашивание акридиновым оранжевым и оливомицином, электронная микроскопия).
11. Биотехнологическая характеристики
Штамм выращивают при 37-38oС в монослое в среде Игла на солевом растворе Эрла или Хенкса при рН 7,0-7,2 с добавлением 10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина или на средах с гидролизатами белков животного происхождения. Клетки снимают со стекла подогретой до 37oС смесью трипсин-версен (1:3) с 0,5% декстрозы, кратность рассева 1:2-1:4. Образование монослоя через 204 суток без смены среды. Жизнеспособность штамма клеток определяют суправитальной окраской трипановым синим и посевом в культуральный сосуд.
Штамм выращивают при 37-38oС в монослое в среде Игла на солевом растворе Эрла или Хенкса при рН 7,0-7,2 с добавлением 10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина или на средах с гидролизатами белков животного происхождения. Клетки снимают со стекла подогретой до 37oС смесью трипсин-версен (1:3) с 0,5% декстрозы, кратность рассева 1:2-1:4. Образование монослоя через 204 суток без смены среды. Жизнеспособность штамма клеток определяют суправитальной окраской трипановым синим и посевом в культуральный сосуд.
Определена чувствительность штамма CG-91 к заражению вирусами ящура, болезни Гамборо (БГ), болезни Ауески (БА) и африканской чумы лошадей (АЧЛ). Так, вирус ящура типов А, О, С и Азия-1 накапливается в монослойной культуре клеток CG-91 в титрах 6,0-6,5 ТЦД50 /мл при титрировании в первично-трипсинизированной культуре СП (контроль-клетки CG-91). Штамм CG-91 может быть использован как тест-кульура для накопления, титрирования и изучения генетических признаков указанных вирусов, а также для изготовления из них антигенов для диагностики и профилактики заболеваний животных указанной этиологии.
12. Криоконсервационные характеристики
Штамм клеток сохраняют в жидком азоте под защитой криофилактика 5% этиленгликоля в ростовой среде с добавлением 10% сыворотки КРС, в стеклянных ампулах объемом 5 мл с концентрацией клеток 2,0-3,0•106. Жизнеспособность после разморажевания 85-90%
Предложенный штамм культивируемых клеток гонад козы получили следующим образом.
Штамм клеток сохраняют в жидком азоте под защитой криофилактика 5% этиленгликоля в ростовой среде с добавлением 10% сыворотки КРС, в стеклянных ампулах объемом 5 мл с концентрацией клеток 2,0-3,0•106. Жизнеспособность после разморажевания 85-90%
Предложенный штамм культивируемых клеток гонад козы получили следующим образом.
Штамм культивируемых клеток гонад козы CG-91 получен путем трипсинизации ткани гонад 3-дневной козы. Органы извлекали с соблюдением правил асептической работы и помещали в стерильную чашку Петри с раствором Хенкса и антибиотиками пенициллином и стрептомицином по 500 ЕД/мл. В этом растворе органы держали при +4oС 30 минут. После этого раствор Хенкса сливали, органы измельчали ножницами на кусочки размером 1-3 мм, затем дважды промывали вышеуказанным раствором и переносили в колбу для трипсинизации с 0,25% трипсина. Дезагрегацию ткани осуществляли на магнитной мешалке в течение 10-20 минут при комнатной температуре.
Надосадочную жидкость собрали в сосуд с небольшим количеством среды Игла с 20% сыворотки КРС для нейтрализации трипсина. Операцию дезагрегации повторяли 3-4 раза. Собранную суспензию фильтровали через два слоя стерильной марли и затем центрифугировали 5 мин. при 1000 об/мин. Осадок ресуспендировали в ростовой среде Игла с 5-10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина и высевали в культуральные сосуды с концентрацией клеток (2-2,5)•105 кл/мл среды. Монослой формировался на 4-5 сутки, клетки снимали со стекла смесью, содержащей 0,02% версена и 0,25% трипсина в соотношении 3:1 с добавлением 0,5% декстрозы. Кратность рассева 1:2, ростовая среда среда Игла с 10% сыворотки КРС и 0,03% глютамина.
Культура клеток гонад козы прошла 73 пассажа от момента первичной эксплуатации до превращения ее в перевиваемый штамм клеток. Как на низких пассажных уровнях субкультивирования (6-21), так и на более высоких (50-60) пролиферативная активность клеток была низкой: монослой формировался на 4-5-7 сутки, накопление клеток в культуральном сосуде (объем 1,5 л) не превышало 25-30 млн. Заметное увеличение пролиферативной активности наблюдали с 61 пассажа, однако формирование монослоя продолжалось не менее 4 суток культивирования. Выход клеток с одного матраса (V=1,5 л) составлял 40-50 млн.
Признаки перевиваемости установлены на 74 пассаже: резкое уменьшение размеров клеток, увеличение выхода клеток с матраса (90 млн), уменьшение срока формирования монослоя (72 часа) и увеличение кратности рассева (1:3-1: 4).
Штамм клеток сохраняют в жидком азоте под защитой криофилактика 5% этиленгликоля в ростовой среде с 10% сыворотки КРС в стеклянных ампулах объемом 5 мл. В клеточный банк ВНИИЗЖ заложены на 79-279 пассажных уровнях производственные партии предложенного штамма клеток под авторским названием CG-91, а также субкультура 12-70 пассажей. Размораживание клеток осуществляют путем оттаивания ампул с суспензией клеток в водяной бане при 37-38oС. Жизнеспособность клеток определяют визуально под световым микроскопом, предварительно окрашивая их 0,01% трипановым синим. Жизнеспособность после размораживания 85-90% Свою исходную скорость роста клетки восстанавливают после 1-2 пассажей в монослое. Штамм клеток CG-91 депонирован в коллекции перевиваемых соматических клеток сельскохозяйственных и промысловых животных ВИЭВ (ВСКК СХ Ж РАСХН) под N 45.
Определена чувствительность клеток CG-91 к заражению вирусами ящура, БГ, БА и АЧЛ. Культуру клеток выращивали в монослое с 0,5% гидролизата лактальбумина или 0,25% ГБК, с 5% сыворотки КРС в объеме 50-500 мл.
Сведения, подтверждающие возможность осуществление изобретения
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами выращивания вирусов различных таксономических групп, что не ограничивает объем изобретения.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами выращивания вирусов различных таксономических групп, что не ограничивает объем изобретения.
Пример 1. Выращивание вируса ящура А22-663 в культуре клеток CG-91. Из культурального сосуда с клетками штамма CG-91 на уровне 40 пассажа удаляют среду культивирования. Монослой клеток дважды ополаскивают подогретой до 36-37o смесью 0,25% раствора трипсина и 0,02% раствора версена (1:3) с добавлением 0,5% декстрозы, покачивают для орошения монослоя до начала отслаивания клеток (3-5 минут). Диспергирующий раствор сливают, вносят среду Игла с 10% сывороткой КРС и 0,03% глутамина и разливают в три аналогичных культуральных сосуда. Культура клеток 41 пассажа инкубируют при 37oС в течение 48 часов до момента формирования плотного монослоя.
Перед внесением вируса питательную среду из культуральных сосудов сливают, клетки отмывают раствором Эрла и вводят вируссодержащий материал множественностью 0,01-0,1 ТЦД50клетка или 1:30-1:50 к объему культуральной среды в сосуде.
Контакт осуществляют при 37oС в течение 1 часа. Затем монослой отмывают раствором Эрла для удаления неадсорбировавшегося вируса, заливают в сосуды Игла без сыворотки рН 7,5 и инкубируют при 37oС в течение 24-48 часов до полного лизиса инфицированной вирусом культуры клеток.
Инкубирование прекращают, материал дважды замораживают при -40oС и оттаивают при +37+38oС для освобождения внутриклеточного вируса определяют титр вируса в культуре клеток перевиваемой почки свиньи. Титр равен 6,0±0,5 lg ТЦД50/мл. Чувствительность к вирусу ящура А22663 у штамма клеток CG-91 находилась на этом уровне от 40 до 190 пассажей.
Пример 2. Выращивание вируса ящура 01-194 в культуре клеток CG-91.
Монослой клеток CG-91 получают так, как описано в примере 1. Вирус ящура 01-194 выращивают, собирают и титрируют в полученной культуре клеток так, как описано в примере 1. Вирус ящура 01194 получают с титром 5,75±0,25 lg ТЦД50/мл.
Пример 3. Выращивание вируса ящура С1- 564 в культуре клеток CG - 91.
Для репродукции вируса монослой клеток CG 91 готовят так, как описано в примере 1. Вирус ящура С#-564 выращивают, собирают и титрируют так, как описано в примере 1. Вирус ящура С1-564 получают с титром 6,0±0,25 lg ТЦД50/мл.
Пример 4. Выращивание вируса ящура Азия-1-48 в культуре клеток CG-91.
Для репродукции вируса монослой клеток CG 91 готовят так, как описано в примере 1. Вирус ящура Азия-1-48 выращивают, собирают и титрируют так, как описано в примере 1. Вирус ящура Азия-1-48 получают с титром 5,75±0,25 lg ТЦД50/мл.
Пример 5. Выращивание вируса БГ в культуре клеток CG-91.
Для репродукции используют вирулентный штамм 52/70 или аттенуированный шт. "Ухтинский" вируса БГ 1 пассажа на 9-10 дневных куриных эмбрионах или первично-трипсинизированной культуре клеток куриных эмбрионов.
Культуру клеток гонад козы готовят так, как описано в примере 1. Вирус выращивают при 37oС. Сбор вируса производят через 72 часа после заражения культуры клеток (при лизисе 50-75% клеток монослоя). Клеточную культуру дважды замораживают при -40oС и оттаивают при +37oС для увеличения выхода внутриклеточного вируса в поддерживающую среду и определяют титр вируса по лизису монослоя клеток перевиваемой культуры клеток почек свиньи ПСГК или кролика RK-13. Титр вируса равен 5,00±0,25 lg ТЦД50/мл.
Пример 6. Выращивание вируса БА в культуре клеток CG-91.
Для выращивания используют вирус БА штамм 18 В. Культуру клеток гонад козы готовят так, как описано в примере 1. Культивирование вируса ведут в течение 36-48 часов до максимального проявления цитолитического воздействия вируса в монослое клеток. Сбор вируса и определение титра приводят так, как описано в примере 1. Титр вируса равен 8,25±0,25 lg ТЦД50/мл. При культивировании в других системах вирус БА имел титр на клетках линии почки свиньи ПСГК 7,2 lg ТЦД50/мл, IB-RC-2-6,4 lg ТЦД50/мл и СП- 7,6 lg ТЦД50/мл.
Пример 7. Выращивание вируса ящура А22-663 в культуре клеток CG-91 с использованием поддерживающей среды на основе гидролизатов белков животного происхождения.
Монослой клеток CG-91 40-190 пассажей получают так, как описано в примере 1. Клетки инфицируют вирусом ящура А22-663 в дозе 0,01-0,1 ТЦД50/мл или 1:30 1:50 объема среды. Контакт осуществляют в течение 1 часа при 37oС, затем монослой отмывают раствором Эрла для удаления неадсорбировавшегося вируса. В качестве поддерживающей среды используют культуральную среду на основе гидролизатов белков молока (0,5% ГЛА) или белков мышц КРС (0,25% ФМГ-С), или белков крови КРС (0,25% ФГБК-с) Культивирование, сбор и титрирование вируса ящура ведут так, как описано в примере 1. Вирус ящура А22-663 получают с титром 5,75±0,25 lg ТЦД50/мл.
Пример 8. Выращивание вируса ящура 01-194 в культкультуре клеток GG-91 CG-91 с использованием поддерживающей среды на основе гидролизатов белков животного происхождения.
Монослой клеток CG-91 получают так, как описано в примере 1. Вирус ящура 01-194 выращивают, собирают и титрируют в полученной культуре клеток так, как описано в примере 7. Вирус ящура 01-194 получают с титром 5,5-5,75 lg ТЦД50/мл.
Пример 9. Выращивание вируса ящура С1-564 в культуре клеток CG-91 с использованием поддерживающей среды на основе гидролизатов белков животного происхождения.
Монослой клеток CG-91 получают так, как описано в примере 1. Вирус ящура С1-564 выращивают, собирают и титрируют в полученной культуре клеток так, как описано в примере 7. Вирус ящура С1-564 получают с титром 5,75-6,0 lg ТЦД50/мл.
Пример 10. Выращивание вируса ящура Азия-1-48 в культуре клеток С-91 с использованием поддерживающей среды на основе гидролизатов белков животного происхождения.
Монослой клеток CG-91 получают так, как описано в примере 1. Вирус ящура Азия-1-48 выращивают, собирают и титрируют в полученной культуре клеток так, как описано в примере 7. Вирус ящура Азия-1-48 получают с титром 5,5-6,0 lg ТЦД50/мл.
Пример 11. Выращивание вируса БГ "шт.Ухтинский" в культуре клеток CG-91 с использованием поддерживающей среды на основе гидролизатов белков животного происхождения.
Монослой клеток CG-91 получают так, как описано в примере 1. Вирус БГ выращивают собирают и титрируют так, как описано в примере 5. В качестве поддерживающей среды используют культуральную среду на основе гидролизатов белков молока (0,5% ГЛА) или белков мышц КРС (0,25% ФМГ-с) или белков крови КРС (0,25% ФГБК-с).
Вирус БГ получают с титром 5,25±0,25 lg ТЦД50/мл.
Пример 12. Выращивание вируса БА штамм 18В в культуре клеток CG-91 с использованием поддерживающей среды на основе гидролизатов белков животного происхождения.
Монослой клеток CG-91 получают так, как описано в примере 1. Вирус БА выращивают, собирают и титрируют так, как описано в примере 6. В качестве поддерживающей среды используют культуральную среду на основе гидролизатов белков молока (0,5% ГЛА) или белков мышц КРС (0,25% ФМГ-С) или белков крови КРС (0,25% ФГБК-с). Вирус БА получают с титром 8,0±0,25 lg ТЦД50/мл.
Проведены исследования по определению пролиферативной активности клеток CG-91. Результаты приведены в таблице 1.
В процессе непрерывного пассирования неоднократно проводили описание морфологических особенностей культуры клеток CG-91 и подтверждение ее видовой принадлежности путем кариотипирования и определения изоферментной активности (ЛДГ и Г6ФД). Результаты исследований приведены в таблице 2.
Проведены исследования по определению чувствительности культуры клеток к заражению вирусом ящура различных типов. Результаты исследований приведены в таблице 3.
Результаты, приведенные в табл.3, показывают, что чувствительность к вирусу у линии клеток на уровне 40-189 пассажей не изменяется и не имеет штаммовых различий у А22-663, С1-564, Азия1-48. Накопление вируса О1-194 было несколько ниже.
Репродукционные свойства вируса ящура изучены также в течение 10 последовательных пассажей в монослое линии клеток CG-91. При этом установлено, что в клетках 160-170 пассажей вирус ящура А22-663, 01-194, С1-594 и Азия1-48 на протяжении 10 пассажей репродуцировался в титрах 5,0-6,5 lg ТЦД50/мл.
Проведен также ряд опытов по определению чувствительности к вирусу ящура линии клеток CG 91 в сравнении с клетками СПЭВ, FLK, ПС при титрировании в них вируссодержащих культуральных материалов, где получены данные, что клетки CG-91 имеют чувствительность на 0,75-1,0 lg ТЦД выше.
Проведены иследования по культивированию вируса БГ в различных системах культивирования при этом установлено, что титры вируса БГ в культуре клеток CG-91 на 1-2 логарифма ниже результатов репродукции вируса БГ в клетках ПСГК, RK-13, ККЭ и на куриных эмбрионах, что указывает на видовые отличия клеточных культур и необходимость изучения качества репродуцированного вируса. Накопление вируса БГ в клетках CG-91 составляло 4,25-5,0 lg ТЦД50/мл и зависело от плотности монослоя клеточной кульутры, множественности инфицирования и биологических свойств культурального вируса.
Проведены исследования по определению чувствительности культуры клеток CG-91 к заражению вирусом БА штамм 18В. Оценку чувствительности осуществляли паралельным титрированием вируса БА штамм 18В в культурах клеток ПСГК, IB-RC-2, СП и CG-91. Результаты опытов приведены в табл.4.
Данные табл. 4 свидетельствуют о том, что клетки CG-91 обладают более высокой чувствительностью к заражению вирусом БА по сравнению с клетками ПСГК, IB-RS-2 и СП.
Вирус БА хорошо репродуцировался в монослое клеток CG-91, где на 1-3 пассажах имел инфекционную активность 7,0-7,5 lg ТЦД50/мл.
Таким образом, при испытании чувствительности линии клеток CG-91 установлена видовая особенность культуры репродуцировать вирус БА в более высоких титрах, чем вирусы ящура и БГ, что определяет ее пригодность для титрования и получения вирусного антигена.
Результаты сравнительных исследований по репродукции вирусов ящура, БГ и БА в культуре CG-91 с использованием различных поддерживающих сред представлены в табл.5.
Таким образом, штамм клеток гонад козы CG-91 может быть использован для репродукции вирусов животных при проведении вирусологических исследований и изготовлении антигенов для диагностики и профилактики вирусных заболеваний животных. ТТТ1 ТТТ2 ТТТ3 ТТТ4
Claims (1)
- Штамм культивируемых клеток гонад Capra hircus L ВСКК(СХЖ) РАСХН N 45 продуцент вирусов животных.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94028942/13A RU2061753C1 (ru) | 1994-08-02 | 1994-08-02 | Штамм культивируемых клеток гонад capra hircus l-продуцент вирусов животных |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94028942/13A RU2061753C1 (ru) | 1994-08-02 | 1994-08-02 | Штамм культивируемых клеток гонад capra hircus l-продуцент вирусов животных |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2061753C1 true RU2061753C1 (ru) | 1996-06-10 |
| RU94028942A RU94028942A (ru) | 1997-03-10 |
Family
ID=20159295
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94028942/13A RU2061753C1 (ru) | 1994-08-02 | 1994-08-02 | Штамм культивируемых клеток гонад capra hircus l-продуцент вирусов животных |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2061753C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488631C1 (ru) * | 2012-06-26 | 2013-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | ЛИНИЯ КЛЕТОК ПОЧКИ ТЕЛЕНКА Bos taurus RBT (Rene Bos Taurus) ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ ЖИВОТНЫХ |
| RU2768962C1 (ru) * | 2021-04-12 | 2022-03-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | TCh (Testis Capra hircus) - перевиваемая монослойная сублиния клеток тестикул месячного козлёнка, предназначенная для репродукции вирусов оспы, чумы мелких жвачных животных и заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота, а также для изготовления диагностических и профилактических ветеринарных биопрепаратов |
-
1994
- 1994-08-02 RU RU94028942/13A patent/RU2061753C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Патент Франции N 2088038, кл. С 12 К 5/00, 1972. Патент Франции N 1526357, кл. С 12 К 5/00, 1968. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488631C1 (ru) * | 2012-06-26 | 2013-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | ЛИНИЯ КЛЕТОК ПОЧКИ ТЕЛЕНКА Bos taurus RBT (Rene Bos Taurus) ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ ЖИВОТНЫХ |
| RU2768962C1 (ru) * | 2021-04-12 | 2022-03-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | TCh (Testis Capra hircus) - перевиваемая монослойная сублиния клеток тестикул месячного козлёнка, предназначенная для репродукции вирусов оспы, чумы мелких жвачных животных и заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота, а также для изготовления диагностических и профилактических ветеринарных биопрепаратов |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94028942A (ru) | 1997-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hull et al. | Growth characteristics of monkey kidney cell strains LLC-MK1, LLC-MK2, and LLC-MK2 (NCTC-3196) and their utility in virus research | |
| Paul Jr | Tissue culture: methods and applications | |
| Huebner et al. | Specific complement-fixing viral antigens in hamster and guinea pig tumors induced by the Schmidt-Ruppin strain of avian sarcoma | |
| Steinhardt et al. | Studies on the cultivation of the virus of vaccinia | |
| CN109609460B (zh) | 一种人脑胶质瘤细胞系及其建立方法和应用 | |
| Sarma et al. | Evidence for the in vitro transfer of defective Rous sarcoma virus genome from hamster tumor cells to chick cells. | |
| CN108865977A (zh) | 一种新生大鼠皮肤终隔细胞大量扩增方法及应用 | |
| CN107629996A (zh) | 一株草鱼胸鳍细胞系的构建方法 | |
| Massicot et al. | Cell line derived from a murine sarcoma virus (Moloney pseudotype)-induced tumor: cultural, antigenic, and virological properties | |
| RU2061753C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток гонад capra hircus l-продуцент вирусов животных | |
| JP4267689B2 (ja) | 鳥類由来の細胞の培養方法および該培養方法によって得られた細胞系 | |
| Boroda et al. | The first steps towards generating induced pluripotent stem cells from cryopreserved skin biopsies of marine mammals | |
| RU2201959C2 (ru) | Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa pk-15/b5, используемый для вирусологических исследований | |
| RU2065496C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток почки oryctolagus cuniculus l для культивирования вирусов животных | |
| RU2343194C2 (ru) | Линия диплоидных клеток фибробластов легкого эмбриона человека для выделения, идентификации вирусов и получения диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2506310C1 (ru) | ШТАММ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК СИНОВИАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ПОРОСЕНКА Sus scrofa, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | |
| RU2140451C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток почки suis domestica l. для культивирования вирусов животных | |
| RU2507255C1 (ru) | ШТАММ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК СИНОВИАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ЯГНЕНКА Ovis aries, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | |
| RU2201960C2 (ru) | Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa рк-15/а11, используемый для вирусологических исследований | |
| Kaplan et al. | A method for preparing smallpox vaccine on a large scale in cultured cells | |
| WO2012034352A1 (zh) | 使人的体细胞逆向分化产生自体生殖干细胞的方法、试剂盒及其应用 | |
| SU1664842A1 (ru) | Штамм культивируемых клеток тестикул эмбриона быка, используемый дл накоплени вирусов крупного рогатого скота | |
| SU1317021A1 (ru) | Штамм диплоидных клеток кожи и мышц эмбриона человека,используемый дл культивировани вирусов | |
| Манин et al. | Biological, cytomorphological and karyological heterogeneity of transformed cell lines derived from domestic pig (Sus scrofa L.) organs | |
| RU2082758C1 (ru) | Штамм внутривидовых гибридных клеток suis domesfice, используемый для выделения и культивирования вируса классической чумы свиней |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040803 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120803 |