RU2058787C1

RU2058787C1 - Method of lecithin preparing

Info

Publication number: RU2058787C1
Authority: RU
Inventors: Виталий Иванович Швец; Ирина Георгиевна Сенникова; Гитана Львовна Орлова; Юрий Павлович Темиров; Василий Иванович Петров; Нина Николаевна Иванова; Юрий Михайлович Краснопольский
Original assignee: Харьковское предприятие по производству иммунобиологических и лекарственных препаратов "Биолек"
Priority date: 1992-03-30
Filing date: 1992-03-30
Publication date: 1996-04-27
Also published as: UA19697C2

Abstract

FIELD: chemistry of natural compounds. SUBSTANCE: hen egg yolks were homogenized in acetone at temperature from -20 to -25 C for 3 min. Process is repeated 6 times. Then egg yolk is extracted with ethanol at 24-28 C in inert gas atmosphere for 1.5 hr. Obtained after filtration the cleared solution is precipitated with cadmium chloride. Precipitate is reprecipitated 5 times with ethanol containing cadmium chloride, dissolved in chloroform and treated with 30% ethanol solution. Method is used for lecithin (phosphatidyl choline) preparing. EFFECT: increased yield of the end product, improved quality. 3 tbl

Description

Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к способам получения лецитина (фосфатидилхолина), который может быть использован в медицине для изготовления лекарственных и диагностических средств, а также в научно-исследовательской работе. The invention relates to the chemistry of natural compounds, and in particular to methods for producing lecithin (phosphatidylcholine), which can be used in medicine for the manufacture of medicines and diagnostic tools, as well as in research work.

Известен способ получения лецитина из желтков куриных яиц путем осаждения ацетоном, экстракции хлороформом и метанолом, хроматографии на окиси алюминия (Бергельсон Л.Д. Дятлевицкая Э.В. Молотковский Ю.Г. и др. Препаративная биохимия липидов. М. Наука, 1981, с. 107-108). There is a method of producing lecithin from egg yolks by precipitation with acetone, extraction with chloroform and methanol, chromatography on alumina (Bergelson L.D. Dyatlevitskaya E.V. Molotkovsky Yu.G. et al. Preparative lipid biochemistry. M. Nauka, 1981, p. 107-108).

Данный метод имеет ряд существенных недостатков: длительность процесса, низкий выход целевого продукта, большие объемы органических растворителей, окисленность жирных кислот продукта и низкая стабильность продукта, невозможность использования способа в промышленных условиях. This method has several significant disadvantages: the duration of the process, the low yield of the target product, large volumes of organic solvents, the oxidation of fatty acids of the product and low stability of the product, the inability to use the method in an industrial environment.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения лецитина из желтков куриных яиц путем осаждения ацетоном при температуре от -10 до -15^оС, экстракции этанолом, переосаждения из хлороформа этанолом, содержащим хлорид кадмия, растворения в хлороформе и обработки 30%-ным раствором этанола.The closest to the proposed method is the preparation of lecithin from egg yolks of eggs by precipitation with acetone at -10 to -15 ^{° C,} ethanol extraction, reprecipitation from chloroform-ethanol containing cadmium chloride, dissolving in chloroform and treating with 30% ethanol.

Данный способ также имеет ряд недостатков: значительная потеря выхода целевого продукта за счет обработки ацетоном и неполной экстракции продукта этанолом, низкая стандартность, окисленность жирных кислот. This method also has several disadvantages: a significant loss of yield of the target product due to treatment with acetone and incomplete extraction of the product with ethanol, low standard, oxidation of fatty acids.

Задача изобретения повышение выхода целевого продукта за счет снижения потерь при обработке ацетоном и экстракции этанолом, стандартизация технологического цикла, повышение стабильности препарата. При использовании указанного изобретения выход целевого продукта увеличивается в 1,5-1,6 раза, что связано с оптимизацией процесса обработки ацетоном, уменьшением содержания продуктов окисления липидов. Это достигается тем, что желток куриных яиц измельчают гомогенизацией в ацетоне при температуре от -20 до -25^оС, а затем экстракцию этанолом проводят при 24-28^оС в атмосфере инертного газа, например азота.The objective of the invention is to increase the yield of the target product by reducing losses during treatment with acetone and extraction with ethanol, standardizing the production cycle, increasing the stability of the drug. When using the specified invention, the yield of the target product increases by 1.5-1.6 times, which is associated with the optimization of the treatment with acetone, a decrease in the content of lipid oxidation products. This is achieved in that the yolk of eggs was ground by homogenization in acetone at a temperature of from -20 to ^-25 ° C, followed by ethanol extraction is carried out at 24-28 ^{° C} in an inert gas atmosphere, for example nitrogen.

Способ осуществляется следующим образом. Желток куриных яиц измельчают гомогенизацией в ацетоне при температуре от -20 до -25^оС в течение 3 мин. Процесс повторяют 6 раз. Затем яичный желток экстрагируют этанолом при 24-28^оС в атмосфере инертного газа в течение 1,5 ч. Прозрачный раствор, полученный после фильтрации, осаждают хлоридом кадмия, и осадок переосаждают 5 раз этанолом, содержащим хлорид кадмия. Осадок растворяют в хлороформе и обрабатывают 30%-ным раствором этанола.The method is as follows. The yolk of eggs milled homogenization in acetone at a temperature of from -20 to -25 ^{° C} for 3 min. The process is repeated 6 times. Next, the egg yolk is extracted with ethanol at 24-28 ^{° C} in an inert gas atmosphere for 1.5 h. The clear solution obtained after filtration, precipitated with cadmium chloride, and the precipitate was recrystallised 5 times with ethanol containing cadmium chloride. The precipitate was dissolved in chloroform and treated with 30% ethanol.

П р и м е р 1. Яйца в количестве 30 шт. разбивают и отделяют белок от желтка. Желтки в количестве 0,9 кг смешивают с ацетоном в количестве 600 мл, охлажденным до -20^оС, и измельчают при указанной температуре при 4000 об/мин в течение 3 мин. Полученную смесь фильтруют, к осадку прибавляют 600 мл охлажденного до -20^оС ацетона и процесс повторяют. Обработку ацетоном проводят еще 6 раз. Полученный порошок яичного желтка смешивают с 1,8 л этанола. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании (3 тыс. об/мин) и 24^оС в течение 1,5 ч в атмосфере инертного газа. Смесь отфильтровывают, полученный прозрачный раствор липидов желтого цвета в количестве 1,7 л охлаждают до 4-6^оС, затем прибавляют 40 мл охлажденного до 4-6^оС 50%-ного раствора хлорида кадмия. Полученную смесь выдерживают при 4-6^оС в течение 12-18 ч до полного осаждения лецитина. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин. Полученный осадок растворяют в 300 мл хлороформа, к нему прибавляют 2 л этанола, содержащего 20 мл 50%-ного раствора хлорида кадмия. Смесь выдерживают при 4-6^оС в течение 30 мин, осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин. Осадок рстворяют в 300 мл хлороформа, и процесс осаждения этанолом повторяют. Осаждение этанолом, содержащим хлорид кадмия, повторяют еще 4 раза. Осадок лецитина растворяют в 400 мл хлороформа и прибавляют 400 мл 30%-ного раствора этанола. Смесь перемешивают и переносят на делительную воронку. Нижний хлороформный слой отделяют и прибавляют вновь 400 мл 30%-ного раствора этанола. Процесс повторяют еще 4 раза. К полученному хлороформному раствору лецитина прибавляют 150 г обезвоженного сернокислого натрия и выдерживают при 4-6^оС в течение 10-12 ч. Раствор отделяют от соли фильтрацией и упаривают хлороформ. Выход целевого продукта составляет 20,4 г. Индекс окисленности 0,09.PRI me R 1. Eggs in the amount of 30 pcs. break and separate the protein from the yolk. Egg yolks in an amount of 0,9 kg mixed with acetone in an amount of 600 ml, cooled to ^-20 ° C, and pulverized at the temperature at 4000 r / min for 3 min. The resulting mixture was filtered and to the residue was added 600 mL cooled to ^-20 ° C acetone and the process repeated. Treatment with acetone is carried out another 6 times. The resulting egg yolk powder is mixed with 1.8 L of ethanol. The extraction is carried out with constant stirring (3 thousand rpm) and 24 ^about C for 1.5 hours in an inert gas atmosphere. The mixture was filtered, the resulting clear yellow solution of lipids in an amount of 1.7 L was cooled to 4-6 ^{° C,} then added 40 mL of chilled to 4-6 ^{° C.} 50% aqueous solution of cadmium chloride. The resulting mixture was kept at 4-6 ^about C for 12-18 hours until the complete precipitation of lecithin. The precipitate formed is separated by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes. The resulting precipitate was dissolved in 300 ml of chloroform, 2 l of ethanol containing 20 ml of a 50% solution of cadmium chloride was added to it. The mixture was kept at 4-6 ^{° C} for 30 min, the precipitate was separated by centrifugation at 3000 rev / min for 20 min. The precipitate was dissolved in 300 ml of chloroform, and the ethanol precipitation process was repeated. Precipitation with ethanol containing cadmium chloride is repeated 4 more times. The lecithin precipitate was dissolved in 400 ml of chloroform and 400 ml of a 30% ethanol solution was added. The mixture is stirred and transferred to a separatory funnel. The lower chloroform layer is separated and 400 ml of a 30% ethanol solution are added again. The process is repeated 4 more times. To the chloroform solution of the lecithin was added 150 g of anhydrous sodium sulfate and maintained at 4-6 ^{° C} for 10-12 hours. The solution is separated from the salt by filtration and the chloroform evaporated. The yield of the target product is 20.4 g. The oxidation index of 0.09.

П р и м е р 2. Яйца в количестве 30 шт. разбивают и отделяют белок от желтка. Желтки в количестве 0,9 кг смешивают с ацетоном в количестве 600 мл, охлажденным до -23^оС, измельчают при указанной температуре при 4000 об/мин в течение 3 мин. Полученную смесь фильтруют, к осадку прибавляют 600 мл охлажденного до -23^оС ацетона, и процесс повторяют. Обработку ацетоном проводят еще 6 раз. Полученный порошок яичного желтка смешивают с 1,8 л этанола. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании (3 тыс. об/мин) и 26^оС в течение 1,5 ч в атмосфере инертного газа. Смесь отфильтровывают, полученный прозрачный раствор липидов желтого цвета в количестве 1,7 л охлаждают до 4-6^оС, затем прибавляют 40 мл охлажденного до 4-6^оС 50%-ного раствора хлорида кадмия. Полученную смесь выдерживают при 4-6^оС в течение 12-18 ч до полного осаждения лецитина. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин. Полученный осадок растворяют в 300 мл хлороформа, к нему прибавляют 2 л этанола, содержащего 20 мл 50%-ного раствора хлорида кадмия. Смесь выдерживают при 4-6^оС в течение 30 мин, осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин. Осадок растворяют в 300 мл хлороформа, и процесс осаждения этанолом повторяют. Осаждение этанолом, содержащим хлорид кадмия, повторяют еще 4 раза. Осадок лецитина растворяют в 400 мл хлороформа и прибавляют 400 мл 30%-ного раствора этанола. Смесь перемешивают и переносят на делительную воронку. Нижний хлороформный слой отделяют и прибавляют вновь 400 мл 30%-ного раствора этанола. Процесс повторяют еще 4 раза. К полученному хлороформному раствору лецитина прибавляют 150 г обезвоженного сернокислого натрия и выдерживают при 4-6^оС в течение 10-12 ч. Раствор отделяют от соли фильтрацией и упаривают хлороформ. Выход целевого продукта составляет 21,9 г. Индекс окисленности 0,12.PRI me R 2. Eggs in the amount of 30 pcs. break and separate the protein from the yolk. Egg yolks in an amount of 0,9 kg mixed with acetone in an amount of 600 ml, cooled to -23 ^{° C,} pulverized at the temperature at 4000 r / min for 3 min. The resulting mixture was filtered and to the residue was added 600 mL cooled to -23 ^{° C} acetone and the process repeated. Treatment with acetone is carried out another 6 times. The resulting egg yolk powder is mixed with 1.8 L of ethanol. The extraction is carried out with constant stirring (3 thousand rpm) and 26 ^about C for 1.5 hours in an inert gas atmosphere. The mixture was filtered, the resulting clear yellow solution of lipids in an amount of 1.7 L was cooled to 4-6 ^{° C,} then added 40 mL of chilled to 4-6 ^{° C.} 50% aqueous solution of cadmium chloride. The resulting mixture was kept at 4-6 ^about C for 12-18 hours until the complete precipitation of lecithin. The precipitate formed is separated by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes. The resulting precipitate was dissolved in 300 ml of chloroform, 2 l of ethanol containing 20 ml of a 50% solution of cadmium chloride was added to it. The mixture was kept at 4-6 ^{° C} for 30 min, the precipitate was separated by centrifugation at 3000 rev / min for 20 min. The precipitate was dissolved in 300 ml of chloroform, and the ethanol precipitation process was repeated. Precipitation with ethanol containing cadmium chloride is repeated 4 more times. The lecithin precipitate was dissolved in 400 ml of chloroform and 400 ml of a 30% ethanol solution was added. The mixture is stirred and transferred to a separatory funnel. The lower chloroform layer is separated and 400 ml of a 30% ethanol solution are added again. The process is repeated 4 more times. To the chloroform solution of the lecithin was added 150 g of anhydrous sodium sulfate and maintained at 4-6 ^{° C} for 10-12 hours. The solution is separated from the salt by filtration and the chloroform evaporated. The yield of the target product is 21.9 g. The oxidation index of 0.12.

П р и м е р 3. Яйца в количестве 30 шт. разбивают и отделяют белок от желтка. Желтки в количестве 0,9 кг смешивают с ацетоном в количестве 600 мл, охлажденным до -25^оС, и измельчают при указанной температуре при 4000 об/мин в течение 3 мин. Полученную смесь фильтруют, к осадку прибавляют 600 мл охлажденного до -25^оС ацетона и процесс повторяют. Обработку ацетоном проводят еще 6 раз. Полученный порошок яичного желтка смешивают с 1,8 л этанола. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании (3 тыс.об/мин) и 28^оС в течение 1,5 ч в атмосфере инертного газа. Смесь отфильтровывают, полученный прозрачный раствор липидов желтого цвета в количестве 1,7 л охлаждают до 4-6^оС, затем прибавляют 40 мл охлажденного до 4-6^оС 50%-ного раствора хлорида кадмия. Полученную смесь выдерживают при 4-6^оС в течение 12-18 ч до полного осаждения лецитина. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин. Полученный осадок растворяют в 300 мл хлороформа, к нему прибавляют 2 л этанола, содержащего 20 мл 50%-ного раствора хлорида кадмия. Смесь выдерживают при 4-6^оС в течение 30 мин, осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин. Осадок растворяют в 300 мл хлороформа, процесс осаждения этанолом повторяют. Осаждение этанолом, содержащим хлорид кадмия, повторяют еще 4 раза. Осадок лецитина растворяют в 400 мл хлороформа и прибавляют 400 мл 30%-ного раствора этанола. Смесь перемешивают и переносят на делительную воронку. Нижний хлороформный слой отделяют и прибавляют вновь 400 мл 30%-ного раствора этанола. Процесс повторяют еще 4 раза. К полученному хлороформному раствору лецитина прибавляют 150 г обезвоженного сернокислого натрия и выдерживают при 4-6^оС в течение 10-12 ч. Раствор отделяют от соли фильтрацией и упаривают хлороформ. Выход целевого продукта составляет 21,6 г. Индекс окисленности 0,14.PRI me R 3. Eggs in the amount of 30 pcs. break and separate the protein from the yolk. Egg yolks in an amount of 0,9 kg mixed with acetone in an amount of 600 ml, cooled to -25 ^{° C,} and pulverized at the temperature at 4000 r / min for 3 min. The resulting mixture was filtered and to the residue was added 600 mL cooled to ^-25 ° C acetone and the process repeated. Treatment with acetone is carried out another 6 times. The resulting egg yolk powder is mixed with 1.8 L of ethanol. The extraction is carried out with constant stirring (3 thousand rpm) and 28 ^about C for 1.5 hours in an inert gas atmosphere. The mixture was filtered, the resulting clear yellow solution of lipids in an amount of 1.7 L was cooled to 4-6 ^{° C,} then added 40 mL of chilled to 4-6 ^{° C.} 50% aqueous solution of cadmium chloride. The resulting mixture was kept at 4-6 ^about C for 12-18 hours until the complete precipitation of lecithin. The precipitate formed is separated by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes. The resulting precipitate was dissolved in 300 ml of chloroform, 2 l of ethanol containing 20 ml of a 50% solution of cadmium chloride was added to it. The mixture was kept at 4-6 ^{° C} for 30 min, the precipitate was separated by centrifugation at 3000 rev / min for 20 min. The precipitate is dissolved in 300 ml of chloroform, the ethanol precipitation process is repeated. Precipitation with ethanol containing cadmium chloride is repeated 4 more times. The lecithin precipitate was dissolved in 400 ml of chloroform and 400 ml of a 30% ethanol solution was added. The mixture is stirred and transferred to a separatory funnel. The lower chloroform layer is separated and 400 ml of a 30% ethanol solution are added again. The process is repeated 4 more times. To the chloroform solution of the lecithin was added 150 g of anhydrous sodium sulfate and maintained at 4-6 ^{° C} for 10-12 hours. The solution is separated from the salt by filtration and the chloroform evaporated. The yield of the target product is 21.6 g. The oxidation index of 0.14.

Выбранные соотношения подтверждаются данными, приведенными в табл.1 и 2. The selected ratios are confirmed by the data given in tables 1 and 2.

Как видно из приведенных в табл.1 данных, оптимальной для обработки ацетоном является температура от -20 до -25^оС. Использование более высокой температуры приводит к снижению выхода целевого продукта (лецитина), а использование более низкой температуры не только не увеличивает выход лецитина, но и экстрагирует значительно меньше балластных липидов.As seen from the data in Table 1, optimal for the acetone treatment temperature is from -20 to -25 ° ^C. Using a higher temperature leads to decrease in the yield (lecithin), and the use of a lower temperature not only increases the yield lecithin , but also extracts significantly less ballast lipids.

Как видно из данных, приведенных в табл.2, оптимальной для экстракции этанолом является температура 24-28^оС. Использование более высокой температуры приводит к экстракции большого количества балластных веществ, а снижение температуры уменьшает выход лецитина. Увеличение содержания примесей требует больше стадий очистки, а следовательно, приводит к снижению выхода целевого продукта.As can be seen from the data shown in Table 2, the optimum ethanol extraction temperature is 24-28 ° ^C. The use of a higher temperature extraction results in a large amount of ballast substances, and lowering the temperature reduces the yield lecithin. The increase in the content of impurities requires more stages of purification, and therefore, reduces the yield of the target product.

Преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом приведены в табл.3. The advantages of the proposed method compared to the prototype are given in table.3.

Claims

METHOD FOR PRODUCING LECITHIN from chicken egg yolks, including treatment with acetone, extraction with ethanol, precipitation with cadmium chloride, reprecipitation with ethanol and treatment with 30% ethanol solution, characterized in that the treatment with acetone is carried out at -20 -25 ^o C, and extraction with ethanol at 24 28 ^o C.