RU2041951C1

RU2041951C1 - Method for production of prednisolone

Info

Publication number: RU2041951C1
Authority: RU
Inventors: Ю.В. Редикульцев; Г.В. Суходольская; К.А. Кощеенко; В.К. Кудряшов
Original assignee: Институт биохимии и физиологии микроорганизмов РАН
Priority date: 1992-10-09
Filing date: 1992-10-09
Publication date: 1995-08-20

Abstract

FIELD: biotechnology. SUBSTANCE: suspension of hydrocortison in phosphate buffer is prepared. Then its transformation by immobilized cells of Arthrobacter globifornis is carried out. Then suspension which contains product is separated and heated at 80-95 C till crystals of product are dissolved. Thus prepared solution is cooled and crystals are isolated of liquid phase. Said liquid phase is then used for preparing suspension of hydrocortison as buffer solution. EFFECT: improves efficiency of the method. 1 dwg

Description

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения дегидрированных производных стероидных соединений с помощью иммобилизованных клеток (ИмК) микроорганизмов, и может быть использовано в микробиологической и фармацевтической промышленности. The invention relates to biotechnology, and in particular to methods for producing dehydrogenated derivatives of steroid compounds using immobilized cells (ImK) of microorganisms, and can be used in the microbiological and pharmaceutical industries.

Дегидрированные стероидные соединения, например преднизолон, 6α -метилпреднизолон, обладают более высокой физиологической активностью по сравнению с исходными субстратами и широко используются в качестве эффективных лекарственных препаратов при заболеваниях ревматического характера, бронхиальной астмы, аллергических реакциях. Dehydrated steroid compounds, for example, prednisone, 6α-methylprednisolone, have higher physiological activity compared to the starting substrates and are widely used as effective drugs for rheumatic diseases, bronchial asthma, and allergic reactions.

Известен способ получения преднизолона с помощью ИмК A.globiformis при проведении процесса 1,2-дегидрирования гидрокортизона в непрерывных условиях при вводе субстрата в реактор сверху или снизу. A known method of producing prednisolone using img A.globiformis during the process of 1,2-dehydrogenation of hydrocortisone in continuous conditions when introducing the substrate into the reactor from above or from below.

При непрерывном потоке через реактор используют водные растворы гидрокортизона. Растворимость гидрокортизона составляет 0,28 г/л. Однако при работе в этом режиме из-за недостаточной аэрации не удается достичь полного превращения гидрокортизона, даже варьируя скорость нисходящего протока в пределах 5-300 мл/ч, при этом процент превращения субстрата остается постоянным 50-60% Снижение скорости протока гидрокортизона способствует протеканию побочных восстановительных процессов и накоплению в культуральной жидкости 20 β -восстановленных производных. Применение искусственных акцепторов электронов феназинметасульфата, менадиона и др. позволяет ингибировать протекание побочных процессов и интенсифицировать превращение гидрокортизона в преднизолон. With a continuous stream through the reactor, aqueous hydrocortisone solutions are used. The solubility of hydrocortisone is 0.28 g / L. However, when operating in this mode, due to insufficient aeration, it is not possible to achieve complete conversion of hydrocortisone, even by varying the speed of the downward flow in the range of 5-300 ml / h, while the percentage of conversion of the substrate remains constant 50-60%. A decrease in the flow rate of hydrocortisone contributes to the occurrence of side effects. recovery processes and the accumulation of 20 β -reduced derivatives in the culture fluid. The use of artificial electron acceptors of phenazine methasulfate, menadione, etc. allows you to inhibit the occurrence of side processes and to intensify the conversion of hydrocortisone to prednisolone.

При проведении трансформации в колонке с восходящим потоком раствора гидрокортизона при перемешивании биокатализатора и продуве воздуха выход продукта увеличивается, а при низких скоростях протока субстрата (до 20 мл/ч) удается достичь полного превращения растворенного гидрокортизона (0,2 г/л) в преднизолон. During the transformation in a column with an upward flow of hydrocortisone solution with stirring of the biocatalyst and air blowing, the product yield increases, and at low substrate flow rates (up to 20 ml / h), it is possible to achieve complete conversion of dissolved hydrocortisone (0.2 g / l) to prednisolone.

При сохранении этого режима трансформации, но при увеличении нагрузки субстрата до 0,5-1,0 г/л и применении его в виде кристаллов наблюдается их вынос из реакционной зоны и накопление в виде пены в верхней части реактора. Наблюдается также оседание кристаллов субстрата на стенках шлангов перистальтических насосов. While maintaining this transformation mode, but with an increase in the substrate load to 0.5-1.0 g / l and applying it in the form of crystals, their removal from the reaction zone and their accumulation in the form of foam in the upper part of the reactor are observed. The subsidence of the crystals of the substrate on the walls of the hoses of peristaltic pumps is also observed.

Эти факторы вызывают нарушение баланса стероидных соединений в реакционной зоне, резко снижают выход продукта, затрудняют анализ за ходом ферментативного процесса и создают ряд других технологических трудностей. These factors cause an imbalance in the steroid compounds in the reaction zone, sharply reduce the yield of the product, make it difficult to analyze the progress of the enzymatic process, and create a number of other technological difficulties.

Таким образом, общим недостатком известных непрерывных способов получения преднизолона является их малая эффективность, обусловленная неполным превращением гидрокортизона в преднизолон, необходимостью использования гидрокортизона в низкой концентрации, малой скоростью восходящего протока растворенного субстрата, при которой достигается его полное превращение образованием побочных продуктов, в частности, 20β -восстановленных производных, потерей субстрата за счет его оседания в шлангах (коммуникациях). Thus, a common drawback of the known continuous methods for producing prednisolone is their low efficiency, due to the incomplete conversion of hydrocortisone to prednisolone, the need to use hydrocortisone in a low concentration, the low rate of the ascending duct of the dissolved substrate, at which its complete conversion is achieved by the formation of by-products, in particular, 20β - restored derivatives, loss of substrate due to its subsidence in hoses (communications).

Недостатком рассматриваемых способов получения преднизолона является также использование больших объемов органических растворителей для экстракции продукта из водной фазы. Извлечение продукта проводится двукратной экстракцией двойным объемом органического растворителя. В результате на 1 л реакционной среды, содержащей 0,1-1,0 г/л продукта, требуется 4 л органического растворителя: хлороформа или этилацетата. The disadvantage of the considered methods for producing prednisone is the use of large volumes of organic solvents for extraction of the product from the aqueous phase. Product extraction is carried out by double extraction with a double volume of an organic solvent. As a result, 4 l of an organic solvent: chloroform or ethyl acetate is required per 1 liter of reaction medium containing 0.1-1.0 g / l of product.

Известен способ получения преднизолона в непрерывных условиях, заключающийся в том, что готовят суспензию гидрокортизона (0,3-1,0 г/л) в фосфатном буфере, которую непрерывно подают в реактор, заполненный иммобилизованными в гранулы полиакриламидного геля клетками Arthorbacter globiformis. Раствор, получаемый на выходе из реактора, содержащий продукт преднизолон, охлаждают в холодильной камере с целью осаждения продукта в виде кристаллов. Выпавшие кристаллы преднизолона по мере их накопления отделяют на фильтре, а жидкую фазу непрерывно возвращают в емкость с суспендированным гидрокортизоном. Степень превращения гидрокортизона в преднизолон составляет 95% (данные ТСХ). Способ позволяет осуществлять выделение продукта без использования органических растворителей и сложного технологического оборудования и обеспечивает возможность создания экологически чистого производства. A known method of producing prednisolone under continuous conditions, which consists in preparing a suspension of hydrocortisone (0.3-1.0 g / l) in phosphate buffer, which is continuously fed into a reactor filled with Arthorbacter globiformis cells immobilized into granules of a polyacrylamide gel. The solution obtained at the outlet of the reactor, containing the product prednisone, is cooled in a refrigerator to precipitate the product in the form of crystals. The precipitated prednisolone crystals are separated on the filter as they accumulate, and the liquid phase is continuously returned to the container with suspended hydrocortisone. The degree of conversion of hydrocortisone to prednisolone is 95% (TLC data). The method allows for the isolation of the product without the use of organic solvents and complex technological equipment and provides the opportunity to create environmentally friendly production.

Основной недостаток данного способа низкая производительность, обусловленная: проскоком субстрата из реактора, в котором происходит турбулентное перемешивание и флотация кристаллов, и попадание его вместе с продуктом в холодильную камеру. Отделение гидрокортизона в процессе очистки продукта преднизолона обуславливает резкое снижение его выхода; деструкцией продукта процессов при низких скоростях протока и низкой (< 0,5 г/л) концентрации субстрата, обусловленной возвращением раствора, полученного после отделения кристаллов продукта, в емкость с суспендированным субстратом; активацией побочного процесса 1,2-гидрирования преднизолона в условиях отсутствия аэрации во влажной массе кристаллов продукта, накапливаемых на фильтре, обусловленной десорбцией клеток микроорганизмов из носителя, вымыванием их из реактора и накоплением их вместе с продуктом. Сохранение этими микроорганизмами стероид-1,2-гидрогеназной активности, определяет увеличение остаточного гидрокортизона в осадке продукта по сравнению с жидкой фазой реактора на 7-10% В результате суммарное содержание остаточного гидрокортизона в осадке кристаллов продукта, составляет 12-15% Очистка продукта от остаточного гидрокортизона сопровождается значительной потерей самого продукта (15-20%). The main disadvantage of this method is low productivity, due to: slip of the substrate from the reactor, in which turbulent mixing and flotation of crystals occurs, and together with the product it enters the refrigeration chamber. The separation of hydrocortisone during the purification of the prednisolone product causes a sharp decrease in its yield; degradation of the product of the processes at low flow rates and low (<0.5 g / l) substrate concentration, due to the return of the solution obtained after separation of the product crystals into a container with a suspended substrate; activation of the side process of 1,2-hydrogenation of prednisolone in the absence of aeration in the wet mass of product crystals accumulated on the filter due to desorption of microorganism cells from the carrier, washing them out of the reactor and accumulating them together with the product. The preservation of steroid-1,2-hydrogenase activity by these microorganisms determines the increase in the residual hydrocortisone in the precipitate of the product by 7-10% compared to the liquid phase of the reactor. As a result, the total residual hydrocortisone in the precipitate of the product crystals is 12-15%. Purification of the product from the residual hydrocortisone is accompanied by a significant loss of the product itself (15-20%).

Перечисленные факторы исключают возможность и целесообразность масштабирования установки. These factors exclude the possibility and expediency of scaling the installation.

Известен способ получения преднизолона в периодических условиях, основанный на трансформации кристаллического гидрокортизона в концентрации 5-10 г/л свободными и ИмК A. globiformis со степенью превращения 85% Однако после очистки преднизолона от остаточного гидрокортизона его выход, считая на исходный гидрокортизон, составляет 59,36%
Известен способ получения преднизолона, согласно которому трансформацию кристаллического гидрокортизона (5-10 г/л) свободными и ИмК A. globiformis осуществляют в присутствии β -циклодекстрина. В этом случае степень превращения гидрокортизона в преднизолон составляет 95-97%
Основной недостаток способа потери продукта при его отделении от β -циклодекстрина. Кроме того, реализация способа затруднена из-за отсутствия производства отечественного β -циклодекстрина.A known method for producing prednisolone under periodic conditions, based on the transformation of crystalline hydrocortisone at a concentration of 5-10 g / l free and ImK A. globiformis with a degree of conversion of 85%. However, after purification of prednisolone from residual hydrocortisone, its yield, counting on the original hydrocortisone, is 59, 36%
A known method for producing prednisolone, according to which the transformation of crystalline hydrocortisone (5-10 g / l) free and imk A. globiformis carried out in the presence of β-cyclodextrin. In this case, the degree of conversion of hydrocortisone to prednisolone is 95-97%
The main disadvantage of the method of product loss when it is separated from β-cyclodextrin. In addition, the implementation of the method is difficult due to the lack of production of domestic β-cyclodextrin.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков и достигаемому эффекту является способ получения преднизолона с помощью свободных и ИмК A. globiformis, предусматривающий приготовление суспензии гидрокортизона (1,0 г/л) в фосфатном буфере, трансформацию гидрокортизона ИмК Arthrobacter globiformis 193, отделение суспензии, содержащей продукт, от гранул геля с иммобилизованными в них клетками, подкисление суспензии до рН 5,0 с целью ингибирования активности ферментов, катализирующих побочные реакции, и выделение преднизолона из нее экстракцией органическими растворителями с последующим упариванием экстрактов в вакууме до сухого остатка и перекристаллизацию полученного продукта. The closest to the present invention in terms of the essential features and the achieved effect is a method for producing prednisolone using free and ImK A. globiformis, providing for the preparation of a suspension of hydrocortisone (1.0 g / l) in phosphate buffer, transformation of hydrocortisone ImK Arthrobacter globiformis 193, separation of the suspension containing the product, from gel granules with cells immobilized in them, acidification of the suspension to pH 5.0 in order to inhibit the activity of enzymes that catalyze side reactions, and the isolation of prednisol therefrom on extraction with organic solvents followed by evaporation of the extracts in vacuo to dryness and recrystallizing the obtained product.

Длительность процесса трансформации при весовом соотношении клетки субстрат 2:1 составляет 2,0-2,5 ч. Степень превращения субстрата при проведении первых 5-8 трансформаций составляет 95-98% В последующий период при проведении последовательных трансформаций происходит постепенное повышение содержания остаточного гидрокортизона, что определяет необходимость увеличения продолжительности процесса. The duration of the transformation process at a weight ratio of the cell of the substrate 2: 1 is 2.0-2.5 hours. The degree of transformation of the substrate during the first 5-8 transformations is 95-98%. In the subsequent period, during subsequent transformations, a gradual increase in the content of residual hydrocortisone occurs, which determines the need to increase the duration of the process.

Недостатки данного способа сложность и трудоемкость процесса и высокая степень экологической опасности, связанные с применением на стадии выделения и очистки продукта больших количеств органических растворителей. The disadvantages of this method are the complexity and complexity of the process and the high degree of environmental hazard associated with the use of large amounts of organic solvents at the stage of isolation and purification of the product.

Цель изобретения создание эффективного способа получения преднизолона, обеспечение условий для экологически чистого процесса и повышения его экономичности. The purpose of the invention is the creation of an effective method for producing prednisone, providing conditions for an environmentally friendly process and increasing its efficiency.

Цель может быть достигнута упрощением способа, снижением трудоемкости процесса, улучшением условий труда, обеспечением экологической безопасности, повышением его экономичности. The goal can be achieved by simplifying the method, reducing the complexity of the process, improving working conditions, ensuring environmental safety, increasing its efficiency.

Сущность изобретения заключается в том, что приготавливают суспензию гидрокортизона в фосфатном буфере, трансформацию его иммобилизованными клетками Arthrobacter globiformis 193, отделение суспензии, содержащей продукт, кратковременное прогревание ее при 80-95^оС до растворения кристаллов, охлаждение полученного раствора в холодильной камере для образования кристаллов продукта с последующим их отделением от жидкой фазы, которую используют для приготовления суспензии гидрокортизона в последующих операциях вместо буферного раствора.The invention consists in that the prepared suspension of hydrocortisone in phosphate buffer, its transformation immobilized cells Arthrobacter globiformis 193, separating a suspension containing the product, its brief warming at 80-95 ^{° C} to dissolve the crystals, cooling the resultant solution in the cooling chamber for the formation of crystals product, followed by their separation from the liquid phase, which is used to prepare a suspension of hydrocortisone in subsequent operations instead of a buffer solution.

Использование приема кратковременного прогревания суспензии, содержащей продукт, при температуре 80-95^оС, позволяет, с одной стороны, подавить протекание побочных реакций путем ингибирования ферментативной активности микроорганизмов, десорбированных из носителя в процессе трансформации и вымытых из реактора, а с другой провести одновременно процесс перекристаллизации продукта и снизить потери продукта и упростить процесс, обеспечить экологическую безопасность производства за счет отсутствия в технологическом процессе органических растворителей, а также повысить его экономичность.Using receive momentary heating the slurry containing the product at a temperature of 80-95 ^{° C,} allows, on the one hand, to suppress side reactions by inhibiting the enzyme activity of microorganisms desorbed from the carrier in the transformation process and washed out of the reactor, and the other to hold simultaneously process recrystallization of the product and reduce product losses and simplify the process, ensure environmental safety of production due to the absence of organically in the process solvents, as well as improve its efficiency.

Способ позволяет осуществлять все операции, начиная со слива суспензии, содержащей продукт, в непрерывном режиме, совмещая их во времени между собой и с осуществлением трансформации следующей порции субстрата, что в совокупности с возвратом жидкой фазы на стадию приготовления суспензии субстрата обеспечивает цикличность процесса и создает предпосылки его автоматизации. The method allows you to carry out all operations, starting with the discharge of the suspension containing the product in a continuous mode, combining them in time with each other and with the transformation of the next portion of the substrate, which together with the return of the liquid phase to the stage of preparation of the suspension of the substrate ensures the cyclical process and creates the prerequisites its automation.

П р и м е р 1. Выращивание A. globiformis, иммобилизация. Культуру A. globiformis 193 выращивают в колбах Эрленмейера объемом 750 мл, на кукурузно-глюкозной среде (глюкоза 1% кукурузный экстракт 1%) в присутствии ацетата кортизона (20 мг%) индуктора 3-кетостероид-1-ендегидрогеназы. Культуру выращивают в течение 24 ч при температуре 28^оС, 220 об/мин. Клетки отделяют от среды центрифугированием (при 5000 g), отмывают 0,01 М фосфатным буфером, рН 7,2 и готовят суспензию клеток, 100 мг (сухой вес) в 1 мл 0,01 М фосфатного буфера, рН 7,2.PRI me R 1. Growing A. globiformis, immobilization. A culture of A. globiformis 193 is grown in 750 ml Erlenmeyer flasks on a corn-glucose medium (glucose 1% corn extract 1%) in the presence of cortisone acetate (20 mg%) of the 3-ketosteroid-1-dehydrogenase inducer. The culture is grown for 24 hours at a temperature of 28 ^about C, 220 rpm Cells are separated from the medium by centrifugation (at 5000 g), washed with 0.01 M phosphate buffer, pH 7.2 and a cell suspension is prepared, 100 mg (dry weight) in 1 ml of 0.01 M phosphate buffer, pH 7.2.

Включают клетки в 10%-ный полиакриламидный гель с 0,5%-ным содержанием сшивающего агента при температуре 4^оС. Полимеризационную смесь тщательно перемешивают и после 2 мин выдерживания в момент начала гелеобразования переносят в камеру холодильника на 10 мин до завершения процесса полимеризации.Include cells in 10% polyacrylamide gel with 0.5% content of crosslinker at a temperature of 4 ° ^C. The polymerization mixture is thoroughly mixed and after incubation for 2 minutes at the beginning of gelation is transferred into the chamber of the refrigerator for 10 minutes to complete the polymerization process.

Образовавшийся блок геля с включенными клетками фрагментируют, продавливая через сито. Полученные гранулы (1,0-1,2 мкм) промывают стерильной водопроводной водой декантацией 5-8 раз и используют в качестве биокатализатора процесса превращения гидрокортизона в преднизолон. The resulting gel block with the included cells is fragmented by forcing through a sieve. The obtained granules (1.0-1.2 μm) are washed with sterile tap water by decantation 5-8 times and used as a biocatalyst for the conversion of hydrocortisone to prednisolone.

На чертеже показана схема установки для получения преднизолона. The drawing shows a diagram of an installation for producing prednisone.

Установка включает емкость 1 исходного субстрата, ферментер 2, емкость 3 для сбора суспензии, содержащей продукт, термостат 4, холодильную камеру 5, фильтр 6, сборник 7 фильтрата. The installation includes a container 1 of the initial substrate, a fermenter 2, a container 3 for collecting a suspension containing a product, a thermostat 4, a cooling chamber 5, a filter 6, a filtrate collector 7.

В биореактор 1 (V 10 л) вводят 6,7 л 0,01 М фосфатного буфера, рН 7,2, содержащего субстрат в концентрации 1,0 г/л и гранулы геля с включенными клетками объемом 1300 мл. Соотношение объема гранул к объему суспензии гидрокортизона составляет 1:5. Весовое соотношение клеток A. globiformis (вес сухого вещества) к гидрокортизону составляет 2:1. Процесс трансформации осуществляют при 28^оС.6.7 L of 0.01 M phosphate buffer, pH 7.2, containing a substrate at a concentration of 1.0 g / L and gel granules with included cells with a volume of 1300 ml are introduced into bioreactor 1 (V 10 L). The ratio of the volume of granules to the volume of the suspension of hydrocortisone is 1: 5. The weight ratio of A. globiformis cells (dry matter weight) to hydrocortisone is 2: 1. The transformation process is carried out at 28 ^about C.

Анализ продуктов трансформации в ходе процесса проводят методом тонкослойной хроматографии на пластинках силуфол UV-254. Разделение продуктов осуществляют в системе бензол-ацетон 3:1 (об/об). Analysis of transformation products during the process is carried out by thin layer chromatography on silofol UV-254 plates. The separation of products is carried out in a benzene-acetone 3: 1 system (v / v).

Трансформацию проводят 2,0-2,5 ч. При завершении процесса степень превращения гидрокортизона в преднизолон составляет 97-98% После окончания процесса трансформации суспензию, содержащую стероиды, из биореактора через сетчатый фильтр сливают в промежуточную емкость, из которой подают в термостат для кратковременного прогревания при 80-95^оС. Прогревание заканчивают, когда при визуальной оценке раствор становится прозрачным, что свидетельствует о растворении кристаллов продукта. Полученный раствор через фильтр, который служит для отделения мелких частиц геля, направляют в холодильную камеру, где при охлаждении формируются кристаллы преднизолона. Кристаллы отделяют фильтрацией. Оставшийся фильтрат, содержащий 0,15-0,2 г/л растворенного преднизолона, используют для приготовления суспензии субстрата гидрокортизона.The transformation is carried out for 2.0-2.5 hours. At the end of the process, the degree of conversion of hydrocortisone to prednisolone is 97-98%. After the completion of the transformation process, the suspension containing steroids is poured from the bioreactor through a strainer into an intermediate container, from which it is supplied to the thermostat for a short time heating at 80-95 ° ^C. The heating is stopped when visual inspection when the solution becomes clear, indicating that the dissolution of the product crystals. The resulting solution through the filter, which serves to separate the fine particles of the gel, is sent to a refrigerating chamber, where prednisolone crystals are formed upon cooling. The crystals are separated by filtration. The remaining filtrate containing 0.15-0.2 g / l of dissolved prednisolone is used to prepare a suspension of hydrocortisone substrate.

Выход продукта при 1-й и 2-й трансформации составляет 65-70% от использованного субстрата (0,65-0,7 г/л). The product yield at the 1st and 2nd transformation is 65-70% of the substrate used (0.65-0.7 g / l).

П р и м е р 2. Способ осуществляют, как в примере 1, но готовят суспензию гидрокортизона с концентрацией 0,8 г/л, используя вместо буфера фильтрат, полученный после отделения кристаллов продукта с первого процесса трансфоpмации. Суммарная концентрация стероидов в реакторе составляет 1,0-1,2 г/л за счет наличия в фильтрате растворенного преднизолона (0,15-0,2 г/л) и адсорбированного преднизолона на стенках реактора и гранулах геля. Трансформацию проводят 2,0-2,5 ч. При завершении процесса степень превращения гидрокортизона составляет 97-98% выход продукта от субстрата 80-85% (0,64-0,68 г/л). В указанных условиях возможно проведение до 50 повторных трансформаций. PRI me R 2. The method is carried out as in example 1, but prepare a suspension of hydrocortisone with a concentration of 0.8 g / l, instead of using a buffer, the filtrate obtained after separation of the product crystals from the first transformation process. The total concentration of steroids in the reactor is 1.0-1.2 g / l due to the presence of dissolved prednisolone (0.15-0.2 g / l) and adsorbed prednisolone on the walls of the reactor and gel granules in the filtrate. The transformation is carried out 2.0-2.5 hours. At the end of the process, the degree of conversion of hydrocortisone is 97-98% of the product yield from the substrate 80-85% (0.64-0.68 g / l). Under these conditions, up to 50 repeated transformations are possible.

П р и м е р 3. Способ осуществляют, как в примере 1, но готовят суспензию гидрокортизона с концентрацией 0,6 г/л, используя фильтрат, характеристика которого представлена в примере 2. Суммарная концентрация стероидов в реакторе не превышает 1,0 г/л. Трансформацию проводят 2,0-2,5 ч. При завершении процесса степень превращения составляет 97-98% выход продукта от субстрата 80-85% (4,8-5,1 г/л). Возможно проведение 50 повторных трансформаций. PRI me R 3. The method is carried out as in example 1, but prepare a suspension of hydrocortisone with a concentration of 0.6 g / l, using the filtrate, the characteristic of which is presented in example 2. The total concentration of steroids in the reactor does not exceed 1.0 g / l The transformation is carried out 2.0-2.5 hours. Upon completion of the process, the degree of conversion is 97-98% of the product yield from the substrate 80-85% (4.8-5.1 g / l). It is possible to carry out 50 repeated transformations.

Предлагаемый способ позволяет осуществить эффективный, простой, экологически чистый и достаточно экономичный процесс получения преднизолона, который легко поддается масштабированию, может быть автоматизирован и осуществлен в промышленных условиях. The proposed method allows for an efficient, simple, environmentally friendly and fairly economical process for the production of prednisone, which is easily scalable, can be automated and carried out in an industrial environment.

Claims

METHOD FOR PRODUCING Prednisolone, which involves preparing a suspension of hydrocortisone in phosphate buffer, transforming it with immobilized Arthrobacter globiformis 193 cells, separating the suspension containing the target product, and isolating it with subsequent crystallization, characterized in that the suspension containing the target product is briefly heated to isolate prednisolone and shortened at 80-95 ^o C to dissolve the crystals, then the resulting solution is cooled to form crystals, while the liquid phase after separation of the crystal tallow is used to prepare a suspension of hydrocortisone in subsequent operations instead of a buffer solution.