RU2033424C1 - Штамм вируса гриппа а (нзn2) для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей - Google Patents

Abstract

Использование: медицинская вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм А/З/17/89 - рекомбинант, полученный скрещиванием эпидемического вируса А/Закарпатье/354/89 (НЗ N 2) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А/Ленинград/134/57/17 (Н 2 N 2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых людей и детей. Штамм А/3/17/89 активно репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре (32°С), разность в показателях инфекционной активности при 32 и 40°С - 6,75 lg ЭИД 50/0,2 мл. Рекомбинат унаследовал от актуального эпидемического вируса 2 гена, кодирующих поверхностные белки (геммаглютинин и нейраминидазу), и 6 генов, кодирующих внутренние белки от донора аттенуации. По данным рекомбинационно-комплементационного анализа в геноме штамма А/3/17/89 имеется 3 ts-мутации, характерные для донора аттенуации А/Ленинград/134/57/17 (Н 2 N 2). Штамм А/3/17/89 ареактогенен для взрослых и детей 3 - 15 лет при интраназальном введении и вызывает четырехкратный прирост антител в крови у 60,0% взрослых и у 73,0% детей, привитых однократно. Штамм включен в ГКВ. Депонент N 2275.

Description

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для профилактики эпидемического гриппа.

Известный штамм А/Л/134/37/88/17 (положительное решение по заявке N 4758677 от 14.05.90), использовавшийся для получения живой гриппозной вакцины для взрослых людей и детей, существенно отличается по антигенным свойствам от современных эпидемических вирусов гриппа A(H3N2), рекомендованных в состав гриппозных вакцин ВОЗ.

Целью изобретения является получение вакционного штамма актуальной разновидности на основе эпидемически значимого вируса, а именно А(Закарпатье)354/89 (H3N2).

Вакционный штамм А(З)17/89 (H3N2) получен в результате рекомбинации эпидемического вируса А(Закарпатье)354/89 (H3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А(Ленинград)134/57/17 (H2N2) с последующей селекцией в присутствии антисыворотки А(Ленинград)134/57/17. Штамм А(З)17/89 (H3N2) унаследовал от донора аттенуации гены 1, 2, 3, 5, 7 и 8, кодирующие белки PB₂,PB₁,NP, M и NS соответственно, и 2 гена от эпидемического вируса, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу). Температурочувствительный холодоадаптированный рекомбинант А(З)17/89 (H3N2) унаследовал 3 ts-мутации в генах 1, 5 и 7 от донора аттенуации, которые обеспечивают высокую степень безвредности и стабильности рекомбинанта. Таким образом, указанный рекомбинантный вакцинный штамм характеризуется сочетанием полученных признаков родительских вирусов, необходимых вакцинному штамму, антигенной специфичностью поверхностных белков актуального эпидемического вируса А(Закарпатье)354/89 (H3N2) и температурочувствительностью, характерной для штамма А(Ленинград)134/57/17 (H2N2).

Морфология штамма А(З)17/89 (H3N2) полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Штамм А(З)17/89 (H3N2) накапливается в куриных эмбрионах до 7,5-8,0 lg ЭИД 50/0,2 мл в течение 48 ч при 32^оС, агглютинирует эритроциты кур в разведении 1:512. Проявляет стабильность биологических признаков после пятикратного пассивирования в развивающихся куриных эмбрионах. Обладает ареактогенностью и выраженной иммуногенностью при однократном интраназальном введении взрослым и детям 3-15 лет.

П р и м е р 1. Группе из 5 серонегативных лиц (с исходным титром антител в сыворотке 0-1: 16) ввели интраназально двукратно с интервалом 28 дней в объеме 0,5 мл вакцинный штамм А(З)17/89 (H3N2) с инфекционным титром 7,25 lg ЭИД 50/0,2 мл. Среди привитых не было зарегистрировано ни одной температурной реакции. При обследовании в РТГА парных сывороток этих лиц четырехкратный прирост антител был зарегистрирован у 4 из 5 двукратно вакцинированных.

По данным неврологического, биохимического, иммунологического исследования функции внешнего дыхания кандидат в вакцинные штаммы А(З)17/89 (H3N2) оказался безвредным для людей.

П р и м е р 2. Группе из 103 серонегативных лиц ввели интраназально однократно в том же объеме вакцинный штамм А(З)17/89 (Н3N2), Среди привитых была зарегистрирована температурная реакция средней тяжести (повышение температуры до 38,4^оС, что составило менее 1%). Слабые температурные реакции (до 37,5^оС) были незначительны (1,7 в опыте и 8,6 в контроле) и более выраженными в группе людей, получивших плацебо. Показатель реактогенности (0,9) ниже предельно допустимого (2%).

При исследовании парных сывороток 87 человек с исходным уровнем <1:8 отмечен четырехкратный прирост антител у 52 человек, что составило 60,0%
П р и м е р 3. Серонегативные дети 3-15 лет (20 человек) были иммунизированы однократно штаммом А(З)17/89 (H3N2), 10 детей получили плацебо. В течение 5 дней не было отмечено температурных реакций (показатель реактогенности 0).

П р и м е р 4. Группа из 117 детей 3-15 лет получила однократно интраназально вакцинный штамм А(З)17/89 (H3N2), а 69 детей получили плацебо. При наблюдении после иммунизации не выявлено температурных реакций средней и сильной степени (показатель реактогенности 0). В РТГА четырехкратный и более прирост антител из 78 привитых однократно детей с исходным титром <1:8 выделен у 57 человек (73,0%).

Таким образом, результаты изучения кандидата в вакцинные штаммы А(З)17/89 (H3N2) на взрослых и детях показали, что штамм соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам МРТУ-42 N 373-70 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения взрослым и детям.

Штамм депонирован в коллекцию ГКВ, депонент N 2275.

Решением Комиссии по гриппозным вакцинным штаммам МЗ СССР от 20 февраля 1990 г. штамм А(З)17/89 (H3N2) рекомендован для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых. Решением Комиссии от 12 сентября 1990 г. штамм рекомендован как вакцинный штамм для детей.

Claims (1)

1. Штамм вируса гриппа А(Н3N2) ГКВ N 2265 для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей.