RU2026343C1

RU2026343C1 - Vaccine against brucellosis in farming animals

Info

Publication number: RU2026343C1
Authority: RU
Inventors: К.В. Шумилов; Р.Г. Яраев; А.И. Климанов; Н.Х. Шевченко; В.В. Калмыков; В.К. Гринько; Ю.Н. Шихалеев; С.А. Назарова; Н.А. Михайлов; В.З. Бондаренко; И.И. Истамов; Л.П. Мельниченко; М.Р. Абдуллаева; Н.А. Бураченко
Original assignee: Узбекский научно-исследовательский ветеринарный институт
Priority date: 1992-06-30
Filing date: 1992-06-30
Publication date: 1995-01-09

Abstract

FIELD: veterinary biotechnology. SUBSTANCE: vaccine against brucellosis in farming animal has suspension of strain Br. melitensis "Nevskiy-13", BGKI-31, oily adjuvant of Freund incomplete adjuvant and formalin taken in the effective ratios. Use of new vaccine in veterinary practice ensures to increase effectiveness of brucellosis prophylaxis in farming animal by 1.5-2 times. EFFECT: enhanced effectiveness of brucellosis prophylaxis. 2 tbl

Description

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных. The invention relates to veterinary biotechnology, in particular to methods for producing vaccines used for the prevention of brucellosis in farm animals.

Бруцеллез сельскохозяйственных животных - хроническое зооантропонозное заболевание, наносящее большой экономический ущерб животноводству. В системе мер борьбы с бруцеллезом ведущее место принадлежит средствам специфической профилактики заболевания. Farm animal brucellosis is a chronic zooanthroponic disease that causes great economic damage to livestock. In the system of measures to combat brucellosis, the leading place belongs to the means of specific prophylaxis of the disease.

Известна вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, содержащая антиген из штамма Brabortus 19 и сахарозо-желатиновый стабилизатор [1]. Known vaccine against brucellosis of farm animals containing the antigen from strain Brabortus 19 and a sucrose-gelatin stabilizer [1].

Недостатком данной вакцины является ее высокая агглютиногенность, препятствующая выявлению больных бруцеллезом животных и недостаточная, как и у всех живых вакцин, экологическая чистота. The disadvantage of this vaccine is its high agglutinogenicity, which prevents the detection of animals with brucellosis and lacks ecological purity, like all live vaccines.

Известна также вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген из штамма Br.abortus 45/20, масляный адъювант и физиологический раствор [2]. A vaccine against cattle brucellosis is also known, containing an inactivated antigen from strain Br.abortus 45/20, an oil adjuvant and physiological saline [2].

Недостатком данной вакцины является невысокая иммуногенность. The disadvantage of this vaccine is its low immunogenicity.

Целью настоящего изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины против бруцеллеза сельскохозяйственных животных. The aim of the present invention is to increase the immunogenic activity of the vaccine against brucellosis in farm animals.

Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит бактериальную массу из штамма Br.melitensis "Невский-13", в качестве масляного адъюванта - неполный адъювант Фрейнда и дополнительно формалин, при следующем соотношении компонентов мас./об.%:
Бактериальная масса
из штамма Br.meliten- sis "Невский-13" 1,45-1,55х
x 10¹¹ микр x
x к/см³
Неполный адъювант Фрейнда 45-50 Формалин 0,3-0,5
Физиологический раствор Остальное
Для изготовления вакцины используют штамм Br.melitensis "Невский-13".The goal is achieved in that the vaccine as an antigen contains a bacterial mass from the strain Nevsky-13 Br.melitensis, incomplete Freund's adjuvant and additional formalin as an oil adjuvant, in the following ratio, wt./vol.%:
Bacterial mass
from strain Br.melitensis "Nevsky-13" 1.45-1.55x
x 10 ¹¹ mic x
x c / cm ³
Incomplete Freund's adjuvant 45-50 Formalin 0.3-0.5
Saline
For the manufacture of the vaccine using a strain of Br.melitensis "Nevsky-13".

Штамм Br.melitensis "Невский-13" получен путем целенаправленной селекции по иммуногенной активности и антигенности. The strain Br.melitensis "Nevsky-13" obtained by targeted selection for immunogenic activity and antigenicity.

Штамм Br.melitensis "Невский-13" депонирован в коллекции Всероссийского государственного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов. The strain Br.melitensis "Nevsky-13" is deposited in the collection of the All-Russian State Order of the Red Banner of Labor of the Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines.

Штамм характеризуется следующими признаками и свойствами. The strain is characterized by the following features and properties.

Морфологические признаки. Короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные поодиночке или парами, без спор и капсул. Размер 0,6-1,0 мкм, ширина 0,3-0,5 мкм. Morphological signs. Short gram-negative sticks with rounded ends, located singly or in pairs, without spores and capsules. Size 0.6-1.0 microns, width 0.3-0.5 microns.

Культуральные свойства. Штамм в мясо-пептонном печеночном глюкозо-глицериновом бульоне при 37-38^оС через 48-72 ч образует легкую опалесценцию и тонкое голубоватое прозрачное пристеночное кольцо. На мясо-пептонном печеночном глюкозо-глицериновом агаре (4-5 сутки) растет в виде выпуклых, круглых, прозрачных с голубовато-зеленым оттенком (в проходящем свете) колоний с диаметром 2,5-3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 колонии не полностью покрыты краской (имеются желтые просветы в виде трещин).Cultural properties. Strain in meat-peptone-glycerol hepatic glucose broth at 37-38 ^{° C} 48-72 hours and form a slight opalescence thin bluish transparent parietal ring. On meat-peptone hepatic glucose-glycerin agar (4-5 days) grows in the form of colonies with a diameter of 2.5-3.0 mm, convex, round, transparent with a bluish-green tint (in transmitted light). When stained with a solution of crystalline violet, 1/2000 colonies are not completely covered with paint (there are yellow gaps in the form of cracks).

На МППГГА с добавлением фуксина 1/50 тыс., тионина 1/50 тыс., натриевой соли бензилпенициллина 10 ЕД/мг, эритритола 0,1% растет. Не растет на МППГГА с добавлением стрептомицина сульфата (5 мкг/мл). Не выделяет при культивировании сероводород, не лизируется фагом "Тб". At MPPGGA with the addition of fuchsin 1/50 thousand, thionine 1/50 thousand, sodium salt of benzylpenicillin 10 IU / mg, erythritol 0.1% increases. Does not grow on MPPHGA with streptomycin sulfate (5 μg / ml). It does not emit hydrogen sulfide during cultivation; it is not lysed with the TB phage.

Антигенные свойства. Штамм не обладает типоспецифической антигенностью, культура не агглютинируется А и М моноспецифическими сыворотками, агглютинируется в РА на стекле R-антибруцеллезной сывороткой, разведенной 1/10 на ++, S-антибруцеллезной сывороткой, разведенной до 80 МЕ/мл на ++. Antigenic properties. The strain does not have type-specific antigenicity, the culture is not agglutinated by A and M monospecific sera, agglutinated in RA on glass by R-anti-brucellosis serum diluted 1/10 by ++, S-anti-brucellosis serum diluted to 80 IU / ml by ++.

Вирулентные свойства: штамм не вызывает патологических изменений, характерных для бруцеллеза у крупного рогатого скота при введении 2х10¹¹ и у морских свинок - 1х10⁹ микробных клеток. Не вызывает абортов у стельных коров при иммунизации в дозе 1-2х10¹¹ микробных клеток.Virulent properties: the strain does not cause pathological changes characteristic of brucellosis in cattle with the introduction of 2x10 ¹¹ and in guinea pigs - 1x10 ⁹ microbial cells. It does not cause abortion in pregnant cows during immunization in a dose of 1-2x10 ¹¹ microbial cells.

П р и м е р 1. Штамм Brucella melitensis "Невский-13" культивируют на мясо-пептоном печеночном глюкозо-глицериновом агаре (печеночно-мартеновском агаре с переваром Хоттингера, картофельном агаре с переваром Хоттингера) или в ферментере на жидкой питательной среде. PRI me R 1. The strain Brucella melitensis "Nevsky-13" is cultivated on meat-peptone hepatic glucose-glycerin agar (liver-open-hearth agar with Hottinger digest, potato agar with Hottinger digest) or in a fermenter in a liquid nutrient medium.

Бактериальную массу суспендируют физиологическим раствором до концентрации 2,9х10¹¹ - 3,1х10¹¹ микр.к./см³.The bacterial mass is suspended with physiological saline to a concentration of 2.9 x ^{10 11} - 3.1 x ^{10 11} mc / cm ³ .

В качестве неполного адъюванта Фрейнда используют следующие составы, %:
1. Болгарское легкое минеральное масло 84 Ланолин 16
2. Синтетическое минеральное масло 84 Ланолин 16
3. Полиэтиленси- локсановая жидкость 84 Ланолин 16
4. Полиэтилсилокса- новая жидкость 84 Т-3 16
К 45-50 мл адъюванта добавляют 0,3-0,5 мл формалина и до 100 мл взвеси бактериальной массы в физиологическом растворе. Полученную смесь перемешивают. Вакцину расфасовывают во флаконы при включенной мешалке, флаконы закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют.As incomplete Freund's adjuvant, the following compositions are used,%:
1. Bulgarian light mineral oil 84 Lanolin 16
2. Synthetic mineral oil 84 Lanolin 16
3. Polyethylene siloxane fluid 84 Lanolin 16
4. Polyethylsiloxa - new fluid 84 T-3 16
0.3-0.5 ml of formalin is added to 45-50 ml of adjuvant and up to 100 ml of suspension of the bacterial mass in physiological saline. The resulting mixture was stirred. The vaccine is packaged in bottles with the stirrer turned on, the bottles are closed with rubber stoppers, wrapped in metal caps and labeled.

Расфасованную вакцину проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. The packaged vaccine is tested for sterility, safety and immunogenicity.

Готовая вакцина представляет собой белую или слегка желтовато-сероватого цвета однородную эмульсию с незначительным отслоением минерального масла над нерасслаивающейся однородной эмульсией. При встряхивании вакцина приобретает вид однородной гомогенной эмульсии. The finished vaccine is a white or slightly yellowish-gray homogeneous emulsion with a slight exfoliation of mineral oil over a non-stratified homogeneous emulsion. When shaken, the vaccine takes the form of a homogeneous homogeneous emulsion.

Получают 3 серии вакцины следующего состава (см. табл.1)
П р и м е р 2. Полученную вакцину серий 1-3 вводят крупному рогатому скоту, нереагирующему на бруцеллез в серологических реакциях (РБП или РА и РСК или РДСК).Get 3 series of vaccines of the following composition (see table 1)
PRI me R 2. The resulting vaccine of series 1-3 is administered to cattle that does not respond to brucellosis in serological reactions (RBP or RA and RSK or RDSK).

Телок иммунизируют в возрасте 4-5 мес. Вакцину вводят подкожно в область подгрудка в дозе 3 см³. Через месяц после вакцинации вакцину вводят повторно в той же дозе.Heifers are immunized at the age of 4-5 months. The vaccine is administered subcutaneously in the area of the breast in a dose of 3 cm ³ . One month after vaccination, the vaccine is repeated at the same dose.

Телок, не иммунизированных в 4-5-месячном возрасте, прививают за 2-3 мес до осеменения. Вакцину вводят дважды с интервалом один месяц в дозе 3 см³ подкожно в область подгрудка.Heifers not immunized at 4-5 months of age are vaccinated 2–3 months before insemination. The vaccine is administered twice with an interval of one month at a dose of 3 cm ³ subcutaneously in the area of the breast.

Испытание эффективности вакцины проводят в двух хозяйствах, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота. Вакциной иммунизируют животных всех возрастных групп. Всего 1856 голов. Результаты испытания показали, что животные, привитые вакциной из штамма "Невский-13" к 90-120 дню после вакцинации, освобождались от агглютинирующих и комплементсвязывающих антител. За время наблюдения в течение двух лет ни одно из вакцинированных животных не заболело бруцеллезом в условиях контакта с больными животными, что указывает на высокую эпизоотическую эффективность препарата. A test of the effectiveness of the vaccine is carried out in two farms unsuccessful for cattle brucellosis. The vaccine immunize animals of all age groups. A total of 1856 goals. The test results showed that animals vaccinated with the vaccine from the strain "Nevsky-13" to 90-120 days after vaccination were released from agglutinating and complement-binding antibodies. During the observation period for two years, none of the vaccinated animals fell ill with brucellosis in contact with sick animals, which indicates a high epizootic effectiveness of the drug.

П р и м е р 3. Иммуногенную активность экспериментальных серий вакцины с использованием различных адъювантов по примеру 1 сравнивают с вакциной из штамма Бр. абортус 45/20 (прототип) и живой вакциной из штамма Бр. абортус 19. Опыт проводят на морских свинках массой 350-400 г. Животных иммунизируют подкожно в область паха вакцинами в дозе 0,2 см³, а живой вакциной - в дозе 1х10⁹ микр.к./см³. Через 85-90 дней после иммунизации всех привитых и контрольных (невакцинированных) животных заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма Бр. абортус 54М/ВГНКИ в дозе 15-20 ИД₅₀. Спустя 30-35 дней после заражения морских свинок убивают и проводят бактериологическое исследование лимфатических узлов и внутренних органов (по 10 объектов от каждого животного). Определяют наличие бруцелл вирулентного штамма в организме животных. Рассчитывают процент защиты (количество незаразившихся животных в процентах от общего количества свинок в группе) и индекс инфицированности органов (процент выделенных культур от общего количества исследованных органов и лимфатических узлов). Результаты испытания представлены в табл.2.PRI me R 3. The immunogenic activity of the experimental series of vaccines using various adjuvants in example 1 is compared with the vaccine from strain Br. abortus 45/20 (prototype) and a live vaccine from strain Br. abortus 19. The experiment is carried out on guinea pigs weighing 350-400 g. Animals are immunized subcutaneously in the groin area with vaccines at a dose of 0.2 cm ³ , and with a live vaccine at a dose of 1x10 ⁹ mc / cm ³ . 85-90 days after immunization, all vaccinated and control (unvaccinated) animals are infected with a standard culture of the control virulent strain of Br. abortus 54M / VGNKI at a dose of 15-20 ID ₅₀ . 30-35 days after infection, guinea pigs are killed and bacteriological examination of the lymph nodes and internal organs is carried out (10 objects from each animal). Determine the presence of virulent strain brucella in animals. Calculate the percentage of protection (the number of non-infected animals as a percentage of the total number of pigs in the group) and the index of infection of the organs (percentage of selected cultures of the total number of examined organs and lymph nodes). The test results are presented in table.2.

Из табл. 2 видно, что предложенная вакцина, содержащая антиген из бруцелл штамма Бр. мелитензис "Невский-13" с неполным адъювантом Фрейнда обеспечивает защиту 70-85% иммунизированных животных и по этому показателю значительно превосходит аналогичную вакцину из штамма Бр.абортус 45/20 (прототип). From the table. 2 shows that the proposed vaccine containing the antigen from brucella strain Br. Melitensis "Nevsky-13" with incomplete Freund's adjuvant provides protection for 70-85% of immunized animals and by this indicator significantly exceeds the similar vaccine from strain Br.abortus 45/20 (prototype).

Предложенная вакцина не уступает по иммуногенности живой вакцине из штамма Бр.абортус 19. The proposed vaccine is not inferior in immunogenicity to the live vaccine from strain Br.abortus 19.

Использование предложенной вакцины в ветеринарной практике позволит расширить ассортимент высокоэффективных биопрепаратов против бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Using the proposed vaccine in veterinary practice will expand the range of highly effective biological products against brucellosis of farm animals.

Claims

Vaccine against brucellosis of agricultural animals, mainly cattle, containing the Brucella antigen, oil adjuvant and physiological saline, characterized in that it contains the bacterial mass of the Brucella melitenSiS strain "Nevsky-N" -13 HH as the Brucella antigen incomplete Freund's adjuvant and additionally formalin in the following ratio of components:
Incomplete Freund's adjuvant, g / 100 ml - 45 - 50
Formalin, g / 100 ml - 0.3 - 0.5
Saline solution, ml - Up to 100
The bacterial mass of the strain Brucella melitenSiS "Nevsky-13" VGNKI N 31, · 10 ¹ ¹ MK./cm ³ - 1.45 - 1.55