RU2023135619A - Новые ингибирующие белки против насекомых - Google Patents

Claims (53)

1. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая гетерологичный промотор, функционально связанный с полинуклеотидным сегментом, кодирующим пестицидный белок или его пестицидный фрагмент, причем необязательно:

a. указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17;

b. указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 96%, или 97%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15, или 17; или

c. указанный полинуклеотидный сегмент гибридизуется в жестких условиях гибридизации с полинуклеотидом, имеющим нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 16 или 18.

2. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что:

a. указанная молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты экспрессируется в растительной клетке с получением пестицидно эффективного количества пестицидного белка или пестицидного фрагмента; или

b. указанная молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты находится в функциональной связи с вектором, а указанный вектор выбран из группы, состоящей из плазмиды, фагмиды, бакмиды, космиды и бактериальной или дрожжевой искусственной хромосомы.

3. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, присутствующая в клетке-хозяине, причем указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактериальной клетки и растительной клетки.

4. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что указанная бактериальная клетка-хозяин принадлежит к роду бактерий, выбранному из группы, состоящей из: Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Brevibacillus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, Pantoea и Erwinia.

5. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 4, отличающаяся тем, что указанная Bacillus представляет собой Bacillus cereus или Bacillus thuringiensis, указанная Brevibacillus представляет собой Brevibacillus laterosperous, и указанная Escherichia представляет собой Escherichia coli.

6. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 2, отличающаяся тем, что указанная растительная клетка представляет собой клетку двудольного или однодольного растения.

7. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 6, отличающаяся тем, что указанная растительная клетка выбрана из группы, состоящей из растительной клетки люцерны, банана, ячменя, фасоли, брокколи, капусты, Brassica, канолы, моркови, маниоки, клещевины, цветной капусты, сельдерея, нута, китайской капусты, цитруса, кокоса, кофе, кукурузы, клевера, хлопчатника, тыквы, огурца, пихты Дугласа, баклажана, эвкалипта, льна, чеснока, винограда, хмеля, лука-порей, латука, сосны Лоблолли, просо, дынь, ореха, овса, маслины европейской, лука, декоративной пальмы, пастбищной травы, гороха, арахиса, перца, голубиного гороха, сосны, картофеля, тополя, тыквы, сосны лучистой, редиса, рапса, риса, подвоев, ржи, сафлоры, кустарника, сорго, сосны южной, сои, шпината, тыквы крупноплодной столовой, клубники, сахарной свеклы, сахарного тростника, подсолнечника, кукурузы, ликвидамбара смолоносного, батата, просо, чая, табака, томата настоящего, тритикале, газонной травы, арбуза и пшеницы.

8. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что указанный белок проявляет активность против чешуекрылых насекомых.

9. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 8, отличающаяся тем, что указанное чешуекрылое насекомое выбрано из группы, состоящей из: совки-ипсилон (Agrotis ipsilon), хлопковой совки {Helicoverpa zed), капустной совки {Trichoplusia ni), европейского кукурузного сверлильщика (Ostrinia nubilalis), травяной совки (Spodoptera frugiperda), южной совки (Spodoptera eridania), соевой совки (Chrysodeixi s includens), кукурузной юго-западной огневки (Diatraea grandiosella), сверлильщика сахарного тростника (Diatraea saccharalis), (совки бархатных бобов (Anticarsia gemmatalis), прямоугольной совки (Striacosta albicostd), и малого кукурузного сверлильщика (Elasmopalpus lignosellus).

10. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что указанный белок проявляет активность против полужесткокрылых насекомых.

11. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 10, отличающаяся тем, что указанное полужесткокрылое насекомое выбрано из группы, состоящей из лугового клопа (Lygus lineolaris) и коричневого клопа-ромбовика (Euschistus heros).

12. Растение, содержащее молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, или его часть.

13. Растение по п. 12, отличающееся тем, что указанное растение представляет собой однодольное растение или двудольное растение, или их часть.

14. Растение по п. 12, отличающееся тем, что растение выбрано из группы, состоящей из люцерны, банана, ячменя, фасоли, брокколи, капусты, Brassica, канолы, моркови, маниоки, клещевины, цветной капусты, сельдерея, нута, китайской капусты, цитруса, кокоса, кофе, кукурузы, клевера, хлопчатника, тыквы, огурца, пихты Дугласа, баклажана, эвкалипта, льна, чеснока, винограда, хмеля, лука-порей, латука, сосны Лоблолли, просо, дынь, ореха, овса, маслины европейской, лука, декоративной пальмы, пастбищной травы, гороха, арахиса, перца, голубиного гороха, сосны, картофеля, тополя, тыквы, сосны лучистой, редиса, рапса, риса, подвоев, ржи, сафлоры, кустарника, сорго, сосны южной, сои, шпината, тыквы крупноплодной столовой, клубники, сахарной свеклы, сахарного тростника, подсолнечника, кукурузы, ликвидамбара смолоносного, батата, просо, чая, табака, томата настоящего, тритикале, газонной травы, арбуза, и пшеницы.

15. Растение по п. 12, отличающееся тем, что часть растения представляет собой семя, и указанное семя содержит указанную молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты.

16. Ингибирующая композиция против насекомых, содержащая молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1.

17. Ингибирующая композиция против насекомых по п. 16, дополнительно содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один другой пестицидный агент, который отличается от указанного пестицидного белка.

18. Ингибирующая композиция против насекомых по п. 17, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один другой пестицидный агент выбран из группы, состоящей из ингибирующего белка против насекомых, ингибирующей молекулы дцРНК против насекомых, химической молекулы и вспомогательного белка, при этом указанный по меньшей мере один другой пестицидный агент токсичен для того же вредителя, что и пестицидный белок или его пестицидный фрагмент.

19. Ингибирующая композиция против насекомых по п. 17, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один другой пестицидный агент проявляет активность против одного или более видов вредителей из отрядов Lepidoptera, Coleoptera или Hemiptera.

20. Ингибирующая композиция против насекомых по п. 17, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один другой пестицидный белок выбран из группы, состоящей из Cry1A, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1A.105, Cry1Ae, Cry1B, Cry1C, вариантов Cry1C, Cry1D, вариантов Cry1D, Cry1E, Cry1F, химер Cry1A/F, Cry1G, Cry1H, Cry1I, Cry1J, Cry1K, Cry1L, Cry2A, Cry2Ab, Cry2Ae, Cry3, вариантов Cry3A, Cry3B, Cry4B, Cry6, Cry7, Cry8, Cry9, Cry15, Cry34, Cry35, Cry43A, Cry43B, Cry51Aa1, ЕТ29, ЕТ33, ЕТ34, ЕТ35, ЕТ66, ЕТ70, TIC400, TIC407, TIC417, TIC431, TIC800, TIC807, TIC834, TIC853, TIC900, TIC901, TIC1201, TIC1415, TIC2160, TIC3131, TIC836, TIC860, TIC867, TIC869, TIC1100, VIP3A, VIP3B, VIP3Ab, AXMI-88, AXMI-97, AXMI-102, AXMI-112, AXMI-117, AXMI-100, AXMI-115, AXMI-113, и AXMI-005, AXMI134, AXMI-150, AXMI-171, AXMI-184, AXMI-196, AXMI-204, AXMI-207, AXMI-209, AXMI-205, AXMI-218, AXMI-220, AXMI-221z, AXMI-222z, AXMI-223z, AXMI-224z и AXMI-225z, AXMI-238, AXMI-270, AXMI-279, AXMI-345, AXMI-335, AXMI-R1 и их вариантов, IP3 и его вариантов, DIG-3, DIG-5, DIG-10, DIG-657, белка DIG-11, IDP102Aa и его гомологов, IDP110Aa и его гомологов, TIC868, Cry1Da1_7, BCW003, TIC1100, TIC867, TIC867 23, TIC6757, TIC7641, IDP072Aa, TIC5290, TIC3668, TIC3669, TIC3670, IDP103 и их гомологов, PIP-50 и PIP-65 и их гомологов, PIP-83 и его гомологов, и Сгу1В.34.

21. Ингибирующая композиция против насекомых по п. 16, определяемая как содержащая растительную клетку, которая экспрессирует пестицидный белок из молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1.

22. Товарный продукт, полученный из растения или его части, по п. 12, отличающийся тем, что содержит детектируемое количество указанной молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты, указанного пестицидного белка или его пестицидного фрагмента.

23. Товарный продукт по п. 22, выбранный из группы, состоящей из товарной кукурузы, упакованной в мешки переработчиком зерна, кукурузных хлопьев, кукурузных жмыхов, кукурузной муки, кукурузной муки грубого помола, кукурузного сиропа, кукурузного масла, кукурузного силоса, кукурузного крахмала, кукурузных хлопьев и подобных им продуктов из сои, риса, пшеницы, сорго, голубиного гороха, арахиса, фруктов, дыни и овощей, включая, где это применимо, соки, концентраты, джемы, желе, мармелады и другие съедобные формы таких товарных продуктов, содержащие детектируемое количество таких полинуклеотидов и/или полипептидов настоящей заявки; цельных или обработанных семян хлопчатника, хлопкового масла, линта, семян и частей растений, переработанных для корма или продуктов питания, волокон, бумаги, биомассы и топливных продуктов, таких как топливо, полученное из хлопкового масла или гранулы, полученные из отходов хлопкоочистительной машины, цельных или переработанных семян сои, соевого масла, соевого белка, соевого шрота, соевой муки, соевой муки грубого помола, соевых хлопьев, соевых отрубей, соевого молока, соевого сыра, соевого вина, корма для животных, содержащего соевые бобы, бумаги, содержащей соевые бобы, сливок содержащих соевые бобы, соевой биомассы и топливных продуктов, полученных с использованием растений сои и частей растений сои.

24. Способ получения семени-потомка, содержащего молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, включающий:

a. посадку первого семени, содержащего молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты;

b. выращивание растения из семени стадии а; и

c. сбор семени-потомка растения, при этом указанное собранное семя содержит указанную молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты.

25. Растение, устойчивое к заражению насекомыми, причем клетки указанного растения содержат молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1.

26. Способ контроля видов чешуекрылых вредителей или заражения такими вредителями, включающий:

a. приведение вредителя в контакт с инсектицидно эффективным количеством пестицидного белка, как указано в SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17; или

b. приведение вредителя в контакт с инсектицидно эффективным количеством одного или более пестицидных белков, содержащих аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 96%, или 97%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17.

27. Способ обнаружения присутствия молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1 в образце, содержащем геномную ДНК растения, включающий:

а. приведение указанного образца в контакт с зондом нуклеиновой кислоты, который гибридизуется в жестких условиях гибридизации с геномной ДНК растения, содержащей молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, и не гибридизуется в таких условиях гибридизации с геномной ДНК из изогенного растения, которое не содержит молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, причем указанный зонд гомологичен или комплементарен SEQ ID NO: 3, 6, 9, 12, 14, 16 или 18; или последовательности, которая кодирует пестицидный белок, содержащей аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 96%, или 97%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17;

b. подвергание указанного образца и указанного зонда жестким условиям гибридизации; и

c. обнаружение гибридизации указанного зонда нуклеиновой кислоты с указанной молекулой рекомбинантной нуклеиновой кислоты.

28. Способ обнаружения присутствия пестицидного белка или его фрагмента в образце, содержащем белок, причем указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность 2SEQ ID NO: 2 или 4; или указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 96%, или 97%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17; включающий:

a. приведение указанного образца в контакт с иммунореактивным антителом; и

b. обнаружение присутствия указанного пестицидного белка или его фрагмента.

29. Способ по п. 26, отличающийся тем, что стадия обнаружения включает ELISA или вестерн-блоттинг.

30. Пестицидно эффективное количество белка, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17.

31. Способ контроля видов чешуекрылых вредителей или заражения вредителями в поле, включающий:

a. выращивание культурного растения, которое экспрессирует инсектицидно эффективное количество пестицидного белка, указанного в SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17; или

b. выращивание культурного растения, которое экспрессирует инсектицидно эффективное количество одного или более пестицидных белков, содержащих аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 96%, или 97%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, 4, 7, 10, 13, 15 или 17; и необязательно

c. распространение в указанном поле трансгенных видов чешуекрылых вредителей, несущих самоограничивающий ген, для снижения вероятности развития устойчивости видов вредителей к пестицидному белку.

32. Способ по п. 31, отличающийся тем, что указанное культурное растение представляет собой однодольное или двудольное культурное растение.

33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что однодольное культурное растение представляет собой кукурузу, пшеницу, сорго, рис, рожь или просо.

34. Способ по п. 33, отличающийся тем, что однодольное культурное растение представляет собой кукурузу.

35. Способ по п. 31, отличающийся тем, что двудольное культурное растение представляет собой сою, хлопчатник или рапс.