RU2023130643A

RU2023130643A - Композиции и способы для лечения заболевания глаз, ассоциированного с ангиогенезом

Info

Publication number: RU2023130643A
Application number: RU2023130643A
Authority: RU
Inventors: Кристиан БЕРНС; Мелисса КЭЛТОН; Мередит ЛЕОНГ; Пол ШИМАНЬСКИЙ
Original assignee: 4Д Молекьюлар Терапьютикс Инк.
Priority date: 2021-04-27
Filing date: 2022-04-26
Publication date: 2024-01-29

Claims

1. Синтетическая молекула рибонуклеиновой кислоты (РНК), содержащая смысловую цепь, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, выбранной из SEQ ID No: 19, 16, 22, 25, 28, 1, 4, 7, 10, 13, 31, 34, 37, 40 и 43, и антисмысловую цепь, имеющую по меньшей мере 90% идентичность с последовательностью, выбранной из SEQ ID No: 20, 17, 23, 26, 29, 2, 5, 8, 11, 14, 32, 35, 38, 41 и 44, соответственно, предпочтительно, где синтетическая молекула РНК содержит смысловую цепь, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с SEQ ID NO:19, и антисмысловую цепь, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с SEQ ID NO:20.

2. Синтетическая молекула РНК по п.1, где РНК представляет собой малую интерферирующую РНК (миРНК), короткошпилечную РНК (кшРНК) или искусственную микро-РНК (мкРНК).

3. Синтетическая молекула РНК по п.1, где РНК представляет собой кшРНК, содержащую петлю, содержащую последовательность CTCGAG или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ей.

4. Синтетическая молекула РНК по п.1, где РНК представляет собой искусственную мкРНК, содержащую РНК, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, указанной как SEQ ID NO:46 или 47, где (X)_n содержит смысловую последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, выбранной из SEQ ID No: 19, 16, 22, 25, 28, 1, 4, 7, 10, 13, 31, 34, 37, 40 и 43, и (Y)_n содержит антисмысловую последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, выбранной из SEQ ID No: 20, 17, 23, 26, 29, 2, 5, 8, 11, 14, 32, 35, 38, 41 и 44, соответственно.

5. Синтетическая РНК по любому из пп.1-4, дополнительно содержащая неспаренную выступающую последовательность на 5'- и/или 3'-конце, где выступающая последовательность, необязательно, содержит последовательность из повторяющихся оснований, где повторяющиеся основания, необязательно, содержат повторяющиеся основания урацила (U).

6. Нуклеиновая кислота, содержащая (i) нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере одну синтетическую молекулу РНК по любому из пп.1-4.

7. Нуклеиновая кислота по п.6, дополнительно содержащая (ii) нуклеотидную последовательность, кодирующую первый антиангиогенный полипептид, ингибирующий активность VEGF-A, предпочтительно, где нуклеотидные последовательности из (i) и (ii) являются функционально связанными с последовательностью для контроля экспрессии.

8. Нуклеиновая кислота по п.7, где первый антиангиогенный полипептид представляет собой афлиберцепт, предпочтительно, где нуклеотидная последовательность, кодирующая афлиберцепт, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:50 или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ей.

9. Нуклеиновая кислота по п.7 или 8, где нуклеотидные последовательности из (i) и (ii) являются функционально связанными с последовательностью для контроля экспрессии.

10. Нуклеиновая кислота по п.9, где нуклеотидная последовательность, кодирующая первый антиангиогенный полипептид, и нуклеотидная последовательность, кодирующая одну или несколько синтетических молекул РНК, находятся под контролем одной и той же последовательности для контроля экспрессии.

11. Нуклеиновая кислота по п.10, где последовательность для контроля экспрессии содержит повсеместно экспрессирующий промотор.

12. Нуклеиновая кислота по п.11, где промотор представляет собой промотор CAG или CBA.

13. Нуклеиновая кислота по п.8, где нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID No: 69, 68 и 70, или последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную ей.

14. Композиция, содержащая синтетическую РНК по любому из пп.1-4 и/или нуклеиновую кислоту по любому из пп.6-13.

15. Композиция по п.14, представляющая собой фармацевтическую композицию, дополнительно содержащую фармацевтически приемлемый носитель.

16. Вектор, содержащий синтетическую молекулу РНК по любому из пп.1-4 и/или нуклеиновую кислоту по любому из пп.6-13.

17. Вектор по п.16, где вектор представляет собой экспрессирующую плазмиду.

18. Вектор по п.16 или 17, где вектор представляет собой вирусный вектор.

19. Вектор по п.18, где вирусный вектор представляет собой рекомбинантный аденоассоциированный вирусный (rAAV) вектор, предпочтительно, где rAAV вектор содержит капсид AAV из серотипа 2, 5 или 8, или его вариант.

20. Вектор по п.19, где rAAV имеет капсид, содержащий капсидный белок, содержащий гетерологичную пептидную вставку длиной 7, 8, 9, 10 или 11 аминокислот, ковалентно вставленную в GH-петле капсидного белка, относительно соответствующего исходного капсидного белка AAV, где пептидная вставка содержит аминокислотную последовательность ISDQTKH (SEQ ID NO:74).

21. Вектор по п.20, где пептидная вставка имеет от 1 до 3 спейсерных аминокислот (Y₁-Y₃) на амино- и/или карбокси-конце аминокислотной последовательности ISDQTKH (SEQ ID NO:74).

22. Вектор по п.20 или 21, где пептидная вставка представляет собой LAISDQTKHA (SEQ ID NO:49).

23. Вектор по любому из пп.20-22, где участок вставки локализован между двумя соседними аминокислотами в положении между аминокислотами 570 и 611 VP1 из AAV2, или в соответствующем положении в капсидном белке из другого серотипа AAV.

24. Вектор по любому из пп.20-23, где участок вставки локализован между аминокислотами, соответствующими аминокислотам 587 и 588 VP1 из AAV2, или между аминокислотами, соответствующими аминокислотам 588 и 589 VP1 из AAV2, или в соответствующем положении в капсидном белке из другого серотипа AAV.

25. Вектор по любому из пп.20-24, где капсидный белок содержит одну или несколько аминокислотных замен(у), относительно VP1 из AAV2, или одну или несколько соответствующих замен(у) в капсидном белке из другого серотипа AAV.

26. Вектор по любому из пп.20-25, где капсидный белок содержит одну или несколько из следующих аминокислотных замен(ы), относительно VP1 из AAV2, или одну или несколько из соответствующих замен(ы) в капсидном белке из другого серотипа AAV: M1L, L15P, P34A, N57D, N66K, R81Q, Q101R, S109T, R144K, R144M, Q164K, T176P, L188I, S196Y, G226E, G236V, I240T, P250S, N312K, P363L, D368H, N449D, T456K, S463Y, D472N, R484C, A524T, P535S, N551S, A593E, 1698V, V708I, V719M, S721L и L735Q.

27. Вектор по любому из пп.20-26, где вариант капсидного белка содержит аминокислотную замену V708I, относительно VP1 из AAV2, или в соответствующем положении в капсидном белке из другого серотипа AAV.

28. Вектор по любому из пп.20-27, где rAAV имеет капсид, содержащий капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO:48, предпочтительно, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:48, более предпочтительно, содержащий аминокислотную последовательность, указанную как SEQ ID NO:48.

29. Вектор по п.28, где rAAV содержит гетерологичную нуклеиновую кислоту, содержащую последовательность, указанную как любая из SEQ ID No: 69, 64, 65, 66, 67, 68 и 70.

30. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп.16-29.

31. Композиция, содержащая вектор по любому из пп.16-29.

32. Композиция по п.31, представляющая собой фармацевтическую композицию, дополнительно содержащую фармацевтически приемлемый носитель.

33. Способ лечения заболевания глаз, ассоциированного с ангиогенезом глаз у субъекта, предпочтительно, заболевания глаз, ассоциированного с VEGF-A, включающий введение субъекту нуклеиновой кислоты по любому из пп.6-13, фармацевтической композиции по п.15, вектора по любому из пп.16-29 или фармацевтической композиции по п.32.

34. Способ по п.33, где субъекту вводят фармацевтическую композицию по п.32, предпочтительно, где фармацевтическая композиция содержит rAAV вирион по п.28 или 29.

35. Способ по п.34, где rAAV вирион или фармацевтическую композицию вводят субъекту внутриглазным способом, предпочтительно, посредством инъекции в стекловидное тело, супрахориоидальной или субретинальной инъекции, предпочтительно, посредством однократной инъекции в стекловидное тело, где дополнительных доз rAAV вириона или фармацевтической композиции не вводят субъекту.

36. Способ по п.34 или 35, где фармацевтическая композиция содержит 1×10⁸-1×10¹⁵ векторных частиц, предпочтительно, 1×10¹⁹-1×10¹⁴ векторных частиц, или от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 5×10¹³ векторных частиц.

37. Способ по любому из пп.23-36, где заболевание, ассоциированное с ангиогенезом глаз, выбрано из группы, состоящей из влажной (неоваскулярной, эксудативной) связанной с возрастом дегенерации желтого пятна; отека желтого пятна после окклюзии вен сетчатки; неоваскуляризации сетчатки в результате окклюзии вен сетчатки; диабетического отека желтого пятна, диабетической ретинопатии (включая все стадии непролиферативной диабетической ретинопатии и пролиферативной диабетической ретинопатии), миопической дегенерации желтого пятна, окклюзии ветви вены сетчатки, окклюзии гемиретинальной вены и окклюзии центральной вены сетчатки; ретинопатии недоношенных; идиопатической хориоидальной неоваскуляризации; миопической дегенерации желтого пятна, и вторичной ретинальной и хориоидальной неоваскуляризации; телеангиэктозии сетчатки; неоваскулярной глаукомы; геморрагии стекловидного тела; ретинальной и хориоидальной неоваскуляризации, вторичной по отношению к заболеваниям сетчатки, включая, но без ограничения, увеит, травму, дегенеративные нарушения сетчатки, генетическое заболевание сетчатки и/или хориоида, опухоли глаза, неоваскуляризацию роговицы и радужной оболочки глаза.

38. Способ по п.37, где заболевание, ассоциированное с ангиогенезом глаз, выбрано из влажной (неоваскулярной, эксудативной) связанной с возрастом дегенерации желтого пятна; диабетического отека желтого пятна; отека желтого пятна после окклюзии вен сетчатки; диабетической ретинопатии; и миопической хориоидальной неоваскуляризации, предпочтительно, где заболевание, ассоциированное с ангиогенезом глаз, представляет собой влажную связанную с возрастом дегенерацию желтого пятна.

39. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.6-13, фармацевтической композиции по п.15, вектора по любому из пп.16-29 или фармацевтической композиции по п.32 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, ассоциированного с ангиогенезом глаз.

40. Применение по п.39, где вектор представляет собой rAAV вирион, и его вводят внутриглазным способом, предпочтительно, посредством субретинальной, супрахориоидальной инъекции или инъекции в стекловидное тело.

41. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.6-13, фармацевтической композиции по п.14, вектора по любому из пп.16-29 или фармацевтической композиции по п.32 для лечения заболевания, ассоциированного с ангиогенезом глаз.

42. Способ доставки синтетической РНК в клетку сетчатки, включающий приведение клетки сетчатки в контакт с синтетической РНК по любому из пп.1-5.

43. Способ доставки гетерологичной нуклеиновой кислоты в клетку сетчатки, включающий приведение клетки сетчатки в контакт с нуклеиновой кислотой по любому из пп.6-13.