RU2023113994A - Композиции и способы генного редактирования аллелями шерстистого мамонта - Google Patents

Claims (55)

1. Жизнеспособная клетка, содержащая по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, приведенных в Таблице 1.

2. Клетка по п. 1, где клетка экспрессирует полипептид, кодируемый по меньшей мере одной последовательностью нуклеиновой кислоты.

3. Клетка по п. 1 или 2, где клетка представляет собой стволовую клетку.

4. Клетка по любому из пп. 1-3, где клетка экспрессирует по меньшей мере один маркер стволовой клетки.

5. Клетка по п. 4, где маркер стволовой клетки выбран из NANOG, SSEA1, SSEA4 или TRA-1-60.

6. Клетка по п. 3, где стволовая клетка представляет собой индуцированную стволовую клетку, эмбриональную стволовую (ES) клетку или мезенхимальную стволовую клетку (MSC).

7. Клетка по п. 1, где клетка представляет собой перепрограммированную клетку.

8. Клетка по п. 1, где клетка представляет собой фибробластную клетку или мезенхимальную клетку.

9. Клетка по п. 1, где клетка выбрана из группы, состоящей из нервной клетки, хрящевой клетки, костной клетки, мышечной клетки, костной клетки, жировой клетки или эпидермальной клетки.

10. Клетка по п. 1, где клетка ранее была дифференцирована in vitro в клетку, выбранную из группы, состоящей из нервной клетки, хрящевой клетки, костной клетки, мышечной клетки, костной клетки, жировой клетки или эпидермальной клетки.

11. Клетка по любому из пп. 1-10, где клетка не экспрессирует эндогенный гомолог по меньшей мере одного гена.

12. Клетка по любому из пп. 1-11, где клетка подвергнута редактированию для ингибирования экспрессии эндогенного гомолога по меньшей мере одного гена.

13. Клетка по любому из пп. 1-12, где клетка представляет собой нечеловеческую клетку.

14. Клетка по п. 1, где клетка представляет собой клетку слона.

15. Клетка по п. 14, где клетка слона представляет собой клетку Африканского слона (Loxodanta Africanus) или клетку Индийского слона (Elephas maximus).

16. Клетка по п. 1, где клетка представляет собой клетку дамана или клетку ламантина.

17. Клетка по п. 16, где клетка дамана выбрана из группы, состоящей из клетки Dendrohyrax arboreus, клетки Dendrohyrax dorsalis, клетки Heterohyrax brucei и клетки Procavia capensis.

18. Клетка по п. 17, где клетка ламантина выбрана из группы, состоящей из клетки Trichechus inunguis, клетки Trichechus manatus, клетки Trichechus manatus latirostris, клетки Trichechus manatus manatus и клетки Trichechus senegalensis.

19. Клетка по любому из пп. 1-18, где клетка является криоконсервированной.

20. Клетка по любому из пп. 1-19, где клетка ранее была криоконсервирована.

21. Клетка по любому из пп. 1-20, где клетки проявляют один или несколько фенотипов, выбранных из группы, состоящей из модуляции кальциевых сигналов, модуляции электрофизиологической функции, модуляции скорости синтеза белка, модуляции метаболической функции и модуляции липидного содержания клеточной мембраны, по сравнению с подходящим контролем.

22. Ооцит, в котором эндогенное ядро было заменено ядром клетки, как описано в любом из пп. 1-21.

23. Клетка, не относящаяся к шерстистому мамонту, содержащая по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, приведенных в Таблице 1.

24. Подвергнутая генному редактированию клетка слона, содержащая по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, приведенных в Таблице 1, где клетка слона подвергнута редактированию для изменения гомолога слона по меньшей мере одного гена.

25. Клетка по п. 24, где клетка слона подвергнута редактированию для делеции или ингибирования функции по меньшей мере одного гена.

26. Подвергнутая генному редактированию клетка слона, имеющая по меньшей мере один ген, выбранный из группы, состоящей из перечисленных в Таблице 1, который подвергнут редактированию для имитации варианта шерстистого мамонта того же гена.

27. Соматическая клетка слона, перепрограммированная на фенотип, который морфологически подобен стволовой клетке и экспрессирует по меньшей мере один эндогенный маркер стволовой клетки.

28. Клетка слона по п. 27, где маркер стволовой клетки выбран из NANOG, SSEA1, SSEA4 или TRA-1-60.

29. Клетка слона по п. 27, где клетка содержит экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую один или несколько экзогенных полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептидов шерстистого мамонта.

30. Клетка слона по п. 27, где гомологичный ген (гены) слона, соответствующий (соответствующие) одному или нескольким экзогенным полипептидам, инактивирован/инактивированы.

31. Нечеловеческий организм, содержащий клетку по любому из пп. 1-27.

32. Нечеловеческий эмбрион, содержащий клетку по любому из пп. 1-27.

33. Нечеловеческий эмбрион, содержащий по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, перечисленных в Таблице 1.

34. Нечеловеческий ооцит, содержащий по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, перечисленных в Таблице 1.

35. Нечеловеческий эмбрион на стадии 4-х клеток, содержащий по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, перечисленных в Таблице 1.

36. Нечеловеческий эмбрион на стадии 8-ми клеток, содержащий по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, перечисленных в Таблице 1.

37. Нечеловеческая бластула, содержащая по меньшей мере одну экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, перечисленных в Таблице 1.

38. Энуклеированный нечеловеческий ооцит, содержащий донорное ядро, содержащее последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере одного гена, выбранного из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, перечисленных в Таблице 1.

39. Эмбрион по любому из пп. 32, 33, 35 и 36, где эмбрион представляет собой эмбрион до гаструляции.

40. Эмбрион по любому из пп. 32, 33, 35 и 36, где эмбрион представляет собой химерный эмбрион.

41. Эмбрион, бластула или ооцит по любому из пп. 32-40, где эмбрион, бластула или ооцит являются криоконсервированными.

42. Ооцит, эмбрион или бластула по любому из пп. 32-41, где гомолог, не относящийся к шерстистому мамонту, экзогенной последовательности нуклеиновой кислоты был удален или инактивирован.

43. Нечеловеческий организм, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере одного гена, выбранного из группы, состоящей из генов шерстистого мамонта, перечисленных в Таблице 1.

44. Клетка слона, содержащая по меньшей мере одну направляющую РНК, перечисленную в Таблицах 2 или 3.

45. Клетка слона по п. 44, дополнительно экспрессирующая РНК-направляемую эндонуклеазу, направляемую по меньшей мере одной направляющей РНК.

46. Нечеловеческая клетка, содержащая по меньшей мере одну направляющую РНК, перечисленную в Таблицах 2 или 3.

47. Нечеловеческая клетка по п. 46, дополнительно экспрессирующая РНК-направляемую эндонуклеазу, направляемую по меньшей мере одной направляющей РНК.

48. Направляющая РНК, содержащая последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1- SEQ ID NO: 426.

49. Нуклеиновая кислота, кодирующая направляющую РНК по п. 48.

50. Нуклеиновая кислота по п. 49, где нуклеиновая кислота, кодирующая направляющую РНК, функционально связана с последовательностью нуклеиновой кислоты, управляющей экспрессией направляющей РНК.

51. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 49 или 50.

52. Клетка, содержащая направляющую РНК по п. 48.

53. Клетка, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 49 или п. 50.

54. Клетка, содержащая вектор по п. 51.

55. Клетка по любому из пп. 52-54, дополнительно содержащая РНК-направляемую эндонуклеазу, активностью которой управляет направляющая РНК.