RU2022132620A - Конъюгаты цитокинов для лечения пролиферативных и инфекционных заболеваний - Google Patents

Claims (46)

1. Конъюгат интерлейкина 2 (IL-2) для лечения пролиферативного заболевания или инфекции, содержащий неприродную аминокислоту, ковалентно присоединенную к конъюгирующему фрагменту, где неприродная аминокислота расположена в области 35-107, и где область 35-107 соответствует остаткам K35-Y107 в SEQ ID NO: 1; и где неприродная аминокислота расположена в положении на конъюгате IL-2, который уменьшает связывание между конъюгатом IL-2 и рецептором α интерлейкина 2 (IL-2Rα), но сохраняет значительное связывание с сигнальным комплексом рецептора βγ интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) с образованием комплекса IL-2/IL-2Rβγ, где сниженное связывание с IL-2Rα сравнивается со связыванием между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rα.

2. Конъюгат IL-2 по п. 1, в котором положение неприродной аминокислоты представляет собой K35, Т37, R38, Т41, F42, К43, F44, Y45, Р47, K48, Q57, Е60, Е61, Е62, L63, K64, Р65, Е68, V69, N71, L72, Q74, S75, K76, N77, М104, С105, Е106 или Y107, где положения остатков соответствуют положениям, представленным в SEQ ID NO: 1.

3. Конъюгат IL-2 по п. 1 или 2, в котором неприродная аминокислота представляет собой аналог лизина или содержит ароматическую боковую цепь.

4. Конъюгат IL-2 по п. 3, в котором неприродная аминокислота включает N6-азидоэтокси-L-лизин (AzK), N6-пропаргилэтокси-L-лизин (PraK), BCN-L-лизин, норборнен-лизин, ТСО-лизин, метилтетразин-лизин, аллилоксикарбониллизин, п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (pAMF), п-йод-L-фенилаланин, м-ацетилфенилаланин, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргилфенилаланин, 3-метилфенилаланин, L-ДОФА, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-ацил-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин, О-аллилтирозин, О-метил-L-тирозин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, фосфонотирозин, L-3-(2-нафтил)аланин, 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-оксопропил)амино)этил)селанил)пропановую кислоту или 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту.

5. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-4, в котором конъюгирующий фрагмент представляет собой водорастворимый полимер.

6. Конъюгат IL-2 по п. 5, в котором водорастворимый полимер включает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(α-гидроксикислоту), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию.

7. Конъюгат IL-2 по п. 6, в котором водорастворимый полимер включает PEG.

8. Конъюгат IL-2 по п. 7, в котором PEG имеет средневесовую молекулярную массу от приблизительно 20 кДа до приблизительно 85 кДа.

9. Конъюгат IL-2 по п. 8, в котором PEG имеет средневесовую молекулярную массу приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа или приблизительно 50 кДа.

10. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-9, в котором конъюгирующий фрагмент связан с неприродной аминокислотой через линкер.

11. Конъюгат IL-2 по п. 10, в котором линкер включает гомобифункциональный линкер, гетеробифункциональный линкер, расщепляемый или нерасщепляемый дипептидный линкер, спейсер или их комбинацию.

12. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что конъюгат IL-2 содержит N-концевую делецию.

13. Конъюгат IL-2 по п. 12, в котором N-концевая делеция включает делецию первых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25 или 30 остатков от N-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1.

14. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что конъюгат IL-2 включает по меньшей мере 80% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 1.

15. Конъюгат IL-2 по п. 14, отличающийся тем, что конъюгат IL-2 включает приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности к SEQ ID NO: 1.

16. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что конъюгат IL-2 способен вызывать экспансию популяций CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных клеток и клеток памяти, клеток естественных киллеров (NK), Т-клеток естественных киллеров (NKT) или их комбинации.

17. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-15, в котором конъюгирующий фрагмент или неприродная аминокислота ослабляет или блокирует связывание IL-2 с IL-2Rα.

18. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-15, активация популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных клеток и клеток памяти, клеток естественных киллеров (NK), Т-клеток естественных киллеров (NKT) через комплекс IL-2Rβγ конъюгатом IL-2 сохраняет значительную активность активации указанной клеточной популяции по сравнению с полипептидом IL-2 дикого типа.

19. Конъюгат IL-2 по п. 18, в котором активность в рецепторной передаче сигнала конъюгата IL-2 к комплексу IL-2Rβγ выше, чем активность в рецепторной передаче сигнала полипептида IL-2 дикого типа к комплексу IL-2Rβγ.

20. Конъюгат IL-2 по п. 18, в котором активность в рецепторной передаче сигнала конъюгата IL-2 к комплексу IL-2Rβγ ниже, чем активность в рецепторной передаче сигнала полипептида IL-2 дикого типа к комплексу IL-2Rβγ.

21. Конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что конъюгат IL-2 проявляет первую активность в рецепторной передаче сигнала к IL-2Rβγ и вторую активность в рецепторной передаче сигнала к IL-2Rαβγ, и причем первая чем активность в рецепторной передаче сигнала по меньшей мере в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз или более выше, чем вторая чем активность в рецепторной передаче сигнала.

22. Конъюгат IL-2 по п. 21, где первая активность в рецепторной передаче сигнала в конъюгате IL-2 выше чем активность в рецепторной передаче сигнала в полипептиде IL-2 дикого типа к IL-2Rβγ, и вторая активность в рецепторной передаче сигнала в конъюгате IL-2 ниже чем активность в рецепторной передаче сигнала в полипептиде IL-2 дикого типа к IL-2Rαβγ.

23. Конъюгат IL-2 по п. 21, в котором первая активность в рецепторной передаче сигнала конъюгата IL-2 по меньшей мере в 1 раз ниже, чем активность в рецепторной передаче сигнала полипептида IL-2 дикого типа.

24. Фармацевтическая композиция для лечения пролиферативного заболевания или инфекции, содержащая конъюгат IL-2 по любому из пп. 1-23 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

25. Фармацевтическая композиция по п. 24, отличающаяся тем, что фармацевтическая композиция составлена для системной доставки.

26. Фармацевтическая композиция по п. 24, отличающаяся тем, что фармацевтическая композиция составлена для парентерального введения.

27. Способ лечения пролиферативного заболевания или состояния у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата IL-2 по любому из пп. 1-23 или фармацевтической композиции по любому из пп. 24-26.

28. Способ по п. 27, в котором пролиферативное заболевание или состояние представляет собой рак.

29. Способ по п. 28, в котором рак представляет собой солидную опухоль.

30. Способ по п. 29, в котором солидная опухоль представляет собой рак мочевого пузыря, рак кости, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак глаза, рак головы и шеи, рак почки, рак легкого, меланому, рак яичников, рак поджелудочной железы или рак предстательной железы.

31. Способ по п. 28, в котором рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование.

32. Способ по п. 31, в котором гематологическое злокачественное новообразование представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), фолликулярную лимфому (FL), диффузную B-крупноклеточную лимфому (DLBCL), мантийноклеточную лимфому (MCL), макроглобулинемию Вальденстрема, множественную миелому, экстранодальную B-клеточную лимфому из клеток маргинальной зоны, нодальную B-клеточную лимфому из клеток маргинальной зоны, лимфому Беркитта, B-крупноклеточную лимфому не Беркитта, первичную медиастинальную B-клеточную лимфому (PMBL), иммунобластную крупноклеточную лимфому, В-лимфобластную лимфому из клеток-предшественников, пролимфоцитарный лейкоз В-клеток, лимфоплазмоцитарную лимфому, лимфому маргинальной зоны селезенки, миелому плазматических клеток, плазмоцитому, B-крупноклеточную лимфому средостения (тимуса), внутрисосудистую B-крупноклеточную лимфому, первичную выпотную лимфому или лимфоматоидный гранулематоз.

33. Способ по п. 27, дополнительно предусматривающий введение дополнительного терапевтического средства.

34. Способ по п. 33, в котором конъюгат IL-2 или фармацевтическую композицию и дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно.

35. Способ по п. 33, в котором конъюгат IL-2 или фармацевтическую композицию и дополнительное терапевтическое средство вводят последовательно.

36. Способ по п. 35, в котором конъюгат IL-2 или фармацевтическую композицию вводят до введения дополнительного терапевтического средства.

37. Способ по п. 35, в котором конъюгат IL-2 или фармацевтическую композицию вводят после введения дополнительного терапевтического средства.

38. Способ по любому из пп. 27-37, в котором субъект представляет собой человека.

39. Способ vitro или ex vivo экспансии популяции CD4+ хелперных клеток, CD8+ эффекторных наивных клеток и клеток памяти, клеток естественных киллеров (NK) или Т-клеток естественных киллеров (NKT), включающий:

контактирование клеточной популяции с конъюгатом IL-2 по любому из пп. 1-23 или фармацевтической композицией по любому из пп. 24-26 в течение времени, достаточного для индукции образования комплекса с IL-2Rβγ, стимулируя тем самым экспансию популяции Teff и/или NK-клеток.

40. Способ по п. 39, в котором конъюгат IL-2 или фармацевтическая композиция вызывают экспансию CD4+ Т-регуляторных (Treg) клеток менее чем на 20%, 15% 10%, 5% или 1%.

41. Способ по п. 39, в котором конъюгат IL-2 или фармацевтическая композиция не вызывают экспансию CD4+ Treg-клеток в популяции клеток.

42. Способ по п. 39, в котором отношение Teff-клеток к Treg-клеткам в клеточной популяции после инкубации с конъюгатом IL-2 или фармацевтической композицией составляет приблизительно или по меньшей мере 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1 или 100:1.

43. Способ по п. 39, отличающийся тем, что способ представляет собой способ in vivo.

44. Способ по п. 39, отличающийся тем, что способ представляет собой способ in vitro.

45. Способ по п. 39, отличающийся тем, что способ представляет собой способ ex vivo.